5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对喉癌细胞中MGMT基因表达水平的影响

目的探讨5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza—dC）对喉癌细胞系抑癌基因MGMT表达活性的影响。方法体外培养Hep-2喉癌细胞,以不同药物浓度的5-aza—dC进行干预处理,应用逆转录PCR方法检测药物干预前后MGMT的表达活性,比较分析不同药物浓度的干预效应。结果Hep-2喉癌细胞系经不同药物浓度的5-aza—dC作用后,能够诱导靶细胞中受抑制而处于不表达状态的抑癌基因MGMT重新恢复表达活性,尤以7μmol／L浓度时效应明显。结论MGMT基因启动子甲基化可能是导致该基因失活的主要原因,5-aza—dCN能显著增强Hep-2喉癌细胞肿瘤抑制基因的表达活性。     

华蟾素对喉癌细胞凋亡的基础研究

目的 探讨中药华蟾素对体外培养人喉癌Ｈｅｐ－２细胞生长作用及癌基因变化。方法 应用光镜,电镜：ＭＴＴ检测技术;ＳＰ免疫组化技术及流式细胞分析仪,对药物作用后Ｈｅｐ－２细胞的数量,形态,抑癌基因Ｐ５３,癌基因ｃｍｙｃ,Ｂｃｌ－２蛋白的表达以及细胞周期ＤＮＡ含量的改变进行研究。结果 发现华蟾素对Ｈｅｐ－２细胞作用在低浓度短时间时促进细胞分裂、增殖和诱导细胞分化;高浓度长时间则抑制细胞生长,促进细胞凋亡     

Survivin基因在喉鳞状细胞癌中的表达及与bcl-2和p53基因表达的相关性

研究表明，肿瘤的发生不仅与细胞增殖有关，而且与细胞凋亡有关。细胞凋亡即程序性细胞死亡，受一系列基因的调控。Survivin(SVV)是新近发现的一种凋亡抑制基因，具有抑制细胞凋亡的作用，在已检测的几种肿瘤组织中表达上调。本研究采用免疫组织化学S-P法对喉鳞状细胞癌、喉不典型增生和喉息肉组织中SVV基因及bcl-2、p53蛋白进行检测，借以探讨SVV基因在喉癌发生发展中的作用及与bcl-2、p53基因表达的相互关系和意义。     

金丝桃素光照对喉癌细胞Hep-2的影响

目的 探讨金丝桃素对喉癌细胞Hep-2的影响。方法 体外培养的喉癌细胞Hep-2分别加入终质量浓度为0．5、1．0、2．0、3．0、5．0μg／ml的金丝桃素，加药后1h给予照射能量为7．5J／cm^2的光照10min，另取喉癌细胞Hep-2分别加入终质量浓度为5．0、10．0、20．0、25．0μg／ml的金丝桃素，不给予光照。各实验组均设空白对照组。继续培养48h后，应用荧光显微镜、四甲基偶氮唑盐[3-(4，5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2H tetrazolium bromide，MTT]法和流式细胞仪检测观察金丝桃素在光照和非光照条件下对喉癌细胞Hep-2的影响。结果 光镜下可见对照组喉癌细胞生长密集，细胞呈梭型或多角型，细胞彼此之间相接触。光照后小剂量金丝桃素组可见细胞数量明显减少，随着金丝桃素剂量的增加，细胞数量明显减少，在高剂量组可见细胞坏死。MTT结果显示光活化金丝桃素呈剂量依赖性抑制喉癌细胞的生长。流式细胞仪分析表明金丝桃素经光照后，可将喉癌细胞阻滞在G0-G1期，并诱导喉癌细胞凋亡；吖啶橙染色可见细胞胞膜出芽、染色质凝集、核片段化及凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。金丝桃素单独应用，对喉癌细胞的抑制作用相对较弱。结论 金丝桃素经光照后，可有效抑制体外培养的喉癌细胞的增殖，并可诱导喉癌细胞凋亡。     

喉癌组织中抑癌基因PTEN的表达及意义

目的检测抑癌基因PTEN在喉癌组织的表达情况,探讨PTEN与喉癌发生发展之间的关系. 方法采用免疫组织化学SABC染色法观察正常喉黏膜和喉癌组织中PTNE蛋白的表达,并比较分析其与肿瘤生长部位、病理分级、临床分期和淋巴转移的关系. 结果 PTNE在喉癌组织的表达阳性率(52.3%)明显低于正常喉黏膜组织的表达阳性率96.7%,(P＜0.05);Ⅰ、Ⅱ期喉癌(71.4%、63.3%)PTEN蛋白表达阳性率又明显高于Ⅲ、Ⅳ期喉癌(25.0%、22.2%),(P＜0.05);声门型喉癌(65.8%)明显高于声门上型和声门下型喉癌(34.8%、25.0%),(P＜0.05);高分化喉鳞癌(88.0%)明显高于低分化喉鳞癌(37.5%、18.8%),(P＜0.05);N0喉癌(78.4%)明显高于N1、2喉癌(17.9%),(P＜0.05). 结论 PTNE在喉癌的发生及发展过程中有表达缺失,缺失程度与临床分期、生长部位、病理分级和淋巴转移有相关性.     

