整合素α6在肝窦毛细血管化中的表达

目的探讨整合素α6在肝窦毛细血管化时的表达情况. 方法皮下注射四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,进行层粘连蛋白(LN)及其整合素受体α6免疫组织化学检测及整合素α6斑点免疫印迹研究. 结果动态观察了LN在肝纤维化时沿肝窦在Disse间隙沉积形成肝窦毛细血管化;正常时整合素α6局限于汇管区血管内皮和胆管内皮细胞膜上,窦内皮细胞(SEC)上无表达,肝窦毛细血管化时,SEC出现整合素α6阳性表达沿肝窦连续分布,整合素α6在纤维化时组织中含量明显高于正常(P＜0.05). 结论肝窦毛细血管化时SEC出现整合素α6亚基的诱导表达.     

四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的形成

目的：观察四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化过程中肝窦毛细血管化的形成过程,探讨其与肝纤维化的关系。方法32只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组,肝纤维化模型组,正常对照组大鼠腹腔注射0．9％氯化钠溶液2 mL/kg ,模型组大鼠腹腔注射50％ CCl4-蓖麻油混合液2 mL/kg ,每周2次,共8周;分别于造模第2、4、6、8周处死大鼠,观察肝组织炎症及纤维化程度,放射免疫法检测血清中透明质酸（HA）的含量,透射电镜观察肝窦窦壁结构,S-P 免疫组织化学检测各组大鼠肝组织CD31、层黏连蛋白（LN）、IV型胶原（Col-IV）的表达。结果肝脏组织学证实CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型构建成功,6周可见纤维间隔形成;透射电镜显示,CCl4诱导2周时,部分肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells ,LSEC）窗孔减少,内皮下未见基底膜（Basement membrane,BM）,随着造模的进程,LSEC 窗孔进一步减少,部分甚至消失,第6、8周时局部肝窦内皮下形成连续的BM。同时,随着肝纤维化的进程,HA浓度逐渐升高,肝窦内皮细胞表面标志物CD31及基底膜主要成分Col-IV、LN表达逐渐增强。结论在CCl4诱导大鼠肝纤维化过程中,肝窦毛细血管化是逐渐形成的,LSEC失窗孔早于纤维间隔的形成,而肝窦内皮下基底膜出现在纤维间隔形成以后。     

肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞整合素α6β1及粘着斑激酶表达的变化

目的研究正常及肝纤维化时大鼠肝窦内皮细胞(SEC)表面层粘连蛋白(LN)的整合素受体α 6 β 1及粘着斑激酶(FAK)的变化.方法用胶原酶原位灌注、Percoll不连续密度梯度离心法分离正常及四氯化碳(CCl4)实验性大鼠肝纤维化模型中的SEC,并进行体外培养.采用细胞-ELISA和免疫沉淀-蛋白质酪氨酸激酶活性测定的方法,分别观察SEC细胞表面整合素α 6 β 1表达及FAK活性的变化.结果正常大鼠SEC细胞表面几乎不表达整合素α6 β 1;在肝纤维化时SEC细胞表面α 6 β 1蛋白表达却明显增加(P＜0.05),且细胞中FAK活性明显增高(P＜0 05).结论在肝纤维化时SEC细胞表面整合素α 6 β 1的表达及FAK活性明显增高,可能在SEC的形态及功能改变中起重要作用.     

肿瘤生长因子β1及血小板衍生生长因子对肝窦内皮细胞整合素α6β1及黏着斑激酶表达的影响

目的：观察肿瘤生长因子β1(TGFβ1）及血小板衍生生长因子（PDGF）对大鼠肝窦内皮细胞（sinusoidal endothelial cell,SEC)整合素α6β1表达及黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK)活性的影响。方法：用胶原酶原位灌注、Prercoll不连续密度梯度离心法分离大鼠SEC，并进行体外培养。采用细胞－ELISA和免疫沉淀－蛋白质酪氨酸激酶活性测定法，分别观察TGFβ1及PDGF对SEC表面整合素α6β1表达及FAK活性的影响。结果：经TGFβ1及PDGF作用24h后，α6β1蛋白表达明显强于对照组（P＜0．05），且呈剂量依赖性。作用至48h，表达继续增强，细胞中FAK的活性也明显增高（P＜0．05），虽于48h后回落，但仍明显高于对照组。结论：TGFβ1及PDGF可促进SEC表面整合素α6β1的表达及FAK活性增高，可能是它们参与肝纤维化发生的机制之一。     

