姜黄素对血管紧张素Ⅱ刺激大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1及smad7表达的影响

目的：观察姜黄素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)刺激大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1及smad7表达的影响,探讨姜黄素改善肾间质纤维化的作用机制。方法培养大鼠肾小管上皮细胞,按随机数字表法分为空白组,AngⅡ对照组,姜黄素低、中、高剂量组。除空白组外,于其余各组细胞培养液中加入10-8mol/L的AngⅡ溶液进行干预;姜黄素低、中、高剂量组分别加入2.5、5.0、10.0μmol/L姜黄素溶液进行干预。干预48 h后,采用Western blot检测各组肾小管上皮细胞TGF-β1、smad7蛋白表达,采用RT-PCR检测肾小管上皮细胞TGF-β1、smad7 mRNA表达。结果与空白组比较,AngⅡ对照组肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白[(0.23±0.03)比(0.16±0.01)]、TGF-β1 mRNA[(1.89±0.20)比(1.00±0.00)]表达升高(P＜0.05),smad7蛋白[(0.19±0.03)比(0.24±0.02)]、smad7 mRNA[(0.48±0.05)比(1.00±0.00)]表达降低(P＜0.05);与 AngⅡ对照组比较,姜黄素低、中、高剂量组 TGF-β1蛋白[(0.18±0.02)、(0.17±0.02)、(0.16±0.03)比(0.23±0.03)]、TGF-β1 mRNA[(1.58±0.11)、(1.34±0.16)、(0.97±0.19)比(1.89±0.20)]表达下降(P＜0.05),smad7蛋白[(0.28±0.04)、(0.31±0.03)、(0.34±0.04)比(0.19±0.03)]、smad7 mRNA[(0.68±0.07)、(0.80±0.06)、(0.98±0.09)比(0.48±0.05)]表达升高(P＜0.05)。结论姜黄素可对抗AngⅡ介导的肾间质纤维化从而发挥肾脏保护作用,其作用机制可能与降低TGF-β1蛋白及其mRNA表达、上调smad7蛋白及其mRNA表达有关。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响

目的:研究中药壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGFβ1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)复合因素大鼠肝纤维化模型,给予壮肝逐瘀煎灌胃,取血清及肝组织做检测,双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清TGF-β1含量,实时荧光定量PCR技术对肝组织TβR Ⅰ/ⅡmRNA进行定量分析.结果:治疗6周后,与病理模型组大鼠比较,壮肝逐瘀煎治疗组肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA明显降低(P＜0.01).结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善肝纤维化大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎抑制TGF-β1及TβRⅠ/Ⅱ mRNA表达有关.     

宣肺健脾法对哮喘大鼠转化生长因子-β1及其抑制型Smad的影响

目的:观察宣肺健脾法对哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制。方法:建立哮喘大鼠模型,观察支气管-肺组织病理学改变,检测支气管壁厚度(Wat)、平滑肌厚度(Wam)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体和Smad7的表达。结果:造模后Wat、Wam、TGF-β1及其受体Ⅰ(TβRⅠ)表达明显增加(P<0.01),Smad7 mRNA显著下调(P<0.01)。药物干预后,Wat、TGF-β1、TβRⅠ显著降低(P<0.05),Smad7 mRNA显著上调(P<0.01),中药组尤为明显。结论:宣肺健脾法可能通过抑制哮喘大鼠TGF-β1、TβRⅠ的过度表达,上调抑制型Smad,影响TGF-β/Smads通路的转导,减轻气道重塑。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1及其受体表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝组织TGF-β1及其受体表达的影响。方法:采用CCl4诱导大鼠肝纤维化,同时分别以200、100、50mg/kg.d的GbE进行干预,6周后取肝组织,采用免疫组化法测定肝组织TGF-β1及其受体TβRⅠ、Ⅱ、Ⅲ蛋白的表达。结果:模型大鼠肝组织TGF-β1及其受体TβRⅠ、Ⅱ、Ⅲ蛋白表达较正常组明显增高,GbE各剂量组肝组织TGF-β1及其受体表达也较模型组显著下降。结论:GbE可能通过降低TGF-β1及其受体的表达,抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。     

