左卡尼汀对冷冻精子运动参数和精子线粒体功能的影响

目的:探讨左卡尼汀(LC)对人冷冻精子的影响。方法:将每份供精志愿者精液分为6组:新鲜精液组(FE组);常规冷冻组(Non-LC组,冷冻保护剂中未添加LC); LC 1～4组,冷冻保护剂中LC浓度分别为:1、2. 5、5、10 mmol/L。通过观察冷冻复苏后精子活力和运动参数改变,筛选最佳LC工作浓度。伊红-苯胺黑染色法评估精子质膜完整性(PMI),JC-1法评估精子线粒体膜电位(MMP),DCFH-DA法评估活性氧(ROS),探索LC对精子冷冻损伤的影响机制。结果:与FE组相比,冷冻复苏后精子(Non-LC组和LC各组),前向运动精子百分率(PR%)和运动参数(VAP、VSL、VCL)均明显下降(P 0. 05)。与Non-LC组相比,LC 3组PR%[(47. 0±4. 3)%vs(41. 9±4. 6)%,P=0. 0261)]和VAP [(38. 9±4. 2)μm/s vs (34. 9±2. 6)μm/s,P=0. 0152)]改善明显,确定5 mmol/L为实验最佳LC工作浓度。与FE组比较,Non-LC组冷冻复苏后精子PMI[(52. 7±5. 7)%vs (75. 5±5. 4)%]、MMP[(44. 5±3. 5)%vs(57. 3±4. 4)%]明显降低(P 0. 01),ROS[(12. 5±3. 9)%vs(6. 8±2. 4)%]明显升高(P 0. 01);与Non-LC组比较,LC组精子PMI[(70. 1±8. 2)%]和MMP[(50. 3±3. 4)%]明显升高(P 0. 01、0. 05),ROS[(8. 4±5. 3)%]明显降低(P 0. 05)。结论:LC可能通过降低精子ROS,提高精子MMP,保护精子质膜,改善冷冻后精子活力和运动参数。     

维生素E对人精子冻融氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨水溶性维生素E(Trolox)对冻融人精子氧化应激损伤的可能保护作用及机制。方法:选取16份健康生育男性的精液标本,分析精液常规参数及动力学参数后,将每份精液一式4份,1∶1加入冷冻保护液后混匀,不含水溶性维生素E者设为阴性对照组(G0),而G1、G2、G3实验组混合液中分别含有50、100、200μmol/L浓度的水溶性维生素E,冷冻复苏精液常规分析,检测复苏后精液中活性氧(ROS)水平,采用硫巴比妥酸法(TBA)检测精子中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)浓度。结果:冻融后各组精子运动参数较新鲜精液参数均明显下降(P0.01),G2组前向运动精子百分率[(53.33±5.63)%]较对照组[(47.85±5.09)%]明显改善(P0.05),精子VCL和VAP高于阴性对照组(P0.05)。G2组与G3组的ROS及MDA均低于阴性对照组(P0.05)。结论:在精液冷冻保护液中添加一定浓度的水溶性维生素E可以减少精子冻融过程中产生的过量ROS,减轻ROS对精子质膜的氧化应激性损伤,从而提高冻融后的精子活力。     

