青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究天然化合物青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测青藤碱对DU145细胞增殖的影响;采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测青藤碱对DU145细胞凋亡的影响;采用电子显微镜观察青藤碱作用DU145细胞后细胞超微结构的变化.结果 MTT结果显示青藤碱浓度在100～400 μmol/L时,作用24、48小时后,细胞增殖受到抑制,呈现明显时间剂量效应关系;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法显示青藤碱(0、200、400 μmol/L)作用于细胞24小时后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应关系;电子显微镜下青藤碱处理组细胞可见染色质浓聚、边集等典型的凋亡改变,而空白对照组没有相应的变化.结论 青藤碱能有效抑制人前列腺癌DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

山楂酸抑制食管鳞癌细胞增殖、迁移与诱导凋亡的作用研究

目的 探讨山楂酸对食管鳞癌细胞增殖、迁移与诱导凋亡的影响及可能机制。方法 分别以不同浓度的山楂酸处理ECA-109细胞,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Annexin V-FITC/PI双染凋亡法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2和p53蛋白的表达。结果 山楂酸剂量依赖性抑制ECA-109细胞的增殖和迁移,Annexin V-FITC/PI双染检测到细胞经给药后发生凋亡,且细胞中Bax、p53蛋白表达上升,Bcl-2蛋白表达下降。结论 山楂酸对食管鳞癌细胞的增殖和迁移有抑制作用,且通过上调Bax、p53和下调Bcl-2的表达来诱导该细胞凋亡。     

唑来膦酸对肺腺癌细胞的生长及化疗敏感性研究

目的:本研究主要探讨第三代双磷酸盐类药物唑来膦酸在体外对人肺腺癌细胞株A549生长的影响,进一步研究唑来膦酸与顺铂(DDP)对A549细胞的生长抑制是否具有协同作用。方法:采用MTT法检测不同剂量的唑来膦酸对人肺癌细胞株A549的生长作用,检测唑来膦酸单药及联合DDP对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制,采用流式细胞术分析唑来膦酸联合DDP对细胞周期及凋亡的影响。结果:唑来膦酸对A549细胞的抑制效应与药物剂量及作用时间均成正比。单用唑来膦酸(1、10μmol/L)对A549细胞的生长抑制率分别为(20.69±2.69)%、(44.05±4.03)%,单用DDP(0.5mg/L)组的抑制率为(13.58±3.13)%。唑来膦酸(1、10μmol/L)联合DDP(0.5mg/L)作用A549细胞72h时,对A549细胞的生长抑制率分别为(44.23±3.77)%、(60.9±3.03)%,联合用药组与单药组相比差异有显著性(P<0.01)。唑来膦酸作用A549细胞72h的IC50值为25μmol/L。流式细胞术分析显示,单用唑来膦酸(1、10μmol/L)的细胞凋亡率分别为(16.94±1.95)%、(24.03±0.44)%,单用DDP(0.5mg/L)组的细胞凋亡率为(9.08±1.31)%。唑来膦酸(1、10μmol/L)联合DDP(0.5mg/L)时,引起的细胞凋亡率分别为(32.22±1.68)%、(39.22±7.00)%,联合用药组的凋亡率明显高于单药组(P<0.01)。唑来膦酸单药或者联合DDP均表现将A549细胞明显阻滞于S期(DNA合成期)。结论:唑来膦酸对肺癌细胞株有生长抑制作用,呈时间、剂量依赖性效应,其IC50值为25μmol/L。唑来膦酸可以干扰DNA合成,与DDP有协同作用。     

TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用

目的:探讨TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用。方法:PCR和Western blot检测TRPM8的表达;MTT法检测DU145细胞增殖能力;划痕实验、transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期相关蛋白(p-AKT,p-GSK-3β,cyclin B1,cyclin D1,CDK2/4/6)、凋亡相关蛋白(Bcl-2,Bax,caspase-3)、迁移相关蛋白(pFAK,MMP2)表达水平的变化。结果:PCR和Western blot提示TRPM8在前列腺癌DU145细胞中表达显著高于正常前列腺上皮PNT1A细胞;BCTC处理后,DU145细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞周期表现为G0/G1阻滞期(P<0.05),迁移、侵袭能力也明显下降(P<0.05),但凋亡相关实验显示BCTC并不引起细胞凋亡(P>0.05)。Western blot显示BCTC能下调p-AKT,cyclin D1,CDK2,CDK6,MMP2和pFAK等的表达,而上调p-GSK-3β的表达。结论:TRPM8抑制剂BCTC能抑制前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力,是一个极具潜力的抗前列腺癌药物。     