家兔非酒精性脂肪肝肝纤维化形成中层粘连蛋白及透明质酸的变化

目的:研究非酒精性脂肪肝家兔肝纤维化形成过程中肝窦壁层粘连蛋白(LN)及透明质酸(HA)的变化.方法:用高脂饲料诱发脂肪肝的方法建立家兔非酒精性肝病动物模型,取肝组织用扫描电镜、特殊染色等进行病理组织形态学观察;免疫组化检测LN;放射免疫法测定血清HA,研究非酒精性脂肪肝家兔在肝纤维化形成过程中肝窦壁基底膜成分的动态变化.结果:肝窦毛细血管化,即窗孔消失、基底膜形成;肝窦壁LN表达(面积百分比)和血清HA含量(mg/L)均随着肝纤维化形成逐渐增加,在8 wk末阳性最强,均与对照组有显著性差异(LN:25.2±1.0 vs 5.1±0.7,P＜0.01;血清HA:1422.18±20.9 vs 1189.3±13.1,P＜0.01),停止造模后逐渐下降,但停药8 wk均强于正常组.结论:家兔肝纤维化形成过程中,肝窦壁功能性基底膜被破坏,发生肝窦毛细血管化.血清HA含量的变化与电镜下SEC去窗孔的改变,以及LN的变化相一致.     

慢性乙型肝炎患者肝组织低氧诱导因子1α的表达变化

目的研究肝组织中低氧诱导因子（HIF）-1α的表达与慢性乙型肝炎（CHB）患者肝脏微循环障碍的关系。方法对81例CHB患者和5例正常人的肝标本进行免疫组织化学染色,并用透射电镜观察肝组织超微结构的变化。结果 HIF-1α在肝组织中的表达强度和范围与CHB患者肝脏微循环障碍程度密切相关,电镜示肝窦腔内红细胞聚集、狄氏腔中胶原纤维沉积及肝窦内皮细胞表面有基底膜形成。结论 HIF-1α通过激活血管增生,最终导致血管纤维化和肝窦毛细血管化,加重肝脏微循环障碍。     

柴胡疏肝散抗肝纤维化的实验研究

目的探讨柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠模型α-SMA、TGF-β1的影响及其抗纤维化的机制。方法采用40?l4皮下注射，制备肝纤维化模型并以柴胡疏肝散干预，测定肝功能、血清透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）及肝组织羟脯氨酸（HYP），光镜观察肝组织病理变化，免疫组织化学法检测肝组织α-SMA、TGF-β1表达，RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果柴胡疏肝散组较模型组：肝功能明显改善，血清HA及LN显著降低，肝组织HYP含量明显少，肝组织纤维化程度明显改善，肝组织α-SMA及TGF-β1表达减少。结论柴胡疏肝散对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有良好的防治作用。     

晚期日本血吸虫病患者肝窦病变的观察

目的 观察晚期日本血吸虫病（晚血）患者肝窦病变，并探讨其与肝纤维化程度、肝功能的关系。方法 26例晚血患者肝活检标本和5例正常肝标本行常规病理染色和天狼猩红染色，进行肝纤维化程度的半定量分析；应用鼠抗人Ⅳ型胶原（C—IV）单克隆抗体和兔抗人层粘蛋白（LN）多克隆抗体进行免疫组织化学（免疫组化）染色，阳性者进行定量检测；放射免疫法检测血清透明质酸（HA），自动生化分析仪检测肝功能；对其中5例患者和2例正常肝标本进行透射电镜观察。结果 肝纤维化程度为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级的患者分别为5、11和10例，晚血患者肝窦壁C-Ⅳ和LN表达增强，并与肝纤维化程度及部分肝功能指标水平相关（P＜0．05或P＜0．01），与血清HA水平无关（P〉0．05）。晚血患者肝窦内皮细胞（SEC）失窗孔及SEC下可见基底膜（BM）的形成，SEC胞浆内出现Weibel、Palade等发现的小体（简称WP小体），肝窦腔内有脱落的肝细胞微绒毛。结论晚血患者肝窦存在病变，与肝纤维化程度及肝功能改变有关。     

