羟基红花黄色素A对脑组织蛋白质羰基化影响的体外研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对体外ONOO~-途径和亚铁血红素/亚硝酸钠/过氧化氢(heme/NaNO_2/H_2O_2)途径引起脑组织蛋白质羰基化的影响。方法分别模拟体内ONOO~-、heme/NaNO_2/H_2O_2羰基化途径,以脑组织蛋白为羰基化底物,分为空白对照组、对照组及低、高浓度组(以HSYA 0.1 mmol/L、1 mmol/L干预)。以2、4-二硝基苯肼(2、4-dinitrophenylhydrazine,DNPH)法检测蛋白质羰基化水平。结果 ONOO~-途径和heme/NaNO_2/H_2O_2途径均可以增加脑组织匀浆中羰基蛋白的含量。HSYA预处理可浓度依赖性地降低ONOO~-途径诱导的蛋白质羰基化水平,低、高浓度组羰基蛋白含量分别降低了26.13%、46.23%,差异有统计学意义(F=14.265,P0.05)。HSYA预处理对体外heme/NaNO_2/H_2O_2途径诱导的蛋白质羰基化没有明显抑制作用,差异无统计学意义(P0.05)。结论 HSYA可剂量依赖性地抑制ONOO~-途径在体外对脑组织蛋白的羰基化修饰;提示HSYA抑制蛋白质羰基化反应可能是其对抗脑血管疾病与神经系统变性疾病的分子机制之一。     

羟基红花黄色素A对6-OHDA诱导的帕金森病小鼠模型的神经保护作用及机制研究

目的 探讨羟基红花黄色素A对6-OHDA诱导的帕金森病小鼠模型的神经保护作用及机制。方法 通过旋转实验检测羟基红花黄色素A 对6-OHDA诱导的帕金森病小鼠模型的神经保护作用; 末次行为学试验后取脑,采用高效液相色谱-荧光检测法测定5-羟色胺(5-HT)水平; 采用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平。结果 与空白组比较,对照组的旋转圈数明显增加(P<0.05),实验组的爬杆时间明显缩短(P<0.05); 使用羟基红花黄色素A治疗后实验组的旋转圈数明显降低(P<0.05); 羟基红花黄色素A能明显提高细胞中5HT、SOD、GSH-Px的水平,降低NOS 的水平,提高抗氧化能力。结论 羟基红花黄色素A对6-OHDA诱导的帕金森病小鼠模型具有神经保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关     

XIAP过度表达对未成熟脑急性放射损伤后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛表达的影响

目的探讨急性放射损伤对未成熟脑高增殖细胞的影响以及X-染色体连锁的凋亡抑制剂(XIAP)过度表达对放射后氧化应激产物硝基酪氨酸(NT)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)形成的影响。方法新生10日龄XIAP过度表达转基因C57BL/6小鼠(XIAP组)及同期野生型10日龄C57BL/6小鼠在8Gy单一剂量放射线照射后6h或7d处死取脑,进行脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛免疫组化染色,以及海马齿状回、侧脑室下区面积测量。结果照射后7d海马齿状回、侧脑室下区面积较对照组明显下降,照射后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛免疫活性明显增加,照射后6hXIAP过度表达组大脑海马齿状回、侧脑室下区硝基酪氨酸和4-HNE的阳性细胞数明显低于野生组(P<0.05,P<0.001)。结论放射线照射可导致活性氧、活性氮基团过度表达,进而引起高增殖细胞损伤;XIAP过度表达可能抑制照射后硝基酪氨酸和4-HNE的形成。     

黄芪甲苷和羟基红花黄色素A配伍抗脑缺血再灌注损伤的协同作用及机制研究

目的探讨黄芪甲苷(AST-IV)和羟基红花黄色素A(HSYA)配伍治疗大鼠脑缺血再灌注损伤作用及其机制。方法 100只大鼠随机分为假手术组、模型组、AST-IV组、HSYA组、AST-IV和HSYA配伍组等5组,采用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,再灌注72 h评分后处死;脑组织制片后采用苏木素-伊红(HE)染色,免疫组化检测血小板-内皮细胞粘附分子(CD31)表达;氧化炎症检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)指标。结果与模型组比较,各给药组均有疗效,AST-IV组、HSYA组、AST-IV和HSYA配伍组均能改善大鼠神经损伤并减轻脑缺血再灌注损伤,促进CD31表达,改善SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性,降低TNF-α和IL-β水平,其中配伍组的治疗效果最为显著。结论 AST-IV和HSYA配伍可以显著发挥协同抗脑损伤作用,其抗炎、抗氧化和促血管新生作用是潜在作用机制。     

