二脱甲氧基姜黄素对体外培养宫颈癌Hela细胞Caspase-8的影响

目的:观察二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌Hela细胞Caspase-8的作用。方法:MTT法检测二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌细胞Hela的抑制作用;分光光度计检测其对Caspase-8酶活性的影响;免疫组化法检测其对人宫颈癌细胞Hela Caspase-8蛋白表达的影响。结果:二脱甲氧基姜黄素对人宫颈癌细胞Hela有明显的抑制作用(P0.001),且呈剂量关系,与姜黄素有显著差异(P0.001);二脱甲氧基姜黄素能增强Caspase-8酶活性,增强Caspase-8蛋白的表达。结论:二脱甲氧基姜黄素能激活Caspase-8蛋白活性,这可能也是其体外抑制宫颈癌细胞Hela生长的机理之一。     

三种姜黄色素对体外人肝癌细胞HepG2 PPARγ蛋白的影响

目的：研究3种姜黄色素对体外培养人肝癌细胞HepG2PPARγ蛋白的作用。方法：MTT法检测3种姜黄色素对体外培养人肝癌细胞HepG2的抑制作用;酶联免疫吸附检测人肝癌细胞HepG2PPARγ蛋白的量;免疫组化法检测三种姜黄色素对人肝癌细胞的作用。结果：3种姜黄色素在高浓度时对人肝癌细胞HepG2有明显的抑制作用（P〈0.01）;且在4～16μg·mL^-1的剂量范围内,随浓度升高抑制效果呈剂量依赖关系。在高浓度时,二脱甲氧基姜黄素比一脱甲氧基姜黄素组抑制作用好（P〈0.001）;3种姜黄色素都能增加PPARγ蛋白的量,结论：三种姜黄素均能激活PPARγ蛋白活性,这可能也是它体外抑制肝癌细胞HepG2生长的机理之一。     

二脱甲氧基姜黄素对胰腺癌Panc-1细胞抑制作用的体外实验研究

目的:研究二脱甲氧基姜黄素对人胰腺癌细胞Panc-1的体外抑制作用。方法:提取二脱甲氧基姜黄素;将不同浓度二脱甲氧基姜黄素作用于人胰腺癌细胞Panc-1,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测胰腺癌细胞的增殖活性;采用荧光染料吖啶橙观察二脱甲氧基姜黄素诱导胰腺癌细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪分析二脱甲氧基姜黄素诱导胰腺癌细胞的凋亡率。结果:二脱甲氧基姜黄素对Panc-1细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度依赖效应,姜黄素<二脱甲氧基姜黄素,统计表明有组间差异(P<0.05);二脱甲氧基姜黄素能诱导人胰腺癌细胞Panc-1凋亡。结论:二脱甲氧基姜黄素能明显抑制人胰腺癌细胞Panc-1的体外增殖。可为临床治疗胰腺癌药物研究提供一种新的方法。     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

姜黄素水解衍生物对肝癌细胞增殖和凋亡调控因子的影响

目的:研究姜黄素水解衍生物对体外培养人肝癌细胞HpG2的增殖抑制作用和对肝癌细胞HpC2凋亡调控因子Fas-L、Bcl-2的表达影响.方法:用盐酸和三氯化铝水解姜黄素,获得姜黄素水解衍生物;MTT比色法观察姜黄素水解衍生物对人肝癌细胞HpG2增殖的抑制作用;用免疫组化法检测其对人肝癌细胞HpG2凋亡调控因子基因Fas-L、Bcl-2的表达影响;采用RT-PCR检测c-Myc的表达.结果:姜黄素水解衍生物对人肝癌细胞HpG2有明显的抑制作用(P<0.01),且与姜黄素有显著差异(P<0.001);姜黄素水解衍生物能降低体外培养的人肝癌细胞HpG2的Bcl-2表达,增强Fas-L的表达.能够下调C-Myc的表述.结论:姜黄素水解衍生物有抗肿瘤作用,而且抗肿瘤可能机理可能通过降低肿瘤凋亡调控因子Bcl-2表达,增强Fas-L的表达,下调C-Myc的表达.     