肝复康对实验性肝纤维化转化生长因子β及层粘连蛋白表达的影响

研究复方中药肝复康对实验性肝纤维化大鼠肝组织的转化生长因子 β(TGF—β1)及层粘连蛋白 (LN)表达的影响 ,探讨其治疗机制。采用 10 %的四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型 ,于造模 6 0天后给予肝复康治疗 6 0天 ,以秋水仙碱及肝脾康为对照药。通过光镜及电镜观察肝组织病理变化 ,检测肝组织羟脯氨酸含量 ,免疫组化法检测肝组织TGF - β1及LN表达。经肝复康治疗后 ,组织学显示肝纤维化程度明显改善 ,肝组织羟脯氨酸明显降低 ,肝组织TGF - β1阳性染色细胞数及LN阳性染色面积明显减少 (P <0 0 1)。肝复康对肝纤维化有明确的治疗作用。其部分机制为减少细胞因子TGF - β1的表达 ,减少LN的表达 ,减轻肝窦毛细血管化     

肝窦毛细血管化在二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化门静脉高压形成中的作用

目的 研究肝窦毛细血管化在二甲基亚硝胺(DMN)大鼠肝纤维化门静脉高压形成中的作用。方法经4周12次腹腔注射DMN制备火鼠肝纤维化模型,应用电镜技术、免疫组织化学方法结合大鼠门静脉压力测定,24周动态分析肝纤维化形成过程中肝窦毛细血管化与门静脉压力变化的相关性。结果 大鼠门静脉压力随着造模的进行不断升高,造模4周时达(1.10 ±0.18)kPa,明显高于对照组(0.52±0.04)kPa(t=6.41.P<0.0 1)。造模停止后,大鼠门静脉压力逐渐恢复正常。其动态变化与电镜下肝窦毛细血管化的变化规律一致;与反映肝窦内皮表型改变的第Ⅷ因子相关抗原的动态变化成正相关(r=0.833,P<0.01);与反映肝窦内皮下基底膜形成的层黏连蛋白的动态变化成正相关(r=0.953,P<0.01);与反映肝窦壁星状细胞活化收缩的α-平滑肌肌动蛋白的动态变化成正相关(r=0.919,P<0.01)。结论 肝窦毛细血管化是DMN肝纤维化模型门静脉高压产生的主要原因。     

Immunolocalization of laminin in normal rat liver and biosynthesis of laminin by hepatic lipocytes in primary culture

Laminin, a glycoprotein with a molecular weight of approximately 850,000 daltons, is a major constituent of most epithelial basement membranes. Its presence in the extracellular matrix of normal liver, however, is debated. Using two affinity-purified antibodies directed against laminin, we have localized the glycoprotein within normal rat liver and identified its cellular source. Immunofluorescent staining of rat liver sections revealed laminin in a continuous distribution around hepatic sinusoids, adjacent to hepatocytes and sinusoidal lining cells. To determine the cellular origin of laminin, three perisinusoidal cell populations (hepatocytes, sinusoidal endothelial cells, and lipocytes) were purified from enzymatically dispersed rat liver and were established in primary culture. By immunofluorescence, laminin was associated almost exclusively with lipocytes. Synthesis of laminin was demonstrated by immunoprecipitation of the protein from lipocyte culture medium pulse-labeled with radioactive methionine. These results show that in adult liver, laminin is present in the perisinusoidal matrix and is produced by hepatic lipocytes. Lipocytes, which have the capacity to produce collagen as well as laminin, may be the principal source of extracellular matrix proteins in the perisinusoidal space, and may contribute to subendothelial fibrosis resulting from liver injury.     

Integrin alpha6beta1 plays a significant role in the attachment of hepatoma cells to laminin.

