甲胎蛋白mRNA在肝癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨甲胎蛋白 (AFP) m RNA在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法 :用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT- PCR)检测 19例肝细胞癌患者癌组织 AFP m RNA。结果 :16例 (88.9% )患者癌组织 AFP m RNA呈阳性表达 ,其外周血 AFP m RNA亦为阳性 ;而阴性表达的 3例其外周血 AFP m RNA和血清 AFP亦为阴性。癌组织 AFP m RNA阳性率在血清 HBs Ag阳性组 (93.8% )、合并肝硬化组 (10 0 % )和血清 AFP≥ 2 5 μg/ L 组 (10 0 % )高于 HBs Ag阴性组 (33.3% )、无合并肝硬化组 (5 7.1% )和 AFP<2 5 μg/ L 组 (5 7.1% ) (P <0 .0 5 )。相关分析显示外周血 AFP m RNA阳性率和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m RNA阳性表达呈正相关 (r =0 .6 413,P <0 .0 5 ;r=0 .6 0 2 4,P <0 .0 5 )。癌组织 AFP m RNA阳性表达和血清 HBs Ag阳性表达及合并有肝硬化呈正相关 (r =0 .6 5 0 3,P <0 .0 5 ;r =0 .5 90 8,P <0 .0 5 ) ,而与有无门静脉癌栓或肝外转移及癌灶大小无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :大多数肝细胞癌的 AFP基因处于活化状态。外周血 AFP m RNA阳性表达和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m RNA阳性表达有关     

人肝癌相关抗原SMP-30在肝癌中的表达及意义

目的：通过免疫组化方法检测人肝癌（HCC）中衰老标记蛋白-30（SMP-30）的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义。方法：制备48例人HCC及相应的癌旁组织、6例正常人肝组织和1例正常人肾组织的石蜡切片。采用免疫组化SABC法,检测SMP-30在HCC和癌旁组织中的表达,结合临床资料进行统计分析。结果：初步发现HCC癌旁组织的SMP-30表达高于HCC组织（P〈0．05）。SMP30的表达与HCC患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、肝硬化背景、HBsAg和AFP检测情况未见相关性（P〉0．05）。结论：SMP-30与HCC的发生、发展有关,其过度表达可能是HCC的早期性、保护性事件。     

PTEN蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨肝癌组织中PTEN的表达。方法：用免疫组化快捷法检测50例肝癌组织和15例正常肝组织中PTEN蛋白的表达,并分析与肝癌临床病理特征,侵袭性的关系。结果：HCC中PTEN阳性表达率明显弱于正常肝组织,PTEN蛋白阳性表达率与HCC组织分化程度、侵袭性有关（p〈0.05）,而与性别、术前AFP水平无关（P〉0.05）。结论：PTEN的表达一定程度上反映HCC侵袭性强弱。     

肝转铁蛋白受体mRNA在肝硬化及肝癌中的表达

目的了解体内转铁蛋白受体(TfR)mRNA表达的调节,为肝癌早期诊断和导向治疗提供依据。方法将大鼠随机分成肝硬化组和对照组,形成三种不同铁水平,分别采取部分肝切除后不同时相大鼠肝脏以及肝癌患者手术标本进行Northernblotting分析。结果无论分组,TfRmRNA表达在缺铁时最高,正常铁水平次之,高铁时最低;正常铁水平下硬化组表达高于对照组,在肝切除后不同时相TfRmRNA表达水平不同,而缺铁及高铁水平则无此变化;肝癌中癌组织表达最高,癌周组织次之,正常组织最低。结论体内调节TfRmRNA的最基本因素为铁,TfRmRNA在肝硬化及肝癌中有高表达。     

ERK2蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨肝癌组织中ERK2的表达。方法：用免疫组化快捷法检测50例肝癌组织和15例正常肝组织中ERK2蛋白的表达,并分析与肝癌临床病理特征,侵袭性的关系。结果：HCC中ERK2阳性表达率明显高于正常肝组织,其与HCC组织侵袭性有关（p〈0.05）,而与HCC组织分化程度、性别、术前AFP水平无关（P〉0.05）。结论：ERK2的表达一定程度上反映HCC侵袭性强弱。     

肝转铁蛋白受体mRNA在肝硬化及肝癌中的表达

目的了解体内转铁蛋白受体(TfR)mRNA表达的调节,为肝癌早期诊断和导向治疗提供依据.方法将大鼠随机分成肝硬化组和对照组,形成三种不同铁水平,分别采取部分肝切除后不同时相大鼠肝脏以及肝癌患者手术标本进行Northernblotting分析.结果无论分组,TfRmRNA表达在缺铁时最高,正常铁水平次之,高铁时最低;正常铁水平下硬化组表达高于对照组,在肝切除后不同时相TfRmRNA表达水平不同,而缺铁及高铁水平则无此变化;肝癌中癌组织表达最高,癌周组织次之,正常组织最低.结论体内调节TfRmRNA的最基本因素为铁,TfRmRNA在肝硬化及肝癌中有高表达.     