姜黄素通过乙二醛酶1对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的:探讨姜黄素通过乙二醛酶1(Glyoxalase 1,GLO 1)对肝癌HepG2细胞增殖的作用。方法:以大肠杆菌中提取出的GLO1纯蛋白和HepG2细胞裂解得到的GLO1蛋白分别测定姜黄素对GLO1活性的作用;利用siRNA干扰实验降低GLO1的表达,Western blot检测GLO1蛋白表达的变化;MTT法检测HepG2细胞的增殖;HPLC-UV检测HepG2细胞内甲基乙二醛(Methylglyoxal, MG)的含量。结果:姜黄素对大肠杆菌中提取的GLO1纯蛋白及HepG2细胞裂解得到的GLO1蛋白活性均有明显抑制作用,结果呈浓度依赖性;姜黄素对HepG2细胞内GLO1蛋白表达水平无明显影响;用siRNA干扰实验降低GLO1表达后,HepG2细胞的增殖也出现了显著的抑制(P<0.01);姜黄素及用siRNA干扰实验降低GLO1表达实验组均能促进MG含量的升高(P<0.05或P<0.01);MG及姜黄素能够明显抑制HepG2细胞的增殖(P<0.05或P<0.01)。结论:姜黄素通过抑制GLO1的活性进而导致HepG2细胞内MG含量的升高来抑制细胞的增殖。     

姜黄素通过调控微管系统干扰HepG2细胞周期研究

目的 研究姜黄素对人肝癌HcpG2细胞周期的影响及微管系统在其中的作用.方法 MTT法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析姜黄素对HepG2细胞周期分布的影响;激光共聚焦显微镜观察姜黄素对HepG2细胞微管结构变化的影响;Westem blotting检测姜黄素对微管蛋白α-tubulin表达的影响;在离体条件下,观察姜黄素对微管蛋白聚合和解聚活性的影响.结果 姜黄素对HepG2细胞增殖具有抑制作用且与时间和剂量相关;随着姜黄素浓度的升高,HepG2细胞阻滞于G2/M期的比例也逐渐增加;激光共聚焦显微镜观察可见姜黄素明显破坏细胞微管结构,改变细胞微管蛋白聚合状态的发生;Western blotting检测发现细胞内α-tubulin蛋白表达的减弱与试药浓度相关.姜黄素还可影响微管蛋白聚合和解聚活性.结论 姜黄素通过破坏HepG2细胞的微管结构及下调微管蛋白α-tubulin的表达,将HepG2细胞阻滞于G2/M期,从而抑制肝癌HepG2细胞的生长.     

姜黄素联合表柔比星对HepG2细胞TIPE2及Foxp3 mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素联合表柔比星对HepG2肝癌细胞增殖及TIPE2和Foxp3 mRNA表达的影响。方法培养HepG2肝癌细胞,分别应用不同浓度姜黄素、表柔比星、姜黄素联合表柔比星进行干预,应用MTT法检测肝癌细胞抑制率,RT-PCR法检测TIPE2和Foxp3 mRNA表达水平。结果姜黄素和表柔比星均可抑制HepG2细胞增殖,且呈时间和剂量的依赖性;姜黄素联合表柔比星可增强对HepG2细胞的生长抑制作用;而且表柔比星可上调肝癌细胞内TIPE2 mRNA表达并且下调Foxp3 mRNA表达,将表柔比星与姜黄素联合应用后其上调TIPE2 mRNA表达及下调Foxp3 mRNA表达作用较单独应用明显增强。结论姜黄素可增强表柔比星对HepG2肝癌细胞生长的抑制作用及对TIPE2和Foxp3 mRNA的调控。     

