细胞外信号调节激酶抑制剂协同蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡

目的 观察细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERK )抑制剂PD98059与蟾蜍灵(bufalin)协同诱导K562细胞凋亡作用并探讨其分子机制.方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;采用形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot方法检测bcl-2蛋白表达.结果 25～100 μmol/L 的PD98059与蟾蜍灵单独或联合应用可抑制K562细胞增殖,并诱导细胞凋亡,在此过程中下调bcl-2蛋白表达,且二者具有协同作用.结论 PD98059协同蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调bcl-2蛋白表达有关.     

蟾蜍灵诱导人急性淋巴白血病细胞凋亡的实验研究

目的研究蟾蜍灵对人急性淋巴白血病(CEM)细胞的作用。方法台盼蓝拒染法观察蟾蜍灵对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测蟾蜍灵作用后细胞凋亡情况。结果10~80nmol/L蟾蜍灵于24h开始明显抑制CEM细胞生长(P<0.01)。24,48和72h抑制细胞增殖50%的药物浓度分别为15.13,9.59和6.57nmol/L;20nmol/L,40nmol/L蟾蜍灵作用24h后出现典型的细胞凋亡形态学改变;20nmol/L蟾蜍灵处理12,24和48h凋亡细胞百分率分别为2.46%、17.92%和66.26%;40nmol/L蟾蜍灵处理12,24和48h凋亡细胞百分率分别为5.19%、32.71%和80%以上;凋亡细胞百分率呈剂量和时间依赖性。结论蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制CEM细胞生长、诱导凋亡。     

蟾蜍灵对K562细胞生长抑制及凋亡诱导作用

目的：研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人白血病细胞的作用。方法：应用MTT比色法观察bufalin对细胞的抑制作用，用荧光双染观察细胞结构的改变，DNA凝胶电泳分析细胞的凋亡。结果：bufalin明显抑制K562细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为0．0125μmol／L；0．10μmol／L的bufalin作用24h即可明显诱导白血病细胞的凋亡，凋亡率呈剂量和时间依赖性；琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带。结论：bufalin对白血病细胞有极强的生长抑制和诱导凋亡作用。     

蟾蜍灵对白血病U937细胞生长抑制和凋亡诱导作用

蟾蜍灵是蟾蜍毒素的主要成分之一,蟾蜍毒素具有强心、麻醉、解毒、止痛、开窍、醒神等药理作用,已被广泛应用于临床。近年来发现,含有蟾蜍毒素的中药制剂在体外能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导白血病细胞的分化。临床观察提示,含有蟾蜍毒素的中药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、白血病等具有明显的抑制作用。Numazawa[1]研究表明,蟾蜍毒素的各种成分以剂量依赖的方式抑制K562细胞生长。在所有的蟾蜍毒素中,蟾蜍灵是诱导白血病细胞分化最有效的成分,蟾蜍灵在较低浓度(1×10-8~1×10-9mol/L)能够在较宽的范围内(有较宽的白血病细胞谱)引起人…     

蟾蜍灵对结肠癌SW620细胞凋亡的影响

目的:研究蟾蜍灵诱导结肠癌细胞的凋亡作用.方法:采用不同浓度的蟾蜍灵处理结肠癌SW620细胞,采用四唑蓝比色法检测细胞生长,分别通过检测caspase-3活性和琼脂糖凝胶电泳了解细胞凋亡情况,以Fura-2荧光复合技术测结肠癌细胞内游离Ca2 浓度.结果:蟾蜍灵对结肠癌细胞增殖具有很强的抑制作用.蟾蜍灵能够诱导结肠癌细胞凋亡.在结肠癌细胞凋亡过程中,胞内游离Ca2 浓度明显升高,以凋亡早期更为明显.1 h时为(288.56±8.46)nmol/L,明显高于对照组(125.56±3.18)nmol/L(P＜0.01).结论:蟾蜍灵对结肠癌细胞生长具有很强的抑制作用,与诱导细胞凋亡有关.Ca2 在蟾蜍灵诱导结肠癌细胞凋亡过程中有一定的作用.     

蟾蜍灵对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)凋亡的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.分为对照组、LPS刺激组和蟾蜍灵干预组,应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,应用透射电镜观察系膜细胞超微结构的变化,采用逆转录PCR检测Bax和Bcl-2基因mRNA的表达.Western blot法检测Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:透射电镜观察蟾蜍灵干预组可见凋亡早期形态学改变.逆转录PCR和Western blot结果显示蟾蜍灵组较脂多糖组Bax表达增多,Bcl-2表达减少,差异均具有统计学意义(P＜0.01),蟾蜍灵干预后,Bax较Bcl-2表达过量.结论:蟾蜍灵可能通过调节Bax和Bcl-2的相对表达量而诱导脂多糖作用后肾小球系膜细胞发生凋亡.     

