LPS激活中脑胶质细胞条件性培养液对神经元损伤及淫羊藿素的神经保护作用

目的 探讨脂多糖(LPS)激活的中脑胶质细胞条件性培养液对神经元的损伤作用,以及淫羊藿素(ICT)是否能够通过雌激素膜受体(GPER)和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1 R)发挥其神经保护作用.方法 在体外原代培养SD大鼠中脑胶质细胞和神经元,分为对照组、LPS组、ICT+LPS组、G15+ICT+LPS组和JB-1...     

表面活性蛋白A在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及炎症调节作用

目的探讨表面活性蛋白A (SPA)在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及其炎症调节作用。方法分别采用免疫荧光双染和免疫组织化学染色法检测SPA在健康大鼠脑组织的星形胶质细胞、体外培养的星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达情况。采用不同浓度(1、5、10μg/mL)脂多糖(LPS)培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞24 h,10μg/mL LPS培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞2、4、8、16、24 h,采用Western blotting检测细胞中SPA的表达情况。将人星形胶质细胞及小胶质细胞随机各分为LPS组(含有5μg/mL LPS的培养液)、LPS+SPA组(含有5μg/mL LPS和0.5μg/mL SPA的培养液)、SPA组(含有0.5μg/mL SPA的培养液)和对照组(未加入任何处理因素的培养基)。各组细胞培养8 h,采用Western blotting检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65蛋白表达;ELISA法检测各组培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果 SPA在大鼠脑组织的星形胶质细胞中表达,在体外培养的人星形胶质细胞和...     

APOE多态性在炎症因子诱导的神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用

目的：探讨载脂蛋白E (APOE)基因多态性在神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用,为阿尔茨海默病（AD）发病机制的研究提供理论依据。方法：体外分离培养APOE基因敲除小鼠（APOE-/-）原代皮层星形胶质细胞,免疫荧光染色法鉴定细胞纯度。构建人APOE3和APOE4重组过表达质粒,分别转染至原代APOE-/-星形胶质细胞中,以APOE-/-原代细胞为对照,采用Western blotting法检测细胞中APOE和神经胶质酸性蛋白（GFAP）蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞培养上清中APOE水平。采用白细胞介素1α (IL-1α)、肿瘤坏死因子（TNF）和补体C1q联合刺激转染APOE3和转染APOE4的原代星形胶质细胞制备炎症模型,分为APOE3+PBS组、APOE4+PBS组、APOE3+IL-1α+TNF+CC1q组和APOE4+IL-1α+TNF+C1q组,采用细胞免疫荧光染色法观察各组细胞形态表现,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中磷脂酰肌醇蛋白聚糖4 (Gpc4)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖6 (Gpc6)、血小板反应蛋白1(Th...     

右美托咪定对LPS诱导星形胶质细胞MCP-1分泌的影响

目的 研究右美托咪定对脂多糖(LPS)诱导大鼠星形胶质细胞MCP-1 mRNA分泌的影响.方法 培养原代大鼠星形胶质细胞,待诱导分化成熟,免疫组化检测α-2A肾上腺受体的表达;不同浓度LPS刺激星形胶质细胞,观察LPS浓度与MCP-1 mRNA表达的量效关系;随后将细胞随机分为6组:对照组(control组)、LPS(200 ng/ml)刺激组(LPS组)、右美托咪定(DEX)500 ng/ml孵育组(DEX组)、DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS(200 ng/ml)组[DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS组],荧光实时定量PCR检测各组MCP-1 mRNA的表达.结果 α-2A肾上腺受体在星形胶质细胞表达,与细胞标志物GFAP完全共标;不同浓度LPS刺激可引起MCP-1剂量依赖性的表达增加(F(6,41)=289.35,P<0.001),LPS刺激引起MCP-1 mRNA表达量增加的ED50为150.8 ng/ml,ED95为344.1 ng/ml,r=0.86;与LPS组相比,不同浓度右美托咪定均可抑制LPS刺激引起的星形胶质细胞MCP-1 mRNA升高(F(5,21)=454.15,P<0.001).结论右美托咪定可抑制LPS刺激大鼠星形胶质细胞MCP-1 mR-NA的表达,该作用可能是其减轻疼痛的机制之一.     

