喹啉对癫(癎)大鼠海马神经元连接蛋白36表达的影响

目的:探讨喹啉对癫癎大鼠海马神经元连接蛋白36(Cx36)表达的影响.方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组、癫癎模型组、地西洋治疗组和喹治疗组,每组16只大鼠.采用氯化锂-匹罗卡品诱导制作癫癎大鼠模型,地西泮治疗组子以1mg/kg地西泮治疗,喹啉治疗组予以60mg/kg喹啉治疗.术后分别采用Racine评分和脑电图检查判断癫癎发作情况.分别用免疫荧光染色法、Western blot法检测各组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36的表达.结果:与正常对照组比较,癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著升高(均P<0.01).癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平比较差异无统计学意义.与癫癎模型组及地西泮治疗组比较,喹啉治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著降低(均P<0.01).结论:癫癎大鼠海马神经元Cx36表达水平升高,喹啉能抑制这一变化.     

癫持续状态大鼠内质网应激预适应对海马神经元保护作用的实验研究

目的探讨2-脱氧葡萄糖诱导内质网应激预适应对癫持续状态大鼠海马神经元的保护作用及其可能机制。方法采用2-脱氧葡萄糖连续腹腔注射诱导内质网应激,并在此基础上制备氯化锂-匹罗卡品癫持续状态大鼠模型。Nissl染色观察癫持续状态后海马神经元损伤情况、计数海马CA1和CA3区存活神经元数目;免疫组织化学检测海马CA3区内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和X盒结合蛋白1(XBP-1)表达变化。结果与癫持续状态组相比,癫持续状态后第7天时内质网应激预适应组大鼠海马存活神经元数目增加,以CA1区显著(t=5.353,P=0.000)。癫持续状态组大鼠发作后6 h,海马CA3区GRP78和XBP-1表达水平升高且高于对照组(均P=0.000),于发作第2天达峰值水平(均P=0.000);内质网应激预适应组大鼠发作前海马CA3区GRP78和XBP-1表达即高于对照组(均P=0.000),GRP78在发作后24 h和2 d时维持在峰值水平(均P=0.000),XBP-1在发作后24 h达峰值水平(P=0.000);内质网应激预适应组大鼠海马CA3区GRP78和XBP-1表达在癫持续状态前,以及癫持续状态后6、12、24 h均高于癫持续状态组(均P=0.000),至第2和7天时与癫持续状态组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论经2-脱氧葡萄糖诱导的内质网应激预适应对癫持续状态大鼠海马神经元具有保护作用,而XBP-1-GRP78信号转导通路的活化可能是其机制之一。     

银杏叶提取物对戊四氮致大鼠海马内NMDA受体和HSP70表达的影响

目的探讨银杏叶提取物抗癫的分子生物学机制。方法在SD大鼠腹腔内注射戊四氮(PTZ)诱发大鼠惊厥急性发作,制作癫模型。应用免疫组化技术观察银杏叶提取物(GBE)对点燃癫大鼠海马内NMDA受体和HSP70表达的影响。结果戊四氮致组大鼠海马内NMDA受体表达明显高于正常对照组,银杏叶提取物干预组明显低于戊四氮致组,银杏叶提取物干预组与正常对照组之间差异无显著性意义。戊四氮致组大鼠海马内HSP70表达明显高于正常对照组,银杏叶提取物干预组明显高于戊四氮致组。结论银杏叶提取物可降低癫大鼠海马内NMDA受体的表达,其可能通过此种机制来抑制癫的发生和发展。银杏叶提取物可增加癫大鼠海马内HSP70的表达,以此来减轻癫发作后所致的神经元损伤。     

