细胞治疗产品安全性的研究进展

目前肿瘤免疫治疗方案包括治疗性肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂(PD1、PDL1、CTLA-4)、过继性细胞免疫治疗(CAR-T、TCR-T、CAR-NK)、溶瘤病毒等,过继性免疫治疗技术主要是弥补经过主动免疫治疗(治疗性肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂)的无进展生存(PFS)的肿瘤人群。随着FDA批准的诺华和Kite细胞制品CAR-T的上市,国内外过继性细胞免疫治疗肿瘤的技术发展迅速,但是针对过继性细胞免疫治疗技术生产的细胞治疗产品的质量安全风险凸显出来。文章主要针对国内外细胞治疗产品质量安全性的研究进行综述。     

乳腺癌浸润淋巴结αT细胞受体谱型偏移分析

目的应用多重PCR方法扩增TCRα链全长序列,分析乳腺癌浸润淋巴结αT细胞受体谱型偏移。方法选取乳腺癌转移淋巴结,提取RNA后逆转录,多重PCR扩增TCRα链全长序列,构建重组质粒并澳4序,利用网上TCR资源分析序列。结果2例患者各扩增出3个α链序列。乳腺癌TCRα限制性取用AV1、AV12亚家族。CDR3区序列分析增生T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论乳腺癌浸润淋巴结扩增的TCR家族存在限制性取用,克隆性增生T细胞CDR3序列不同。     

多重PCR扩增乳腺癌克隆性T细胞TCRβ链全长序列

目的 建立乳腺癌克隆性T细胞TCRβ链全长编码序列(CDS)的多重PCR扩增方法。方法 根据Gen Bank现有TCR序列设计扩增TCRβ链24个亚家族上游引物24条,下游引物2条。对Mg2+、d NTPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定最佳反应体系进行TCRβ链多重PCR扩增,构建重组质粒并酶切鉴定。结果 扩增出乳腺癌转移淋巴结中的TCRβ链全长编码序列并成功构建重组质粒,5例患者共获得24个阳性克隆。结论 建立的TCRβ链多重PCR扩增方法具有特异、快速、简便的特点,为研究乳腺癌克隆性T细胞的特点提供了帮助。     

T细胞在β-内酰胺类抗生素过敏反应中的作用

β-内酰胺类抗生素可诱导体液或特异性T细胞免疫反应的发生.在体液免疫反应中,经常研究的是IgE介导的速发型免疫反应,而T细胞与此类抗体的产生密切相关.T细胞依赖于T细胞受体(TCR)实现对β-内酰胺类半抗原的特异性识别.在外来抗原驱动下,TCR受体谱会出现偏移或基因片段限制性取用现象.由于β-内酰胺类抗生素之间存在交叉过敏反应,而相似的化学结构可能是影响因素之一,TCR识别β-内酰胺类抗生素结构位点的研究还处于初级阶段.     

化疗药物靶向肿瘤相关免疫抑制性细胞的研究进展

肿瘤相关免疫抑制性细胞在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要的免疫抑制作用,肿瘤的发展和转移常伴有这些细胞的异常聚集。调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)和髓系来源的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)是免疫抑制性细胞网络的主要成分,它们通过直接或间接作用负向调节其他免疫细胞,抑制抗肿瘤的免疫反应。最新研究显示,有些常规化疗药物除可直接杀伤肿瘤细胞外,还可降低Treg和MDSC的数量,抑制其功能,从而增强抗肿瘤免疫功能。因此,将化疗药物作为预处理方案,凭借其免疫调节作用联合后续的过继性细胞免疫治疗可有效增强抗肿瘤免疫应答。化学免疫治疗策略将改变人们对传统化疗抗肿瘤地位的认识,继而更加合理地应用化疗药物。     

肿瘤的免疫治疗：改变平衡

肿瘤抗原反应性淋巴细胞过继性免疫治疗（ACT）是肿瘤免疫疗法中最有前景的策略之一，即在体内注入在体外激活的自体肿瘤反应性T细胞。ACT的作用已经在黑素瘤的治疗中得到验证，与非清髓性造血干细胞移植治疗联合应用，减少了宿主淋巴细胞数目且使肿瘤特异性CD8^＋T细胞增多。     

