精子的生育相关抗原研究进展

精子的生育相关抗原研究进展沙国柱综述黄宇烽武建国审校关键词精子，精子抗原，生育相关抗原中图法分类号Ｒ３２１．１精子抗原的研究是生殖免疫、生殖生理、免疫不育（ｉｍｍｕｎｏｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ）以及免疫避孕（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ）的重...     

SPAG6/SPINK2蛋白复合物在小鼠精子顶体形成中的作用初探

目的:初步探讨精子相关抗原6(SPAG6)在小鼠精子发生过程中顶体形成阶段的表达及其调控作用。方法:采用Western印迹检测出生后小鼠睾丸发育不同阶段(第8、12、16、20、24、28、30、35天)中SPAG6的表达;免疫荧光观察SPAG6在生精细胞中的定位;分别构建SPAG6和SPINK2蛋白表达质粒,以AH109和CHO细胞为对象,采用酵母双杂交及细胞内共定位实验检测SPAG6与SPINK2蛋白间相互作用;免疫荧光检测SPINK2在SPAG6基因敲除(KO)小鼠的睾丸生精细胞中的表达与定位。结果:小鼠出生后第16～28天,SPAG6表达显著升高,且定位于圆形精子细胞的顶体;酵母双杂交实验显示SPAG6/SPINK2组能在选择性培养基(SD/-Leu/-Trp/-His)中生长;CHO细胞共转染SPAG6和SPINK2表达质粒时,SPAG6与SPINK2共定位在细胞核周围;SPAG6 KO小鼠睾丸生精细胞中未检测到SPINK2表达及定位于精子顶体。结论:SPAG6与SPINK2形成蛋白复合体,并可能通过调控SPINK2的稳定表达参与精子顶体形成。     

溶质载体家族22成员14和精子相关抗原6在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨溶质载体家族22成员14(SLC22A14)和精子相关抗原6(SPAG6),在特发性弱精子症患者精子中的表达情况。方法:收集精子库合格捐精者(正常对照组)和特发性弱精子症患者(弱精子症组)各50例精子样本,采用非连续密度梯度离心纯化精子,分别用RT-PCR和Western印迹检测SLC22A14、SPAG6 mRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14、SPAG6 mRNA表达均显著低于正常对照组(SLC22A14:0.53±0.10 vs 0.77±0.08,t=12.834,P0.01;SPAG6:0.52±0.10 vs 0.77±0.06,t=13.755,P0.01),Western印迹检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14和SPAG6蛋白表达量同样均显著低于正常对照组,分别为(SLC22A14:0.55±0.10 vs 0.80±0.09,t=12.884,P0.01;SPAG6:0.56±0.09 vs 0.78±0.09,t=12.257,P0.01)。结论:在特发性弱精子症患者中SLC22A14和SPAG6表达降低可能是导致弱精子症的重要原因之一。     

精子受精抗原(FA-1)的研究进展

１９８４年,Ｎａｚ领导的研究小组用正常生育者的洗涤精子免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,并取其脾细胞与淋巴瘤ＮＳ１细胞进行杂交,共得到４０个分泌抗体的杂交瘤细胞克隆,其中ＭＡ２４单克隆抗体被详细分析［１］。ＭＡ２４的免疫亲和层析法从二碘水杨酸锂（ＬＩＳ）溶解的精子膜制剂中纯化出一种相对分子质量为２３０００的糖蛋白,此糖蛋白与精卵受精密切相关,被命名为受精抗原１（ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１;ＦＡ１）。本文将对ＦＡ１的生化性质和免疫学特性,抗ＦＡ１抗体对生殖过程的影响,以及ＦＡ１与…     

抗精子抗体相关靶抗原的研究进展

抗精子抗体能导致免疫性不育 ,对抗精子抗体靶抗原的深入研究有助于揭示抗精子抗体与不育的因果关系。本文综述了近年来陆续发现的 6种重要的抗精子抗体靶抗原的结构和功能 ,为进一步探讨抗精子抗体与不育的因果关系以及筛选免疫避孕疫苗奠定基础。     

淋巴细胞功能相关抗原1共刺激作用在活动性狼疮肾炎中的作用

目的探讨淋巴细胞功能相关抗原(LFA)1及其信号分子在狼疮肾炎发病机制中的作用。方法 利用免疫沉淀、免疫印迹和RTllPCR技术检测了LFA-1共刺激对19例活动性狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)P13-K磷酸化产物、IL-10 mRNA表达的影响。以14例健康献血员作为对照。结果 在CD3 mAb30 ng/ml存在的情况下,LFA-1mAb共刺激明显提高了活动性LN患者PBMC P13-K磷酸化产物表达(P<0.01),伴有IL-10 mRNA表达和蛋白含量增加(P<0.01),抗lFA-1抗体(5μmol/L)加入后明显抑制了P13-K磷酸化产物表达(P<0.01)。在CD3 mAb和LFA-1mAb协同刺激的情况下,P13-K特异抑制剂Wortamannin的加入明显抑制了LN患者PBMCIL-10 mRNA水平和蛋白含量(P<0.01)。结论 LFA-1作为共刺激分子过度活化P13-K可能介导了活动性狼疮肾炎IL-L 10的高效表达。     

TF相关抗原与MUC1的相关性和临床应用研究进展

目的 黏蛋白1与TF相关抗原基因都是与肿瘤的发生和发展有密切关系的基因,对其基因及蛋白质在国内外的研究进展与临床应用进行探讨和展望.方法 回顾性总结国内外近10年的文献,对黏蛋白1与TF相关抗原的表达关系及临床研究进展进行讨论.结果 黏蛋白1与TF相关抗原在肿瘤的表达中存在高度的特异性,且二者存在共表达并相互影响.与黏蛋白1相关的多种疫苗已经投入临床使用,部分基于TF相关抗原的药物也已进入临床试验阶段.结论 黏蛋白1与TF相关抗原可作为肿瘤治疗的新型靶抗原,其表达与肿瘤的生物学行为与预后密切相关,对肿瘤的诊断和治疗有重要意义.     

