川芎嗪对血虚证小鼠骨髓细胞IL-4R和IL-7R基因表达的作用

目的：考察川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞IL-4R和IL-7R基困表达的影响，为阐明川芎嗪的补血机制提供依据。方法：采用3.5Gy^60Coγ射线全身1次性照射制各小鼠血虚证模型；骨髓集落培养计数CFU-GM、CFU-E、BFU—E、CFU-mix；RT-PCR检测骨髓IL-4R和IL-7R基因表达。结果：川芎嗪显著升高放射线致血虚证小鼠骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-mix数量，上调骨髓细胞IL-4R和IL-7R基因表达。结论：川芎嗪促进骨髓细脆IL-4R和IL-7R基因表达明能是其升血和调节免疫功能的机制之一。     

血虚证小鼠模型骨髓细胞红系祖细胞、粒单系祖细胞变化规律及中药复方对其的影响

目的：研究血虚证小鼠模型骨髓造血祖细胞体外增殖水平及变化规律,以及中药复方地甘口服液,红霖四物口服液对其的影响。方法：以Balb/c小鼠为实验对象,分别采用免疫介导法和综合放血法制作血虚证模型。采集其骨髓有核细胞进行培养;并分组灌服地甘口服液,红霖四物口服液,比较观察各组小鼠骨髓细胞体外培养CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成情况。结果：两种血虚证小鼠模型的CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落形成较空白对照组显下降,尤以前为甚;两种中药复方均可促进模型小鼠骨髓细胞的增殖,但对于免疫介导血虚证模型,两治疗组的效果存在一定差异。结论：血虚证小鼠模型骨髓造血干（红9系,粒单系）细胞的体外增殖较正常小鼠明显下降,而地甘口服液,红霖四物口服液可以促进骨髓CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成。     

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

[目的]探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。[方法]γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。[结果]四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子(G-CSF,GM-CSF,PDGF-α)等,抑制造血抑制因子(M-CIP)的分泌。[结论]四物汤补血的物质基础可能是芍药苷,促进骨髓基质细胞分泌G-CSF,GM-CSF,PDGF-α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。     

Expression and function of c-kit receptor in bone marrow mononuclear cells of patients with myelodysplastic syndromes

目的　了解骨髓增生异常综合征 (MDS)骨髓单个核细胞c kit受体的表达与功能。方法　采用免疫荧光方法测定c kit受体蛋白 (CD117)的表达 ;逆转录 聚合酶链反应方法测定c kitmRNA的表达 ;细胞培养检测c kit受体的功能。结果　CD117表达率正常人为 3 0 4 %± 1 4 9% ,MDS患者为 8 58%± 5 2 8% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;RA患者为 5 12 %± 2 13% ) ,RAEB RAEB t患者为 10 0 1%± 5 0 7% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;MDS继发白血病患者为 32 4 3%± 18 16 %。MDS患者c kit基因mRNA表达与CD117表达相一致。正常骨髓单个核细胞体外半固体培养 ,在加入造血干细胞因子、白细胞介素 3、红细胞生成素 (SCF IL 3 Epo)后形成的粒 巨噬细胞集落 (CFU GM)较仅加入IL 3 Epo显著增多 (P <0 0 5) ,红系爆式集落 (BFU E)数量极显著增多 ,且BFU E体积显著增大(P <0 0 1)。MDS患者在上述相同条件下CFU GM数量无明显变化 (P >0 0 5) ,与正常对照比较 ,CFU GM和BFU E数量均显著减少 (P <0 0 5)。结论　MDS患者骨髓单个核细胞CD117表达明显高于正常对照 ,且与病情进展相关 ;c kitmRNA表达与CD117表达相一致 ;MDS患者骨髓单个核细胞体外培养时 ,SCF协同IL 3、Epo促进造血干 祖细胞增殖分化能力较正常对照明     