甘草甜素诱导前列腺癌细胞株DU145凋亡的体外研究

目的:探讨甘草甜素(GL)诱导前列腺癌细胞株DU145凋亡的作用机制。方法:采用不同浓度的GL处理细胞后,用流式细胞仪检测前列腺癌细胞株DU145的凋亡率及细胞周期分布。结果:50、100μmol/L浓度的GL能诱导前列腺癌细胞DU145凋亡,凋亡率与剂量成正相关;DU145随药物浓度及作用时间变化,细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高,并出现典型的凋亡峰。结论:甘草甜素能诱导前列腺癌细胞凋亡,并明显抑制癌细胞增殖,具有直接抗肿瘤作用。     

石榴叶提取物诱导前列腺癌细胞凋亡并抑制其增殖转移的研究

目的 研究石榴叶提取物(pomegranate leaves extract, PLE)对前列腺癌细胞增殖、凋亡及转移能力的影响。方法 采用MTT法检测不同质量浓度PLE（终质量浓度分别为12.5、25、50、100、200 μg/mL）干预作用不同时间(24、48、72 h)对前列腺癌细胞TRAMP-C1、DU145、PC3增殖的影响,克隆形成实验验证PLE对DU145、PC3细胞增殖的长期影响。PLE干预PC3细胞48 h后,Hoechst-33258染色观察细胞核内染色质变化,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,细胞划痕实验测试细胞迁移运动能力的变化。结果 与对照组比较,PLE在12.5～200 μg/mL范围内对TRAMP-C1、DU145、PC3细胞增殖具有抑制作用(P<0.05);PLE在6.25～100 μg/mL范围内使DU145和PC3集落形成数明显减少(P<0.01)。PLE干预48 h后,PC3出现细胞核断裂、产生凋亡小体的现象,随着PLE质量浓度增大,凋亡率逐渐上升(P<0.05),同时PC3细胞向划痕区域迁移生长的能力比对照组低(P<0.01)。结论 PLE能抑制前列腺癌细胞增殖,同时促进PC3细胞凋亡,减弱其迁移能力。     

抗SMO多克隆抗体对DU145前列腺癌细胞生长及侵袭力的影响

目的 探讨抗SMO多克隆抗体对DU145前列腺癌细胞生长及侵袭能力的影响。方法 预测SMO蛋白抗原表位并制备SMO抗体,评估其效价和特异性;实验分组包括空白对照组、兔IgG抗体处理组、抗SMO抗体处理组、shRNA空载对照组、TRPC-6蛋白shRNA稳转细胞处理组以及合并正常IgG抗体和抗SMO抗体处理组。MTT法和细胞凋亡实验检测抗SMO抗体对DU145细胞增殖和细胞凋亡的影响;Transwell实验检测抗SMO抗体对正常以及稳转TRPC-6shRNA蛋白的DU145细胞侵袭能力的影响。结果 制备的抗体效价为1∶51200,且抗体特异性良好;随着抗SMO抗体浓度的升高,细胞存活百分比逐渐下降(P<0.05),随着时间的发展,48h和72h之间的细胞存活百分比存在差异(P<0.05)。凋亡实验显示,早期凋亡细胞(Annexin V⁺/PI-)凋亡百分比在抗SMO抗体处理组较空白对照组中明显升高(P<0.05),随着抗体浓度的升高,凋亡百分比逐渐升高。Transwell实验显示,随着抗SMO抗体的处理,细胞的细胞侵袭抑制率逐渐升高(P<0.05),TRPC-6蛋白shRNA稳转DU145细胞处理组中,随着抗体浓度的升高,细胞的细胞侵袭抑制率逐渐升高(P<0.05)。结论 抗SMO多克隆抗体对正常以及TRPC-6蛋白shRNA稳转的DU145细胞生长以及侵袭能力均有明显的抑制作用,为临床治疗前列腺癌提供一个潜在的方向。     