BACKGROUND/AIMS: Tumor invasion and metastasis consist of a series of complex events. During this process, the ability of tumor cells to adhere to laminin, a major component of basement membranes, is required at various steps. The expression of laminin-binding integrins and the extent of tumor metastasis and progression appear to be related. In hepatocellular carcinoma, increased expression of laminin-binding integrins is observed. However, little is known concerning the possible functional interactions between laminin-binding integrins and laminin. Therefore, we investigated the participation of laminin-binding integrins in the attachment of hepatoma cells to laminin. METHODS: Human hepatoma cell lines (KIM-1, KYN-1, 2) were used. We investigated the expression of integrin alpha1, alpha2, alpha3, alpha6, beta1, and beta4 subunits on hepatoma cells by immunocytochemical and flow cytometric analysis. Participation of these integrin subunits in the attachment of hepatoma cells to laminin was evaluated by an inhibition of cell adhesion assay. RESULTS: Integrin alpha1, alpha2, alpha3, alpha6 and beta1 subunits were expressed at the marginal areas of hepatoma cells, while the integrin beta4 subunit was scarcely detected. Laminin promoted the attachment of hepatoma cells in a dose-dependent manner. Although anti-integrin alpha1, alpha2, beta3 and beta4 subunit antibodies did not inhibit cell attachment to laminin, anti-integrin alpha6 and beta1 subunit antibodies inhibited the attachment by 50% or more. CONCLUSIONS: These findings indicate that integrin alpha6beta1 is very important in the attachment of hepatoma cells to laminin, suggesting the participation of this integrin in metastasis and invasion of hepatoma cells.     

从组织病理学角度探讨慢性乙型肝炎肝纤维化的发生

目的 探讨窦内皮细胞在肝纤维化发生中的作用,以及肝脏微循环障碍、肝窦毛细血管化与肝纤维化发生的关系. 方法对56例慢性乙型肝炎患者进行肝活组织枪查,将肝组织分成两部分,分别通过HE染色进行光学显微镜观察,以及常规制作电子显微镜标本在透射电子显微镜下进行超微结构观察.结果 56例慢性乙型肝炎患者中,轻度39例,中度10例,重度7例.慢性乙型肝炎患者肝星状细胞的形态类似成纤维细胞,周围有胶原纤维形成.窦内皮细胞与肝星状细胞间有电子致密物沉积.其中53例窦内皮细胞窗孔有不同程度的减少,减小,20例见窦内皮细胞下有连续或不连续的膜样物质形成,15例狄氏腔内有胶原纤维沉积.15例肝功能正常患者有的肝窦腔内有红细胞聚集,严重者有微血栓形成. 结论窦内皮细胞通过与肝星状细胞作用,从而参与肝纤维化的发生.肝脏微循环障碍、肝窦毛细血管化是肝纤维化的早期重要病理改变.     

Segment-specific but pathologic laminin isoform profiles in human labial salivary glands of patients with Sjogren's syndrome

OBJECTIVE: To assess the laminins in basement membrane of the labial salivary glands of patients with Sjogren's syndrome (SS) and healthy controls. METHODS: Labeling of laminin alpha1-alpha5, beta1, beta2, gamma1, and gamma2 chains was performed using immunohistochemistry with chain-specific monoclonal antibodies and pattern recognition analysis of the labeled specimens. RESULTS: Laminin alpha1, alpha2, and alpha4 chains were detected exclusively in the acinar basement membranes, whereas laminin alpha3, alpha5, beta1, gamma1, and gamma2 chains were also detected in ductal basement membranes. Laminin beta2 chain was not found. In patients with SS, laminin alpha1 and alpha2 chains were weakly labeled, but laminin alpha4 labeling was also intense in areas not infiltrated by lymphocytes. Pattern recognition analysis suggested that laminin alpha1, alpha2, and alpha4 chains were associated with acinar cells, myoepithelial cells, and tissue damage/repair, respectively. CONCLUSION: All salivary gland basement membranes signal through laminin 5, laminin 6, and laminin 10 trimers, but acinar basement membranes also signal through laminin 1, laminin 2, and laminin 8 trimers. Laminin alpha1 chain/laminin 1 may play a central role in the maintenance of acinar cells in healthy glands. This possibility was supported by the finding of variable expression of laminin alpha1 chain/laminin 1 in acinar basement membrane and its weak expression in SS with acinar cell atrophy. The impairment of myoepithelial laminin alpha2 chain/laminin 2 in patients with SS indicates a double defect in the acinar compartment and pathologic extracellular matrix-to-cell signaling, which may contribute to structural deterioration and functional abnormality of the exocrine glands.     