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的干预作用

目的探讨补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的影响。方法将53只Wistar大鼠随机分成空白组8只、模型组15只、补肾柔肝方组15只和秋水仙碱组15只。除空白组外,其余组均首次在背部皮下注射纯四氯化碳5 m L/kg,3 d后注射40%CCl4花生油3 m L/kg,每周注射2次,连续8周。第9周开始,补肾柔肝方组和秋水仙碱组分别给予补肾柔肝方流浸膏5 m L/(kg·d)、秋水仙碱溶液5 m L/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,共8周。然后取各组大鼠肝组织,分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应检测肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白,Smad2和Smad3磷酸化水平及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA的表达情况。结果与空白组比较,模型组肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白及TGF-β_1、TβRI、TβRⅡmRNA表达水平均显著升高(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05);与模型组比较,补肾柔肝方组和秋水仙碱组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白以及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA表达水平均显著降低(P均0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均0.05)。结论在TGF-β_1-Smads信号通路中,补肾柔肝方主要是通过抑制TβRⅠ、TβRⅡ表达,无法磷酸化的Smad2和Smad3失去活性,从而阻断信号通路传导发挥抗纤维化的作用。     

血小板反应蛋白-1在复发性流产患者绒毛膜组织中的表达及其价值探讨

目的探讨复发性流产(RSA)患者绒毛膜组织中血小板反应蛋白-1(TSP-1)的表达水平及临床意义。方法收集42例行早期人工流产的复发性流产患者记为观察组,选择同期35例既往分娩过足月正常胎儿、无不良生育史且自愿行人工流产产妇记为对照组,2组流产时分别留取绒毛、蜕膜组织并采用免疫组化SP法检测TSP-1表达水平,同时采用CD34标记血管内皮细胞检测绒毛、蜕膜组织中微血管密度(MVD)。结果 2组绒毛组织中TSP-1阳性区域灰度值均明显低于蜕膜组织(P均0.05),即绒毛组织中TSP-1表达量高于蜕膜组织,观察组绒毛组织中TSP-1灰度值明显低于对照组(P0.05),即RSA患者绒毛组织中TSP-1表达量高于对照组。观察组绒毛组织中MVD分别较对照组、本组蜕膜组织低(P均0.05),而对照组绒毛组织中MVD显著高于蜕膜组织(P0.05)。RSA患者绒毛、蜕膜组织中TSP-1灰度值与MVD均呈显著正相关(r=0.584,0.397,P均0.05),即绒毛、蜕膜组织中TSP-1表达量与MVD呈显著负相关。结论 RSA患者绒毛、蜕膜组织中TSP-1表达量异常升高,绒毛组织中MVD较蜕膜组织异常偏低,RSA患者绒毛膜组织中TSP-1的异常高表达可能是血管生成障碍、复发性流产的重要影响因素。     

宣肺健脾中药对哮喘大鼠肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ、TβRⅡ表达的影响

目的:观察宣肺健脾方对哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制.方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组和宣肺健脾方组.除正常对照组外,其余各组动物建立哮喘模型.观察支气管一肺组织病理学改变,测量支气管基底膜周径、支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度( Wam),支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数.免疫组化PV二步法检测TGF-β/Smads信号通路中配体(TGF-β)及其受体Ⅰ(TβR Ⅰ)、受体Ⅱ(TβRⅡ)水平.结果:模型对照组大鼠支气管肺组织有大量炎性细胞浸润,支气管腔内可见黏液栓和炎性细胞,支气管平滑肌层明显增厚;地塞米松组炎性细胞浸润减少,气管壁和平滑肌增厚明显减轻,黏膜结构较完整;宣肺健脾方组支气管黏膜上皮无明显增厚,管壁及其周围少量炎性细胞浸润.地塞米松组和宣肺健脾方组的Wat、Wam减少,宣肺健脾方组Wat、Wam较模型对照组低,差别有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),但与正常对照组对比,差别无统计学意义(P＞0.05).与模型对照组对比,两药物组BALF中的嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞(WEU)降低,巨噬细胞(MAC)升高,差别有统计学意义(P＜0.01).与正常对照组相比,模型对照组支气管一肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ表达增加,差别有统计学意义(P＜0.01);2药物组TGF-β1、TβR Ⅰ表达降低,与模型对照组对比,差别有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);宣肺健脾方组TGF-1β1、TβRⅠ表达较地塞米松组低,差别有统计学意义(P＜0.01).结论:宣肺健脾法可能通过抑制哮喘大鼠TGF-β1及其受体的过度表达而干预气道重塑.     