RUNX3蛋白在肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨RUNX3蛋白在肝癌组织及其癌旁组织中的表达情况,并分析其与临床病理因素的相关性。方法采用免疫组织化学法检测RUNX3蛋白在肝癌组织及其癌旁组织中的表达水平,并分析其与临床病理因素的相关性。结果 RUNX3蛋白在肝癌组织、癌旁组织中的表达阳性率分别为49.02%(25/51)、82.35%(42/51),两者间有显著差异(χ2=12.5706,P<0.01)。RUNX3蛋白在分化程度、门静脉癌栓、肝内转移等病理因素的表达差异有统计学意义(P<0.05),而在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RUNX3蛋白在肝癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织。RUNX3蛋白表达下调可能对肝癌的发生、发展具有重要作用,RUNX3基因可能是肝癌的抑癌基因。     

uPAR及PTEN在肝癌组织中的表达及其意义

目的:研究尿激酶型原激活剂受体(uPAR)及肿瘤抑制基因PTEN在肝癌组织中的表达及其意义。方法:应用免疫组织化SP法检测46例肝癌(HCC)及癌旁组织中uPAR及PTEN的表达,分析其与肝癌病理特征及侵袭性的关系。结果:HCC中uPAR的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05),而PTEN的阳性表达率明显低于癌旁组织(P<0.05),且两者呈负相关(P<0.05,r=-0.44)。uPAR及PTEN的表达与Edmondson分级和肿瘤的侵袭性有关(P<0.05),PTEN的表达还与门脉是否有癌栓及TNM分期有关(P<0.05),但与年龄、性别、肝硬变程度、肝癌组织类型、AFP、HBsAg、肿瘤大小等因素无关(P>0.05)。结论:uPAR及PTEN的异常表达与肝癌的发生和发展有一定关系,在一定程度上反映了肝癌侵纤溶酶袭性强弱。     

HSPA2在人肝癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)组织中热休克蛋白70-2(HSPA2)的表达及临床意义。方法利用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和免疫组化法检测120例HCC组织和癌旁组织中的HSPA2 m RNA和蛋白的表达水平,并分析HSPA2蛋白在HCC组织中的表达水平与患者临床病理特征之间的关系。结果 RT-q PCR结果显示,HSPA2 m RNA在50例HCC组织中的表达水平明显高于癌旁正常肝脏组织中(2.82±0.19与1.18±0.14,P<0.01);免疫组化结果显示,在120例HCC标本中,HSPA2蛋白高表达有69例(57.5%),低表达有51例(42.5%),HSPA2蛋白高表达与肿瘤长径、病理分化程度和肿瘤分期有关(P<0.05),而与年龄、性别、HBs Ag状态以及血清AFP水平无关(P>0.05)。结论 HSPA2在人HCC中高表达,其高表达可能与HCC的发生、发展密切相关,可能作为HCC早期诊断和预后预测的指标。     

肝癌组织中Raf激酶抑制蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR方法 检测肝细胞癌、癌旁组织及正常肝组织中RKIP mRNA的表达;采用组织芯片的免疫组织化学方法 检测RKIP蛋白和磷酸化的RKIP蛋白的表达,并分析RKIP蛋白和磷酸化的RKIP的表达与肝细胞癌临床病理学特征的关系.结果 RKIP mRNA在肝细胞痛组织、癌旁肝组织及正常肝组织的表达差异无统计学意义(P>0.05).肝细胞癌、癌旁肝组织及正常肝组织中RKIP蛋白表达的阳性率分别为22.2%、86%、93.8%,磷酸化的RKIP蛋白表达的阳性率分别为29.2%、84%、93.8%;肝癌组织中RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达均显著低于癌旁及正常肝组织(P<0.05);RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达与肿瘤大小、AFP水平及有无门静脉或胆管癌栓无关(P>0.05);RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达与肝细胞癌分化程度及有无肝内或淋巴转移有关,中高分化组RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达高于低分化组,无肝内或淋巴转移组高于有肝内或淋巴转移组(P<0.05).结论 RKIP和磷酸化的 RKIP 蛋白表达的减少或缺失与肝癌的发生、发展、侵袭转移密切相关.     