雌激素调控瞬时外向钾通道对大鼠慢性颞叶癫发作的影响

目的探讨雌激素对大鼠慢性颞叶癫发作的影响及其与瞬时外向钾通道(kv4.2)之间的关系。方法 SD雌性大鼠随机分为正常对照组、去势对照组、正常致组、去势致组。应用毛果芸香碱诱导大鼠癫持续状态(SE),观察大鼠行为学变化。经4周后成为慢性颞叶癫大鼠。Western bolt方法检测大鼠海马瞬时外向钾通道Kv4.2蛋白表达水平。结果与正常致组比较,去势致组达到SE的潜伏期延长、死亡率降低,但差异无统计学意义(P0.05);去势致组的癫发作强度较正常致组轻,差异有统计学意义(P0.05)。去势致组和正常致组在SE 4周后海马Kv4.2均较正常对照组显著升高,均差异有统计学意义(P0.05和P0.01)。去势对照组和去势致组比较,均未见对Kv4.2蛋白表达产生影响,说明Kv4.2蛋白表达升高为癫发作所致。结论大鼠癫发作后Kv4.2表达增加、瞬时外向钾电流增强、神经冲动的发放频率减慢,可能是产生代偿性自我保护反应的结果;虽然去势雌性大鼠未对Kv4.2表达产生影响,但出现潜伏期延长和死亡率降低、发作强度降低的行为学趋势,提示低剂量雌激素可能存在对癫发作的保护作用。     

戊四氮点燃癫癎大鼠海马5-羟色胺能神经递质的动态研究

目的：观察戊四氮（PTZ）点燃癫癎形成过程中大鼠海马5-羟色胺（5-HT）能神经递质的变化。方法：用PTZ制作癫癎大鼠模型,将造模成功大鼠分为戊四氮急性发作组（PTZ 1组）和戊四氮慢性点燃组（PTZ 2组）,同时设立对照组（腹腔注射生理盐水）。在体微透析取样,观察大鼠行为、脑电图（EEG）和海马5-HT能神经递质的变化。结果：PTZ 1组癫癎发作时EEG自发放电逐级加重;癫癎发作时海马5-HT水平与对照组、发作前和发作后比较显著升高（P〈0.05）;海马5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）水平差异无统计学意义;5-HT转化率（5-HIAA/5-HT）降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。PTZ 2组点燃后大鼠出现自发癫癎发作,EEG在发作间期出现自发放电;5-HT和5-HIAA水平在点燃期、维持点燃期、对照组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：大鼠癫癎发作时海马5-HT水平显著升高,发作后恢复正常;在癫癎形成过程中,早期5-HT水平一过性升高、PTZ点燃后和发作间期海马5-HT水平逐渐降低。     

左乙拉西坦和托吡酯对癫(疒间)大鼠脑P-糖蛋白表达的影响

目的研究左乙拉西坦(LEV)和托吡酯(TPM)对癫大鼠脑P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法将海人酸1.5μg(3μl)注射至SD大鼠海马制作癫模型(癫组),对照组大鼠海马注射3μl生理盐水(NS)。将癫组(18只)和对照组(15只)大鼠分别随机分为LEV、TPM和NS亚组(每亚组6只、5只),各亚组大鼠予相应药物(LEV50mg/kg、TPM40mg/kg、等体积NS)灌胃,每天1次,共30d。采用免疫组化EnVi-sion染色法检测大鼠颞叶、海马P-gp表达水平,采用LeicaQwin图像分析系统中平均整合灰度(MIB)值对P-gp表达水平进行半定量分析。结果癫各亚组大鼠颞叶和海马P-gp表达水平(MIB值)均显著高于其相应对照亚组(P<0.05～0.001);对照亚组中,LEV和TPM组与NS亚组间P-gp表达水平比较,差异无统计学意义;在癫组中,TPM亚组P-gp表达水平显著高于NS亚组(1550.3±371.9vs1049.7±282.8,P=0.004);而LEV亚组与NS亚组差异无统计学意义(1285.1±340.3vs1049.7±282.8,P=0.172)。结论癫发作可诱导...     