蟾蜍灵对K562细胞凋亡诱导作用及bcl-2基因表达的影响

目的探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（bufalin）对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;原位缺口末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;半定量RT—PCR技术检测bcl-2mRNA表达。结果蟾蜍灵对K562细胞生长具有明显的抑制作用,MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0．013μmol·L^-1,统计学分析表明差异具有显著性（P〈0．01）;蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡（P〈0．01）,药物作用6h、12h和24hK562细胞的凋亡率分别为20．36％、34．35％和48．16％;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;bcl-2mRNA表达3h开始下降,6～12h持续下调,与对照组相比具有显著差异（P〈0．01）。结论蟾蜍灵对K562的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用,而K562细胞凋亡可能是由于bcl-2基因表达改变。     

蟾蜍灵对白血病K562细胞生长抑制机制

目的探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响。方法倒置光显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态结构改变;MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;流式细胞术分析蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果在光镜、荧光显微镜和电子显微镜下,蟾蜍灵作用K562细胞的形态和结构发生明显改变;蟾蜍灵对K562细胞的生长具有明显的抑制作用,与对照组细胞进行比较,差异具有显著性(P<0.05);MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0.013μmol/L,统计学分析证明,差异具有显著性(P<0.01);蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;蟾蜍灵可阻滞K562细胞于G2/M期。结论①蟾蜍灵对K562细胞的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用;②蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡可能归功于G2/M期阻滞。     

人晶状体上皮细胞凋亡时细胞外信号调节激酶表达的变化

目的研究紫外线B引起培养的人晶状体上皮细胞凋亡时细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达水平的变化。方法以人晶状体上皮细胞系为研究模型,其中实验组用紫外线B照射后与对照组继续培养12h,然后通过蛋白印迹(Westernblot)法检测两组ERK酶表达的量。结果试验组上样品量明显少于对照组,而两组ERK1/2表达的量相等,故说明实验组实际ERK1/2表达量强于对照组。结论人晶状体上皮细胞在紫外线照射下发生凋亡,此时ERK1/2表达量随之增强。该研究为进一步深入研究ERK1/2在白内障和后发障形成过程中的作用打下良好基础。     

细胞外信号调节激酶磷酸化对十字孢碱诱导肝星形细胞凋亡的调控

目的:肝星形细胞(hepatic stellate cells, HSCs) 是参与肝纤维化和肝硬化发展过程的主要细胞。在肝纤维化过程中, 肝星形细胞增殖并发生表型转化, 从静止状态向肌纤维母细胞样转化。后者的归宿可为凋亡, 也可重归静止状态。目前转化肌纤维母细胞样细胞的凋亡机制尚未明确。本文研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERKs)磷酸化状态对十字孢碱诱导HSCs凋亡的影响。方法:采用Western 印迹和流式细胞术检测4种肝星形细胞株(CFSC-8B, -2G, -3H and-5H) 的ERKs表达水平和细胞凋亡状态。结果:4种肝星形细胞株各具有形态特异性, 并与其内α-SMA表达水平相符, 其中 CFSC-8B 细胞株 α-SMA表达水平为最高。虽然 ERK1/2 总蛋白表达水平在4种细胞株相似, 但磷酸化 ERK1/2在 CFSC-8B 和 CFSC-2G 2个细胞株中表达明显高于 CFSC-3H 和 CFSC-5H细胞株。进一步采用CFSC-8B 细胞(ERK1/2 高磷酸化水平)和 CFSC-5H 细胞(ERK1/2 低磷酸化水平), 通过staurosporine 诱导细胞凋亡。结果显示 CFSC-8B 细胞对staurosporine诱导的细胞凋亡敏感性明显增加。同时, staurosporine还可进一步增加这2株细胞内ERK1/2的磷酸化程度。结论:HSCs中ERK1/2 的磷酸化程度决定细胞对 staurosporine 所致细胞凋亡的敏感性。     

Phosphorylated extracellular signal-regulated kinase up-regulated p53 expression in shikonin-induced HeLa cell apoptosis

Background The role of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) in shikonin-induced HeLa cells apoptosis remains vague. This study was to investigate the activation of caspase pathways and the role of ERK1/2 in human cervical cancer cells, HeLa, by shikonin. Methods The inhibitory effect of shikonin on the growth of HeLa cells was measured by MTr assay. Fluorescent microscopic analysis of apoptotic cells stained with 4‘ , 6‘-oliiamiclino-2-phenylindole C (DAPI) and Hoechst 33258 was carried out. Caspase-3 and -8 activities were detected using caspase-3 substrate and caspase-8 substrate as substrates, respectively. The protein levels of ERK, p53 and p-ERK were determined by Western blot analysis. Results Shikonin inhibited cell growth in a time- and dose-dependent manner. Caspase-3 and caspase-8 were activated in the apoptotic process and caspase inhibitors effectively reversed shikonin-induced apoptosis. Phosphorylation of ERK resulted in up-regulation of p53 expression, which was blocked by mitogen-activated protein kinase (MEK) , inhibitor PD 98059. Conclusion Shikonin induces HeLa cell apoptosis through the ERK, p53 and caspase pathways.     