PI3K/Akt通路介导LPS调节星形胶质细胞HSPA12B表达的研究

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白kinaseB(PI3K/Akt)通路对内毒素脂多糖（LPS）诱导的星形胶质细胞热休克蛋白A12B（HSPA12B）表达的影响。方法将处于对数生长期的新生SD大鼠星形胶质细胞分为3组：con组（空白对照）、LPS组（1滋g·ml-1LPS刺激4h）、LPS+LY组（20滋mol·L-1LY294002预处理1h+1滋g·ml-1LPS刺激4h）。采用Westernblot法检测3组细胞HSPA12B、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达水平,采用细胞免疫荧光染色法检测细胞HSPA12B免疫荧光强度,并进行比较。结果3组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与con组比较,LPS组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）;而与LPS组比较,LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）。LPS组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度强于con组,而LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度较LPS组减弱。结论LPS或是通过PI3K/Akt通路介导调节星形胶质细胞HSPA12B的表达,进而影响中枢神经系统炎症过程。     

氟西汀对体外培养星形胶质细胞活性及脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的 通过体外培养星形胶质细胞,观察氟西汀对星形胶质细胞的活性及对脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞释放肿瘤坏死因子-α( TNF-α)的影响.方法 体外分离、纯化大鼠星形胶质细胞.星形胶质细胞接种到96孔板中,以浓度为(5,10,20,40)μM的氟西汀孵育24h,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测星形胶质细胞增殖活性;星形胶质细胞接种至48孔板,经(5,10,20,40) μM氟西汀预处理后再用1μg/ml LPS刺激,酶联免疫吸附(Elisa)法检测各组上清TNF-α的水平.结果 氟西汀浓度为20 μM,40μM时星形胶质细胞的增殖活性(OD值:0.23±0.014,0.24 ±0.012)与对照组(OD值:0.20±0.017)相比明显增加(P＜0.05),经LPS刺激24h星形胶质细胞释放TNF-α水平(53.84±24.84) pg/ml与对照组(8.00±10.87) pg/ml相比明显增加(P＜0.01),氟西汀浓度为10μM明显抑制LPS刺激星形胶质细胞释放TNF-α(28.85±3.36) pg/ml(P＜0.05).结论 氟西汀在一定浓度范围内可促进星形胶质细胞的增殖活性,氟西汀浓度为10μM时可抑制LPS诱导的星形胶质细胞对TNF-α的释放.     

姜黄素对LPS诱导的星形胶质细胞炎性反应的抑制作用

目的：探讨脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞产生炎性反应及姜黄素对它的抑制作用。方法在2015年3月—2015年7月期间,分离培养了10只新生1~2 d的昆明小鼠大脑皮质星形胶质细胞,培养10 d后传代分组,实验分PBS对照组(n=6)、LPS刺激组(n=6)、LPS联合姜黄素干预组(n=6)。 ELISA检测炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α的释放。结果与PBS组的IL-6(873.82±20.28)、IL-1β(680.62±10.35)和TNF-α(492.73±8.56)比较,LPS刺激组IL-6(1132.42±78.09)、IL-1β(821.87±14.33)和TNF-α(559.32±9.6)的分泌增加(P<0.05);姜黄素能显著抑制 LPS 诱导的IL-6(1014.79±52.08)、IL-1β(738.84±7.33)和 TNF-α(476.7±10.38)的分泌,与 LPS 组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能抑制LPS激活星形胶质细胞所致的炎性反应。     

白藜芦醇对脂多糖引起小胶质细胞激活的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resv)抑制脂多糖(LPS)引起的小胶质细胞激活的作用及机制。方法:将小胶质细胞分为对照组、100ng/ml的LPS刺激组、25μM的Resv+LPS组、沉默信息调节因子1(SIRT1)-siRNA+Resv+LPS组和SC-siRNA+Resv+LPS组,24h后,采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养上清液中促炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,相差显微镜观测细胞形态。结果:LPS暴露可显著激活小胶质细胞,增加促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌和iNOS表达,细胞形态从静息状态的多角形变为激活状态的圆形,白藜芦醇可显著抑制LPS对小胶质细胞产生的上述激活作用,而SIRT1-siRNA显著逆转了白藜芦醇产生的抑制小胶质细胞激活的作用。结论:白藜芦醇可通过SIRT1减轻LPS引起小胶质细胞激活。     