Aktl在颞叶癫痫大鼠海马中的表达变化

目的研究颞叶癫痼模型海马区神经元Aktl表达变化,探讨其在癫痫发生发展中的作用。方法采用氯化锂．匹罗卡品方法制备颞叶癫痴大鼠模型,Westernblotting检测海马区总蛋白、Quantitvone软件行灰度值分析;免疫组织化学染色观察海马各区Aktl蛋白表达变化,计数不同处理组阳性神经元数目。结果Westernblotting检测结果显示,与正常对照组相比,癫痫模型组大鼠于癫痫持续状态发作即刻海马区Aktl蛋白表达升高（t=2．445,P=0．034）,并于第30天时达峰值水平（}=1．214,P=0．002）,发作后24h表达水平迅速降低,并低于正常值范围（t=4．294,P=0．000）,其余各测量时间点表达无明显改变;与氯化锂组相比,癫痼模型组大鼠于癫痫持续状态后1h海马区Aktl蛋白表达开始降低,24h降至最低水平（t：4．134,P=0．000）,至发作48h后开始逐渐升高（t=2．481,P=0．002）,并于发作第7天时升至氯化锂组水平。免疫组织化学染色显示,癫痫持续状态发作后海马CA3区Aktl蛋白表达阳性神经元数目立即增加,12h达高峰（t=16．586,P：0．000）,48h减少并降至正常值水平（t=0．357,P=0．089）,发作后第10天再次增加（t=3．123,P=0．000）,于第30天时阳性神经元数目再次达峰值水平（t=18．339,P=0．000）,第50天开始恢复至正常值水平（t=3．219,P=0．000）;氯化锂组仅海马CA3区Aktl蛋白表达于实验初始（0h）升高并高于正常对照组（P〈0．05）,海马CA1和CA2区Aktl蛋白表达变化组间差异均无统计学意义（P〉O．05）。结论海马及海马CA3区Aktl蛋白表达均呈现癫疝持续状态后升高、降低、再升高的动态过程,提示可能存在神经元保护作用,对抗细胞凋亡、促进细胞存活。     

杏仁核电点燃及海人酸点燃难治性癫疒间大鼠脑组织及外周血P糖蛋白的表达

目的探讨杏仁核电点燃及海人酸点燃难治性癫大鼠模型脑组织及外周血P糖蛋白(Pgp)过度表达的可能机制,并比较不同方法致难治性癫大鼠脑组织及外周血中Pgp的表达趋势。方法应用电刺激点燃及海人酸点燃方法对大鼠杏仁核进行点燃,制作难治性癫模型;将其分为A组(杏仁核电点燃,12只),B组(杏仁核海人酸点燃,12只),另设C组(杏仁核埋入电极而不点燃,且给予卡马西平灌胃,8只),D组(杏仁核注射生理盐水,且给予卡马西平灌胃,8只),E组(杏仁核埋入电极而不点燃,且给予生理盐水灌胃,8只),F组(杏仁核注射生理盐水,且给予生理盐水灌胃,8只);采用免疫组化方法分析两种模型大鼠脑组织及外周血Pgp的表达。结果A组、B组大鼠脑组织及外周血Pgp表达明显高于其余4组,差异有统计学意义(均P<0.05);C组、D组大鼠脑组织及外周血Pgp表达高于E组及F组,差异有统计学意义(均P<0.05);A组与B组大鼠脑组织及外周血Pgp的表达差异无统计学意义。结论脑组织及外周血Pgp的过度表达可能是未能控制的癫发作、服用抗癫药(AEDs)等多因素共同作用的结果;难治性癫发生1个月后,脑组织中Pgp高表达的大鼠外周血中Pgp的表达...     

癫痫幼鼠海马和颞叶皮质区缝隙连接蛋白43和突触体素表达的变化

目的观察神经元缝隙连接蛋白43（Cx43）和突触体素（synaptophysin P38）在戊四氮（PTZ）点燃癫痫幼鼠海马及颞叶皮质区中的表达，探讨两者与癫痫的关系及其在癫痫形成中的作用。方法将50只21日龄Wistar大鼠分为对照组和实验组。实验组采用PTZ点燃癫痫幼鼠，按点燃进程分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级及Ⅳ级发作组。采用免疫组化和图像分析技术，观察海马及颞叶皮质区Cx43和P38表达的变化。结果应用PTZ点燃后，实验各组幼鼠海马及颞叶皮质区Cx43和P38的表达明显高于对照组（P〈0．01），且随发作级别的增高，幼鼠海马及颞叶皮质各区Cx43和P38的表达均增加。但各组间海马区和颞叶皮质区Cx43和P38的表达情况的比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Cx43和P38的表达水平与癫痫的发生发展有密切关系，为研究小儿癫痫的病因及发病机制提供依据。     