RhIL-2对人骨髓CFU-GM,CFU-E和BFU-E的影响

采用甲基纤维素体外半固体培养法证明，50～1000U／mlrhIL－2单用对人骨髓造血祖细胞的CFU－CM，CFU－E及BFU－E无直接刺激增生作用；当与GM－CSF联用时．100～400U／mlrhIL－2其CFU－GM集落形成率明显高于单用GM－CSF的对照组（P＜0．05）；当与EPO联用时，其CFU－E及BFU－E集落形成率也明显高于单用EPO对照组（P＜0．05），而1000U／mlrhIL－2其3种集落形成数目呈下降趋势，可能有抑制作用。说明100～400U／mlrhIL－2可应用于协同GM－CSF及EPO体外扩增骨髓干／祖细胞以进行骨髓移植是有重要意义的。     

5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的 探讨IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响。方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、1000u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落。结果 IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、250u/ml。峰值浓度下,对CFU－E、BFU－Em、BFU－Eim、CFU－GM形成的作用强度不同,PIXY321条件下所形成的集落数最多。结论 这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著。     

重组人粒细胞集落刺激因子对辐射后小鼠中性粒细胞减少的治疗作用

目的 :观察重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对辐射致小鼠中性粒细胞减少的治疗作用。方法 :分别用rhG CSF 10 μg·kg- 1 ·d- 1 和 30 μg·kg- 1 ·d- 1 二个剂量对辐射致中性粒细胞减少症小鼠皮下注射 ,观察rhG CSF对辐射小鼠脾脏重量、脾表面造血灶 (CFU S)数、骨髓有核细胞数和骨髓DNA含量及骨髓粒 单核系祖细胞 (CFU GM)的影响。结果 :rhG CSF二个剂量对钴6 0 照射小鼠有明显增加脾脏重量和CFU S数 ,加速小鼠骨髓DNA合成速率的作用 ;CFU GM细胞集落形成增多。结论 :rhG CSF对辐射所致小鼠中性粒细胞减少有明显促进其造血功能的恢复、增加外周血白细胞数和中性粒细胞数     

放、化复合损伤性血虚证小鼠肾脏Epo、脾脏Epo受体及骨髓细胞GM-CSF mRNA表达量变化研究

目的：探究放、化复合损伤性血虚证小鼠造血调节因子及其受体水平改变,丰富血虚证实质研究内涵。方法：用荧光定量PCR检测放、化复合损伤性血虚证小鼠肾脏Epo、脾脏Epo受体、骨髓细胞GM-CSF mRNA表达量的变化。结果：放、化复合损伤性血虚证小鼠肾脏Epo、脾脏Epo受体mRNA表达量显著高于正常小鼠,骨髓GM-CSF mRNA表达量无显著改变。结论：放、化复合损伤性小鼠血虚模型的形成机制与肾脏Epo、脾脏Epo受体和骨髓细胞GM-CSF的减少无关。     

造血生长因子对脐血单个核细胞的体外增殖效应

目的 :探讨不同造血生长因子组合对人脐血造血细胞的体外增殖效应 .方法 :采用免疫荧光染色和祖细胞集落测定 ,观察人脐血单个核细胞 (MNC)经多种造血生长因子的不同组合作用 2wk后其有核细胞、CD34+ 细胞和祖细胞数量的变化 ,并用脾结节形成实验和骨髓祖细胞培养等观察其在小鼠体内的短期造血能力 .结果 :脐血MNC分别与A(SCF /IL 3/IL 6 /G CSF/GM CSF) ,B(SCF/IL 3/IL 6 /FL/EPO) ,C(SCF/IL 3/IL 6 /EPO ) ,3种造血生长因子组合悬浮培养 2wk ,有核细胞、CD34+ 细胞和祖细胞数量增加 .有核细胞总数在B组因子作用下增加最显著 [(2 6± 5 )倍 ],而CD34+ 细胞数量在A组因子作用下增加最明显 [(8± 2 )倍 ].3种因子组合对不同种类祖细胞的增殖效应不同 ,其中A组因子主要刺激早期混合系祖细胞CFU Mix扩增 [(11± 2 )倍 ],B组因子主要刺激粒单系祖细胞CFU GM扩增 [(2 2± 3)倍 ],C组因子主要刺激早期红系祖细胞BFU E扩增 [(13± 4 )倍 ].此外 ,给受照小鼠输注A组因子作用后的人脐血细胞 ,13d在小鼠脾脏形成脾结节 (CFU S) ,30d从小鼠骨髓检出造血祖细胞(CFU GM和CFU E) ,造血细胞数量与从输注新鲜脐血细胞的小鼠体内检出的结果无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :造血细胞生长因子对人脐血单个核细胞具有体外     