宣肺健脾法对哮喘大鼠转化生长因子-β1及其受体表达的影响

目的:观察宣肺健脾法中药哮逐平对支气管哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制。方法:SPF级雄性Wistar大鼠32只随机分为正常对照组(A组)8只、哮喘模型组(B组)8只、地塞米松组(C组)8只、哮逐平组(D组)8只。除A组外,余组动物建立哮喘模型。HE染色,观察支气管-肺组织病理学改变,以医学图像分析软件测量支气管基底膜周径(Pbm)、支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数。免疫组化PV二步法染色,应用上述图像分析软件检测支气管-肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体Ⅰ(TβRⅠ)、受体Ⅱ(TβRⅡ)水平的积分光密度(IOD)。结果:与A组相比,B组EOS百分比、Wat、Wam和支气管-肺组织TGF-β1、TβRⅠ表达明显增加,具有非常显著性意义(P0.01)。经药物干预后,C和D组EOS百分比、Wat、Wam减少,支气管-肺组织TGF-β1、TβRⅠ表达显著降低(P0.05)。D组EOS百分比、Wat、Wam、TGF-β1和TβRⅠ减少尤为明显,与B组相比,均有显著差异(P0.05),其中Wat、Wam与A组相比,无显著性差异(P0.05)。与C组相比,D组EOS百分比、TGF-β1和TβRⅠ表达明显减少,具有非常显著性意义(P0.01)。结论:宣肺健脾法中药可能通过抑制哮喘大鼠支气管-肺组织TGF-β1及其受体的过度表达而影响平滑肌增殖、减轻气道壁增厚,干预气道重塑。     

盆炎方对盆腔炎性疾病后遗症大鼠卵巢、子宫组织TGF-β1、TβRⅡ蛋白的影响

目的通过观察盆腔炎方对盆腔炎性疾病后遗症雌性大鼠子宫组织、卵巢组织转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及其受体Ⅱ(transforming growth factor-βreceptorⅡ,TβRⅡ)水平的影响,探讨其治疗盆腔炎性疾病后遗症的机制。方法将124只SD雌性大鼠随机抽取空白组10只、假手术组10只后造模,造模成功后按体质量随机分为盆炎方高、中、低剂量组,模型组及妇科千金胶囊组各15只。药物干预21天后,采用免疫组化法检测大鼠卵巢、子宫组织TGF-β1、TβRⅡ的表达。结果与空白组和假手术组比较,模型组子宫、卵巢组织TGF-β1、TβRⅡ表达均升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,盆炎方各剂量组和妇科千金胶囊组能不同程度地降低模型大鼠子宫组织、卵巢组织TGF-β1及TβRⅡ水平,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。盆炎方各剂量组中,以高剂量组的疗效最佳,且与妇科千金胶囊相当。结论盆炎方可能通过降低盆腔炎性疾病后遗症模型大鼠子宫组织、卵巢组织中粘连修复相关指标TGF-β1及TβRⅡ的表达,缓解和消除局部炎症过程,从而治疗盆腔炎性疾病后遗症。     

基于JAK1/STAT3通路的寿胎丸对复发性流产小鼠细胞自噬的影响

目的 观察寿胎丸对复发性流产（RSA）小鼠的妊娠保护作用，基于JAK1/STAT3通路及细胞自噬探讨其作用机制。方法 分别构建正常妊娠小鼠模型及RSA小鼠模型，将小鼠分为空白组、模型组、地屈孕酮组和寿胎丸组，分别予相应药物干预，连续12 d。观察小鼠妊娠情况，计算胚胎丢失率及子宫脏器系数；HE染色观察小鼠蜕膜及胎盘组织病理改变；ELISA检测血清孕酮、β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）含量；Western blot检测蜕膜组织Janus激酶1(JAK1)、p-JAK1、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3、ATG5、Beclin1、LC3蛋白表达；实时荧光定量PCR检测蜕膜组织JAK1、STAT3、ATG5、Beclin1 mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠胚胎丢失率显著升高（P<0.01），子宫脏器系数显著降低（P<0.01）；蜕膜及胎盘组织形态受损，血清孕酮、β-HCG含量显著减少（P<0.01）；蜕膜组织p-JAK1、p-STAT3、ATG5、 Beclin1蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低（P<0.01, P&l...     