碱性成纤维细胞生长因子对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影晌

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对致痫大鼠的神经保护作用及可能机制。方法给予戊四氮（PTZ）致痫大鼠每日腹腔注射bFGF（bFGF组，n=36）、生理盐水（NS组，n=36），分别于痫性发作后6h、12h、24h、48h、3d、5d处死取脑，切片进行bcl-2、caspase-3染色，用原位末端标记（TUNEL）方法检测海马神经元凋亡细胞。结果痫性发作6h后两组海马CA1、CA3区的bcl-2、caspase-3、TUNEL染色阳性表达差异无统计学意义（P〉0．05）；12～48h表达逐渐增强，bFGF组bcl-2、TUNEL的表达显著高于NS组，bFGF组caspase-3的表达显著低于NS组（P均〈0．01）；3d后表达减弱，bFGF组与NS组的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论bFGF能显著减轻癫痫所致的海马神经元凋亡，提示可能通过调控bcl-2和caspase-3基因的表达发挥作用。     

全蝎醇提物对氯化锂-毛果芸香碱诱导癫痫持续状态模型大鼠海马神经细胞caspase-3表达的影响

目的：探讨全蝎醇提物（EES）对氯化锂-毛果芸香碱诱导癫痫持续状态模型鼠的疗效及对癫痫持续状态后海马神经细胞caspase-3表达的影响。方法：156只成年雄性大鼠除6只设为正常对照组外,其余均建立氯化锂-毛果芸香碱癫痫持续状态大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、丙戊酸钠干预组和EES低（EESL组）、中（EESM组）、高（EESH组）剂量干预组（均n=30）,观察各组大鼠癫痫持续状态发作情况,用免疫组化方法观察各组大鼠癫痫持续状态后6、24、48、72h和7d各时点海马神经细胞caspase-3表达的变化。结果：癫痫持续状态模型鼠的造模成功率为95．2％。经EESM、EESH和丙戊酸钠冶疗后,大鼠发作癫痫持续状态级别及持续时间较模型组显著改善（P〈0．01）。各观察时点CA1区和CA3区caspase-3阳性细胞数较模型组显著减少（P〈0．05）,其中以EESH和丙戊酸钠疗效最好（两者疗效相当,P〉0．05）;EESL疗效不明显,与模型组比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：一定剂量的EES能显著对抗癫痫持续状态发作,疗效与caspase-3细胞的减少相对应,说明EES具有抗凋亡作用。对caspase-3表达的抑制可能是其发挥抗凋亡作用的机制之一。     

癫痫持续状态大鼠内质网应激预适应对海马神经元保护作用的实验研究

目的 探讨2-脱氧葡萄糖诱导内质网应激预适应对癫痫持续状态大鼠海马神经元的保护作用及其可能机制。方法 采用2-脱氧葡萄糖连续腹腔注射诱导内质网应激,并在此基础上制备氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态大鼠模型。Nissl染色观察癫痫持续状态后海马神经元损伤情况、计数海马CA1和CA3区存活神经元数目;免疫组织化学检测海马CA3区内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和X盒结合蛋白1（XBP-1）表达变化。结果 与癫痫持续状态组相比,癫痫持续状态后第7天时内质网应激预适应组大鼠海马存活神经元数目增加,以CA1区显著（t=5.353,P=0.000）。癫痫持续状态组大鼠发作后6 h,海马CA3区GRP78和XBP-1表达水平升高且高于对照组（均P=0.000）,于发作第2天达峰值水平（均P=0.000）;内质网应激预适应组大鼠发作前海马CA3区GRP78和XBP-1表达即高于对照组（均P=0.000）,GRP78在发作后24 h和2 d时维持在峰值水平（均P=0.000）,XBP-1在发作后24 h达峰值水平（P=0.000）;内质网应激预适应组大鼠海马CA3区GRP78和XBP-1表达在癫痫持续状态前,以及癫痫持续状态后6、12、24 h均高于癫痫持续状态组（均P=0.000）,至第2和7天时与癫痫持续状态组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 经2-脱氧葡萄糖诱导的内质网应激预适应对癫痫持续状态大鼠海马神经元具有保护作用,而XBP-1-GRP78信号转导通路的活化可能是其机制之一。     

