甲型肝炎病毒HM175株的细胞病变、蚀斑分析和加热灭活

作者用经B-SC-1细胞传30代,能在该细胞上产生细胞病变作用(CPE)的HM175株,再经传8代后得到HM175A株。以每个细胞接种1个放射免疫灶形成单位(RIFU)病毒的剂量感染44～60代的B-SC-1细胞,置34℃培养2～3天,发现了一种独特的、类似肠道病毒的细胞病变,其特征为感染细胞的固缩和聚集,5～8天后单层细胞完全破     

高代次甲型肝炎病毒HM175株的核苷酸序列:野毒株与细胞培养适应株的比较

甲型肝炎病毒(HAV)在细胞培养中的传代次数增加可使其毒力下降,但导致这些表型变化的分子基础尚不清楚.为此,作者比较了野毒株与细胞培养适应变异株之间完整的核苷酸序列.     

核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的评价核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用。方法以HepG2．2．15细胞作为细胞模型,拉米夫定作为阳性对照药物。HepG2．2．15细胞于药物处理14d后,收集上清液及细胞。采用ELISA检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,HBV荧光定量检测上清液和细胞内HBV DNA水平,CCK-8试剂盒检测药物对细胞的毒性作用。结果核酸类似物PNA与拉米夫定在浓度1．6-1000μmol·L^-1内对HepG2．2．15细胞的毒性均较小。与药物未处理组比较,PNA和拉米夫定均可有效抑制细胞上清HBV DNA,半数抑制浓度（IC50）分别为0．05-0．10μmol·L^-1和0．09-0．18μmol·L^-1,两者之间差异无统计学意义。结论在体外细胞实验中,PNA对细胞的毒性小,与拉米夫定的安全指数相当;PNA对乙型肝炎病毒复制有较强的抑制作用,且具有一定时效量效关系,与拉米夫定的抑制强度相当。     

金茵清热口服液对甲型H1N1流感病毒致细胞病变效应的影响

目的：研究金茵清热口服液（试药）抑制甲型H1N1流感病毒的作用及其对喉癌上皮细胞（Hep-2细胞）免疫机能的影响。方法：甲型H1N1流感病毒感染狗肾细胞（MDCK细胞）和Hep-2细胞后,给予不同浓度的试药。显微镜观察细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,MTT法检测细胞活性,荧光定量PCR（qRT-PCR）检测试药作用于Hep-2细胞后细胞因子（TNF-α,IFN-1α,IFN-1β,IL-1α和IL-6）mRNA的水平。结果：实验细胞感染病毒后用试药处理,当试药质量浓度为3 mg·mL^-1时,MDCK细胞存活率提高了61.6%;试药质量浓度为4 mg·mL^-1时,Hep-2细胞存活率提高了40.6%,显著高于药物空白组细胞的存活率（P<0.05）。同时,试药显著上调Hep-2细胞的TNF-α（2.39倍）和IFN-1α（1.98倍）水平,下调炎症因子IL-1α（90%）和IL-6（64%）水平（P<0.05）,而IFN-1β水平的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：金茵清热口服液可以显著提高染毒细胞的存活率,并能显著上调Hep-2细胞抗病毒免疫分子,同时抑制炎症反应,推测金茵清热口服液调节细胞免疫应答可能是其抗流感病毒作用机制之一。     

用咖啡因作探药,快速测定人体细胞色素P—450CYP1A2酶的活性

AIM: To develop a rapid HPLC method for the determination of cytochrome P-450 CYP1A2 activity. METHODS: A 300-microL plasma was prepared by extraction with 5-mL chloroform/isopropanol (9:1), and beta-hydroxyletheophylline was added as internal standard (IS). Samples were separated on an ODS column by a gradient elution system, of which mobile phase consisted of 0.05% acetic acid, acetonitrile, and methanol. The compounds of interest were monitored at 282 nm by UV detector. RESULTS: No potential interfering peaks were found. Paraxanthine (17X), IS and caffeine (137X) were rapidly eluted with baseline resolution, and their retention time was less than 13 min. The detection limits of both 17X and 137X were 0.1 mumol.L-1. Linear relations ranged over 1-100 mumol.L-1 and 1-200 mumol.L-1 with correlation coefficient of 0.9999 and 0.9987, respectively, for 17X and 137X. The coefficients of variation were within 6% for 17X, and 10% for 137X. The average recoveries for both compounds were ranged from 96% to 108%. CONCLUSION: This method is sensitive and rapid, and can be used for population studies of CYP1A2.     