芪连扶正胶囊调控TGF-β/smad信号通路抑制肺癌转移的研究

目的:观察芪连扶正胶囊对TGF-β/smad通路相关分子表达的影响,探讨其相关机制。方法:体外培养肺癌A549细胞,制备芪连扶正胶囊含药血清,按实验分组干预,Western blotting检测TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad4、Smad7的表达,RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达。结果:芪连扶正胶囊含药血清可上调TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad4表达,下调Smad7、TGF-β1mRNA在肺癌A549细胞中的表达,其中,各药组分子表达量除芪连扶正胶囊低剂量组外,与对照组相比均有显著性差异(P0.01),与化疗组相比,联合组及芪连扶正胶囊各组亦有显著性差异(P0.05或P0.01)。结论:芪连扶正胶囊含药血清可通过纠正TGF-β/smad通路紊乱发挥抗肺癌转移作用。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。     

兔高胆固醇-动脉粥样硬化模型心肌血管紧张素Ⅱ的表达及阿托伐他汀的干预效果

目的:建立兔高胆固醇-动脉粥样硬化模型,观察心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的表达,探讨阿托伐他汀对心肌组织AngⅡ表达的影响。方法:22只健康雄性新西兰白兔随机分为3组:正常对照组(n=6),高胆固醇饲养组(n=8),高胆固醇饲养加阿托伐他汀(2.5mg&#183;kg-1.d-1)组(n=8)。喂饲8周后,经兔中央动脉取空腹血标本测定血清总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度。取主动脉组织肉眼观察形态学改变;取心肌组织用免疫组化方法测定各组AngⅡ的阳性表达,结果采用阳性单位(PU)表示。结果:高胆固醇饲养组心肌组织AngⅡ的阳性表达显著高于对照组[(21.65&#177;4.20)PU对(4.58&#177;1.20)PU,P&lt;0.05],高胆固醇饲养加阿托伐他汀组AngⅡ的阳性表达(16.50&#177;1.53)PU较高胆固醇饲养组明显降低,但仍显著高于对照组,P&lt;0.05。结论:高胆固醇血症时心肌组织肾素-血管紧张素醛固酮系统(RAAS)处于高度激活状态,阿托伐他汀具有明显的抑制心肌组织RAAS激活的作用。     

温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad 信号通路的影响

目的探讨温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病(systemic sclerosis,SSc)皮肤成纤维细胞TGF-β_1/Srnad信号通路的影响。方法将36例SSc患者按随机数字表分为中药组、西药组和中西药纽,每组12例,中药组予口服温阳化浊通络方汤剂(每日1剂),西药组予口服青霉胺片(每次0.125 g,每日2次)和醋酸泼尼松片(每次20 mg,每日1次),中西医组予口服青霉胺片、醋酸泼尼松片及温阳化浊通络方汤剂,治疗1个月制备含药血清;另取10例未治疗的SSc患者血清作为对照组。健康皮肤成纤维细胞来源于2例女性整形外科患者上臂外侧健康皮肤组织。各组血清分别加入SSc患者和健康皮肤成纤维细胞培养体系中。Western blot法测定皮肤成纤维细胞转化生长因子-β_1Ⅰ型受体(transforming growth factorβ_1 receptor typeⅠ,TGF-β_1 RⅠ)、TGF-β_1Ⅱ型受体(TGF-β_1 RⅡ)、p-Smad2/3及Smad7蛋白表达,RT-PCR法检测SSc皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原(Col-Ⅰ、Col-Ⅱ)mRNA的表达,E LISA法测定SSc皮肤成纤维细胞培养上清液中MMP-9及TIMP-1含量。结果与对照组比较,西药组、中药组和中西药组SSc患者和健康皮肤成纤维细胞TGF-β_1 RⅠ、p-Smad2/3蛋白水平降低,Smad7蛋白水平升高(P0.05,P0.01),同时中西药组TGF-β_1RⅡ蛋白表达降低(P0.05,P0.01);与西药组比较,中药组和中西药组TGF-β_1 RⅠ、p-Smad2/3表达降低,中西药组Smad7蛋白表达升高(P0.01)。SSc患者皮肤成纤维细胞中,与对照组比较,西药组、中药组和中西药组Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA表达水平降低(P0.05,P0.01),且中西药组Col-ⅢmRNA表达水平明显低于西药组(P0.01)。与对照组比较,西药组、中药组和中西药组MMP-9水平及MMP-g/TIMP-1比值明显升高(P0.05,P0.01),而中药组和中西药组TIMP-1表达水平降低(P0.01);与西药组比较,中西药组MMP-g水平和MMP-9/TIMP-1比值升高,中药组和中西药组TIMP-1水平降低(均P0.01)。结论温阳化浊通络方含药血清可能通过调控SSc皮肤成纤维细胞TGF-β_1/Smad信号通路中关键分子TGF-β_1 RⅠ、pSmad2/3及Smad7的表达,抑制rGF-β_1/Smad信号通路传导,减少Col-Ⅰ、Col-Ⅲ表达。     