喉癌中SSTR2和SSTR5 mRNA的表达及意义

目的 研究生长抑素受体（somatostatin receptor，SSTR）亚型SSTR2和SSTR5在喉癌组织及癌旁正常组织中的表达，以及与临床病理特征的关系。方法 应用反逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，检测46例喉癌组织与30例癌旁正常组织中SSTR2和SSTR5的表达，分析其与临床病理特征的关系。结果 在46例喉癌中SSTR2和SSTR5的表达率分别为58．70％和82．61％；在癌旁正常组织中的表达率分别为83．33％和90．00％。喉癌中SSTR2的表达低于癌旁正常组织（P〈0．05）；SSTR5的表达与癌旁正常组织无统计学意义（P〉0．05）。SSTR2和SSTR5的表达与喉癌的临床分期、病理分化程度明显相关（P〈0．001）。结论 大多数喉癌肿瘤组织中有一种以上生长抑素受体亚型基因的表达，其表达随喉癌恶性程度呈下降趋势。     

p57^KiP2和Cyclin A在喉癌中的表达及其临床意义

目的研究细胞周期素依赖性激酶抑制因子p57^KiP2和细胞周期素A（CyclinA）在喉癌组织中的表达及其临床意义。方法40例喉癌、20例声带不典型增生、20例正常喉组织切缘标本,免疫组化S-P法检测p57^KiP2和CyclinA的表达活性,比较分析其临床意义。结果在喉癌组织中,p57^KiP2阳性表达率42.5%,显著低于癌旁正常喉黏膜与不典型增生喉黏膜（P〈0.05）,并与喉癌组织的分化程度和淋巴结转移特性相关（P〈0.05）;CyclinA阳性表达率55.0%,明显高于癌旁正常喉黏膜与不典型增生喉黏膜（P〈0.05）,并与喉癌组织的分化程度和淋巴结转移特性相关（P〈0.05）。p57^KiP2与CyclinA的表达活性呈负相关（P〈0.01）。结论p57^KiP2的低表达及CyclinA高表达在喉癌的发生、发展过程中可能发挥重要作用,其表达水平与喉癌的分化程度、淋巴结转移与否及预后密切相关,是判断喉癌恶性程度与淋巴结转移特性的重要参考指标。     

咽喉反流对声门型喉癌中COX-2mRNA表达的影响

目的：探讨咽喉反流对环加氧酶2（COX-2）mRNA在声门型喉癌病变黏膜中表达的影响。方法：对40例声门型喉癌患者行电子鼻咽喉镜检查、反流检查计分量表（RFS）和反流症状指数量表（RSI）评分,将其分为声门型喉癌反流阳性组（20例）和声门型喉癌反流阴性组（20例）,另取10例癌旁2cm以上黏膜组织作为对照组。采用Real—timePCR方法,测定各组黏膜中COX-2tuRNA的表达情况。结果：声门型喉癌组COX-2mRNA的表达明显高于对照组（P〈O．05）;声门型喉癌反流阳性组的表达高于声门型喉癌反流阴性组（P〈0．05）。结论：咽喉反流因素可能通过组织损伤、炎症及细胞恶性转化使声门型喉癌的COX-2mRNA的表达升高。     

利用RNA-seq探讨谷氨酰胺剥夺对喉癌细胞转录组的影响

目的 利用RNA-seq技术研究谷氨酰胺剥夺对喉癌细胞基因表达谱的影响。 方法 CCK8检测喉癌细胞增殖速度,RNA sequence检测转录组学的改变。 结果 谷氨酰胺剥夺限制喉癌细胞的增殖,转录组分析发现谷氨酰胺剥夺导致328个基因上调,210个基因下调;GO分析发现上述基因与细胞代谢、蛋白质和核苷酸的合成相关;KEGG信号通路分析发现上述基因与O-多聚糖、糖基磷脂酰肌醇的生物合成,果糖、甘露糖、氨基酸和核苷酸的代谢,P53信号通路相关;疾病富集发现差异表达的基因主要与头颈部肿瘤相关。 结论 谷氨酰胺剥夺限制核酸代谢、RNA和蛋白质的结合,影响P53信号通路。     