淋巴瘤细胞转染GM-CSF 基因后生物学特性的变化

目的：制备高表达GM－CSF的淋巴瘤细胞系，观察淋巴瘤细胞转染GM－CSF基因后生物学特性的改变。方法：将小鼠GF－CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA，有限稀释法制备单个细胞克隆，经RT－PCR，骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM－CSF的RMA克隆，并观察其生物学特性的改变。结果：获得了高表达GM－CS的RMA细胞系,其同基因动物体内致瘤性降低。结论：淋巴瘤细胞系RMA转染GM－CSF基因后致瘤性降低。     

川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞蛋白质表达的影响

目的:观察川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞蛋白质表达的影响,探讨川芎嗪补血作用的分子机制。方法:采用3.5 Gy60Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;骨髓集落细胞培养,观察并计数粒系-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、爆增型红细胞集落生成单位(BFU-E)、红细胞集落生成单位(CFU-E)、混合集落生成单位(CFU-mix)集落数;利用蛋白质组学寻找差异表达蛋白质。结果:辐射后小鼠骨髓CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-mix集落数明显减少,川芎嗪能使其显著回升并部分逆转辐射后蛋白质表达的变化,使小鼠骨髓细胞5种蛋白质表达回升,5种回落。结论:川芎嗪可促进辐射致血虚证小鼠骨髓造血祖细胞增殖,调节多种骨髓细胞蛋白质的表达,后者可能是川芎嗪促进造血细胞生长和增殖的重要机制之一。     

电离辐射对胎鼠皮肤间充质干细胞支持骨髓粒系造血作用的影响

目的：观察不同剂量的X射线照射对体外培养的胎鼠皮肤间充质干细胞(MSCs)支持造血细胞增殖作用的影响,为提高造血干细胞体外扩增效率提供一种更为有效的方法,进而为造血干细胞移植提供一个新的途径。 方法：分别用不同剂量的X射线照射培养的胎鼠皮肤MSCs层,然后将骨髓细胞种植于该细胞层上,扩增后不同时间(0~12 d)进行骨髓CFU-GM集落培养,同时取经X射线照射的皮肤MSCs的上清液进行骨髓CFU-GM、CFU-E及BFU-E培养,观察射线对胎鼠皮肤MSCs造血支持作用的影响。 结果：6、8和10 Gy剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs与骨髓细胞共同作用7 d时,骨髓祖细胞集落显著增加,其中6 Gy组增加最为明显,CFU-GM是0 Gy组的2.17倍。6、8和10 Gy剂量X射线照射培养皮肤的上清液体外亦可刺激骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E的生长,与0 Gy组比较差异均有显著性(P<0.05)。其中6 Gy组增加最为明显,分别达0 Gy组的1.81倍、3.94倍和3.51倍,集落亦明显加大。 结论：一定剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs,其体外支持造血的作用增强,无论照射后的单纯MSCs细胞层还是上清液都可使骨髓细胞集落数增多。     

Effects of Weiganfi on the Hemopoietic Function of the Myelosuppressed Anemic Mice