白藜芦醇对人精子冷冻损伤的保护作用

目的:通过在人精子冷冻保护液中添加白藜芦醇,研究其对冻融后精子质量和功能的影响。方法:选择正常精液与少弱精子症样本各50例,液化后的精液样本分别与甘油-卵黄-柠檬酸盐(GEYC)冷冻保护液或含有30μmol/L白藜芦醇的GEYC冷冻保护液混匀。冷冻复苏前后,进行精子活力、存活率及顶体反应分析。采用丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)检测试剂盒评估精子脂质过氧化程度及ROS水平。通过罗丹明123(Rh123)染色法及TUNEL试验检测精子线粒体膜电位及DNA损伤。结果:在正常精液和少弱精子症样本组中,与各组冷冻前新鲜精液相比,冻融后前向运动精子百分率、总活力、存活率、线粒体膜电位及顶体反应率均显著下降(P0.05),而精子ROS、MDA水平和DNA碎片指数(DFI)均显著升高(P0.05)。冷冻保护液中添加30μmol/L白藜芦醇后,正常精液组前向运动精子百分率[(43.1±6.3)%]、总活力[(56.9±7.4)%]、存活率[(67.5±5.6)%]、线粒体膜电位[(63.4±7.5)%]及顶体反应百分率[(26.3±4.7)%]较冷冻对照(未加白藜芦醇)的前向运动精子百分率[(32.7±4.8)%]、总活力[(44.8±6.9)%]、存活率[(52.3±6.1)%]、线粒体膜电位[(56.5±7.0)%]及顶体反应百分率[(16.6±3.8)%]均显著提高(P0.05),而精子ROS、MDA水平和DFI较冷冻对照均显著降低(P0.05)。在少弱精子症组中,添加白藜芦醇也均显著地提高了冷冻后精子前向运动百分率、总活力百分率、存活率、线粒体膜电位及顶体反应百分率,尤其是DFI[28.5±4.8)%]较冷冻对照[(36.3±5.7)%]显著降低(P0.01)。结论:在精液冷冻保护液中添加白藜芦醇可以通过降低精子内ROS水平减少精子冷冻损伤,从而改善解冻后精子质量和功能。     

高原环境对世居藏族与移居汉族男性精液特征的影响

目的:探讨世居高原藏族和移居高原汉族生育与不育人群精液参数特征,分析高原环境对男性生育力的影响。方法:从不育门诊收集男性不育人群1 563例,其中世居藏族698例,移居汉族865例;生育人群为西藏阜康妇产儿童医院员工,共56例,其中世居藏族33例,移居汉族23例。行精液常规分析、精子DNA完整性检测、外周血生殖激素测定,分别比较世居藏族及移居汉族不育人群生育力特征和生育人群主要精液参数和生殖激素水平。结果:在两组不育人群中,世居藏族较移居汉族人群无精子症、严重少精子症、精液粘稠度异常发病率显著增高(分别为5.87%vs 2.89%、3.15%vs 1.73%,P0.05;43.12%vs 25.89%,P0.01),而精液参数正常者和少精子症、严重弱精子症、严重畸形精子症患者百分率无明显差异(分别为81.08%vs 87.39%、5.44%vs3.93%、4.44%vs 4.04%、4.58%vs 6.59%,P均0.05)。在已育人群中,世居藏族与移居汉族在年龄[(32.42±4.82)岁vs(34.57±6.01)岁]、精子浓度[(143.69±85.74)×106/ml vs(155.11±82.56)×106/ml]、直线运动速度(VSL)[(25.74±3.94)μm/s vs(27.24±3.46)μm/s]、正常形态精子百分率[(8.22±4.35)%vs(7.28±2.46)%]、精子DNA碎片指数(DFI)[(25.49±7.88)%vs(24.52±11.86)%]、TT[(17.97±2.98)nmol/L vs(15.72±6.38)nmol/L]、FSH[(5.51±1.62)IU/L vs(4.17±2.08)IU/L]等方面均无统计学差异(P均0.05);移居汉族男性精子活动率明显高于世居藏族男性[(79.75±14.67)%vs(66.58±17.21)%,P0.05],而曲线运动速度(VCL)[(60.97±2.71)μm/s vs(71.14±82.13)μm/s,P0.05)]、LH[(4.28±1.20)IU/L vs(5.84±1.15)IU/L,P0.05]均较世居藏族低。结论:移居高原汉族人群在习服高原低氧环境过程中,其精子浓度、精子活力等发生适应性改变,且无精子症、严重少精子症等发病率低于世居藏族。     

