恶性疟原虫基因工程疫苗的研究——Ⅰ.恶性疟原虫保护性抗原复合基因的合成与克隆

本文应用基因工程技术,设计并化学合成了编码恶性疟原虫红内期保护性抗原MSA_1,MSA_2和RESA上多个免疫原性决定簇(含T、B细胞位点)以及来自白细胞介素-1(IL-1)和破伤风类毒素(TT)上的外源性T细胞激活位点的复合基因HGFC。全基因共由246个碱基对组成,编码一个75肽的复合抗原。合成后的基因克隆在M13mp18载体上,并经序列分析证实与设计完全一致。杂合基因合成和克隆的成功,为在基因水平上进行多价疟疾疫苗的蛋白质工程研究创造了条件。     

一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物的细胞免疫…

检测一种恶性疟原虫保护性原重组复合基因表达产物诱导小鼠细胞免疫的反应，方法：免疫小鼠的巴细胞，体外分别经ＣｏｎＡ，ＨＲＡ和可溶性裂殖子抗原的刺激。＾３Ｈ－ＴｄＲ参入法检测淋巴细胞的增殖水平。结论：ＨＲＡ上的Ｔ细胞位点发挥了效应。具肝一这一的突破ＭＨＣ限制的能力。     

恶性疟基因工程疫苗的研究Ⅲ．恶性疟原虫保护性抗原复合基因在大肠杆菌中的表达及产物分析

将人工合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因ＨＧＦＣ和ＨＧＦＣＡＣ分别与表达载体ｐＢＶ２２０重组并转化大肠杆菌ＤＨ５χ，挑取工程菌进行发酵试验并用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表达产物。结果显示经温度诱导后的工程菌在相当于分子量１０ｋｄ和２５ｋｄ的位置出现表达产物的条带，扫描测定表达产物的量占菌体蛋白总量的５％左右。免疫印迹分析显示表达产物可与免抗恶性疟原虫多肽抗原的抗体发生特异性免疫反应，提示表达产物为具有恶性疟原虫抗原位点活性的重组复合蛋白。     

一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物的细胞免疫特性研究(I)

目的：检测一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物（ＨＲＡ）诱导小鼠细胞免疫的反应．方法：免疫小鼠的脾淋巴细胞，体外分别经ＣｏｎＡ、ＨＲＡ和可溶性裂殖子抗原（ＳＭＡ）的刺激，３Ｈ－ＴｄＲ参入法检测淋巴细胞的增殖水平．结果：含佐剂的ＨＲＡ免疫ＢＡＬＢ／ｃ和Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后，其脾细胞经ＨＲＡ刺激后，增殖明显，可溶性裂殖子抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞经ＨＲＡ刺激发生明显的增殖．结论：ＨＲＡ上的Ｔ细胞位点发挥了效应．具有一定的突破ＭＨＣ限制的能力．     

疟原虫的肝期抗原有助于疟疾疫苗的研制

一种新鉴定的恶性疟原虫的肝期抗原可以保护黑猩猩抵抗大量恶性疟原虫孢子体的连续性异源性挑战。法国巴黎巴斯特研究所的Pierre Druilhe认为:这至少可以证明一种观点,即一种认真选择的单分子能够引起抗疟株的超越性保护作用。 Druilhe解释说,人类通过接触数千只照射过的感染蚊虫叮咬而引致抗疟疾的免疫性,但使用亚单位疫苗也能达到同样     

疟原虫复合多价疫苗研究进展

疟疾是流行于热带地区最严重的寄生虫病。据ＷＴＯ最新统计，疟疾分布于世界约１００个国家和地区，年发病人数３－５亿，死亡人数１５０－２７０万。大多数患者分布于非洲、亚洲、中美以及南美，我国也是疟疾流行区之一。近年来疟原虫、蚊虫耐药现象日益严重，这就更迫切需要尽快开展研制高效的抗疟疫苗[１］．由于疟原虫生活史复杂、抗原成份多、抗原变异等原因，单价疫苗免疫效果不理想。复合多价疫苗的问世是疟疾疫苗研制的一条新途径。多价疫苗包含子孢子、裂殖子、配子的有效保护性抗原表位（包括Ｔ细胞和Ｂ细胞表位），较单价疫苗更…     

恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫效应检测

目的探讨恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫活性。方法利用毕赤酵母高效表达系统分泌表达AMA-1(Ⅲ),表达产物用纯化后免疫新西兰兔,检测其血清中IgG滴度的变化,观察重组AMA-1(Ⅲ)免疫效应。结果重组AMA-1(Ⅲ)免疫后,ELISA检测新西兰兔血清中IgG滴度发现在3次免疫后OD490值明显高于佐剂免疫对照组(P<0.01)。结论AMA-1(Ⅲ)重组蛋白具有较好的免疫原性。     

恶性疟疾多价疫苗的构建及表达

目的 构建恶性疟原虫多表位融合抗原基因(PfCP2E9),并在毕氏酵母中进行高效分泌表达.方法 选取本实验室前期构建的融合蛋白PfCP-2.9与疟原虫红内期疫苗候选抗原EBA175IIF2,按一定的次序拼接成该融合基因,并克隆至酵母表达载体,用电转化方法将拼接基因导入毕氏酵母中进行分泌表达.结果 拼接的基因在毕氏酵母中高水平分泌表达.结论 构建的恶性疟原虫多表位融合抗原基因能在毕氏酵母中高水平分泌表达,为探讨其免疫学功能及作为多价联合疫苗的成分提供了基础.     