细胞外信号激酶在泰素引起的卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号激酶(ERK)在紫杉醇引起的卵巢癌细胞调亡中的作用.方法用紫杉醇处理人卵巢上皮性腺癌细胞株Caov-3 and Skov-3,应用二氨基联苯染色,在显微镜下观察其凋亡.应用蛋白印迹法技术,用特异性识别双磷酸化ERK1/2的抗体,检测卵巢癌细胞经泰素作用后ERK1/2的活化情况.用MTT法检测PD98059对泰素引导的卵巢癌细胞毒性的影响.结果在80 nM泰素导致Caov-3和Skov3细胞凋亡和ERK1/2激活,泰素作用9h后,出现ERK的激活,15h后活性最大.用100μM的PD 98059作用于不同药物浓度(60nM和80nM)的泰素作用的细胞,细胞存活率显著降低(P＜0.05).结论泰素能激活卵巢癌Caov-3和Skov3细胞ERK.抑制ERK的活性能提高Caov-3和Skov3细胞对泰素的敏感性.阻断MEK1/ERK信号转导通路,可以增加泰素对卵巢癌的细胞毒作用.     

细胞外信号调节激酶ERK1/ERK2对胰腺癌生长的影响

目的研究胰腺癌患者组织中及细胞系Pane-1及Jf-305中的ERK1／ERK2蛋白表达情况,以探讨其在胰腺癌发生、发展过程中的意义。方法应用免疫组织化学技术检测临床胰腺癌患者组织中ERK1／ERK2蛋白表达;Western blot方法观察胰腺癌细胞系Pane-1及Jf-305中的ERK1／ERK2蛋白表达。结果胰腺癌患者组织ERK1和ERK2蛋白均呈显著性高表达,阳性率分别为86．7％(39／45)和84．44％(38／45),而对照组织的阳性率分别为30％(6／20)和20％(4／20),胰腺癌组织和对照组织阳性率有显著差异;胰腺癌细胞系Panc-1及Jf-305中均有ERK1／ERK2蛋白的高表达。结论胰腺癌患者组织及细胞系中均有ERK1／ERK2蛋白强表达,ERK1和ERK2蛋白的过表达可能在人胰腺癌的发生、发展过程中起重要作用。     

ERK蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的：研究细胞外信号调节激酶（ERK）在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法：采用Westem blot技术和免疫组化方法，研究ERKI和ERK2蛋白在50例上皮性卵巢癌，10例卵巢良性肿瘤，10例正常卵巢组织中的表达。结果：ERK1和ERK2在卵巢癌中有过度表达，与正常卵巢及卵巢良性肿瘤相比，差异十分显著（P〈0．01）。Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅰ～Ⅱ期，差异显著（P〈0．05）。ERK1和ERK2与卵巢癌分化程度、病理类型无关。结论：ERK的过度表达在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

细胞外信号调节激酶在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在乳腺癌中的表达及在乳腺癌发生发展中的作用。方法:采用Westernblot技术和免疫组化方法,研究ERK1和ERK2蛋白在60例乳腺癌,10例乳腺良性肿瘤,10例正常乳腺组织中的表达。结果:ERK1和ERK2在乳腺癌中有过度表达,与正常乳腺及乳腺良性肿瘤相比,其差异有显著性(P<0.01),乳腺癌Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅱ期和Ⅰ期,差异有显著性(P<0.05);有腋窝淋巴结转移者表达高于无腋窝淋巴结转移者,差异有显著性(P<0.05)。ERK1和ERK2在高、中、低分化乳腺癌中无显著差异,与乳腺癌病理类型无关。结论:ERK的过度表达在乳腺癌的发生发展及淋巴结转移中起重要作用。     

细胞外信号调节激酶在人纤维化肝组织中的表达

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在人纤维化肝组织中的表达及其与肝纤维化发生的相关性。方法:收集肝手术标本(纤维化肝组织和远癌的纤维化肝组织,以正常的肝组织做对照),以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常肝和不同程度纤维化肝组织中ERK的表达情况,对结果进行统计分析。结果:人肝纤维化的发生发展过程中,ERK的表达增加。结论:ERK参与并介导其中的RAS/RAF/MEK/ERK信号通路,可能与肝纤维化的发生密切相关。     

细胞外信号调节蛋白激酶在梗阻性肾组织中的表达及其意义

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）在梗阻性肾病的分子发病机制中作用。方法 应用免疫组化方法检测ERK和增殖细胞核抗原（PCNA）在47份梗阻性肾组织中表达，并分析ERK表达与梗阻肾纤维化之间相关关系。结果 梗阻肾的肾小管和间质中ERK表达均高于正常的，但仅间质中两者表达差异有显著性（P〈0．05）。间质中ERK表达与梗阻肾纤雏化程度密切正相关（P〈0．05），而肾小管中两者相关差异无显著性（P〉0．05）。梗阻肾的肾小管和间质中ERK强表达者的PCNA指数均分别显著高于ERK弱表达者（P〈0．01）。结论 ERK活性增强促进细胞增殖增多、从而参与梗阻挂肾病的发病过程，尤其在肾纤维化过程中起着重要作用。