肥胖男性精浆同型半胱氨酸、叶酸和维生素B12浓度与精液参数的相关性分析

目的:探讨肥胖男性精浆同型半胱氨酸(Hcy)及其代谢相关因子叶酸(FA)和维生素B12(VB12)与精液参数的相关性。方法:随机选取83例特发性不育男性为研究对象,依据体质量指数(BMI)分为正常组(BMI 24 kg/m~2,n=28)、超重组(24 kg/m~2≤BMI 28 kg/m~2,n=28)、肥胖组(BMI≥28 kg/m~2,n=27),采用ELISA法检测不同BMI组精浆Hcy、FA及VB12的浓度,并与精液参数进行相关性分析。结果:与正常组相比,肥胖组男性精液量[(2. 58±0. 77) ml vs (3. 23±0. 86) ml]、精子总数[(121. 55±88. 08)×106vs (191. 35±103. 00)×106]、前向运动精子百分率[PR%,(38. 97±16. 52)%vs (52. 88±15. 58)%]、精浆Hcy[(6. 62±0. 85)μmol/L vs (7. 41±1. 29)μmol/L]、VB12[(230. 07±37. 75) pmol/L vs (282. 41±30. 38) pmol/L]显著降低(P 0. 05),超重组各项精液参数与正常组和肥胖组均无显著差异(P 0. 05);精子浓度和精浆FA浓度3组间无统计学差异(P 0. 05)。相关性分析发现,精浆Hcy、VB12浓度与精液量(r=0. 281、0. 242)和精子总数(r=0. 229、0. 258)呈正相关(P 0. 05),与BMI(r=-0. 293、-0. 238)呈负相关(P 0. 05),而与精子浓度和PR%无相关性(P 0. 05)。精浆FA浓度与BMI、精液参数无相关性(P 0. 05)。结论:精浆Hcy、VB12与BMI、精液量和精子总数存在相关性,推测精浆Hcy和VB12可能对肥胖男性的生育力有一定影响。     

吸烟对育前男性精浆活性氧含量及精子质量的影响

目的:了解重庆市育前男性吸烟现状及吸烟对育前男性精浆活性氧(ROS)含量及精子质量的影响,为育前夫妇优生优育指导提供参考。方法:根据吸烟情况,将368例育前男性分为不吸烟组,轻度吸烟组(每天吸烟≤9支及吸烟年限≤5年),中、重度吸烟组(每天吸烟≥10支及吸烟年限≥5年;或每天吸烟量≤9支及吸烟年限≥10年)。全部对象进行体格检查和病史询问,填写健康调查表,并进行精液参数、精浆ROS含量、精子DNA碎片指数(DFI)检测。结果:368例育前男性中,有吸烟史者为53. 26%,中、重度吸烟者为29. 35%;仅55. 44%和52. 59%的育前男性的正常形态精子百分率和前向运动精子百分率(PR%)在正常参考值范围内。中、重度吸烟组与不吸烟组相比,精液量[(2. 78±1. 08) ml vs (3. 33±1. 20) ml]、精子浓度[(75. 16±60. 13)×106/ml vs (88. 19±70. 33)×106/ml]、PR%[(32. 18±15. 24)%vs (36. 58±13. 90)%]、正常形态精子百分率[(3. 52±1. 58)%vs(3. 85±1. 93)%]显著下降(P均0. 05);精子DFI[(14. 53±12. 85)%vs (10. 45±8. 53)%]和精浆ROS[(24. 10±18. 50) nmol/mg prot vs (12. 20±8. 10) nmol/mg prot]含量均显著增高(P 0. 05)。吸烟与育前男性精浆ROS含量显著正相关(r=0. 235,P 0. 05);吸烟者精浆ROS含量与PR%(r=-0. 381,P 0. 01)、精子总数(r=-0. 136,P 0. 05)、正常形态精子百分率(r=-0. 218,P 0. 01)显著负相关;与精子DFI显著正相关(r=0. 387,P 0. 01)。结论:吸烟会导致育前男性精浆ROS含量升高,精子总数和PR%下降,诱导精子畸形和DNA损伤。     