多孔碳酸化羟基磷灰石水泥植入修复兔包容性骨缺损的力学分析

背景：采用发泡剂成孔技术,制成了有知识产权的新型骨修复材料多孔碳酸化羟基磷灰石,既保留了碳酸化羟基磷灰石骨水泥原位固化性能等所有的优点,同时又形成多孔结构。 目的：通过动物实验观察新型的骨修复材料多孔碳酸化羟基磷灰石水泥修复骨缺损的力学效果。 方法：30只新西兰大白兔,手术组25只在双侧股骨髁制备直径为5.5 mm、深12 mm的骨缺损动物模型,左侧植入多孔碳酸化羟基磷灰石骨水泥为实验组,右侧植入碳酸化羟基磷灰石骨水泥为对照组。非手术组5只,用于正常力学对照。将多孔碳酸化羟基磷灰石骨水泥和碳酸化羟基磷灰石骨水泥试件经模仿体液浸泡,检测力学强度。同时在手术组背肌内分别植入多孔碳酸化羟基磷灰石骨水泥和碳酸化羟基磷灰石骨水泥标准试件。分别于术后2,4,8,12,16周分批处死动物,进行试件骨内和肌内植入的力学实验分析和试件在模仿体液中浸泡后的抗压强度测试。 结果与结论：多孔碳酸化羟基磷灰石骨水泥：2周时的骨内力学强度较低,4周时降到最低,8周时接近正常松质骨强度,12周时超过正常松质骨强度,16周时恢复到正常松质骨水平。碳酸化羟基磷灰石骨水泥：2周时骨内植入强度较多孔碳酸化羟基磷灰石骨水泥略高,4周时有所降低,8,12,16周时略升高,但是始终低于正常松质骨的强度。多孔碳酸化羟基磷灰石骨水泥和碳酸化羟基磷灰石骨水泥在SBF中浸泡的抗压强度变化不大。试件植入肌内后抗压强度变化非常显著。结果表明,多孔碳酸化羟基磷灰石水泥具有原位固化性能和一定的力学支撑作用,能作为自体骨移植的一种替代物修复骨缺损。 关键词：多孔碳酸化羟基磷灰石水泥;骨缺损;生物活性材料;兔;生物力学 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.16.003     

羟基喜树碱抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应：与环孢素A的比较

背景：近期研究表明羟基喜树碱在一些器官移植过程中具有免疫抑制作用,但在角膜移植中的免疫抑制作用却未见报道。 目的：观察羟基喜树碱对大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的影响,并与经典抗排斥药环孢素A进行比较。 方法：18只成年雌性Wistar大鼠为供体,36只成年雄性SD大鼠为受体,建立大鼠穿透性角膜移植动物模型。受体大鼠随机分为3组,羟基喜树碱组、环孢素A组和对照组,每组12只。羟基喜树碱组和环孢素A组分别在术后腹腔注射羟基喜树碱2.0 mg/(kg•d)和环孢素A 10 mg/(kg•d),连续用药12 d。对角膜植片进行临床观察,以混浊、水肿和新生血管3 项指标作为临床评估标准,记录角膜植片存活时间。 结果与结论：羟基喜树碱组、环孢素A组和对照组角膜植片的存活时间分别为(21±2),(19±2)和(11±2) d,各用药组与对照组比较角膜植片存活时间显著延长(P < 0.01),羟基喜树碱组比环孢素A组植片存活时间明显延长(P < 0.05)。实验结果提示羟基喜树碱能对大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应具有明显的抑制作用,可延长植片存活时间,抑制新生血管,其作用优于环孢素A。 关键词：角膜移植;大鼠;免疫排斥;羟基喜树碱;免疫抑制剂     