To study the effect of Weiganli （维肝力） on bone marrow hemopoiesis. Methods： The effects of Weiganli on the peripheral blood picture and the number of bone marrow nucleated cells （BMCs） were observed in myelosuppressed anemic model mice, and the effects of Weiganli on the growth of colony forming unit-granulocyte macrophage （CFU-GM）, colony forming unit-erythroid （CFU-E）, burst forming unit-erythroid （BFU-E）, colony forming unit-megkaryocyte （CFU-Meg） were investigated by in vitro cell culture technique. The hemopoietic stem cells （HSCs, c-kit＋） in bone marrow were double stained with fluorescent antibody PE-C-Kit and FITC-CD45, and the HSCs （c-kit＋） were counted by flow cytometer with CD45/SSC （side scatter） gating. Results： Peripheral blood cell counts and the number of BMCs were significantly improved after Weiganli administration; and bone marrow hemopoietic stem/progenitor cells were significantly increased. Conclusion： Weiganli can effectively promote the recovery of hemopoietic function in the mvelosuooressed anemic mice.     

The effects of total saponins of panax ginseng on hematopoietic progenitor cells in healthy humans and aplastic anemia patients

Ginseng is said to have beneficial effects on anemia. The proliferation effects of total saponins of Panax ginseng (TSPG) on hematopoietic progenitor cell in healthy individuals and 29 patients with aplastic anemia (AA) were observed through bone marrow cultures of burst forming unit-erythroid (BFU-E), colony forming unit-erythroid (CFU-E) and colony forming unit-granulocyte/macrophage (CFU-GM) in vitro compared with methyltestosterone (MT). The results suggest TSPG might prompt the proliferation of normal progenitor cells at a concentration of 20 μg/ml. The numbers of BFU-E,CFU-E and CFU-GM increased by 37.8±2.9%, 31.4±2.9% and 33.3±4.0% respectively overthe controls; furthermore TSPG was still useful to BFU-E, CFU-E growth without Epo in vitro, although the colony numbers were much lower. Otherwise MT was useless to CFU-GM. Of the 29 patients with AA, 14 who responded to MT showed sensitivity to TSPG in marrow culture (the rising rate of colony formation exceeded 30%), but immune-mediated AA (patient’s peripheral blood mononucleated cell suppressed normal hematopoiesis) and stem cell decreased AA (few of colonies were formed) showed almost no expression for TSPG activity because of the immunological suppression system and the absence of progenitors.     

儿童再生障碍性贫血骨髓祖细胞的测定和意义

目的通过对再生障碍性贫血 (AA)患儿红系 (BFU E、CFU E)、粒单核系 (CFU GM)及巨核系 (CFU Meg)祖细胞培养 ,了解骨髓祖细胞增殖情况。方法抽取 4 7例AA患儿骨髓分别作四类祖细胞培养 ,在 7、14d测定其集落数。结果 4 7例AA患儿中 ,四类集落数均值与对照组比较均有显著下降 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,且四类集落数均值在AA三种类型中 ,基本上随病情加重均值逐步下降 ,其中四类集落数低于对照组下限的患儿分别为BFU E 36 .17%、CFU E 85 .11%、CFU GM 74 .4 7%、CFU Meg 91.4 9 %。BFU E、CFU GM和CFU Meg随着患儿疾病的加重 ,低于对照组下限的患儿百分比同步上升 ,且三者的表现与外周血三系表现一致 ,而CFU E却未见上述现象。结论在部分AA患儿中存在着四类祖细胞培养集落数的下降 ,且基本上与患儿病情成正比 ;BFU E的变化较CFU E更能代表患儿骨髓红系祖细胞的变化。     

脐血造血干细胞特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒一单系祖细胞（ＣＰＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和骨贿及成人外周血做了比较，实验提示脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平，脐血红系祖细胞对ＥＰＯ、ＢＰＡ表现出更高的敏感性，而粒系祖细胞对ＣＳＦ的敏感性和骨髓比较似无明显差别．脐血Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期，及Ｓ＋Ｇ２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义．     