男性不育患者精子DNA完整性与精浆氧化应激水平的关系及其对体外受精的影响

目的:探讨男性不育患者精子DNA完整性与精液常规参数、精浆氧化应激水平的关系,以及对体外受精(IVF)结局的影响。方法:采用精子染色质扩散法(SCD)检测433个IVF周期中精子DNA损伤性,根据精子DNA碎片指数(DFI)的不同,分为低DFI组(DFI30%)、高DFI组(DFI≥30%),比较2组精子浓度、前向运动精子百分率、快速前向运动精子百分率、精浆丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAC)水平及受精率、卵裂率、优胚率的差异。结果:高DFI组与低DFI组比较,前向运动精子百分率及快速前向运动精子百分率显著降低[(29.2±16.8)%vs(48.6±16.7)%、(9.4±6.6)%vs(19.0±9.1)%,P0.01],高DFI组精子浓度与低DFI组相比差异无显著性[(52.3±32.4)×106/ml vs(51.4±30.9)×106/ml,P0.05];高DFI组精浆中的MDA含量明显高于低DFI组[(2.28±0.26)nmol/L vs(0.95±0.18)nmol/L,P0.01],高DFI组精浆中的TAC含量明显低于低DFI组[(10.2±3.5)U/L vs(33.2±7.9)U/L,P0.01];高DFI组IVF受精率明显低于低DFI组[(58.9±30.0)%vs(77.2±25.0)%,P0.01],两组间卵裂率[(70.7±35.6)%vs(80.4±15.6]、优胚率[(40.4±31.3)%vs(41.7±29.4)]比较差异均无显著性(P均0.05)。结论:精子DNA损伤与氧化应激有关,同时精子DNA损伤可降低IVF受精率,影响IVF结局。     

IVOS Ⅱ与SCA精子质量分析仪对精液检测结果的比较研究

目的:比较Hamilton-Thorn IVOSⅡ全自动精子质量分析仪(IVOSⅡ)及西班牙SCA全自动精子质量分析仪(SCA)的计算机辅助精液分析(CASA)系统对精液参数检验结果的差异性。方法:收集2018年9～10月99例就诊患者的精液标本,根据精子浓度分为3组:A组(15×10~6/ml)、B组[(15～50)×10~6/ml]和C组(50×10~6/ml)。采用IVOSⅡ、SCA及显微镜人工方法对同一精液标本同时检测,比较IVOSⅡ和SCA对精子浓度、前向运动精子百分率及活率检测的一致性以及重复性。结果:IVOSⅡ与SCA对A组精子浓度的检测结果显著高于显微镜人工方法[(10.24±4.60)×10~6/ml、(10.20±5.11)×10~6/ml vs(8.45±4.15)×10~6/ml,P0.05],但是IVOSⅡ与SCA对B组[(30.95±11.84)×10~6/ml、(31.81±12.90)×10~6/ml vs(29.14±10.65)×10~6/ml]以及C组[(102.14±45.97)×10~6/ml、(109.48±46.32)×10~6/ml vs(104.74±41.87)×10~6/ml]精子浓度的检测结果与显微镜人工方法相比无统计学差异(P0.05)。IVOSⅡ与SCA分别对B组的前向运动精子百分率[(24.21±14.62)%vs(23.92±15.42)%]与活率[(37.48±19.34)%vs(37.69±16.61)%]以及C组的前向运动精子百分率[(30.80±12.06)%vs(32.98±16.10)%)]与活率[(44.50±15.62)%vs(47.26±17.46)%)]的检测结果差异无统计学意义(P0.05),然而IVOSⅡ对A组的前向运动精子百分率[(18.54±12.96)%vs(22.90±12.88)%]与活率[(26.97±14.05)%vs(34.90±15.18)%]的检测结果显著低于SCA(P0.05)。SCA及IVOSⅡ对精子浓度、前向运动精子百分率、活率检测结果均具有良好的重复性(CV值均15%)。结论:IVOSⅡ与SCA精子质量分析仪对精子浓度、前向运动精子百分率和活率的检测结果均有较好的一致性,但对于低浓度精液的精子浓度、前向运动精子百分率和活率的检测结果可比性较差。     