肝窦内皮细胞损伤在大鼠肝纤维化形成中的作用

目的 研究肝窦内皮细胞损伤在二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化形成中的作用。方法 采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)4周12次腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,应用电镜技术、免疫组织化学及图像分析方法结合血清生化测定,24周动态观察肝纤维化形成过程中肝窦内皮细胞损伤及其表型的改变。结果 造模2d后肝结构未见明显改变,肝窦内皮细胞(sinusoidal endothelial cell,SEC)远侧胞浆窗孔数减少、造模1周SEC失窗孔更明显,肝组织内未见明显变性坏死及纤维间隔形成,造模4周时见肝组织内大片出血坏死,有大量假小叶形成,内皮下出现SEC窗孔减少。SEC失窗孔早于肝细胞发生较为严重的坏死、肝纤维化的形成以及肝窦内皮下基底膜的形成。造模4周HA(ng/ml)和肝羟脯氨酸(ug/g)平均含量分别为231.30±143.80和223.04±37.09,对照组分别为56.50±18.10和61.55±20.85,t值在3.14～8.28,P<0.05。结论 DMN引起大鼠肝窦内皮细胞损伤及其表型改变可能是其诱导肝纤维化重要的始动机制之一。     

大鼠纤维化肝组织中PTEN的动态表达及其与肝星状细胞增殖和活化的关系

目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)在大鼠纤维化肝组织中的动态表达及其对在体肝星状细胞(HSC)活化、增殖的影响. 方法 采用胆总管结扎法建立大鼠肝纤维化模型;应用免疫组织化学染色、Western blot和实时荧光定量PCR技术测定大鼠肝组织中PTEN的表达;应用免疫荧光双标记共聚焦激光扫描显微术测定大鼠肝组织中活化HSC的PTEN表达;采用免疫组织化学染色检测大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白的表达.结果 免疫组织化学染色显示正常大鼠肝组织中PTEN有广泛表达,主要表达于细胞质,随着肝纤维化的发展,PTEN表达逐渐减少(P<0.01),而α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞明显增多(P<0.01);造模1、2、3周及4周不同时间大鼠纤维化肝组织中PTEN的mRNA(分别为假手术组的0.66、0.53、0.44和0.37)及蛋白质表达(吸光度比值分别为1.20±0.13,1.07±0.16,0.88±0.08,0.73±0.07)均低于假手术组(P<0.01),并随着肝纤维化的进展逐渐降低(P<0.01);免疫荧光双标记共聚焦激光扫描显微术显示PTEN在活化HSC广泛表达,主要表达于细胞质,随着肝纤维化的进展,表达PTEN的活化HSC占总的活化HSC的比例逐渐减少(P<0.01). 结论 大鼠纤维化肝组织中PTEN的mRNA及蛋白质表达均下调;在体HSC的PTEN表达亦降低;肝组织中PTEN的动态表达与HSC的活化、增殖呈显著负相关.     

肝纤维化大鼠肝组织Raf/ERK信号通路的变化及肝复康的干预作用

目的探讨中药肝复康通过Raf/ERK介导的信号转导通路治疗肝纤维化大鼠的作用机制。方法制备四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠,应用肝复康干预;采用RT-PCR法测定肝组织及HSC-T6细胞Raf、ERK和Ⅲ型胶原mRNA水平的变化;采用免疫组织化学法检测肝组织ERK的表达。结果模型组肝组织Raf、ERK和Ⅲ型胶原mRNA水平较正常对照组明显上调(P<0.01),而肝复康治疗组则明显下调(P<0.01);模型组肝组织ERK蛋白的表达上调,而肝复康治疗组表达则下调。结论肝复康对肝纤维化有明确的治疗作用,其抗肝纤维化的作用机制可能与ERK介导的信号转导通路有关。     

细胞间粘附分子-1表达与肝纤维化关系的研究

目的:探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达与肝纤维化的关系。方法:建立四氯化碳大鼠实验性肝纤维化模型。用链酶蛋白和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离正常大鼠HSC,并进行体外培养,应用免疫组织化学方法分别观察静息或活化状态下的HSC及造模肝组织中ICAM-1的表达。结果:肝纤维化模型组织中,ICAM-1表达明显增加,ICAM-1阳性细胞多分布在汇管区周围,肝小叶内炎性细胞浸润区和坏死灶内,其阳性强度及分布与肝脏炎症、肝纤维化程度和分布相一致;静息的HSC不表达ICAM-1,而活化的HSC表达ICAM-I,且随着培养时间的延长ICAM-1表达量逐渐增加。结论:动物体内实验和体外细胞培养表明,ICAM-1表达与HSC活化、肝脏炎性损伤及肝纤维化的发生有关。