合肥地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征研究

目的:了解合肥地区结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药株rpoB基因突变特点。方法:应用PCR-直接测序法对合肥地区肺结核病人痰液中分离的90株结核分枝杆菌的rpoB基因629 bp(包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)的81 bp)序列进行测定分析。结果:90株结核分枝杆菌中69株对RFP耐药,21株对RFP敏感;69株耐利福平临床分离株中53株发生rpoB基因突变,突变率为76.8%;突变发生在531位丝氨酸的31株,发生率为44.9%,发生在526位组氨酸的8株,发生率为11.6%;还有6株发生了联合突变,发生率为8.7%。21株敏感株中1株rpoB基因发生突变,突变位点是533位亮氨酸。结论:合肥地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB基因的RRDR发生了突变,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特征研究

目的了解郑州市结核分枝杆菌耐利福平临床分离株的相关耐药rpoB基因突变特征。方法应用PCR方法对40株结核分枝杆菌利福平耐药、40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株中包含"利福平耐药决定区(RRDR)"在内的rpoB基因片段(385bp)进行扩增,并将扩增产物进行测序,以H37Rv结核分枝杆菌标准株的DNA序列作为参比序列,分析结核分枝杆菌临床分离株的突变特征。结果 40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株均未检测到突变,结核分枝杆菌耐利福平临床分离株中有36株检测到突变,突变率92.3%,且突变均位于RRDR区域内;突变位点为8个,共有8个突变类型;最常见的突变热点依次为531位点,该位点突变率为64.1%;526位点,其突变率为12.8%和516位点,其突变率为10.3%。结论 rpoB基因是郑州市结核分枝杆菌对利福平耐药的最相关基因,其中在RRDR内的531位点基因突变率最高,并可通过对rpoB基因的突变检测,对耐多药结核病进行预测。     

rpoB基因突变与结核分枝杆菌利福平耐药相关性研究

目的 探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系. 方法 对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况;根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定区（RRDR）的扩增引物,PCR法进行扩增,运用生物信息学方法对耐药决定区扩增产物序列进行比对分析,对耐药株与非耐药株基因突变率进行统计学分析. 结果 115株结核分枝杆菌经比例法药敏试验,RIF耐药株53株,占所有菌株的46.09％;53株RIF耐药株中39株rpoB基因存在不同位点的变异,突变率为73.58％,突变位点包括531、526、522、516、513、511,最主要的突变位点集中在531位,引起氨基酸呈Ser531Gln、Ser531Leu、Ser531Trp 3种形式改变;RIF敏感株62株,其中有2株检测到rpoB基因的突变,敏感株与耐药株突变率经McNemar统计检验,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 岳阳地区rpoB基因变异与利福平耐药呈高度相关,rpoB基因最主要的突变位点位于531位和526位.     

结核分枝杆菌部分耐药相关基因的突变特点

目的 分析结核分枝杆菌耐药相关基因的突变特点,评价DNA序列分析用于结核分枝杆菌快速耐药性检测的应用价值.方法 利用DNA序列分析检测结核分枝杆菌的katG、rpoB和gyrA基因片段.结果 86.81%(79/91)异烟肼耐药株存在katG基因的点突变和/或单碱基插入,最常见的突变形式为R463L,占76.92%(70/91).90.38%(94/104)的利福平耐药株在rpoB基因耐药决定区(RRDR)发生突变,突变类型有26种,涉及11种氨基酸,突变集中在密码子第507～533位.70.49%(86/122)氧氟沙星耐药株在gyrA基因耐药决定区(QRDR)发生突变,突变主要形式为A90V、D94Y、D94N、D94H及S91P.结论 耐药相关基因突变的检测,可作为临床快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法之一.     

