骨保护素基因敲除对小鼠左心室收缩功能的影响

目的 探讨左心室收缩功能与骨保护素配体(RANKL)和雌激素在骨保护素(OPG)基因敲除小鼠引起骨质疏松之间的关系.方法 建立OPG基因敲除小鼠模型,并设对照组;ELISA法检测小鼠血清 OPG 和RANKL水平,放射免疫法检测血清雌激素水平;利用心脏超声对心功能进行评价.结果 与对照组比较,OPG基因敲除组小鼠的心脏质量、心脏质量与体质量的比值、左室心肌细胞的横切面积均明显增大(P<0.01),左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积也明显增大(P<0.05).OPG基因敲除组小鼠血清RANKL浓度明显高于对照组(P<0.001),两组血清雌激素水平则无显著差异(P>0.05).结论 OPG缺乏导致血清RANKL水平升高,左心室心肌细胞肥大,但不影响血清雌激素水平.     

骨保护素基因敲除小鼠发生骨质疏松症的特征

目的研究我国自行开发的骨保护素（OPG）基因敲除小鼠的骨质疏松基本数据及其所属的骨质疏松类型,为其进一步推广应用提供基线数据。方法将野生型OPG（OPG^-WT）小鼠,7和13周龄的骨保护素基因敲除小鼠（OPG^-/-）分成3组（每组6只）,分别检测其血清碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）及骨钙素（OC）水平,并行骨密度测定、X线摄片、扫描电镜检查和生物力学测试,将所得数据进行统计学分析。结果OPG^-/-小鼠的骨密度、股骨刚度和最大折断负荷均显著降低（P〈0．01）,血清ALP和ACP明显升高（P〈 0．01）,OC在早期与对照组无明显差异。OPG^-/-小鼠在X线平片上表现为骨量减少,骨小梁稀疏或塌陷,骨皮质变薄。扫描电镜观察到OPG^-/-小鼠骨小梁变细、变尖,骨小梁间隙增大,部分骨小梁塌陷。结论OPG^-/-小鼠骨吸收活性增强伴继发性成骨活性提高,符合高转换型骨质疏松的特征,具有明显的优点,为研究OPG／OPGL／RANK体系提供了新的平台,有可能成为一种新的模型用于高转换型骨质疏松症的实验研究。     

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的：研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响，探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子机制。方法：3月龄wistar（雌雄各半）30只，随机分为阿胶强骨口服液，雌激素，及生理盐水对照组，灌胃7d后，制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞，制成单细胞悬液，消化传代，取二代培养的成骨细胞，制成细胞悬液。培养细胞分为5组，分别加同体积药液，对照组仅加培养液，继续培养。采用MTT比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）渗入法测定成骨细胞增殖，用放免法测定细胞内BGP含量，RT—PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。蛄果：阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖，与对照组相比，差异显著（P〈0．05）。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清1000ml／L时最强，与雌激素组比较无显著性差异（P〉0．05），且明显高于对照组（P〈0．05）。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异（P〉005），且明显低于对照组（P〈0．05）。结论：阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂，分子水平上调节OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。     

骨保护素系统对骨代谢的影响

破骨细胞(osteoclast,OC)的骨吸收与成骨细胞(Osteoblast,OB)的骨形成的平衡与协调是维持骨不断更新,功能正常和结构完整的关键。任何引起OC生成增多或过度活化的因素均可使OC功能亢进,骨吸收超过骨形成,导致代谢性骨病(如骨质疏松症)。抑制骨吸收已成为防治各种代谢性骨病的     

OPG基因敲除小鼠骨量及微结构的改变

目的 研究小鼠OPG基因敲除对其骨质量及微结构的影响.方法 HE、扫描电镜、四环素荧光及显微CT观察OPG基因敲除小鼠骨微结构的改变;DXA仪测定小鼠股骨标本的总体骨密度和骨矿含量.结果 与野生型小鼠相比,OPG基因敲除小鼠松质骨与皮质骨均出现明显的骨丢失,伴显著的骨微结构破坏;总体骨密度和骨矿含量减少.结论 OPG-/-小鼠发生明显骨丢失,骨微结构破坏.     

骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞分化过程中的表达及对破骨细胞形成的影响

摘 要 背景 骨保护素和骨保护素配体在骨代谢过程中具有重要作用。本实验研究骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化过程中的表达情况,及对破骨细胞形成的影响,探讨其在骨代谢过程中的调节作用。 方法 采用梯度离心法获得人骨髓基质细胞,并将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分化。通过形态学观察、生化指标检测、细胞染色和矿化结节测定等方法,确定骨髓基质细胞的功能状态和分化程度。采用RT-PCR和Western blot方法,检测骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中骨保护素和骨保护素配体的表达情况。在进一步的实验中采用骨髓法获得破骨细胞前体细胞,与分化中或者未分化的骨髓基质细胞共同培养,并加入OPG和OPGL进行实验,观察抗酒石酸阳性多核的破骨细胞形成情况。 结果 获得的骨髓基质细胞生长状态良好,生化指标稳定。骨髓基质细胞分化后,碱性磷酸酶分泌明显增加,可以产生大量的矿化结节,具有成熟成骨细胞的表型特征。RT-PCR和Western blot检测结果显示,在骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素在mRNA和蛋白质水平的表达明显升高,而骨保护素配体的表达则逐渐下降。细胞中OPG mRNA和蛋白质表达水平在第21天时达到最大,约为未分化时水平的2.5倍左右,而OPGLmRNA和蛋白质表达减少约为未分化时1/2。统计学分析,P<0.01,差异有显著性。实验结果显示破骨前体细胞与未分化骨髓基质细胞共同培养后,可以观察到TRAP阳性的多核破骨细胞形成,而与分化骨髓基质细胞共同培养后,不能检测到TRAP阳性多核破骨细胞的形成。但加入OPGL试剂后可以看到破骨细胞的形成。 结论 在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素表达逐渐升高而骨保护素配体表达显著降低,两者比值逐渐增大,骨形成增加,并进一步抑制破骨细胞形成,减少骨吸收,这可能是调节MSC分化,OB和OC形成,使骨代谢周期平衡有序进行的重要机制。     

RNAi法特异性抑制骨保护素配体

目的:构建能产生与骨保护素配体(OPGL)同源的发卡结构小干预RNA (siRNA)的载体并验证其对OPGL mRNA的抑制效应. 方法:根据大鼠的OPGL的基因序列,参考OPGL mRNA的空间结构,设计发卡结构siRNA模版,并构建由U6启动子引导产生siRNA的质粒载体. 转染大鼠骨髓基质细胞,48 h后提取细胞总RNA,RT-PCR,以OPGL与内参β-actin扩增产物的吸光度比值来反映OPGL mRNA的表达情况,结果进行统计学分析. 结果:成功获得U6启动子引导产生siRNA的质粒载体,转染骨髓基质细胞后细胞中OPGL mRNA的表达量随着质粒载体量的增加而减少. 结论:U6启动子引导产生siRNA的质粒载体能有效地减低OPGL mRNA的表达量从而抑制OPGL的表达.     

骨保护素及其配体在牙正畸中作用的研究进展

骨保护素(OPG)是生理性的抑制破骨细胞性骨吸收的因子,而骨保护素配体(OPGL)是能直接诱导破骨细胞分化发育并参与破骨细胞功能调节的细胞因子。牙周膜细胞可表达OPG和OPGL,揭示了在正畸牙移动中,牙周膜细胞可能是通过OPG/OPGL系统来调节牙槽骨代谢的。OPG和OPGL在多种骨病和牙正畸的治疗中具有很大潜力,具有良好的临床应用前景。     