羟基红花黄色素A对谷氨酸诱导损伤神经元过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)拮抗谷氨酸诱导神经元损伤的保护机制。方法采集经体外原代培养第7天的Sprague Dawley胎鼠皮质神经元,通过形态学观察、噻唑蓝法、Westernblotting法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和磷酸化PPARγ(pPPARγ,即PPARγ的失活形式)表达水平,以探讨HSYA抗谷氨酸诱导神经元损伤的保护机制。结果经谷氨酸处理后神经元发生肿胀、部分崩解、死亡。与正常对照组相比,谷氨酸不同剂量组(1.00、5.00和10.00mmol/L组)的神经元存活率(66.60%、33.40%和21.60%)和PPARγ蛋白表达水平显著降低,对照组灰度值:1.06±0.18,谷氨酸5.00和10.00mmol/L组灰度值分别为:0.32±0.09、0.28±0.07(均P=0.000),pPPARγ蛋白表达水平明显升高,灰度值分别为:0.37±0.05、1.83±0.17和1.75±0.21(均P=0.000)。HSYA与谷氨酸共同处理后神经元形态明显改善、细胞相对存活率提高,谷氨酸5.00mmol/L,HSYA0.01、0.10和1.00mmol/L组分别为33.40%、35.30%、51.00%和72.50%(P=0.742、0.033、0.002),PPARγ蛋白表达水平呈现逐渐升高趋势,对照组,谷氨酸5.00mmol/L,HSYA0.01、0.10和1.00mmol/L组灰度值分别为:1.20±0.16、0.25±0.06、0.39±0.10、0.41±0.12、0.37±0.08,但差异未达到统计学意义(均P>0.05),pPPARγ蛋白表达水平降低,对照组,谷氨酸5.00mmol/L,HSYA0.01、0.10和1.00mmol/L组灰度值分别为:0.51±0.14、1.91±0.25、1.70±0.26、1.25±0.23、0.85±0.19,(P=0.022、0.004、0.000)。结论 HSYA对由谷氨酸诱导的神经元损伤具有保护作用,其机制与抑制PPARγ蛋白磷酸化即抑制PPARγ活性有关。     

3-硝基丙酸多次预处理上调神经凋亡抑制蛋白表达保护多巴胺能神经元的研究

目的研究3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)多次预处理对多巴胺能神经元的保护机制.方法应用MPTP在C57BL小鼠上制作帕金森病模型,应用爬杆、悬挂实验检测小鼠协调运动能力;应用免疫组化检测中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)及神经凋亡抑制蛋白(NAIP)的表达.结果在MPTP组小鼠爬杆、悬挂实验评分降低,TH表达明显减少,无NAIP表达;3-硝基丙酸单次预处理后评分增加,TH、NAIP表达增多;多次预处理后TH、NAIP表达及评分增加更明显.结论3-NPA多次预处理对多巴胺能神经元的保护机制与上调NAIP表达有关.     

3-硝基丙酸预处理对大鼠脑组织缺血-再灌注损伤的保护作用与神经细胞骨架蛋白的相关性研究

目的在蛋白质水平探讨3-硝基丙酸(3-NAP)预处理对缺血-再灌注损伤(IRI)大鼠的脑保护作用的可能机制。方法采用大脑中动脉线栓法(MCAO)制备脑缺血再灌注模型,对3-NPA预处理的大鼠(预处理组)与单纯IRI组大鼠(IRI组)应用荧光差异双向凝胶(2D-DIGE)电泳、基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)及数据库检索鉴定出差异表达的神经细胞骨架蛋白。结果预处理组与IRI组相比有52种蛋白表达量具有显著性差异,其中鉴定出15种主要的差异蛋白质,神经细胞骨架相关蛋白有7种。结论一些神经细胞骨架相关蛋白可能对IRI后的脑组织具有保护作用。     