具骨髓间充质干细胞表型的成体干细胞移植造血

目的为了探索骨髓成体干细胞是否能重建超致死剂量射线照射后小鼠的造血功能.方法采用液体培养分离,培养,扩增雄性小鼠骨髓成体干细胞,作为供体细胞,将受体雌性小鼠预先经Cs137全身照射850rad后在4 h内从尾静脉输入细胞.受体小鼠分为5组,每组10只a正常小鼠不经任何处理;b输入6×106cell/只(0.3ml)新鲜全骨髓;c输入6×106 cell/只(0.3 m1)去基质细胞的造血细胞;d输入6×106cell/只(0 3 m1)经培养后的成体干细胞,输注细胞后第1天上、下午肌肉注射各一次Granulocyte colony stimulating factor(G-CSF)等细胞因子;e注射D-Hanks液0.3ml/只.观察各组小鼠的存活情况,小鼠在输注前查尾静脉血,计细胞总数、涂片、分类,输细胞后每周各组分别取小鼠肝、脾、股骨,固定作病理切片,另外一侧股骨冲出骨髓,计数一条股骨有核细胞数、涂片、测定colonyforming unit-granulocyte/macrophage(GM-CFU)值.结果输全骨髓组外周血有核细胞和骨髓有核细胞数及GM-CFU值在输注后的第1,2周都高于单输成体干细胞组,但单输基质细胞组有核细胞逐渐恢复,小鼠存活好,至输注后第3周,无论外周血或骨髓中的有核细胞都较第2周明显恢复,GM-CFU也明显升高,而单输造血细胞和D-hnks液组小鼠存活7～8 d死亡.结论小鼠超致死剂量照射后,输入经培养后的同种小鼠骨髓成体干细胞配合G-CSF等细胞因子注射可重建小鼠造血功能.     

脐血造血干细胞体外培养及其特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术(FCM),观察了脐血中粒-单系祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(BFU-E)的数量和特性,并对其细胞增殖周期和骨髓及成人外周血做了比较.结果表明,脐血中含丰富的CFU-GM和BFU-E,其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平;脐血红系祖细胞对促红细胞生成素(EPO)和爆式促进活性(BPA)表现出更高的敏感性,而粒系祖细胞对集落刺激因子(CSF)的敏感性和骨髓比较似无明显差别;脐血S期、G_2+M期及S+G_2M期细胞数均明显低于骨髓,虽略高于外周血各期细胞数,但差别无显著性意义.提示脐血造血干细胞体外培养可以得活性较高的祖细胞.     

再生障碍性贫血患者造血祖细胞及免疫机制的研究

目的探讨再生障碍性贫血(再障)的发病机制。方法采用甲基纤维素及胶原半固体培养法对56例再障骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K进行培养;采用APAAP法及双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)对再障患者外周血T细胞亚群、血清sIL-2R进行检测。结果再障患者CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K集落数均低于对照组,且严重型再障集落数减少程度与慢性再障相近;再障患者CD 3亚群细胞无变化,CD 4亚群细胞减低,CD 8亚群细胞增高,CD 4/CD 8降低,重型再障患者血清sIL-2R中水平高于正常对照组与慢性再障。结论骨髓造血祖细胞数量减少是再障发病的重要因素,其减少程度与再障的病情有关;细胞免疫功能异常及造血负调控因子可能在再障发病中起一定的作用。     

三尖杉酯碱对红系造血机能的影响

用微量甲基纤维素培养方法检测三尖杉酯碱(Harringtonine,Ha)促进小鼠骨髓红系祖细胞CFU-E和BFU-E增殖的作用。结果表明,适当剂量的Ha能增强骨髓红系造血机能;如剂量过大反而起抑制作用。双盲实验也表明Ha有促进骨髓CFU-E和BFU-E增殖的作用。