利拉鲁肽对胰岛素抵抗大鼠肾脏8-羟基脱氧鸟苷、丙二醛及超氧化物歧化酶表达的影响

目的研究利拉鲁肽对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠肾脏8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量的影响。方法 54只雄性Wistar大鼠随机分成对照组(普通饮食)16只、模型组(高脂饮食)38只。喂养8周末各组取5只行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验评价各组IR状态,判定IR造模成功后再将高脂喂养组随机分为IR组、干预组1(利拉鲁肽100μg·kg~(-1)·d~(-1))、干预组2(利拉鲁肽200μg·kg~(-1)·d~(-1))。药物干预2周后,测定各组大鼠血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿蛋白量以及肾组织中8-OHdG、MDA和SOD含量,并应用电镜观察各组肾组织形态结构。结果 IR组的SCr、BUN、24 h尿蛋白定量、8-OHdG、MDA分别为(26.31±0.60)μmol/L、(10.43±0.50)mmol/L、(7.13±0.60)mg、(32.81±2.96)ng/L和(7.7±1.0)nmol/mg,与对照组[(15.55±0.42)μmol/L、(5.34±1.33)mmol/L、(2.18±0.29)mg、(13.30±1.72)ng/L、(3.3±0.4)nmol/mg]比较均明显升高(均P0.05),而SOD表达下降[(175.0±7.7)U/mg比(237.1±12.4)U/mg,P0.05)];与IR组比较,干预组1的24 h尿蛋白定量[(6.46±0.44)mg]、8-OHdG[(28.54±2.71)ng/L]、MDA[(6.6±1.0)nmol/mg]表达均减少(均P0.05);与IR组比较,干预组2的SCr[(24.07±1.05)μmol/L]、BUN[(9.53±0.53)mmol/L]、24 h尿蛋白定量[(4.60±0.40)mg]、MDA[(5.7±0.5)nmol/mg]、8-OHdG[(20.06±1.65)ng/L]表达均降低(均P0.05),而SOD[(216.1±10.6)U/mg]表达升高(P0.05);与干预组1比较,干预组2的SCr、BUN、24 h尿蛋白量、MDA、8-OHdG均降低(均P0.05),而SOD表达升高(P0.05)。结论利拉鲁肽可呈浓度依赖性降低肾脏氧化应激水平,可能是阻断IR所致肾损伤的原因之一。     

腹腔镜胆囊切除术中应用不同器械对机体氧化应激的影响

目的探讨在腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)术中应用不同器械对机体氧化应激的影响。方法选择2007年10月～2008年10月符合标准的胆囊切除术78例,LC术中分别使用超声刀(A组,n=30)和电刀(B组,n=30),18例因经济原因要求开腹手术(C组,n=18)。术前、术后0h、12h、24h检测3组患者丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平并进行比较。结果与术前相比,LC术后0h MDA[A组:(7.141±1.024)nmol/Lvs(6.483±0.721)nmol/L,q=3.940,P0.05;B组:(7.357±1.151)nmol/Lvs(6.562±0.730)nmol/L,q=4.545,P0.05]均明显升高,C组升高不明显[(6.676±0.920)nmol/Lvs(6.575±0.762)nmol/L,q=0.505,P0.05]。术后24h MDALC组均恢复至术前水平[A组:(6.635±0.903)nmol/Lvs(6.483±0.721)nmol/L,q=0.910,P0.05;B组:(6.762±0.884)nmol/Lvs(6.562±0.730)nmol/L,q=0.890,P0.05],而C组持续升高[(7.715±1.183)nmol/L vs(6.575±0.762)nmol/L,q=4.880,P0.05]。与术前相比,术后0hLC组SOD活性降低[A组:(99.405±18.840)U/ml vs(121.821±15.535)U/ml,q=7.039,P0.05;B组:(101.516±19.304)U/ml vs(124.242±16.301)U/ml,q=6.962,P0.05],C组降低不明显[(111.019±18.425)U/ml vs(118.748±18.247)U/ml,q=2.443,P0.05];术后24hLC组均恢复至术前水平[A组:(120.487±17.004)U/ml vs(121.821±15.535)U/ml,q=0.420,P0.05;B组:(119.118±18.235)U/ml vs(124.242±16.301)U/ml,q=1.570,P0.05],而C组继续降低[(102.363±15.741)U/ml vs(118.748±18.247)U/ml,q=4.009,P0.05]。A组术后各时点MDA水平较B组无明显差异(P0.05),而术后12h SOD活性较B组明显偏高[(119.836±18.208)U/ml vs(109.917±17.543)U/ml,q=3.080,P0.05]。结论 LC术中CO2气腹可导致氧化应激的产生,但较开腹胆囊切除术恢复快;LC术中应用超声刀较电刀更有利于机体术后氧化应激的恢复。