GM-CSF联合5-FU对胃癌细胞凋亡和周期的影响

目的通过GM-CSF联合5-FU作用于SGC7901胃癌细胞,以初步探究其对胃癌细胞凋亡和周期有何影响,为临床胃癌化疗的联合用药提供参考依据。方法体外培养胃癌SGC7901细胞,Annexin V-FITC/PI流式检测细胞凋亡情况,PI流式检测细胞周期情况。结果 Annexin V-FITC/PI流式检测结果显示5-FU能显著诱导胃癌细胞凋亡,而加入GM-CSF后抵抗了5-FU诱导的凋亡(P0.05)。流式周期结果显示5-FU和GM-CSF均能导致胃癌细胞周期阻滞,并且两者具有互相拮抗作用。结论 GM-CSF能够有效抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡和周期阻滞,在增强胃癌细胞5-FU化疗耐药性方面具有重要作用。     

miR-221在前列腺癌细胞中的表达及对增殖的影响

目的研究前列腺癌细胞中miR-221的表达情况及其对癌细胞增殖的影响。方法运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异情况,利用细胞转染构建miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,再通过CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖情况的变化。结果 qRT-PCR检测细胞株发现miR-221在PC3、LNCa P和DU145三种前列腺癌细胞株中表达量均比前列腺正常细胞株Pr EC低(F=254.197,P<0.001),其中两两比较差异也均有统计学意义。细胞转染技术构建的miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,经qRT-PCR结果显示,miR-221在LNCa P和DU145细胞株中的表达水平明显升高(LNCa P,倍数变化=2.24,t=3.46,P<0.01;Du145,倍数变化=2.24,t=4.29,P<0.01)。细胞增殖实验结果显示,过表达了miR-221的LNCa P(P<0.001)和DU145(P<0.001)细胞生长速度慢于对照组。结论实验证明miR-221表达过度能减慢前列腺癌细胞的增殖,miR-221有可能成为前列腺肿瘤治疗的生物学标志物。     

芹菜籽提取物抑制卵巢癌细胞SKOV-3生长的机制研究

目的 研究芹菜籽提取物(CSE)对卵巢癌细胞生长抑制的作用及机制.方法 超临界提取芹菜籽成分(CSE),体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3,MTT法检测CSE对细胞生长的抑制作用,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡以及PI单染色法检测细胞周期.结果 成功提取芹菜籽成分(CSE),MTT法检测显示CSE可呈现剂量依赖性抑制卵巢癌细胞的生长,流式细胞术结果显示CSE抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡.结论 CSE抑制卵巢癌细胞株SKOV-3生长繁殖,其机制可能与阻滞细胞周期、促进凋亡有关.     

抗人DR5单抗对人肝癌细胞系的凋亡作用

目的:探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝癌细胞系的凋亡诱导活性。方法:常规培养人肝细胞HL7702,单克隆抗体对细胞的杀伤活性用MTT法检测、对细胞的凋亡作用采用Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞形态变化及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析技术。结果:MTT的结果显示抗体的量和细胞杀伤率之间有明显的线性关系,随着抗体浓度的增加,细胞的杀伤率就增加;荧光显微镜下mDRA-6诱导导致细胞呈现典型的细胞凋亡的形态性特特征;流式细胞术检测显示,2 mg/L的mDRA-6作用人肝肝癌癌细胞系SMMC-7721细胞6 h,细胞凋亡率为35%。结论:mDRA-6能够诱导人肝癌细胞系凋亡,mDRA-6具有诱导细胞凋亡的活性。     

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的 研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率,采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响,采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明,新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量依赖性;fluo-3AM染色荧光显微镜下观察,可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平,且呈现浓度依赖关系;PI染色流式细胞仪检测结果表明,新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期;Hoechst 33342染色和Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明,随着新藤黄酸浓度的增加,A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势;Western blot检测结果表明,新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论 新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。     

活性氧在大黄素联合顺铂诱导食管癌EC-9706细胞凋亡中的作用

目的探讨大黄素联合顺铂诱导人食管癌EC-9706细胞凋亡过程中的作用及可能机制。方法不同浓度大黄素、顺铂与二药联合分别作用于EC-9706细胞,应用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双荧光染色法测细胞凋亡（形态学变化）;MTT法检测细胞抑制率;用Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）双染法及流式细胞术检测细胞凋亡情况（计算凋亡细胞百分率）;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果大黄素、顺铂均可明显抑制EC-9706细胞增殖,并且呈一定的时间依赖性;大黄素、顺铂分别及联合作用24 h,细胞早期凋亡率分别为（15.39±3.40）%、（12.80±2.41）%和（23.09±3.97）%,较对照组〔（1.42±0.14）%〕明显增加（P均〈0.05）;两药分别及联合作用2 h,细胞内活性氧的含量分别为（35.57±3.16）%、（29.44±2.43）%和（43.23±3.68）%,较对照组〔（4.73±2.12）%〕明显升高（P〈0.05）。结论大黄素能抑制EC-9706细胞增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生促进凋亡,与顺铂联用存在协同作用,其机制可能与通过诱导细胞内活性氧的产生促进细胞凋亡有关。     