结核分枝杆菌利福平分子药敏结果与其表型药敏差异的研究

目的 分析结核分枝杆菌利福平耐药的分子药敏(Xpert MTB/RIF)检测与在表型药敏(Bactec MGIT 960)检测结果不一致的机制。 方法 从2015年10月－2018年4月在长沙医学院第一附属医院进行 Xpert MTB/RIF 检测的8 274位患者中筛选出 Xpert MTB/RIF 检测利福平耐药而 Bactec MGIT 960 利福平敏感的患者39例,以及Xpert MTB/RIF 检测利福平敏感而 Bactec MGIT 960 利福平耐药的患者7例,共46例患者标本复苏其分离株,然后提取基因组DNA并进行rpoB的利福平耐药决定区域(rifampicin resistance determining region, RRDR)测序,同时对所有复苏的分离株进行最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)测定,观察不同突变菌株的耐药程度。 结果 46例患者中有2例菌株复活失败、2例菌株丢失,剩下42例菌株完成测序,其余有5株菌株RRDR区未发生突变,剩余的37株在rpoB基因的RRDR区有不同位点及不同类型的变异,其中有2株在508和509位点发生缺失突变,其它突变的位点有511、516、526、531、533。多数突变位点集中在526位,突变类型包括His526Asn、His526Leu、His526Gly、His526Cys四种,其余位点突变形式为Leu511Pro、Asp516Tyr、Leu533Pro。在511、516、526、533位点突变中,MIC测定除了一株突变类型为His526Leu的菌株为32 μg/ml外,其余位点突变均表现为低水平耐药或敏感,而531位点突变中Ser531Trp、Ser531Leu均表现为高水平耐药。 结论 基于rpoB测序和MIC测定的结果显示特定rpoB基因突变可能导致结核分枝杆菌利福平耐药水平的改变,结核分枝杆菌利福平耐药(Xpert MTB/RIF)检测与(Bactec MGIT 960)检测结果不一致。     

福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征

目的初步分析福建耐多药结核病(multi-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药相关基因突变情况。方法自福建福州肺科医院收集耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株,采用PCR测序技术测定利福平和异烟肼耐药相关基因,包括rpoB、katG、inhA和mabA-inhA,并与标准菌株基因序列比对,分析基因突变特点。结果共对67株MDR-TB菌株进行了分析,91.04%的菌株在rpoB81 bp RRDR区发生突变,其中,88.06%(59/67)的MDR-TB菌株在rpoB531、526和516位发生突变;79.10%的菌株在katG、inhA或mabA-inhA上发生突变,59.70%(40/67)的菌株在katG315或者mabA-inhA(-15)位发生突变,没有检测到同时在inhA结构基因和基因调节区发生突变的菌株。结论 PCR-DNA测序分析技术可以用于检测MDR-TB临床分离菌株对RFP和INH的药物敏感性。     

焦磷酸测序技术在利福平rpoB基因突变检测中的应用评价

目的 应用焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌rpoB基因突变,并探讨其在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用价值.方法 利用焦磷酸测序技术,测定150株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因81个碱基的利福平抗药性决定区(RRDR),分析rpoB基因突变特点,并与绝对浓度法和MIC法药敏结果进行比较.结果 150株结核分枝杆菌中66株耐药84株敏感,54株为耐多药菌株,rpoB基因突变涉及6个密码子12种突变基因型,最常见的突变位点及突变形式分别为531位TCG突变为TYG,占60.6%,526位CAC突变为TAC、GAC,占22.7%.耐药性检测结果表明,焦磷酸检测法与绝对浓度法二者的符合率为92.7%,与MIC法的符合率为97.8%.结论 焦磷酸测序检测技术不仅是一种快速、准确、高通量的利福平分子药敏检测方法,同时也是结核分枝杆菌耐药性研究的有用工具.     

结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征初步分析

目的 阐明结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法 对110株结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区（RRDR）81个碱基在内的286bp片段进行聚合酶链反应．单链构象多态性（PCR．SSCP）分析，并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌rpoB基因此扩增区域进行序列测定。其中利福平耐药株73株，非利福平耐药株11株，敏感株26株。结果 PCR—SSCP检测显示利福平耐药株中有47株有突变存在，经直接测序分析其中76．6％的菌株存在rpoB基因的单位点突变，主要集中在531位（61．1％）和526位（25．0％）；联合突变发生率为23．4％。此外，经PCR—SSCP检测，11株非利福平耐药株中2株有突变存在，26株敏感株中1株有突变存在。经直接测序分析突变涉及位点为511位、526位和535位。结论 rpoB基因耐药决定区发生突变是结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因，其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