姜黄素类化合物的分离及其抗肝癌和子宫内膜癌的研究

目的从中药姜黄提取3种姜黄素类化合物并对它们进行抗肝癌细胞和子宫内膜癌作用研究。方法采用柱层析法从姜黄提取物中分离出3种姜黄素类化合物,用MTT法测定其抗肝癌细胞和子宫内膜癌作用。结果3种姜黄素化合物分别鉴定为姜黄素、脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素。0.01 mg/m l双脱甲氧基姜黄素,0.01 mg/m l和0.001 mg/m l脱甲氧基姜黄素能明显抑制肝癌细胞的生长;0.01 mg/m l和0.001 mg/m l双脱甲氧基姜黄素,0.01 mg/m l脱甲氧基姜黄素,0.01 mg/m l和0.001 mg/m l姜黄素能明显抑制子宫内膜癌细胞的生长。结论一定浓度的姜黄素化合物能明显抑制肝癌和子宫内膜癌细胞的生长。     

3种姜黄色素抗血管生成及相关因子表达作用研究

为了解3种姜黄色素(姜黄色素、一脱甲氧基姜黄素、二脱甲氧基姜黄素) 体外抗血管生成作用.该研究检测了3种姜黄色素对OX-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖的抑制作用;对HUVEC细胞迁移的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法观察姜黄色素对血管生成作用;RT-PCR检测HUVEC细胞生长因子VEGF的表达;RT-PCR检测HUVEC细胞黏附因子ICAM-1,VCAM-1的影响.结果发现3种姜黄色素在4,8,16 mg·L^-1剂量范围内,对OX-LDL诱导的HUVEC细胞增殖都有抑制作用,且抑制效果呈剂量依赖关系.姜黄素对HUVEC细胞增殖的作用大于其他2个衍生物(P< 0.01).3种姜黄色素都能抑制HUVEC细胞的迁移、抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成.中,高剂量姜黄素的迁移抑制率大于一脱甲氧基姜黄素、二脱甲氧基姜黄素(P< 0.01).3种姜黄色素都能下调VEGF,ICAM-1的表达,对VEGF下调作用姜黄素比一脱甲氧基姜黄素、二脱甲氧基姜黄素明显(P< 0.01);二脱甲氧基姜黄素对ICAM-1 的下调作用最明显(P<0.01);三者对VCAM-1的表达作用不明显,二脱甲氧基姜黄素有下调作用(P<0.05).该研究显示3种姜黄素均有抗血管生成作用,抑制内皮细胞增殖和迁移,下调内皮细胞生长因子VEGF和黏附分子ICAM-1的表达可能是其作用的机制.     

金复康口服液对人肺腺癌耐吉非替尼PC-9R细胞凋亡的影响

目的:探讨金复康口服液对人肺腺癌吉非替尼获得性耐药细胞株PC-9R的凋亡的影响及机制。方法:流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,免疫组化法检测Caspase-3、Caspase-8的表达。结果:对于G1、G2期细胞数含量,金复康药物血清+吉非替尼组与金复康药物血清组、吉非替尼组比较,P<0.05,有统计学差异,对于S期细胞数含量,金复康药物血清+吉非替尼组、金复康药物血清组、吉非替尼组,P>0.05,无统计学差异,表明吉非替尼联合金复康药物血清后,金复康口服液增强了吉非替尼将细胞周期阻滞在G2期;在凋亡率方面,金复康药物血清+吉非替尼组与金复康药物血清组、吉非替尼组比较,P<0.05,有统计学差异,表明吉非替尼联合金复康药物血清后,金复康口服液增强了吉非替尼对PC-9R细胞的凋亡诱导作用;吉非替尼组、金复康药物血清+吉非替尼组与Con组比较,Caspase-3、Caspase-8的阳性表达率有统计学差异(P<0.05)。结论:金复康口服液能够逆转人肺腺癌吉非替尼获得性耐药细胞株对吉非替尼的凋亡抵抗,可能与上调caspase-3、caspase-8的表达有关。     

姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK—N—SH细胞凋亡的保护作用

目的观察姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK—N—SH细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取相同代的SK—N—SH细胞随机分为正常对照组、模型组、姜黄提取物低浓度（20μmol／L）组、姜黄提取物中浓度（40μmol／L）组、姜黄提取物高浓度（80μmol／L）组。用分光光度法检测姜黄提取物对细胞外SOD、MDA的影响,通过MTT比色法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率,采用Westernblot检测法检测细胞Caspase-3蛋白的表达情况。蛄果与模型组比较,姜黄提取物各组细胞存活率升高（P〈0．01）,姜黄提取物各组SK—N—SH细胞培养液内的MDA水平均明显降低（P均〈0．01）,而SOD水平均明显升高（P均〈0．01）,同时Caspase-3活性受到抑制。结论姜黄提取物能够通过抗氧化作用抑制Na2S2O4对SK—N—SH细胞凋亡作用。     

姜黄素调控结肠癌SW480细胞skp2-p27kip通路的研究

目的：探讨姜黄素抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡的分子机制。方法：通过MTT检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞SW480后凋亡情况;通过蛋白免疫印迹方法检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞后细胞中skp2、p27kip蛋白表达情况。结果：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480增殖并促进其凋亡,有浓度和时间依赖;姜黄素降低了结肠癌细胞SW480中skp2蛋白的表达（P〈0.05）,而促进了p27kip蛋白的表达,有时间和剂量依赖,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480的增殖并促进其凋亡,有时间和剂量依赖,这种抗癌效应可能与干扰skp2-p27kip通路有关。     

肾康注射液对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害的研究

目的：探讨肾康注射液（SKI）对马兜铃酸（AA）导致肾小管上皮细胞损伤的影响。方法：以90％DMEM培养液加10％胎牛血清培养人肾小管上皮细胞系（HK-2）,加入不同浓度的SKI（终浓度分别为4、6、8mg／mL）和AA（终浓度为10、20、40μg／mL）培养48h。采用MTT法观察HK-2细胞活性;根据MTT法检测细胞活性的结果,选择SKI最佳干预浓度8mg／mL和AA致细胞明显凋亡浓度20μg／mL,将实验分为3组,①对照组：培养液不加马兜铃酸;②AA干预组：在培养液中加入AA（终浓度为20μg／mL）;（3）SKI治疗组：在培养液中加入AA（终浓度为20μg／mL）和SKI（终浓度为8ing／mL）。用透射电镜观察3组细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;分别采用实时定量荧光PCR及Western—blot技术检测凋亡蛋白Caspase-3mRNA及蛋白的表达情况。结果：与对照组比较,AA干预组细胞结构发生改变,治疗组大部分细胞结构基本正常,部分细胞结构改变明显。AA浓度超过10μg／mL时,HK-2细胞的活性显著抑制。分别以不同浓度4,6,8mg／mL的SKI和AA（20μg／mL）处理HK-2细胞后,则细胞活性明显增加,而且随着SKI浓度的增加其作用愈趋明显（P〈0．05）。与对照组比较,AA组凋亡细胞的比例明显增加（P〈0．05）,SKI治疗组凋亡细胞的比例也增加,但比AA组细胞凋亡的比例明显减少。AA组Caspase-3mRNA及蛋白的表达较对照组明显增高;治疗组Caspase-3mRNA及蛋白的表达较AA组降低。结论：肾康注射液通过降低凋亡蛋白Caspase-3mRNA及蛋白的表达抑制HK-2细胞的凋亡,明显提高HK-2细胞抵抗AA致细胞损伤的能力,起到保护HK-2细胞的作用。该途径可能为肾康注射液抑制HK-2细胞凋亡的机制之一。     

心脑通络液对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞Bcl-2、Caspase-3的影响

目的：探讨心脑通络液对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞的干预作用。方法：选取健康雄性新西兰大耳兔40只。随机分成假手术组、模型组、血脂康组、心脑通络液高、低剂量组,对除假手术组外的其余组动物建立腹主动脉粥样硬化模型。造模成功后,各组分别灌胃给药,连续治疗8周,采用SP法测定各组家兔Bcl-2、Caspase-3的阳性表达率。结果：与假手术组比较,模型组Bcl-2含量明显降低,Casapase-3含量明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;与模型组比较,血脂康组和高低剂量组Bcl-2含量均增高、Caspase-3含量均降低（P〈0．05）,以高剂量改善最显著（P〈0．05）。结论：心脑通络液可能通过对bcl-2及Caspase-3蛋白表达的调控而降低动脉斑块内过度凋亡的平滑肌细胞,从而抑制粥样斑块的形成。     