高胆红素血症新生大鼠脑组织激活素A、caspase-3表达的研究

目的 探讨高胆红素血症新生大鼠脑损伤后内源性激活素A(ACT A),caspase-3表达的变化.方法 将100只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(C组,n=10),实验1组(T1组,n=30),实验2组(T2组,n=30)和实验3组(T3组,n=30),各实验组建立高胆红素血症动物模型(T1组注射胆红素50 μg/g,T2组100 μg/g,T3组200 μg/g),于造模后0、4、8、12、24 h采集标本,各组检测血清胆红素浓度、脑组织胆红素含量、脑组织含水量,观察脑组织病理改变及用免疫组织化学法检测脑组织中ACTA、caspase-3的表达.结果 T1组血清胆红素浓度于造模后8 h、12 h显著高于C组(P＜0.05),T1组脑组织胆红素含量、脑组织含水量及ACT A、caspase-3表达于造模后各时间点与C组比较均无统计学意义(P＞0.05).T2、T3组血清胆红素浓度、脑组织胆红素含量、脑组织含水量及ACT A、caspase-3表达于造模后各时间点均显著高于C组(P＜0.01).脑组织胆红素含量与脑组织含水量及ACT A、caspase-3表达均呈正相关(r=0.876,P＜ 0.01;r=0.886,P＜0.01;r=0.900,P＜0.01).C组、T1组大脑皮质、海马区神经元排列整齐,结构完整;T2、T3组神经元数量减少,结构紊乱,可见胆红素沉积.T2、T3组造模后4 h ACT A蛋白表达开始上调,12 h达高峰,保持高表达状态至24 h;阳性反应主要位于细胞浆和突起,细胞核不着色.T2、T3组造模后4 h caspase-3蛋白表达开始上调,24 h达高峰;阳性反应主要位于细胞核.结论 高胆红素血症新生大鼠脑损伤后可诱导ACT A,caspase-3表达的增加,提示二者在高胆红素血症新生大鼠脑损伤的病理过程中可能发挥重要作用.     

红花黄色素可促进人脐静脉内皮细胞的增殖*

背景：心血管疾病的发生、发展与内皮细胞增生及凋亡有关。 目的：观察红花黄色素对血管内皮细胞模型的保护作用。 方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,先采用红花黄色素进行干预,随后采用溶血卵磷脂体外诱导建立人脐静脉内皮细胞损伤模型,并设置对照组。 结果与结论：与对照组比较,溶血卵磷脂干预的人脐静脉内皮细胞增殖减弱(P < 0.05),细胞凋亡增加(P < 0.05),一氧化氮浓度降低(P < 0.01),而经红花黄色素干预后上述现象均可被逆转(P < 0.05)。结果证实,红花黄色素可通过促进内皮细胞增殖,抑制其凋亡并增加一氧化氮浓度对溶血卵磷脂诱导的内皮细胞损伤起保护作用。     

抗癫痫药物对人癫痫病灶脑片癫痫样电活动的抑制作用

目的：探讨用手术切除的癫痫病灶进行抗癫痫药物研究的可行性。方法：将手术中切除大脑皮层病灶切成脑薄片,通过脑标本的降温通氧保存脑片活力,用低Ｍｇ＾２＋和４－氨基吡啶（４－ＡＰ）灌流诱导脑片自发性癫痫样放电,用自行研制的多孔溶槽实现对同一脑标本行４种药物实验,观察在抗癫痫药前后自发放电波幅度变化。结果：４例癫痫病灶及２例非癫痫脑组织（对照组）实施了药物敏感实验,常用的４种药物实验,观察在抗癫痫药前后自发放电波幅变化。结果：４例癫痫病灶及２例非癫痫组织（对照组）实验了药物敏感实验,常用的４种抗癫痫药在低浓度时（μｍｏｌ／Ｌ：苯妥英钠１００,苯巴比妥１０００,安定３０,卡马西平１００）对癫痫脑片自发放电的抑制作用较对非癫痫脑片的作用弱。药物浓度增大３倍后,对两组脑片均产生明显抑制作用。结论：癫痫病灶皮层脑片在体外可以用     