用无神经氨酸酶的甲型流感病毒变异株对雪貂鼻内免疫的保护效果

美国弗吉尼亚大学Mishin等用基因重组技术删去甲型流感病毒〔A/Bayern/7/95类似株(H1N1)〕神经氨酸酶(NA)基因而构建了无NA的变异株(delNA-mutant),以及用一种编码嵌合蛋白(eGFP,由绿色荧光蛋白胞质尾区、跨膜区和NA主要区融合而成)基因插入取代NA基因而构建了另一变异株(delNA     

葡萄糖对HepG2细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2表达的影响

目的 探讨葡萄糖对HepG2细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(acyl-CoA:cholesterol acyltransferase2,ACAT2)表达的调节作用及可能机制.方法 用不同浓度的葡萄糖(5.5、12.5、25.0 mmol/L)作用HepG2细胞12 h,RTPCR检测ACAT2和人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor 1α,HNF1α) mRNA的表达水平.将HNF1α的真核表达质粒瞬时转染HepG2,利用RT-PCR和Western blot检测高表达HNF1α对ACAT2表达的影响.利用凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察葡萄糖对HNF1α结合于ACAT2上游调控序列活性的影响.结果 25.0 mmol/L葡萄糖可上调HepG2细胞HNF1α和ACAT2的转录水平;HepG2细胞内过表达HNF1α可增强ACAT2的表达;高糖组HNF1α与ACAT2上游调控序列的结合活性明显增高.结论 高糖可上调ACAT2的表达,其机制可能与高糖增强了HNF1α与ACAT2上游调控区域的结合活性有关.     

阿司匹林联合华法林对HepG2细胞中CYP3A4酶的抑制作用

目的研究阿司匹林联用华法林对肝药物代谢酶CYP3A4活性的影响及其机制。方法不同质量浓度的阿司匹林、华法林及联合用药处理Hep G2细胞48 h,采用MTT法检测细胞存活率;通过荧光素酶报告基因技术检测各组对PXR转录酶活性和酶CYP3A4活性的影响;采用荧光定量PCR法和Western blotting法检测Hep G2细胞的酶CYP3A4的m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,阿司匹林组、联合用药组细胞的孕烷X受体(PXR)转录酶活性、酶CYP3A4活性均显著降低(P0.01),CYP3A4 m RNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),华法林组均无显著差异。结论阿司匹林联用华法林能够抑制药物代谢酶CYP3A4活性,其机制可能是通过抑制PXR受体的m RNA和蛋白表达实现的。     

2019-nCoV灭活方式对酶免疫法检测急性淋巴细胞白血病患儿血清甲氨蝶呤浓度的影响

目的 研究紫外线和加热2种2019-nCoV灭活方法对酶免疫法检测甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)浓度的影响,探讨该方法在疫情防控期间的应用。方法 将临床送检采血管以75%乙醇表面消毒,低速离心后,将血清分为未灭活组、紫外线灭活组和加热灭活组。其中紫外线灭活组将MTX质控液及血清样本于二级生物安全柜密闭后,紫外灯照射30 min灭活;加热灭活组将质控液与血清样本置于密封袋中,于56℃恒温水槽中水浴30 min灭活。结果 紫外线灭活组和加热灭活组MTX检测结果与未灭活组相比,差异均无统计学意义。未灭活组、紫外线灭活组和加热灭活组3组91%~95.5%的浓度点分布在Bland-Altman图中的95%一致性区间内。未灭活组、紫外线灭活组和加热灭活组3组相关系数均>0.98(P<0.001),表明3组结果一致性良好。结论 以紫外线照射30 min或56℃加热灭活30 min处理对酶免疫法检测MTX浓度检测无影响,可用于疫情防控期间急性淋巴细胞白血病患儿MTX酶免疫法治疗药物监测的开展。     