再生颗粒对兔股骨头坏死骨保护素和骨保护素配体mRNA表达影响的实验研究

目的:研究再生颗粒对兔股骨头坏死骨保护素和骨保护素配体mRNA表达水平的影响。方法:选用肌注甲强龙20mg/(kg.d),2次/周,连续注射4周制造兔股骨头坏死模型,再生颗粒治疗4周、8周后实时定量PCR检测骨保护素和骨保护素配体mRNA的表达情况。结果:再生颗粒治疗组在各时间点骨保护素的表达水平明显高于对照组,而骨保护素配体的表达明显低于对照组。结论:再生颗粒可以提升兔股骨头坏死骨保护素mRNA的表达水平,抑制骨保护素配体的表达,从而促进坏死骨组织的修复。     

骨保护素的临床应用

<正>骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)受体家族的新成员,最初于1997年被两个独立的实验室同时发现,也被称为破骨细胞抑制因子(os-     

重组人骨保护素对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL 、OPG蛋白表达的影响

目的：探讨重组人骨保护素（rhOPG）对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG蛋白表达的影响,为rhOPG应用于牙周炎的治疗提供实验依据。方法选择22只Wistar大鼠,采用随机数字表法选择2只健康大鼠作为健康组;其余20只作为实验组,建立牙周炎大鼠模型,再将其分为实验对照组（n＝10）和rhOPG组（n＝10）,rhOPG组大鼠于上颌第2磨牙牙周袋间隙局部注入10 mg／kg rhOPG治疗。实验对照组大鼠于相同部位注射等体积灭菌注射用水。采用链霉素抗生物素蛋白‐过氧化物酶（SP）检测牙槽骨RANKL、OPG蛋白的表达。结果与健康组比较,实验组大鼠牙槽骨OPG表达水平较低,差异有统计学意义（P＜0．05）,而RANKL表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。与实验对照组比较,rhOPG组大鼠牙槽骨组织OPG蛋白的表达水平明显上调,而RANKL蛋白的表达明显下调（P＜0．05）。治疗后rhOPG组大鼠牙槽骨中OPG表达水平明显高于治疗前,而RANKL表达水平明显低于治疗前,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 rhOPG能调节牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG的表达。     

RANKL/RANK/OPG系统造成人工关节假体无菌性松动的机制

人工关节假体无菌性松动是影响关节置换术长期疗效的重要因素。许多研究表明,无菌性松动与RANKL/RANK/OPG系统的关系密切。该系统是在破骨细胞分化、激活和凋亡过程中的一个重要信号调节系统,将骨代谢、免疫系统和内分泌系统紧密地联系起来。研究发现,体内多种激素和细胞因子等均直接或间接地调节该系统的表达,调控RANKL、OPG二者之间的平衡,从而介导破骨细胞的分化和功能而达到影响骨代谢的作用。该文就近年RANKL/RANK/OPG系统与人工关节无菌性松动机制的研究进展作一综述。     

失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响

目的明了失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响及其调节骨折愈合的机制.方法 40只新西兰白兔随机分为:单纯下颌骨骨折组及下齿槽神经离断 下颌骨骨折组.分别于骨折术后7、14、21、28 d处死,取骨痂标本行HE及免疫组织化学染色.结果单纯骨折组骨折后7 d骨痂中即可见到降钙素基因相关肽(CGRP)阳性神经纤维,沿血管分布,14、21 d在编织骨边缘有大量的CGRP阳性神经纤维,28 d仍较多.同时骨折后7 d 骨保护素(OPG)强阳性表达,以后逐渐下降,但均保持较高水平的表达.破骨细胞分化因子(RANKL)的表达高峰则在骨折后第14天;而失神经骨折组除7 d骨痂中见CGRP阳性表达外,7 d后骨痂中仅有极低水平的CGRP表达.同样,OPG在骨折后7 d在骨痂中阳性表达以后持续弱阳性表达.RANKL则持续强阳性表达.结论在骨折愈合过程中,CGRP能够上调OPG/RANKL的表达量的比值,从而参与骨折愈合过程的调节,失神经支配失去了CGRP对OPG/RANKL表达的调节作用,不利于骨折愈合.     