疟原虫抗原的免疫抑制效应分析

本文报道伯瓦疟原虫分离、提纯的四种抗原具免疫抑制效应。应用单克隆抗体免疫荧光试验检测结果，四种不同方法处理的疟原虫抗原可造成小鼠脾ＤＣ４Ｔ细胞和Ｂ细胞阳性百分数下降，ＣＤ８Ｔ细胞百分数明显升高。结果表明，四种抗原中具有免疫抑制性抗原组分，通过诱导、激活ＣＤ８Ｔ细胞而对宿主的免疫应答起下调作用。四种抗原中，抗原提纯度高，免疫抑制效应随之增强。     

恶性疟原虫顶端膜抗原1基因转染伯氏疟原虫模型的建立

目的：建立恶性疟原虫顶端膜抗原1（AMA-1）基因转染伯氏疟原虫的模型．方法：将含有恶性疟原虫AMA-1基因的重组转染质粒pDB.DTm. DB./AB. AF. DB．用Bgl Ⅰ酶切线性化．伯氏疟原虫经体外培养和分离后进行电转化,转化的原虫经药物筛选后进行PCR检测．结果：PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在恶性疟原虫AMA-1基因．结论：成功建立了恶性疟原虫AMA-1基因转染伯氏疟原虫的模型,为进一步研究提供了基础．     

恶性疟原虫海南株丝氨酸重复抗原部分基因序列分析

该文采用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性原虫海南株（ＦＣＣ－１／ＨＮ）ＳＥＲＡ基因片段,并将该基因片克隆于Ｍ１３噬菌体,用双脱氧链末端终止法进行测序,ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析,结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ,Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６：１,符合恶性瓶原虫结构基因的特点。同源性分析显示在不同虫株间高度保守,我国ＦＣＣ－１／ＨＮ虫株ＳＥＲＡ与Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株仅一个     

人工合成人恶性疟原虫58肽抗原基因在大肠杆菌中的表达

使用DNA合成仪合成的人恶性疟原虫58肽抗原基因,与大肠杆菌表达性载体质粒PWR450—Ⅰ重组,转化到大肠杆菌JM83中。用斑点杂交技术和电泳分析DNA方法筛选出阳性重组转化菌株,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳分析,证明合成基因在大肠杆菌中表达,产生与β—半乳糖苷酶融合的多肽。     

疟疾基因工程疫苗的研究Ⅱ．恶性疟保护性抗原复合基因的串接与克隆

将人工合成的恶性疟原虫４５肽抗原基因ＨＰＦＡ和７５肽抗原基因ＨＧＦＣ分别从克隆载体上切下，经过一系列的串接和克隆，筛选出含有ＨＧＦＣ－ＨＰＦＡ－ＨＧＦＣ三连体基因（ＨＧＦＣＡＣ）的重组克隆，经酶切鉴定和ＤＮＡ序列分析证实基因序列与设计一致。该三连体基因含有起始和终止密码，编码一个１９３肽的复合抗原。多连体基因串接与克隆的成功，在基因水平上实现了复合抗原的多聚，从而为进一步研究疟疾多价疫苗的结构和功能提供了条件。     

胶体金层析法检测恶性疟原虫HRPⅡ抗原的应用研究

建立一种简易快速，适于基层或流行病学调查的自测试胶体金免疫层析法用于检测恶性疟原虫中ＨＲＰⅡ抗原，判定是否现症感染。方法用ＧＩＣＡ测试条检测全血及滤纸血样中的ＨＲＰⅡ抗原。结果４０例恶性全血及滤纸血ＨＲＰⅡ抗原阳性检出率均为１００％，与镜检结果相符合；２５例间日疟均为阴性。     

胶体金层析法检测恶性疟原虫HRPII抗原的应用研究

目的 :建立一种简易快速 ,适于基层或流行病学调查的自测式胶体金免疫层析法 (GICA)用于检测恶性疟原虫中 H RPII抗原 ,判定是否现症感染。方法 :用 GICA测试条检测全血及滤纸血样中的 H RPII抗原。结果 :40例恶性疟全血及滤纸血 H RPII抗原阳性检出率均为 1 0 0 ,与镜检结果相符合 ;2 5例间日疟均为阴性。结论 :GICA检测血中恶性疟原虫 H RPII抗原特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,滤纸血的应用使样本的采集、保存和运输更为便利 ,适合大规模流行病学调查和基层使用 ,有广泛应用价值。     

疟原虫抗原B表位NKNDD和NANP串联重复片段与脊灰病毒全…

人工合成含有恶性疟原虫抗原Ｂ表位ＮＫＮＤ的单拷贝抗原基因片段ＮＫＮＤＤ和恶性疟原虫环子孢子蛋白ＣＳＰ的重复性抗原Ｂ表位ＮＡＮＰ的２拷贝基因片段，将ＮＫＮＤＤ和（ＮＡＮＰ）２分别进行自串联后克隆到中介载体ｐＳＫＭＭ，得到一系列不同拷贝数的串联多拷贝克隆，从（ＮＫＮＤＤ）ｎ／ｐＳＫＭＭ和（ＮＡＮＰ）ｎ／ｐＳＫＭＭ的各拷贝类克隆中挑选３，４，５，８拷贝的（ＮＫＮＤＤ）ｎ／ｐＳＫＭＭ和４，６拷贝的（ＮＡＮ