六味地黄颗粒对哮喘大鼠转化生长因子-βⅠ、Ⅱ型受体影响的研究

目的探讨六味地黄颗粒对哮喘大鼠肺部TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA含量的干预作用;方法逆转录-荧光实时定量PCR法检测大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA含量,比较正常组、哮喘模型组、各用药组之间两个指标水平的差异;结果联合用药组的大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA接近,均接近于于正常组,且显著低于模型组;结论六味地黄颗粒能够协同激素类药物,下调哮喘大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA的表达。     

爱罗咳喘宁对COPD大鼠p38MAPK,TNF-α及AQP5基因表达的影响

目的: 观察爱罗咳喘宁对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonarydisease,COPD)大鼠模型支气管和肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen activatein kinase,p38MAPK)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、及水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)基因表达的影响,探讨爱罗咳喘宁方对COPD炎症及气道高分泌的作用及机制. 方法: 采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)加烟雾诱导COPD大鼠模型,随机将大鼠分为正常组、模型组、爱罗咳喘宁低、中、高剂量组.正常组、模型组灌胃生理盐水(15.52 mL·kg^-1·d^-1),爱罗咳喘宁口服液低、中、高剂量组分别灌胃(7.75,15.52,31.04 g·kg^-1·d^-1),连续15 d.原位杂交、免疫组化检测p38MAPK、TNF-α及AQP5基因在细支气管和肺组织中的原位表达. 结果: 与正常对照组比较,模型组大鼠AQP5 mRNA[(4.52±0.11)VS(0.87±0.32),P<0.01]和蛋白[(3.98±0.22)VS(0.58±0.02),P<0.01]表达均显著减弱,而p38MAPK mRNA[(0.49±0.02)VS(0.85±0.02),P<0.01],TNF-α mRNA[(0.26±0.01)VS(0.44±0.01),P<0.01]均显著增强,p-p38MAPK蛋白[(0.30±0.01)VS(0.41±0.01),P<0.05]和TNF-α蛋白[(0.20±0.01VS(0.38±0.01),P<0.05]表达均显著增强,AQP5蛋白与p-p38MAPK,TNF-α蛋白表达均呈负相关(r分别为-0.547,-0.532,P<0.01);与模型组相比,爱罗咳喘宁中剂量组AQP5 mRNA[(0.87±0.32 VS 1.80±0.32,P<0.01)],AQP5蛋白[(0.58±0.02 VS 1.61±0.72,P<0.01)]表达显著增强,p38MAPK mRNA[(0.85±0.02)VS(0.51±0.02),P<0.01],TNF-α mRNA[(0.44±0.01)VS(0.40±0.01),P<0.01]表达减弱,p38MAPK蛋白[(0.41±0.01)VS(0.32±0.00),P<0.01]TNF-α蛋白[(0.38±0.01)VS(0.31±0.00), P<0.01]表达显著减弱.AQP5蛋白表达与p-P38MAPK,TNF-α蛋白均呈显著负相关(r分别为-0.542,-0.541,均P<0.01). 结论: 爱罗咳喘宁有抗炎和抑制COPD气道黏液高分泌作用,其机制可能与下调p38MAPK,TNF-α基因表达、上调AQP5基因表达有关.     