缺氧对人牙周膜细胞OPG和RANKL 基因表达的影响

目的：研究缺氧对人牙周膜细胞骨保护素（OPG）和核因子κb受体活化因子配体（RANKL）基因表达的影响,揭示缺氧在正畸牙移动压力侧骨吸收中的作用。方法采取酶消化法结合组织块法培养人牙周膜细胞。取3～5代细胞,分别在常氧（O2浓度为20％,对照组）和缺氧（O2浓度为2％）状态下培养3、6、12、24 h ,采用RT‐PCR检测OPG、RANKL mRNA的表达情况。采用SPSS15．0软件包,对RT‐PCR数据进行单因素方差分析。结果在培养3、6 h时,缺氧组和对照组OPG、RANKL mR‐NA的表达水平比较差异无统计学意义（P＞0．05）;在培养12、24 h时,缺氧组OPG mRNA 表达水平低于常氧组,而缺氧组RANKL mRNA的表达水平高于常氧组,缺氧组RANKL／OPG的比值较常氧组升高,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论缺氧可以影响人牙周膜细胞OPG、RANKL mRNA的表达,在正畸牙移动压力侧骨吸收中起促进作用。     

RANKL/OPG在高原低氧条件下兔牙周炎发病机制中的作用

目的 研究模拟高原低氧条件下兔牙周炎的病理改变以及与破骨细胞相关的核因子κB受体活化子配体( receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegenn,OPG)的相关性.方法 40只家兔完全随机分成4组:平原实验组、平原对照组、高原实验组、高原对照组,每组各10只.通过钢丝结扎切牙方法建立家兔牙周炎模型,动物于分组饲养8周后处死,制作牙周组织石蜡切片,HE染色观察牙周组织病理变化、破骨细胞的表达,荧光免疫组化检测牙周组织中RANKL、OPG的表达.免疫荧光组化采用激光扫描共聚焦显微镜对实验组与对照组RANKL、OPG进行半定量分析,并比较其差异.结果 高原实验组与平原实验组、高原对照组和平原对照组RANKL灰度值分别为(1.799±0.036)、(1.519±0.061)、(1.242 ±0.078)、(0.963±0.098),差异有统计学意义(P＜0.05),与高原对照组比较,高原实验组OPG表达降低无统计学意义.高原实验组RANKL与牙周指数呈正相关(P＜0.01).结论 高原低氧条件下可能通过改变破骨细胞的RANKL/OPG调节途径促进牙周炎的发生、发展.     

金雀异黄素通过雌激素受体β增加人成骨细胞护骨素与破骨细胞分化因子表达比值

目的 探讨植物雌激素——金雀异黄素（genistein）对人成骨细胞（HOB）作用的分子机制。方法 采用细胞培养结合Western blot方法，观察不同浓度金雀异黄素对HOB细胞的护骨素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL）、雌激素受体（ER-α，ER-β）蛋白质的影响。结果 ①中、大剂量金雀异黄素明显上调HOB细胞OPG蛋白质的表达、下调RANKL蛋白质的表达；雌激素受体拮抗剂ICI 182．780（10^-8mol／L）拮抗金雀异黄素（10^-8mol／L）的上述作用。②大剂量金雀异黄素刺激HOB细胞ER-β蛋白质的表达；各组ER-α蛋白质的表达量与对照组比较，差异无显著性意义（均P〉0．05）。③OPG／RANKL比值与金雀异黄素剂量成正相关关系（r=0．694，P〈0．05）。结论 金雀异黄素通过ER-β上调HOB细胞OPG表达、下调RANKL表达，该雌激素样效应可能是其抗骨质疏松作用的分子机制之一。     