粉防己碱对难治性癫痫大鼠行为的影响

目的 观察中药提取物粉防己碱对于难治性癫痫大鼠行为的影响.方法 建立戊四氮化学点燃的慢性癫痫大鼠模型,通过后放电阈值的变化筛选出难治性癫痫大鼠,将其分为粉防己碱组和对照组,每组8只.粉防己碱组予以粉防己碱腹腔注射,观察粉防己碱对于癫痫发作行为变化.结果 相对于对照组,粉防己碱组大鼠在给予粉防己碱后,Racine行为分级明显下降(P<0.05).结论 粉防己碱可以协助AEDs降低点燃后发作分级,提示粉防己碱可以逆转难治性癫痫的耐药.     

辛醇对红藻氨酸致痫大鼠的保护作用及其对海马组织连接蛋白43的影响

目的 研究辛醇对红藻氨酸(kainic acid,KA)致痫大鼠海马组织连接蛋白43(connexin43,CX43)表达的影响及其抗痫效应.方法 采用行为学评分评价KA致痫及辛醇腹腔注射后致痫大鼠的痫性发作程度和潜伏期,应用免疫组织化学方法检测海马CX43的表达.结果 KA组CX43的表达较正常对照组明显增高(P<0.01);辛醇组CX43的表达也较正常对照组明显增高(P<0.01),但较KA组明显下降.致痫后3h内辛醇组痫性发作评分较KA组明显下降(P<0.01),潜伏期明显延长(P<0.01).结论 反复痫性发作后CX43的表达增加.辛醇能够减少CX43表达,降低痫性发作的评分,延长痫性发作的潜伏期,具有较明显的抗癫痫效应.

Abstract：

Objective To study the effects of octanol on the expression of connexin 43 in the brain of epilepsy-rats induced by kainic acid and the anti-epileptic effect of octanol. Methods The epilepsy-rats induced by kainic acid and treated by octanol was assessed by behavior score. The expression of CX43 in the hippocampal tissue was measured by immuno-histochemistry. Results The expression of CX43 in the group of epilepsy-rats induced by kainic acid was higher than that in control group( P <0. 01) ;the expression of CX43 in the group treated by octanol was higher than that in control group( P <0. 01) ,but lower than the group of epilepsy-rats induced by kainic acid;the Patel score of the rats in the group treated by octanol was lower than the group only induced by kainic acid within 3 hours after the induction (P <0. 01) ,and the latency was longer (P <0.01). Conclusions After the epileptic seizure repeatedly, the expression of CX43 was upregulated. Octanol could reduce the expression of CX43, decrease the Patel score,and extend the latency of epileptic seizure. It has obviously anti-epileptic effect.     

酸感受离子通道及钠氢泵基因表达在痫性发作中的作用研究

目的探讨酸感受离子通道（ASICs）、钠氢泵（NHE）基因表达及其在痫性发作中的作用。方法联合运用脑电图及逆转录PCR方法,检测正常大鼠,匹鲁卡品致痫大鼠,阿米洛利海马ASIC1a,ASIC3及NHErnRNA表达。结果痫性发作1h即可观察到ASIC1a,ASIC3及NHEmRNA表达较正常大鼠增加,差异具统计学意义（P〈0．01）;痫性发作大鼠给予阿米洛利后,与对照组（痫性发作1h组）相比,ASIC1a,ASIC3mRNA表达差异有统计学意义（P〈0．01）,NHEmRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论痫性发作可致ASIC1a,ASIC3基因表达增加,抑制AslC1a,ASIC3基因可减弱痫性发作,而与时NHE的作用无关。     

Quinine, a blocker of neuronal cx36 channels, suppresses seizure activity in rat neocortex in vivo