肝癌中P27的表达及其意义

目的:研究P27蛋白在肝细胞癌中的表达和意义.方法:选取经手术治疗的肝癌患者标本50例,癌旁组织22例,正常肝组织9例,用免疫组化方法检测这些组织中P27表达指数(P27LI).结果:肝癌组织中P27LI比癌旁组织高(P=0.002),而癌旁组织比正常对照肝组织高(P=0.007).P27蛋白的表达与肿瘤的分化、分期、肿瘤直径大小以及有无门静脉侵犯和有无肝内转移相关.P27LI≥50%的肝癌患者术后生成时间明显延长(P=0.004).结论:P27在早期肝癌中有阻止癌细胞增殖的作用,其在肝癌组织中的表达有助于判断肿瘤的进展程度,是一个有用的预后指标.     

肝细胞癌组织中血管生成素样蛋白3和MAPK蛋白的表达

目的:研究血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)和有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达.方法:应用SP免疫组化方法检测60例HCC及其相应癌旁组织中ANGPTL3和MAPK的表达.结果:HCC组织中ANGPTL3和MAPK的阳性表达率分别为61.7%(37/60)和68.3%(41/60),...     

Expression of the MAGE-1 gene in human hepatocellular carcinomas

Objective To further investigate the expression of MAGE-1 gene in hepatocellular carcinom a (HCC). Methods The tumors and adjacent liver tissue from 45 HCC patients and liver tissue from 28 non-HCC patients (16 with liver cirrhosis and 12 with normal liver) were cha racterized by RT-PCR. A 421 bp PCR product from a cDNA fragment spanning exon s 1, 2 and 3 was sequenced. The HLA type was assayed by standard ELISA in 43 HC C patients.Results Thirty-two of 45 tumor tissues from HCC patients expressed MAGE-1 mRNA (71.1% ). In contrast, MAGE-1 mRNA was not detected in adjacent tissues. Three were found to have point mutations at 3 identical sites resulting in the substitutio n of two amino acid residues. The most frequent HLA types in 43 HCC patients we re: HLA-A2, 53.5%; A11, 25.6%; A24, 20.9%; A33, 20.9%; HLA-B13, 28.3% and B35, 23.2%. Expression of HLA-A33 (20.9%) was higher in HCC patients than t hat predicted in the normal Chinese population (8.8%). There was no discer nable correlation between MAGE-1 expression and α-FP level, tumor size and he patitis B or C virus infection. The identification of peptides which are restri cted by haploptypes other than A1 should increase the opportunity for peptide ba sed immunotherapy.Conclusions This study shows that MAGE-1 mRNA is highly expressed in HCC tumor tissue in Ch inese patients. Previously unreported point mutations in the MAGE-1 gene are d escribed and may also provide additional opportunities for immunotherapy.     

HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达

目的:了解HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达.方法:分离18个正常个体外周血白细胞和20例急性白血病患者原代白血病细胞,用免疫细胞化学染色和Western印迹分析HCAP1蛋白表达并进行比较.结果:受检的正常人外周血白细胞和白血病患者原始细胞均表达HCAP1蛋白;在正常人外周血成熟白细胞,HCAP1主要分布于细胞核,而急性白血病患者的原始细胞在细胞核和细胞质均有分布;急性白血病患者原始细胞HCAP1蛋白的相对表达值(HCAP1/actin的灰度比值)为(0.37±0.23),正常人外周血白细胞的HCAP1蛋白相对表达值为(0.31±0.19,P＞0.05).结论:正常入外周血白细胞和白血病患者的原代白血病细胞均表达HCAP1蛋白,两者之间表达水平并无显著差异,但其在细胞内的分布有所不同.     

PTEN蛋白在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的 探讨PTEN蛋白在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床病理意义。方法 应用免疫组织化学SP法,用PTEN兔抗人多克隆抗体检测56例HCC组织,17例肝硬化组织和3例正常肝组织中PTEN蛋白的表达,同时结合临床病理进行分析。结果 56例HCC组织中,PTEN蛋白的阳性表达率为71％（40／56）,其中低分化HCC的阳性率最低,为57％（12／21）。G1,G2级与G3级HCC组织中的PTEN蛋白阳性表达率具有显性差异（P＜0．05）。17例肝硬化组织中,阳性表达率为94％（16／17）。HCC与肝硬化组织中PTEN蛋白的表达具有显性差异（P＜0．05）。HCC组织中存在较高比例的PTEN蛋白表达缺失,且恶性程度最高的HCC组织中,PTEN蛋白的阳性表达率最低。结论 在HCC的发生发展过程中,PTEN蛋白表达缺失起着一定作用,且其缺失主要发生于肝癌晚期。这对判断患的预后具有一定的意义。     