二陈汤加味对COPD大鼠转化生长因子-β1，组蛋白去乙酰化酶2基因表达的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及其受体(TGF-βRII)基因表达,外周血单个核细胞(PBMCs)中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因表达及活性的影响。方法:采用烟熏加脂多糖方法制备COPD大鼠模型。随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组(20,10,5 g·kg~(-1))。正常组、模型组灌胃生理盐水(10 g·kg~(-1)),二陈汤加味高、中、低剂量组分别灌胃,连续14 d。荧光酶联免疫法测定PBMCs中HDAC2活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定肺组织匀浆中TGF-β_1及PBMCs中HDAC2含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肺组织匀浆中TGF-β_1mRNA及PBMCs中HDAC2 mRNA表达;免疫组化检测TGF-β_1与TGF-βRⅡ蛋白在肺组织的原位表达,光镜观察组织结构。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织匀浆中TGF-β_1含量升高(P0.05);肺组织中TGF-β_1mRNA,TGF-β_1与TGF-βRⅡ蛋白表达均显著增强(P0.01);模型组大鼠PBMCs中HDAC2 mRNA表达、含量及其活性均明显减低(P0.05,P0.01),差异均有统计学意义。与模型组比较,二陈汤加味高、中剂量组肺组织匀浆中TGF-β_1mRNA表达(P0.01)和TGF-β_1蛋白含量均显著降低(P0.05,P0.01),免疫组化检测肺组织中TGF-β_1与TGF-βRⅡ蛋白表达均显著弱于模型组(P0.01),PBMCs中HDAC2 mRNA表达、含量及其活性均升高(P0.05,P0.01),肺组织结构明显改善。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能与增强PBMCs中HDAC2基因表达,提高HDAC2活性,抑制TGF-β_1及其受体基因的表达有关。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β受体的影响

目的探讨姜黄素对经转化生长因子β(TGF-β)诱导后人胚肺成纤维细胞TGF-βⅠ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、RⅡ)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响,及其与特发性肺纤维化的关系。方法细胞分为正常组、姜黄素组、模型组、治疗组,采用RT-PCR、Western blotting法检测TGF-βRⅠ、RⅡ在人胚肺成纤维细胞的变化。结果模型组TGF-βRⅠ与RⅡ表达增强,治疗组与正常组、模型组相比,TGF-βRⅠ与RⅡ表达明显减弱。结论姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起一定作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-βRⅠ与RⅡ的表达而实现的。     

通肾络胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白-1、转化生长因子及细胞外基质成分的影响

目的:探讨通肾络胶囊对DN大鼠肾脏保护作用的机制。方法:采用单侧肾脏切除并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法复制DN大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组、糖适平组、通肾络胶囊组。动态检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、24h尿微量白蛋白(24hmALB),末次给药后测定大鼠血浆糖化血红蛋白(HblAc)、透射电镜观察各组大鼠肾脏超微结构改变,应用流式细胞仪技术测定各组大鼠肾脏组织葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)的表达,应用免疫组化技术及图像采集分析系统测定各组大鼠肾脏组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)及转化生长因子βⅡ型受体(TβRⅡ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的表达。结果:通肾络胶囊可降低DN大鼠FBG、HblAc、24hmALB(P<0.05或P<0.01)的水平,减轻肾小球基底膜(GBM)增厚程度,降低GLUT-1的表达,降低TGF-β1、TβRⅡ的表达(P<0.05或P<0.01),减少细胞外基质ECM成分的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:通肾络胶囊可能通过降低GLUT-1、TGF-β1和TβRⅡ的表达,直接和间接地减少了ECM成分的表达从而发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。     

糖耐康对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smads通路的影响

目的:探讨糖耐康(TNK)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110μg·L-1)、空白血清对照组(TGF-β110μg·L-1+10%空白血清)、TNK高浓度组(TGF-β110μg·L-1+20%糖耐康含药血清)、TNK中浓度组(TGF-β110μg·L-1+10%糖耐康含药血清)、TNK低浓度组(TGF-β110μg·L-1+5%糖耐康含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测TGF-β1及其Ⅰ,Ⅱ受体(TβRI,TβRⅡ)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRⅠ,TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2,Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05),但经TNK含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组及TGF-β1+空白血清对照组相比有显著性差异(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:TNK能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。