长期应用糖皮质激素对大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL表达的影响

目的:观察长期应用糖皮质激素(GC)对大鼠骨组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖化终产物受体(RAGE)、骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,探讨其导致激素性骨质疏松症的相关机制。方法:将48只健康成年SD大鼠随机分为低、中、高剂量GC组和对照组,每组12只。低、中、高剂量GC组大鼠分别给予肌肉注射醋酸泼尼松龙7.0、12.5、25.0 mg·kg^-1,对照组大鼠同时给予相同部位注射等量生理盐水。所有大鼠每周注射2 次,干预4周后取材。ELISA法检测大鼠血清中HMGB1、OPG和RANKL水平,HE染色检测大鼠骨组织病理形态学,免疫组织化学和Western blotting法检测大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL蛋白的表达水平。结果:ELISA检测,各剂量GC组大鼠血清中HMGB1水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);OPG水平均较对照组降低,且随GC剂量增加OPG水平呈下降趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组OPG水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各剂量GC组大鼠血清中RANKL水平均较对照组升高,且随GC剂量增加呈上升趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组RANKL水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色, 低剂量GC组大鼠股骨组织接近正常骨组织,中剂量GC组大鼠股骨组织镜下见软骨下区出现骨小梁变细,骨小梁间隙内出现肉芽纤维组织,可见坏死骨细胞及空骨陷窝;高剂量GC组大鼠股骨组织骨小梁紊乱并存在骨折,脂肪细胞空泡变性,骨髓腔水肿,造血细胞稀少,骨小梁周边成骨细胞数量减少,多核破骨细胞增多。免疫组织化学和Western blotting法检测,各剂量GC组大鼠骨组织中HMGB1蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),各剂量GC组大鼠HMGB1蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各组大鼠骨组织中RAGE蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);各剂量GC组大鼠骨组织中OPG蛋白表达水平均较对照组明显降低(P<0.05),各剂量GC组大鼠OPG蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);中和高剂量GC组大鼠骨组织中RANKL蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),中剂量GC组大鼠骨组织中RANKL表达低于高剂量组(P<0.05)。结论:大鼠使用过量GC后,骨组织中HMGB1水平升高,OPG/RANKL比例降低,这可能是激素性骨质疏松症的发病机制之一。     

房颤心室率对超声测量左室收缩功能的影响

[目的]探讨房颤伴不同心室率对常规超声方法测量左室收缩功能的影响。[方法]连续收录阵发性房颤患者30例,分别于房颤发作时和窦性心律时行心脏超声检查,存储3—10个心动周期的动态图像,测量各腔室内径及左室射血分数（LVEF）,进行比较分析。[结果]所有患者均有不同程度的左房增大;单个患者,房颤伴不同心室率时经胸超声双平面Simpson’s法测得的LVEF变化范围可达12％～40％,合并心衰时。LVEF受影响更大。随心室率由慢到快,测得的LVEF呈类“ ”型曲线,最接近窦律下测得的LVEF的RR间期范围是806～1010（910±72）ms（对应的心室率74～59次／min）,而心脏每搏输出量随RR间期的延长而逐渐增加。[结论]超声心动图评估房颤患者的心脏收缩功能时不仅要考虑到其基础心脏状态,选择合适的心率范围也很重要。     

血小板衍生生长因子D对体外破骨细胞分化过程的影响

目的 用外源性血小板衍生生长因子D(platelet-derived growth factor D,PDGF-D)体外刺激外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨细胞(osteoclasts,OCs)分化过程的影响.方法 采集外周血并分离单个核细胞,实验分为3组:阳性对照组为NF-κB配体激活因子(receptor or activator of NF-κB Ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)联合诱导,阴性对照组(细胞培养基)和实验组(PDGF-D).应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察各组破骨细胞前体细胞向破骨样细胞(osteoclast like cells,OLCs)的分化情况,Real-time PCR检测破骨细胞标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的表达情况,Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达.结果 ①TRAP染色可见阳性对照组和实验组的OLCs显著多于阴性对照组.②阳性对照组和实验组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著高于阴性对照组(P＜0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P＞0.05).③阳性对照组和实验组MMP-9(ELISA检测)、Cathepsin K蛋白(Western blot检测)表达均显著高于阴性对照组(P＜0.05),但阳性对照组和实验组间无统计学差异(P＞0.05).结论 外源性PDGF-D可在无RANKL/M-CSF的条件下于体外独立诱导破骨前体细胞向OLCs分化.