抗精子抗体相关精子膜抗原的免疫印迹分析

目的 筛选抗精子抗体相关的精子膜抗原。方法 使用ELISA试验检测不育病人血清的抗精子抗体,选取抗精子抗体阳性血清,通过免疫印迹的方法来筛选抗精子抗体相关精子膜抗原。结果 通过ELISA试验共收集到抗精子抗体阳性男子血清标本18份、女子血清标本15份。有8种分子量的精子膜抗原被抗精子抗体阳性血清所识别,其中78KD、60KD、51KD、23KD的精子膜抗原的识别率较高,分别为71.43％、60.71％、14.29％和14.29％。结论 78KD、60KD、51KD、23KD的精子膜抗原与抗精子抗体的生成和免疫不育密切相关。     

METH1在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测

目的通过观察血管生成抑制因子METH1的cDNA片段在酵母双杂交中的表达及检测其对报告基因有无激活作用,为进一步明确METH1抑制增生性瘢痕的分子机制奠定基础。方法采用酵母双杂交Gal4系统3,经PCR扩增子METH1的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再分别亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因的激活作用。结果成功获得METH1的cDNA片段,该片段所表达的蛋白对酵母菌AH109无毒性,且对报告基因无激活作用。结论血管生成抑制因子METH1蛋白活性区在酵母双杂交系统中的表达产物,可作为诱饵蛋白进行相互作用蛋白的筛选研究。     

增生性瘢痕成纤维细胞中分泌型凋亡相关蛋白1相互作用蛋白的研究

目的 寻找与分泌型凋亡相关蛋白1 （secreted apoptosis-related protein1,SARP1）存在相互作用的蛋白质分子,分析其分子机制.方法 成功构建的重组SARP1腺病毒载体Ad-SARP1,转染进入原代培养的增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）.免疫共沉淀法沉淀出蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离后,用考马斯亮蓝染色,对SDS-PAGE胶上切取的电泳蛋白条带进行酶解与质谱分析,根据质谱分析获得的肽序列谱图自动进行数据库搜索.结果 在阳细胞对照组和导入Ad-SARP1感染的细胞当中,均共沉淀出7条蛋白带,相对分子质量分别约为93×103、43×103、40×103、37×103、31×103、26×103和12×103;在未加SARP1抗体组则没有沉淀出蛋白条带.分析蛋白条带得到6个可能与SARP1有相互作用的蛋白,分别为骨膜蛋白前体（periostin precursor或OSF-2）、牙周韧带相关蛋白1（asporin precursor或PLAP1）、磷酸甘油激酶1（phosphoglycerate kinase 1）、未知蛋白rCG50690、载脂蛋白（apolipoprotein A-I,Apo-AI）、硫氧还蛋白1（thioredoxin 1,TRX1）.结论 通过免疫共沉淀法结合液相色谱/质谱联用离子阱检测技术,可以获得SARP1的相互作用蛋白,为研究SARP1调控HSFb凋亡信号通路的作用机制提供了新的线索.     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11 mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。     

Interaction between GALNT12 and C1GALT1 Associates with Galactose-Deficient IgA1 and IgA Nephropathy

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Interaction between ESRα polymorphisms and environmental factors in osteoporosis

We hypothesized that environmental factors might affect the relationship between genetic predisposition and the risk of bone mineral density (BMD) loss. Cases were 114 Japanese women with a confirmed diagnosis of postmenopausal osteoporosis and controls were 171 general Japanese women. Genetic risk of SNPs in the estrogen receptors was analyzed by a case–control study. The interaction between gene and environmental factors for osteoporosis were assessed by a case‐only design. Significant increases in osteoporosis risk were observed with minor alleles of rs2077647 located in the first exon and rs2234693 located in the first intron of estrogen receptor α (ESRα). Haplotype CC at these risk SNPs was strongly associated with osteoporosis risk (odds ratio [OR] = 3.15, 95% confidence interval [CI] = 1.83–5.41). There was a statistically significant interaction between haplotype CC and alcohol drinking; moderate alcohol consumption decreased genetic risk of osteoporosis (OR = 0.22, 95%CI = 0.05–0.83). © 2012 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 30:1529–1534, 2012     

精子相关抗原SPAG9在人精液精子中的表达及定位

目的:SPAG9作为MAPK家族中的成员,在精卵融合过程中发挥着重要的作用。本研究检测SPAG9在人精液精子中的表达情况。方法:取人不同组织(肌肉、肝、食管、肺、胃、肾、前列腺、子宫、睾丸、附睾)标本及健康男性的精液精子,为了排除圆形细胞的污染,精液标本经非连续性Percoll梯度离心、分离纯化;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和间接免疫荧光方法,从mRNA和蛋白水平检测SPAG9在精子中的表达。结果:RT-PCR结果显示,SPAG9mRNA不仅在各种不同的组织中有表达,而且在人精液精子中也有表达;间接免疫荧光结果显示,SPAG9蛋白主要定位于人精液精子头部的赤道板和精子尾部鞭毛上。结论:SPAG9在人精液精子中有表达,可能在精子获能和运动中有一定作用。