新型超微载体FA-PAMAM介导hTERT-siRNA对人脑胶质瘤细胞系U251抑制作用的体外研究

目的 探讨由叶酸(FA)修饰的聚酰胺-胺型高聚物(PAMAM)制成的新型超微载体FA-PAMAM介导人端粒酶催化亚基(Htert)-siRNA对人脑胶质瘤细胞系U251的抑制作用.方法 人脑胶质瘤细胞系U251被分为FA-PAMAM/Htert-siRNA转染组(干涉组)、FA-PAMAM空载对照组(空载对照组)和空白对照组.利用FA-PAMAM介导Htert-siRNA体外转染胶质瘤细胞系U251,流式细胞仪检测各组细胞转染效率、细胞增殖活性、Htert Mrna表达水平、端粒酶活性以及细胞凋亡率.结果 FA-PAMAM在体外能够有效地将Htert-siRNA转染导入胶质瘤细胞系U251,转染效率为67.36%;干涉组细胞存活率随转染时间的延长而逐渐降低,以转染后48 h最低,仅为(68.97±1.19)%,与同一时限空载对照组比较,差异有统计学意义(P=0.000);转染后72h,干涉组Htert Mrna表达水平较空载对照组和空白对照组下调57%,差异有统计学意义(均P=0.000);转染后72h,干涉组端粒酶活性为(52.57±5.34)TPG,与空载对照组和空白对照组比较明显下调,差异有统计学意义(均P=0.000);转染72h后,干涉组细胞凋亡率为(29.63±2.91)%,高于空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(均P=0.000),肿瘤细胞生长明显受到抑制.结论 FA-PAMAM作为一种新型超微载体可于体外有效转染Htert-siRNA,具有高效、低细胞毒性之优点;Htert-siRNA可作为胶质瘤基因治疗的靶点.     

An inhibitory effect of interferon gamma on the injury-induced astrocyte proliferation in the postmitotic rat brain

Influence of interferon gamma (IFNγ) on astrocytes proliferating in response to unilateral injury of the cerebral hemisphere was investigated in 30-day-old rats. The brain injury was followed by an immediate injection of IFNγ into the lesion cavity. On 1st or 2nd day following injury the animals were injected with [³H]thymidine and killed 4 h after the injection. The proliferating astrocytes were visualised by combination of immunocytochemical staining for glial fibrillary acidic protein (GFAP) and autoradiography. Thereafter, numbers of GFAP-immunopositive and autoradiographically-labeled astrocytes located within the region of injury were counted. On the day 1 after injury no effect of IFNγ administration was seen. However, on day 2 the average 43% reduction of the number of proliferating astrocytes was recorded. The reduction showed no dose-dependent changes. This in vivo evidence of IFNγ-induced suppression of astrocyte proliferation was considered in relation to other determinants of astrocyte reactivity existing in the injured brain.     

抑胶素对C6胶质瘤细胞p16蛋白表达的影响

目的探讨不同浓度的抑胶素对C6胶质瘤细胞p16蛋白表达的影响。方法体外培养C6胶质瘤细胞,应用顺铂作为对照,通过免疫细胞化学染色法检测不同浓度的抑胶素作用后细胞周期负性调控基因p16在不同时问点的蛋白表达。结果 C6胶质瘤细胞经过抑胶素处理后,随着抑胶素浓度的增加,p16蛋白的表达也明显增强。结论抑胶素能够抑制C6胶质瘤细胞的增殖,并且具有改变肿瘤细胞增殖周期的作用。     

Hydroxysafflor yellow A improves learning and memory in a rat model of vascular dementia by increasing VEGF and NR1 in the hippocampus

Hydroxysafflor yellow A (HSYA) has angiogenesisregulating and neuro-protective effects, but its effects on vascular dementia (VaD) are unknown. In this study, 30 adult Sprague-Dawley rats were randomly allocated to five groups: normal, sham-operation, VaD alone (bilateral carotid artery occlusion), VaD plus saline (control), and VaD plus HSYA. One week after operation, the HSYA group received one daily tail-vein injection of 0.6 mg/100 g HSYA for two weeks. Five weeks after operation, the spatial memory of all five groups was evaluated by the water maze task, and synaptic plasticity in the hippocampus was assessed by the long-term potentiation (LTP) method. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and N-methyl-Daspartic acid receptor 1 (NR1) expression in the hippocampus was detected via Western blot. We found that, compared with the group with VaD alone, the group with HSYA had a reduced escape latency in the water maze (P < 0.05), and the LTP at CA3-CA1 synapses in the hippocampus was enhanced (P < 0.05). Western blot in the late-phase VaD group showed slight up-regulation of VEGF and downregulation of NR1 in the hippocampus, while HSYA significantly up-regulated both VEGF and NR1. These results suggested that HSYA promotes angiogenesis and increases synaptic plasticity, thus improving spatial learning and memory in the rat model of VaD.     

Adaptation of in vitro rat brain protein synthesis to long-term ingestion of n-butanol

Long-term treatment of rats with n-butanol leads to a change in in vitro brain protein synthesis which increases the resistance of this process to either ethanol or isopropanol. The change seems to be related to ribosomal events since the synthesis of aminoacyl-tRNA was not affected in the same conditions.