PURPOSE: The selective contribution of neuronal gap junction (GJ) communication via connexin 36 (Cx36) channels to epileptogenesis and to the maintenance and propagation of seizures was investigated in both the primary focus and the mirror focus by using pharmacologic approaches with the 4-aminopyridine in vivo epilepsy model. METHODS: ECoG recording was performed on anesthetized adult rats, in which either quinine, a selective blocker of Cx36, or the broad-spectrum GJ blockers carbenoxolone and octanol were applied locally, before the induction or at already active epileptic foci. RESULTS: The blockade of Cx36 channels by quinine before the induction of epileptiform activity slightly reduced the epileptogenesis. When quinine was applied after 25-30 repetitions of seizures, a new discharge pattern appeared with frequencies >15 Hz at the initiation of seizures. In spite of the increased number of seizures, the summated ictal activity decreased, because of the significant reduction in the duration of the seizures. The amplitudes of the seizure discharges of all the patterns decreased, with the exception of those with frequencies of 11-12 Hz. The blockade of Cx36 channels and the global blockade of the GJ channels resulted in qualitatively different modifications in ictogenesis. CONCLUSIONS: The blockade of Cx36 channels at the already active epileptic focus has an anticonvulsive effect and modifies the manifestation of the 1- to 18-Hz seizure discharges. Our findings indicate that the GJ communication via Cx36 channels is differently involved in the synchronization of the activities of the networks generating seizure discharges with different frequencies. Additionally, we conclude that both neuronal and glial GJ communication contribute to the manifestation and propagation of seizures in the adult rat neocortex.     

伴海马硬化的颞叶癫痫药物治疗的预后因素分析

目的回顾性研究药物治疗伴海马硬化的颞叶癫痫(TLE-HS)的有效性,分析预测药物治疗效果的相关预后因素,以早期识别药物难治性癫痫,筛查手术候选者。方法 190例颞叶癫痫患者MRI证实伴海马硬化,药物治疗至少随访2年或以实施手术为观察终点。根据观察终点是否发作分为有效组和耐药组。采用χ2检验和t检验对两组在年龄、性别、癫痫家族史、早期突发损伤因素(包括热性惊厥、颅内感染、脑创伤、围生期损伤)、起病年龄、病程、癫痫持续状态、认知功能障碍、精神异常、发作类型、发作频率、是否存在先兆,发作间期脑电图异常放电的单双侧性、MRI海马硬化出现的侧别、药物方案(单药、联合)等方面进行比较。并进一步将有统计学意义的参数,采用二分类Logistic回归分析方法进行药物治疗预后因素的相关分析。结果 190例TLE-HS,有效组54例,耐药组136例,其中手术51例。进行两组的一般人口学资料(年龄、性别、起病年龄、病程)统计学处理,P值分别为0.35,0.29,0.44,0.00。病程差异有统计学意义。两组间在早期促发因素(出生史、热性惊厥史、脑炎史、脑创伤史)方面比较差异有统计学意义(P值分别为0.99,0.17,0.38,0.90)。两组在其他相关病史(癫痫持续状态、家族史、认知障碍、精神障碍)方面比较(P值分别为0.34,0.93,0.72,0.70)差异无统计学意义。在癫痫发作频率和发作先兆方面两组间差异无统计学意义(P=0.01,0.04),而发作类型和间期脑电图痫样放电特点方面两组间差异无统计学意义(P=0.34,0.88)。两组在MRI海马硬化出现在左右侧或双侧的情况比较(P=0.43)差异无统计学意义。有效组39例为单药治疗,15例为联合治疗。耐药组单药治疗者46例,联合治疗者90例。两组间的药物治疗方案差异有统计学意义(P=0.00)。病程和药物治疗方案与药物治疗预后间差异有统计学意义(P=0.01,0.00),但病程与预后之间无关联(OR=1.09),药物治疗方案是药物治疗预后不良的危险因素(OR=4.92)。结论 28.4%的TLE-HS药物治疗2年以上无发作。病程长,发作每月多于4次,存在先兆,多药联合治疗的患者可能更容易耐药。其中多药联合治疗是预测TLE-HS药物治疗效果不佳的独立危险因素。     