喉鳞状细胞癌组织中Survivin基因与p15和p16基因表达的关系

OBJECTIVE:: To investigate the expression of Survivin (SVV) and its relationship with expression of p15, p16 in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). METHODS: Using strep avidin-biotin complex (SABC) method, we examined the expression of SVV, p15 and p16 gene in 48 LSCC tissus samples, 24 normal laryngeal mucosa tissus samples and 24 normal laryngeal tissus adjacent to the tumors samples. RESULTS: SVV was expression in 27 of 48 (56.3%) samples of LSCC and expression in 6 of 24 (25.0%) samples of normal laryngeal tissus adjacent to the tumors. Normal laryngeal mocosa tissus samples did not expressed SVV. Overexpression of SVV was related to the tumor site, grade, clinical stage and tumor prognosis (P < 0.05). The expression of SVV in LSCC was positive correlated with p16 expression( C = 0.52 P < 0.001), but not with p15 expression. CONCLUSION: SVV may play a role in the pathway of carcinogenesis and tumor progress. It is feasible for early diagnosis and prognosis estimation. Overexpression of SVV gene and de-activation of antioncogene p16 may be play synergetic roles in the carcinogenesis of LSCC.     

华蟾素对喉癌细胞株的诱导分化研究

目的研究华蟾素(Cinobutacini,CIN)对喉癌细胞的诱导分化作用.方法体外培养喉癌细胞(Hep-2)放射性同位素掺入法检测CIN对Hep-2的生长抑制作用,原位杂交方法检测c-myc(细胞核内癌基因)的表达变化.结果CIN低浓度在24小时内有促进Hep-2细胞分裂、增殖并诱导细胞分化作用;高浓度作用72小时则抑制Hep-2细胞生长.3H-脱氧胸苷(3H-TdR)掺入量检测提示,CIN短时间作用的Hep-2细胞cpm(每分钟脉冲数)值增高,而长时间作用组则cpm值下降.CIN作用48小时后,Hep-2细胞内c-myc蛋白表达较对照组低,但较平阳霉素组高.结论中药华蟾素在低浓度和时间相对较短时对人喉癌Hep-2细胞具有诱导分化作用,当作用时间超过72小时,则表现为抑制肿瘤细胞生长作用.     

巨噬细胞集落刺激因子对喉鳞状细胞癌喉癌细胞株的作用

目的:了解和探讨巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)及其受体对喉鳞状细胞癌细胞株(Hep2)细胞系的作用。方法:使用氚标记胸腺嘧啶核苷(3HTDR)掺入法和MTT法测试MCSF作用于Hep2后细胞的增殖状况,并测试加入巨噬细胞集落刺激因子受体(MC-SFR)抗体后细胞生长情况。ELISA法测试M-CSF作用Hep2细胞后上清中的MCSF的浓度变化。结果:Hep2细胞培养后较培养前的上清中的MCSF的浓度升高。加入的M-CSF浓度越大,细胞增殖越差,加入MCSFR抗体浓度越大细胞增殖越好。结论:MCSF对喉癌细胞Hep2细胞的增殖具有抑制作用。     

抗人喉癌双功能抗体制备及对Hep-2细胞株杀伤作用的研究

目的：为了制备高效的,特异的抗人喉癌／抗蓖麻毒素A双功能单克隆抗体,观察其对Hep－2细胞株杀伤作用。方法：选用BALB／C鼠,分别行蓖麻毒素A和人喉鳞状细胞癌腹腔免疫后,提取抗体,经与骨髓瘤细胞融合,制备成抗人喉癌／抗蓖麻毒素A双特异性单克隆抗体。结果：该双功能抗体与喉癌组织的特异性结合率为87％,对Hep－2细胞半数抑制浓度比游离环磷酰胺强40倍。结论：采用二次杂交瘤技术制备的双功能抗体优于化学偶联法,抗体效价具有均匀性和理想的信噪比,抗体易于标准化。     

脂质体介导p27基因转染对喉癌细胞系Hep-2生长影响的研究

目的探讨p27基因对喉癌Hep-2细胞系生长的抑制作用,为喉癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法采用基因转染技术,将p27cDNA转染到喉癌Hep-2细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果转染p27基因的喉癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0～G1期的细胞由32.2%增加到66.9%,经Dotblot、Western blot杂交和免疫组化证实,p27mRNA表达有明显差异（P〈0.01）,p27的蛋白表达量有明显差异（P〈0.01）,说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1～S期。结论提高喉癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗喉癌的新途径。     