四藤方对SGC-7901胃癌Caspase-3、剪辑型PARP及Livin表达影响

目的：观察四藤方对人胃癌SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤Caspase-3、剪辑型PARP及Livin蛋白表达的影响。方法：人胃腺癌SGC-7901细胞BALB／C裸小鼠皮下移植瘤模型,随机分为3组,每组10只。对照组予生理盐水0．3mL灌胃,1次／d;四藤方组予四藤方煎剂0．3mL灌胃,1次／d;5-Fu组予5-Fu腹腔注射,1mg／次·周。免疫组织化学法检测胃癌组织Caspase-3、剪辑型PARP及Livin蛋白表达。结果：四藤方治疗后,SGC-7901裸小鼠移植瘤Caspase-3及剪辑型PARP蛋白表达升高（P〈0．05）;Livin蛋白表达降低（P〈0．01）。结论：四藤方可上调SGC-7901裸鼠移植瘤Caspase-3,促进PARP剪辑,下调Livin蛋白表达。     

中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织海马凋亡相关因子C-fos蛋白表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马组织中C-fos蛋白表达水平的影响,探讨中药复方抗痫灵治疗癫痫的可能作用机制。方法:将90只Wistar大鼠随机分成空白对照组(10只),戊四氮(PTZ)腹腔注射(ip)法造模组(80只)。将戊四氮所诱导成功的癫痫大鼠随机分成5组,分别为癫痫模型组,丙戊酸钠治疗组,抗痫灵低剂量治疗组,抗痫灵中剂量治疗组,抗痫灵高剂量治疗组。观察大鼠痫性发作时,空白组、模型组及治疗各组大鼠行为,并采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马C-fos蛋白表达,采用实时荧光定量(Real time PCR)方法检测大鼠海马组织中C-fos mRNA的相对表达。结果:各治疗组大鼠C-fos蛋白阳性目标面密度值较模型组均显著降低,差异具有统计学意义(P0.01),但均未达到空白组水平(P0.01);西药组和中药中剂量组的阳性目标面密度值与其他各组相比差异具有统计学意义(P0.05);各治疗组之间相比差异无统计学意义(P0.05),模型组大鼠海马中C-fos mRNA表达较模型组均显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),但均未达到空白组水平(P0.01)。结论:中药复方抗痫灵对癫痫病的抗痫作用可能是通过降低癫痫大鼠大脑内C-fos的水平从而抑制神经元细胞的凋亡而达到抗癫痫作用的。     

中药复方“松友饮”诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究中药复方“松友饮”对人肝癌细胞凋亡的影响及可能的分子机制,为临床应用提供理论依据。方法：采用流式细胞术、Caspase-3活性实验及RealTimePCR技术,观察2、4、8、10、20、30及40me,／mL“松友饮”（c1、c2、c3、c4、c5、c6及c7组）对体外培养的人肝癌细胞MHCC97H凋亡的影响,并探索可能的分子机制。结果：流式细胞仪检测结果显示,同对照组相比,干预组细胞凋亡率呈时间依赖性增加,“松友饮”（c4,10mg／mL）干预72h后MHCC97H细胞凋亡率增加超过3倍。干预48h后Caspase-3显著激活,Caspase-3活化呈时间依赖性。“松友饮”浓度增加,转移抑制基因1（Metastasissuppressor1,MTSS1）抑制效果越明显,“松友饮”（c4,10mg／mL）干预48h,MTSS1基因表达抑制率为39．0％。结论：“松友饮”诱导肝癌细胞凋亡可能与MTSS1基因表达抑制、Casoase-3活化相关。