苯并(a)芘对H1299细胞CYP1A1酶活力和相关基因表达的影响

目的研究BaP对人肺腺癌细胞(H1299)CYP1A1酶活力和CYP1A1及其相关基因表达的影响。方法用不同浓度BaP(8、16、32、64和128μmol/L)处理H1299细胞24 h。实时荧光定量PCR方法检测H1299细胞中CYP1A1、HSP90、AhR和ARNT基因的mRNA表达水平;表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)检测CYP1A1和HSP90蛋白表达水平;荧光分光光度法测定CYP1A1酶活力(7-ethoxyresorufin-o-deethylase,EROD)。结果与溶剂对照组相比,CYP1A1和ARNT基因mRNA水平在BaP为16和64μmol/L时有统计学意义(P0.01),AhR和HSP90在各染毒组中均有统计学意义(P0.05)。在16、32和64μmol/L的BaP染毒组中,CYP1A1和HSP90蛋白水平高于对照组。在16、32、64和128μmol/L的BaP染毒组中均可诱导CYP1A1酶活力显著性增强(P0.01)。结论该试验条件下,在H1299细胞,BaP可通过诱导CYP1A1与其上游转录因子AhR和ARNT的mRNA以及蛋白表达而增强CYP1A1酶活力。     

振源胶囊对细胞色素P_(450)酶CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的影响

目的:研究振源胶囊对细胞色素P450酶CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的影响。方法:用Cocktail探针药物法,将Wistar大鼠随机分组,灌胃给予振源胶囊溶液,以生理盐水组为空白对照,诱导10d,于股动脉插管,注射给予3种探针药物咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗,通过高效液相色谱法检测各探针药物的代谢率来评价各组CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1亚型酶的活性;药动学计算采用DAS2.0软件完成。结果:给予振源胶囊的大鼠,咖啡因代谢加快,半衰期缩短;氨苯砜代谢减慢,半衰期延长;氯唑沙宗半衰期与空白对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论:振源胶囊对大鼠CYP1A2有诱导作用,对CYP3A4有抑制作用,对CYP2E1的作用不明显。     

细胞色素P450酶1A2、2D6与多巴胺D2受体基因多态性对奥氮平治疗精神分裂症PANSS减分率的影响

目的 研究细胞色素P450酶（cytochrome P450,CYP）1A2、2D6以及多巴胺D2受体（dopamine receptor D2,DRD2）的基因多态性对奥氮平治疗精神分裂症阳性和阴性症状量表（positive and negative syndrome scale,PANSS）减分率的影响及其程度。方法 入组只用奥氮平治疗的精神分裂症住院患者178例,评定治疗前以及治疗4周后的PANSS量表得分,计算减分率。同时,收集血液,测定CYP1A2*1F、CYP2D6*10、DRD2-141C Ins/Del、DRD2-241 A>G、DRD2 Taq1A位点的基因多态性。通过方差分析,比较各基因型PANSS减分率的差异;通过多元线性回归分析,得出减分率的回归方程,并计算决定系数。结果 PANSS减分率在CYP1A2*1F（CC：65.68±11.22;CA：55.59±15.40;AA：43.75±15.20）、CYP2D6*10（CC：44.36±16.67;CT：51.78±17.81;TT：56.14±17.13）、DRD2-141C Ins/Del （Ins/Ins：55.11±17.39;Ins/Del：39.16±14.28）和DRD2-241 A>G （AA：45.47±17.52;GA：61.82±10.55;GG：75.43±17.71）不同基因型之间均有统计学显著差异（P均<0.01）,而DRD2 Taq1A位点的基因型间PANSS减分率差异无统计学意义。PANSS减分率=58.041-10.703×CYP1A2*1F+4.272×CYP2D6*10-11.921×DRD2-141C Ins/Del+13.443×DRD2-241 A>G （决定系数R²=0.517,P<0.05）。结论 CYP1A2*1F、CYP2D6*10、DRD2-141 C Ins/Del、DRD2-241A>G位点基因多态性影响奥氮平治疗精神分裂症疗效,但只解释了减分率的51.7%,有待纳入更多的影响因素进行分析。     

COPD患者m6A甲基化酶水平观察及FTO对PM2. 5刺激后MH-S细胞极化和NF-κB信号活化的影响

目的 观察COPD患者体内N6-甲基腺苷(m6A)甲基化酶水平,并探讨肥胖相关蛋白(FTO)对细颗粒物2. 5(PM2. 5)刺激后小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)的极化及核因子κB(NF-κB)信号活化的影响.方法 收集COPD患者的支气管肺泡灌洗液标本.使用m6A dot blot检测两组mRNA的 m6A变化.体外培...