Annexin V-FITC／PI法检测脂多糖诱导滋养细胞的凋亡

目的：通过流式细胞术测定法检测脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对滋养细胞凋亡的影响，明确LPS与滋养细胞凋亡的关系，为预防和治疗由滋养细胞凋亡导致的病理妊娠提供新的思路。方法：利用流式细胞仪Annexin V-FITC／H法检测不同浓度的LPS处理培养的JEG0细胞系滋养细胞的凋亡率分析。结果：流式细胞检测结果显示LPS组凋亡指数分别为（2．05±0．33）％、（7．43±0．68）％、（13．43±0．90）％显著高于对照组（0．80±0．15）％，且P均〈0．01。结论：Annexin V-FITC／PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞；LPS能够诱导滋养细胞过度凋亡，且凋亡率随着LPS浓度的增加而增加。     

Eg5通过c-Myc/SP1/CDK1通路调节去势抵抗性前列腺癌细胞的恶性增殖

目的：探究纺锤体有丝分裂驱动蛋白（Eg5）对去势抵抗性前列腺癌细胞株DU145生长、凋亡、细胞周期及侵袭转移的调节作用及机制。方法：Eg5 shRNA干扰Eg5在DU145细胞内的表达,小分子抑制剂SB-743921抑制Eg5在DU145细胞内的功能。实验分为对照组、NC shRNA组、Eg5 shRNA组和SB-743921组,MTT实验和单克隆形成实验测定各组细胞生长;Annexin V-FITC和PI双染实验测定各组细胞凋亡;PI单染实验分析各组细胞周期;划痕实验分析各组细胞迁移能力;q-PCR和Western blot评价各组细胞内c-Myc、SP1、CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1、CDC25B、N-cadherin、Vimentin及E-cadherin的表达情况。结果：NC shRNA组与对照组各指标差异均无统计学意义（P ＞0.05）。Eg5 shRNA组、SB-743921组与对照组比,细胞增殖及迁移能力降低、细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G2/M期,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。Eg5 shRNA组、SB-743921组与对照组相比,细胞内c-Myc和SP1的表达量降低（P ＜0.05）,调控G2/M期基因CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1及CDC25B的表达降低（P ＜0.05）,同时调控细胞迁移基因N-cadherin和Vimentin的表达量降低,E-cadherin的表达量增加（P ＜0.05）。结论：有丝分裂驱动蛋白Eg5可能通过c-Myc/SP1/CDK1通路调节去势抵抗性前列腺癌的恶性增殖和侵袭转移,是治疗前列腺癌的潜在靶点。     

姜黄素抗白血病细胞活性及其机制

目的 探讨姜黄素对白血病细胞的致凋亡作用及其相关作用机制.方法 MTT细胞毒实验检测姜黄素对白血病HL-60细胞的生长抑制作用,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,提取细胞总蛋白Western blot检测survivin蛋白、caspase-9和caspase-3剪切带的表达.结果 姜黄素对白血病HL-60细胞显示了高效的细胞毒活性,IC50值为(1.66±0.31)μmol/L.0、2、4和8μmol/L的姜黄素处理HL-60细胞48h后,细胞的凋亡率分别为(2.44±1.24)％、(17.12±3.61)％、(34.82±6.63)％和(53.94±8.17)％,各处理之间差异有显著性(P＜0.01).Western blot结果显示姜黄素诱发了HL-60细胞内caspase-9的裂解和继发的caspase-3剪切,同时姜黄素也剂量依赖性的下调了HL-60细胞内survivin蛋白的表达.结论 姜黄素对人白血病细胞具有高效的致凋亡作用,下调细胞survivin蛋白的表达激活线粒体凋亡途径是其致凋亡的主要作用机制.     