蛋白激酶A和蛋白激酶C对大鼠背根神经节神经元P2X3受体介导的内向电流的调节作用

目的 探讨蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)对分离培养的背根神经节(DRG)神经元ATP受体P2X3功能的调节作用.方法 分离培养大鼠DRG神经元,给予外源性ATP诱导出瞬时型内向电流,通过全细胞膜片钳记录的方法观察P2X3和P2X2/3受体特异性阻断剂TNP-ATP对这一电流的影响,在此基础上观察PKA和PKC激动剂对ATP诱导的瞬时型内向电流的调节作用.结果 在分离培养的DRG神经元上,ATP诱导的瞬时型电流可以被TNP-ATP抑制,其抑制效应呈剂量依赖性,半数有效剂量(IC50)为(21.7±7.6)nmol/L.PKA激动剂forskolin(1 μmol/L)和PKC激动剂PMA(1 μmol/L)均可以快速、可逆地抑制ATP诱导的瞬时型电流.结论 在大鼠分离培养的DRG神经元,PKA和PKC可能通过磷酸化调节抑制P2X3受体的功能,从而抑制ATP诱导的瞬时型内向电流,提示蛋白激酶对P2X3受体的调节作用可能参与痛觉的形成.     

Farnesoid X receptor expression is reduced in human hepatocellular carcinoma

Farnesoid X receptor (FXR, NR1H4) is a member of nuclear hormone receptor superfamily. Previously studies showed that FXR^?/? mice spontaneously developed liver tumors when they aged, however, the relevance of which to human hepatocellular carcinoma (HCC) is unclear. The aim of this study is to observe whether FXR expression is also downregulated in HCC and discuss the mechanism of the reduced FXR expression in HCC. Expression of FXR and small heterodimer partner (SHP) was measured by real-time PCR and immunohistochemical technique. Effect of pro-inflammatory cytokines on expression of FXR and its promoter activity were determined in primary hepatocytes or HepG2 and Huh7 cell lines. Our results showed that expression of FXR and its target gene SHP in human HCC was strongly downregulated compared to the normal liver tissues. In addition, pro-inflammatory cytokines were able to decrease FXR expression by inhibiting the FXR promoter activity. In conclusion this work demonstrates FXR expression is strongly downregulated in human HCC, which may be caused by decreased FXR promoter activity, suggesting a potential role of FXR in human HCC development.     

PTD-p53 融合蛋白的表达、纯化及其对肝癌细胞的转导活性

目的：原核表达野生型p53与PTD的融合蛋白,检测PTD介导p53进入肝癌细胞的效率。方法：利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTATHA和pET32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）LysS内诱导表达并进行纯化。以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清。将PTD-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测PTD-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率。结果：成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体,表达纯化了p53融合蛋白及p53蛋白,证实PTD-p53可以高效地转入HepG2细胞。结论：PTD-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析,为应用PTD-p53蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了理论基础。     

嘌呤P2X7 受体介导对氯苯丙酸致大鼠 前额皮质蛋白激酶的变化

目的 探讨脑内5- 羟色胺（5-HT）含量下降后大鼠前额皮质受体后信号P38 MAPK、PKC 和 CaMK Ⅱ蛋白和基因表达的变化及P2X7 受体在其中的作用。方法 大鼠分为正常组、对照组、对氯苯丙氨酸 （PCPA）组、P2X7 受体拮抗剂及激动剂干预组。腹腔注射PCPA 使脑内5-HT 合成下降,脑室注射P2X7 受 体拮抗剂和激动剂,采用免疫组织化学、Western blot 和实时荧光定量PCR 检测前额皮质P38 MAPK、PKC 和 CaMK Ⅱ蛋白和mRNA 的表达。结果 与对照组比较,PCPA 组的P38 MAPK 蛋白和mRNA 表达增加,而PKC 和CaMK Ⅱ的蛋白和mRNA 表达水平下降。与PCPA 组比较,P2X7 受体拮抗剂能使P38 MAPK 蛋白和基因 mRNA 表达下降,PKC 和CaMK Ⅱ的蛋白表达水平升高及mRNA 表达水平上升;而P2X7 受体激动剂引起 P38 MAPK 蛋白和mRNA 表达水平升高,PKC 和CaMK Ⅱ的蛋白表达下降和基因mRNA 表达水平下降。结论 P2X7 受体介导了脑内5-HT 下降所致的前额皮质受体后信号P38 MAPK、PKC 和CaMK Ⅱ蛋白和基因表达 的变化。