颞叶内侧癫(癎)海马CA1区CytC、caspase-9、caspase-3蛋白的表达研究

目的 探讨凋亡相关蛋白细胞色素C(CytC)、caspase-9、caspase-3在颞叶内侧癫(癎)(MTLE)病人致(癎)海马CA1区神经元内的表达及意义.方法 选择30例典型MTLE病人为实验组,6例颢叶深部血管畸形病人为对照组.采用苏木精-伊红染色、原位末端标记(TUNEL)方法在光镜下观察MTLE病人致(癎)海马CA1区神经元凋亡的情况.采用免疫组化S-P法检测并比较MTLE海马CA1区与对照组海马组织神经元内凋亡相关蛋白CytC、caspase-9、caspase-3的表达.结合病史资料,分析caspase-3表达水平与癫(癎)病程和发作频率的相关性.结果 MTLE组致(癎)海马CA1区光镜下可观察到神经元退变、噬神经元现象,TUNEL染色发现凋亡神经元18例,对照组则为阴性;CytC、caspase-9、caspase-3蛋白在MTLE组海马CA1区均有明显表达,对照组中则呈轻微表达,差异显著(P<0.01).caspase-3蛋白表达水平与发作频率呈正相关,而与病程长短无关.结论 MTLE致(癎)海马神经元中存在外源性凋亡途径,这可能是癫(癎)发展的重要因素之一.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后Cx43蛋白的表达模式

目的：建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型,探索再灌注后Cx43蛋白的表达模式。方法75只大鼠随机分为MCAO组（60只）和假手术组（15只）。MCAO组均行MCAO手术,术后根据缺血再灌注时间分为0.5、4、12、24 h 4个亚组,每组15只;假手术组不插入线栓。各组进行改良神经损伤严重程度评分（mNSS）、脑组织TTC染色及神经元尼式染色,Western blot及免疫组织化学方法检测各组脑组织Cx43蛋白的表达并进行统计学分析。结果 MCAO组造模成功率75%。MCAO组大鼠mNSS评分明显高于假手术组（P＜0.05）,脑梗死面积增加,额顶叶皮质区神经元大量损伤。Western blot结果显示：假手术组及MCAO 0.5、4、12、24 h组Cx43表达量分别为0.23±0.12、0.58±0.18、0.78±0.07、0.61±0.05和0.27±0.07, MCAO 0.5、4、12 h组与假手术组差异均有统计学意义（P＜0.05）,而MCAO 24 h组与假手术组差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化结果显示：MCAO组侧脑室下区Cx43的表达在0.5 h开始升高,4 h达高峰,12 h逐渐下降,直至24 h恢复基线水平;与Western blot结果一致。结论 Cx43蛋白在脑缺血性再灌注损伤发生、发展中起重要作用。     

Differential effects of trimethylamine and quinine on seizures induced by 4-aminopyridine administration in the entorhinal cortex of vigilant rats

In vivo and in vitro evidence from animals suggesting that gap junctions (GJs) play a role in the spreading of epileptiform activity. We have examined the influence of the gap junction opener trimethylamine (TMA) and the connexin 36 (Cx36) gap junctional blocker, quinine, on epileptiform activity induced by 4-aminopyridine (4-AP) in the rat entorhinal cortex (EC) and the CA1 hippocampal region. A cannula and surface electrodes were implanted into the brain to administer drugs and to monitor electrical activity. Injection of 4-AP (10 nmol) produced epileptiform discharge trains of high amplitude and frequency associated with seizure behavior rated between 0 and 3 in the Racine scale. In the presence of TMA (500 nmol), 4-AP produced distinct epileptiform patterns with continuous, long epileptiform discharges of high amplitude and frequency associated with seizure behavior of 0, 1, 3 and 5 during the first 30 min post-drug administration that diminished after 90 min. Quinine injection (35 pmol) into the EC of seizing animals decreased the amplitude and frequency of the discharge trains in the EC and CA1 regions, which were completely blocked after 34 min. Indeed, the seizure behavior of the animals was completely blocked in five of the six rats 53.2 s after quinine administration. We suggest that the intensity of the proepileptic effect of TMA on epileptiform activity depends on the time and route of drug administration, and that neural Cx36-dependent GJs are important structures in the generation of epileptiform activity, as well as in the seizure behavior induced by 4-AP.