硫化氢对氧化损伤心肌细胞凋亡的影响

目的:观察硫化氢(H2S)对体外培养乳鼠心肌细胞氧化损伤所致凋亡的影响。方法:以0.1 mmol/LH2O2处理细胞建立心肌细胞氧化损伤的模型,检测不同浓度的H2S对氧化应激下细胞存活率乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量的影响,Annexin V-FITC/PI双染色分析不同剂量的H2S对氧化应激所致心肌细胞凋亡的影响。结果:过氧化氢对心肌细胞有明显的损伤作用,H2S可使培养基中的LDH和MDA水平显著下降,不同剂量的H2S预处理均可显著降低H2O2诱导的凋亡。结论:H2S能有效对抗H2O2引起的氧化损伤,且对细胞凋亡有抑制作用,其抗凋亡效应在一定范围内呈剂量依赖关系。     

DETECTION OF B LYMPHOMA CELLS UNDERGOING APOPTOSIS BY ANNEXIN—V ASSAY

Objecte.To quantitatively analyze apoptotic and secondary necrotic cells under apoptosis conditions.Methods.The cells of Burkitt lymphoma (BL) cell line Raji were incubated with 1.0μmol/L dexamethaone(DEX) for 2,4 and 8h respectively,then stained with Annexin V-FITC (fluorescein isothiocyanate conjugated)which was used to detect the exposed phosphatidylserine(PS) on the epimembrane resulting from a loss of phospholipid asymmetry in the early stage of apoptosis ,and also stained with propidium iodide(PI)which allows analysis of secondary necrotic cells related with cell membrane and DNA damage that probably represent late stage of apoptosis,then apoptotic cells were quantified by flow cytometry(FCM).Furthermore,Annexin^ /PI^- and Annexin^ /PI^ cells were sorted by fluoresence-activated cell sorter(FACS),and identified by electron microscopy(EM)and DNA gel electrophoresis.Reuslts.The percentage of apoptotic cells was fund to increase with the incubation time(r=0.97).This method was senitive with low detection limit(0.02%) ,and was reproducible with low coefficient variance (CV)(4.2%).Meanwhile,the Annexin^ /PI^- and Annexin^ /PI^- cells were identified as apoptotic and necrotic cells under EM,and DNA extracted from the Annexin^ /PI^- cell was characteriazed by “ladder pattern“.Conclusions.Annexin-V assay is a specific,sensitive,accurate,reproductive and quantitative method for analyzing apoptotic cells.     

骨形态发生蛋白2对体外培养结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨骨形态发生蛋白2对体外培养的结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法重组人骨形态发生蛋白（rhBMP-2）不同浓度（分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml）、不同时间干预细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）检测rhBMP-2对细胞增殖的影响;Hoechest 33342染色观察细胞形态变化;An-nexinV/PI染色流式细胞仪分析细胞凋亡。结果BMP-2对HT-29细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性,100 ng/ml浓度24 h内抑制作用最强。随时间延长抑制作用无显著性差异。BMP-2作用24 h后Hoe-chest 33342染色可见核固缩、核碎裂等细胞凋亡表现增加明显。AnnexinV/PI染色流式细胞仪分析显示作用24 h后细胞凋亡较对照组有显著性差异。结论BMP-2在一定作用时间、浓度条件下对结肠癌HT-29细胞有明确的抗增殖促凋亡作用。     

Annexin V for flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on lymphoma cells undergoing apoptosis]

OBJECTIVE: To quantitatively analyze apoptotic and secondary necrotic cells under apoptosis conditions. METHODS: The cells of Burkitt lymphoma cell line Raji were incubated with 1.0 mumol/L dexamethasone (DEX) for 2, 4 and 8 h, then stained with Annexin V-FITC (fluorescein isothiocyanate conjugated) which was used to detect the exposure of phosphatidylserine (PS) on the out membrane resulting from a loss of phospholipid asymmetry in the early stage of apoptosis, and also stained with propidium iodide (PI) which allows the analysis of secondary necrotic cells related with cell membrane and DNA damage, then apoptotic cells was quantified by flow cytometry (FMC). Furthermore, Annexin+/PI- and Annexin+/PI+ cells were sorted by fluoresence-activated cell sorter (FACS), and identified by electron microscopy (EM) and DNA gel electrophoresis. RESULTS: The results revealed that the percentage of apoptotic cells was increased and correlated well with incubation time (r = 0.97). The sensitivity of this method was shown by its detection limit 0.02%; the method was reproducible, and the coefficient variance (CV) was 4.2%. Meanwhile, the Annexin+/PI- and Annexin+/PI+ cells were identified as apoptotic and necrotic cells under EM, and the DNA extracted from the Annexin+/PI- cells was characterized by "ladder pattern". CONCLUSION: Annexin V assay for analyzing apoptotic cells is specific, sensitive, accurate, reproducible and quantitative for apoptosis investigation.