瑞安地区多重耐药结核分枝杆菌IS6110指纹图谱研究

目的了解温州瑞安市多重耐药结核分枝杆菌耐药IS6110指纹图谱特征。方法收集2013年1月-2017年3月本院结核患者的痰标本,进行结核培养,菌株鉴定,药物敏感实验,对利福平和异烟肼同时耐药的菌株进行RFLP分析。结果 516份培养阳性标本中468株(468/516,90.7%)为结核分枝杆菌,48株(48/516,9.3%)为非结核分枝杆菌。468株结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇的耐药率分别为12.8%、8.3%、7.7%、3.2%。根据耐药谱分析393株(393/468,84.0%)结核分枝杆菌对4种药物全部敏感,对利福平和异烟肼同时耐药的菌株有36株(36/468,7.7%)。36株多重耐药菌株RFLP分析主要分为2组。结论瑞安地区多重耐药结核分枝杆菌为散发存在,外来民工为高危人群,需要更好地对外来民工进行管理。     

吉林省耐多药结核分枝杆菌rpoB基因突变特征分析

目的分析吉林省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征,为耐多药结核病快速诊断方法的建立提供科学依据。方法采用DNA测序技术对吉林省287株耐多药结核分枝杆菌进行rpoB基因序列检测,分析检测菌株rpoB基因突变特征。结果 287株耐多药结核分枝杆菌中201株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因发生突变,突变率为70.03%(201/287)。碱基突变发生在前3顺位的是rpoB 531(39.72%)、rpoB 526(18.82%)、rpoB 516(5.92%)。287株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因共发现碱基突变、缺失、插入等40种基因突变类型。其中,单位点碱基突变、双位点碱基突变、多位点碱基突变、碱基缺失、碱基插入的发生率分别为60.63%(174/287)、6.27%(18/287)、1.39%(4/287)、1.39%(4/287)、0.70%(2/287)。结论吉林省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药相关基因最常见突变为rpoB 531、rpoB 526和rpoB 516。     

苏州市耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特点的研究

目的 了解苏州市利福平( rifampin,RFP)耐药结核分枝杆菌rpoB基因突变特点,以期为苏州市RFP耐药结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床快速诊断提供有价值的分子标记靶点.方法 通过裂解MTB抽提基因组DNA,采用PCR扩增和DNA测序方法,分析苏州市结核病患者痰培养阳性并经药敏试验诊断为RFP耐药MTB的rpoB基因RFP耐药决定区(rifampin resistance-determining region,RRDR)和CⅡ区变异谱与变异率.将主要突变形式RRDR-531 (TCG→TTG)与传统药敏实验进行诊断学试验,评价此类型突变作为RFP耐药菌株分子标记靶点的临床应用价值.结果 42株RFP耐药MTB的rpoB基因总突变率为90.5％ (38/42),在所检测到的突变中,以RRDR-531 (TCG→TTG)为主要形式(61.9％).以此类型的位点突变作为RFP耐药菌株诊断的分子标记,与传统药敏试验比较进行配对x2检验,结果表明,与敏感菌株相比,RRDR-531(TCG→TTG)突变在RFP耐药菌株中差异有统计学意义(x2=12.51,P＜0.01).结论 rpoB基因RRDR-531(TCG→TTG)突变是苏州市MTB产生RFP耐药性的主要分子机制,其作为RFP耐药MTB诊断的分子标记靶点具有较好的临床应用价值.     