DRB对人喉癌Hep-2细胞系中PK-CK2 mRNA表达的影响及其与细胞凋亡的关系

目的探讨5,6-二氯-1--βD-呋喃核糖苯并咪唑(DRB)对人喉癌Hep-2细胞系中蛋白激酶CK2(PK-CK2)mRNA表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法不同浓度的DRB作用于人喉癌Hep-2细胞后,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hep-2细胞PK-CK2 mRNA表达水平的变化,采用流式细胞术检测Hep-2细胞凋亡率的变化。结果随着DRB浓度的增加或作用时间的延长,Hep-2细胞PK-CK2 mRNA表达水平呈下降趋势,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),流式细胞术检测二倍体峰前出现凋亡峰,5、10、20、40、80μmmol/L DRB与Hep-2细胞共育2h后的细胞凋亡率分别为0.68%、1.17%、7.25%、10.40%、22.66%。结论DRB可下调Hep-2细胞PK-CK2 mRNA表达水平,诱导细胞凋亡,这些可能是DRB抗癌作用的重要机制之一。     

美洛昔康对人喉癌Hep-2细胞株作用的研究

目的探讨美洛昔康对喉癌细胞株Hep-2凋亡作用和对体外培养喉癌Hep-2细胞周期的影响及作用机制。方法应用肿瘤细胞培养技术,随机分实验组和空白对照组,培养不同时间后,用流式细胞仪检测美洛昔康对Hep-2细胞凋亡发生率及对细胞周期的影响,同时检测美洛昔康作用Hep-2细胞后细胞线粒体跨膜电位的变化。结果流式细胞仪分析显示美洛昔康呈浓度依赖性诱导Hep-2细胞凋亡,且实验组G1期细胞数明显增加,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;实验组Hep-2细胞线粒体跨膜电位明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论美洛昔康具有诱导Hep-2细胞凋亡及抑制细胞分化的作用,其机制可能与触发了线粒体凋亡途径有关。     

新型平阳霉素杀伤喉癌细胞系Hep-2细胞的体外实验研究

喉癌是耳鼻咽喉科常见的恶性肿瘤 ,手术切除是治疗该肿瘤的首选方法。但是对于晚期喉癌患者单纯采用手术疗法难以获得满意的疗效。应用化疗作为辅助治疗手段 ,可望减少晚期恶性肿瘤患者的复发率 ,提高其生存率。平阳霉素(pingyangmycin,PYM)是我国自行开发和研制的新型抗肿瘤抗生素 ,国内许多研究已证实PYM能在体外抑制多种类型的癌细胞株 ,但对喉癌细胞系 Hep- 2的杀伤作用研究尚未见报道。本研究应用 PYM作用于喉癌细胞系 Hep-2 ,观察其对喉癌细胞系 Hep- 2的杀伤作用 ,并对 PYM诱导 Hep- 2细胞凋亡进行了初步观察。1　材料与方法1…     

RNAi沉默miRNA-224-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术,来探讨沉默miRNA-224-5p对人喉鳞状细胞癌（简称喉鳞癌）Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-224-5p-RNAi-LV3转染喉鳞癌Hep-2。设为干扰组（miRNA-224-5p-siRNA,SI组）、阴性对照组（NC组）和空白对照组（BC组）,分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-224-5p的表达情况,用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果 miRNA-224-5p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-224-5p的表达,转染后Hep-2细胞增殖能力显著降低,细胞侵袭能力明显减弱,细胞周期及细胞凋亡均未见明显影响。结论 RNAi沉默miRNA-224-5p可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力。     

阳离子卟啉光动力疗法作用于人喉癌Hep-2细胞的实验研究

目的：探讨阳离子卟啉对人喉癌Hep-2细胞的光动力疗法(PDT)的作用。方法：采用4-甲酰基苯甲酸甲酯和4-吡啶甲醛经化学反应合成阳离子卟啉(5-[4-[1-(4-苯基哌嗪基)-乙酰氧羰基]苯基]-10,15,20-三(4-N-甲基吡啶盐)卟啉,三碘盐)。以倒置显微镜下观察细胞生长状态,应用四唑盐比色(MTT法)和原位末端标记技术(TUNEL)分别研究阳离子卟啉在不同浓度(0、10^-7、10^-6、10^-5mol／L)及不同时间(0、0．5、1．0、1．5、2．0h)高压汞灯照射下对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果：在一定浓度范围内,阳离子卟啉对Hep-2细胞生长增殖的抑制作用和诱导凋亡作用随着浓度和光照时间的增加而增强。最高浓度(10^-5mol／L)及不同光照时间下Hep-2细胞生长抑制率分别为1．18％、35．21％、58．59％、70．42％、84．34％,诱导的细胞凋亡率分别为3．30％、29．41％、32．30％、34．52％。大剂量和高能量照射可直接导致少量细胞坏死,随着光照时间的延长,未加卟啉的对照组对细胞生长亦有一定的抑制作用。结论：阳离子卟啉在高压汞灯的照射下能抑制体外培养的Hep-2细胞生长增殖并诱导部分Hep-2细胞凋亡,其治疗效果在一定浓度范围内与用药剂量和照射能量相关。