人真核表达慢病毒质粒载体plenti6/V5-D-TOPO(R)-T13RⅡ Dnglytk的构建及意义

目的:构建含有T13R Ⅱ DNglytk的慢病毒质粒载体plenti6/V5-D-TOPO(R)-TβR Ⅱ DNglytk,用含有TβR ⅡDNglytk质粒的慢病毒感染T淋巴细胞使其对转化生长因子-β(TGF-β)失敏感.恢复其对肿瘤的杀伤活性.方法:以原始质粒为模板,PCR扩增TβRⅡ DN和HSV-tk基因,运用重组PCR方法将2个基因连接起来,获得TβR Ⅱ DNglytk融合基因,再以此基因为模板,PCR扩增获得其对照基因TRANSglytk.应用Invitrogen公司提供的系统,通过TOPO技术将2个融合基因分别连接到慢病毒表达质粒,并经过测序验证.结果:完成慢病毒表达质粒载体TβR Ⅱ DNglytk的构建,经测序验证序列正确,可以用于相应慢病毒的生产.结论:运用重组PCR技术和TOPO技术成功构建了plenti6/V5-D-TOPO(R)-T13RⅡDNglytI[载体,为产生对TGF-β不敏感的人肿瘤特异性淋巴细胞,并用于肿瘤的免疫治疗提供了基础.     

嵌合抗原受体(CAR)技术在血液肿瘤免疫治疗中的应用及策略

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)技术作为一种重新定向T淋巴细胞到靶抗原的一种新兴免疫治疗策略,已经从涉及基因工程多个领域的复杂技术转变成为治疗病毒感染性疾病、恶性肿瘤一种新型免疫治疗策略。CAR技术具有使得T细胞突破了HLA-1类分子的限制,增加了T细胞识别肿瘤抗原的特异性和靶点范围,同时增加了过继输注T细胞治疗的安全性。本文主要回顾CAR技术在血液肿瘤免疫治疗中的应用以及应用中获得的改善CAR技术的策略。     

吉西他滨对胰腺癌外周血调节性T细胞影响的研究

目的 探讨吉西他滨对胰腺癌外周血调节性T细胞的影响,为进一步提高过继免疫治疗的疗效提供依据和参考。方法 本研究入选2012年1月至2014年10月收治的32例胰腺癌患者,分为吉西他滨组(吉西他滨+过继免疫治疗)和对照组(单纯过继免疫治疗),观察两组患者治疗前后外周血调节性T细胞水平、化疗不良反应,并对两组患者的生存时间进行分析比较。结果 吉西他滨组患者治疗后外周血调节性T细胞水平较治疗前显著降低,与对照组相比亦显著降低,两组比较有统计学差异(P<0.05),吉西他滨组中位生存时间较对照组延长1.3个月(10.0个月与8.7个月比较)。结论 吉西他滨化疗可以显著降低胰腺癌患者外周血调节性T细胞水平,有效调节患者的肿瘤免疫耐受,提高过继免疫治疗的疗效。     

分子伴侣Tapasin在介导特异性细胞毒性T淋巴细胞反应中的作用

病毒及肿瘤细胞的清除很大程度上依赖于特异性CD8＋细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,CTL通过T细胞受体（TCR）特异性识别病毒肽段并通过MHC-I类分子提呈引起感染细胞融解,经典MHC-I类分子在内质网内的装配要求有抗原肽配体和β2微球蛋白（β2m）的存在,而这一过程需要伴侣分子（chaperones）如Tapasin的参与。Tapasin是抗原递呈相关转运体（TAP）相关蛋白的基因产物,与MHC-I类分子同为免疫球蛋白超家族成员,在介导特异性CTL反应中有着重要作用,本文简述了Tapasin分子结构特征、在介导特异性CTL反应中的作用及与疾病的联系。