利福霉素耐药结核分枝杆菌rpoB突变与利福布丁耐药水平的关系

目的研究利福霉素耐药结核分枝杆菌 rpoB基因突变与利福布丁耐药水平的相关性。方法倍比稀释法测定64株利福霉素耐药及6株敏感菌株对利福布丁的最低抑菌浓度(MIC),并分析其对异烟肼的耐药情况。同时对rpoB全基因扩增后测序,分析rpoB突变位点和突变性质与利福布丁MICs高低及多重耐药的关系。结果6株敏感株rpoB未突变,MICs为 0.25～0.50 mg/L。64株耐药株rpoB突变率为100％。37株利福布丁高度耐药(MICs≥4 mg/L)株中,S531L突变27株,H526R突变和Y389C突变各2株,S531W、H526Y、Q513K、V176F、D516Y联合Q253R突变与D516G联合L511P突变各1株。17株中度耐药 (MICs 2～4 mg/L) 株中,S531L突变16株,D516G联合L511P和S509R突变1株。10株低度耐药（MICs 0.25～1 mg/L）株中,L533P、H526L、H526S、D516V、D516Y单点突变各2株。93.75％(60/64)的利福霉素耐药株对异烟肼耐药。结论检测rpoB突变即可初步筛选多重耐药结核分枝杆菌;中、高水平利福布丁耐药株以S531L突变占绝对优势,rpoB突变位点及突变类型与利福布丁耐药水平有一定相关性。     

某院结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因特征

目的了解某院结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpo B及异烟肼耐药相关基因kat G、inh A的突变特征,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。方法收集83例结核病患者痰标本,分离培养MTB,采用BD960液体法检测利福平、异烟肼耐药性,提取菌株DNA,采用聚合酶链反应扩增rpo B、kat G、inh A全基因,对扩增产物进行测序分析。结果 83株样本中,39株对利福平耐药,51株对异烟肼耐药。耐利福平菌株rpo B基因突变率为97.44%(38/39),531位点突变率60.53%(23/38),526位点突变率23.68%(9/38),32株出现多位点联合突变。耐异烟肼菌株kat G基因突变率为98.04%(50/51),共发现16种突变类型,其中以kat G 315位点突变为主,占70.00%(35/50),1株为kat G与inh A联合突变。结论该院耐多药MTB产生耐药性与rpo B和kat G基因突变相关,检测MTB耐多药相关基因突变可为早期快速诊断耐药结核病提供参考依据。     

55株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因突变研究

[目的]了解福建省耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因的突变特征。[方法]PCR扩增了55株结核分枝杆菌临床分离株，对包括81个碱基利福平耐药决定区（RRDR）在内的rpoB基因片段进行序列测定。[结果]10株敏感菌株rpoB基因未检测到突变。45株耐多药分离株中有40株rpoB基因存在21种不同类型突变，其中17个点突变，2个插入突变，2个缺失。[结论]88．9％的耐多药菌株检测到rpoB基因的突变，最常见的突变部位分别是531、526和516位密码子，突变率分别是47．1％、19．6％和7．8％。     

2014—2015年宜昌市新患者结核分支杆菌基因突变及耐药情况

目的检测宜昌地区结核分枝杆菌(MTB)的感染及耐药情况,为本地结核病的防治和分子流行病学研究提供科学依据。方法收集宜昌地区2014年1月到2015年12月所有新患者涂阳痰标本和涂阴培阳菌株提取DNA,采用基因芯片技术检测利福平相关rop B基因511(T→C)、513(C→A)、516(G→T,A→T,A→G)、526(C→T,C→G,A→T,A→G)、531(C→T,C→G)、533(T→C)位点及异烟肼耐药相关Kat G基因的315(G→C,G→A)位点和inh A基因的-15(G→T)位点突变情况。结果基因芯片法共检测2 271位新感染MTB患者,其中男性占72.35%(1 643/2 271),女性占27.65%(628/2 271),两个年度中结核病新患者利福平、异烟肼总耐药率为8.72%(198/2 271),rop B基因一共有171例发生突变,突变频率最高的是531(C→T),突变频率为57.31%(98/171),其次是511(T→C)和526(C→T),突变频率分别为11.11%(19/171)和10.53%(18/171)。katG和inhA基因一共有211例发生突变,其中150例为kat G基因突变,突变率为71.09%,51例为inh A基因突变,突变率为24.17%,kat G和inh A基因同时突变的有10例,突变频率为4.74%,突变频率最高的是315(G→C),突变频率为67.78%(143/211)。结论宜昌地区结核病新患者对利福平和异烟肼的总耐药率为8.72%,男性感染者高于女性,且随着年龄增大感染率增高。