莱菔硫烷抑制LPS诱导的小鼠星形胶质细胞增殖

目的 探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(astrocyte,AST)增殖的影响及其机制.方法 体外培养小鼠原代星形胶质细胞,给予0.1 μg/mL LPS刺激星形胶质细胞活化增殖;同时分别给予不同浓度的莱菔硫烷(10、15、20 μmol/L)处理星形胶质细胞24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况;选取20 μmoL/L作为干预剂量行GFAP、Ki67双标免疫荧光染色及流式细胞仪细胞周期检测,进一步验证莱菔硫烷对LPS诱导星形胶质增殖的作用;Western blot检测细胞周期相关蛋白P27kip1、CyclinD1、PCNA的表达情况.结果 CCK8法检测显示0.1μg/mL LPS能显著促进星形胶质细胞增殖(P＜0.01),而加入20μmol/L莱菔硫烷能显著抑制LPS诱导的星形胶质细胞增殖(P＜0.01),并能减少LPS刺激下的Ki67阳性细胞(P＜0.05);细胞周期分析提示20 μmol/L莱菔硫烷可减少LPS诱导下的星形胶质细胞S期比例,增加G1期细胞比例(P＜0.05);Western blot提示20 μmol/L莱菔硫烷能下调LPS刺激下PCNA、CyclinD1的表达,上调P27kip1表达(P＜0.05).结论 莱菔硫烷可以通过调控星形胶质细胞细胞周期,抑制体外LPS诱导的星形胶质细胞增殖.     

化风丹对小胶质细胞介导的神经炎症反应的抑制作用

目的 观察化风丹对小胶质细胞介导的神经炎症反应的抑制作用.方法 采用原代大鼠小胶质细胞培养,通过脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞激活引起神经炎症反应.实验随机分为空白对照组、化风丹组(0.3 mg/mL)、模型组(10 ng/mL LPS)、LPS+化风丹组(0.03、0.1和0.3 mg/mL).实时反转录聚合酶链反应(Real - time RT - PCR)检测细胞中炎症因子mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Griess试剂检测细胞培养上清液中炎症因子蛋白含量的变化.结果 化风丹能够抑制LPS诱导的小胶质细胞内肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素-1β(IL- 1β和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的过度表达以及降低细胞培养上清液中TNFα、IL - 1β和一氧化氮(NO)的含量.结论 化风丹能够抑制小胶质细胞介导的神经炎症反应.     

ASK1在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用

目的 探讨细胞凋亡信号调节蛋白1 (ASK1)在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用.方法 原代培养得到高纯度(＞96％)大鼠脊髓星形胶质细胞,建立星形胶质细胞损伤模型.星形胶质细胞损伤后立即给予生理盐水(损伤模型组)、ASK1特异性抑制剂(Trx组)、ASK1特异性抗体(抗体中和组)处理;对照组为原代大鼠脊髓星形胶质细胞,不作任何处理.应用蛋白质印迹法检测星形胶质细胞标志蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况,应用免疫荧光标记技术检测星形胶质细胞划痕宽度的变化,应用CCK-8法检测星形胶质细胞增殖活性.结果 损伤后24 h及72 h损伤模型组GFAP和Vimentin蛋白的表达均显著高于对照组、Trx组和抗体中和组(P＜0.01);损伤后24 h及72 h损伤模型组星形胶质细胞划痕平均宽度明显小于对照组、Trx组和抗体中和组(P＜0.01);损伤后12h、24 h、72 h对照组、Trx组和抗体中和组星形胶质细胞增殖活性明显低于损伤模型组(P＜0.05).结论 大鼠脊髓星形胶质细胞损伤后阻断ASK1可抑制其细胞增生.     

枸橼酸铁铵对小胶质细胞释放炎性因子的作用

目的观察枸橼酸铁铵(FAC)对小胶质细胞释放炎性因子的作用。方法分别用脂多糖(LPS)、FAC、LPS+FAC刺激小胶质细胞,采用酶联免疫吸附试验方法检测培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果对照组和FAC组几乎检测不到炎性因子的释放,LPS组IL-1β、TNF-α释放量较对照组显著增加(F=38.864、102.504,q=8.204、14.369,P0.01),LPS+FAC组IL-1β、TNF-α释放量较LPS组显著增加(q=4.517、5.610,P0.01)。结论 FAC可以刺激激活状态小胶质细胞释放大量炎性因子。     

RIPK1调控LPS诱导的星形胶质细胞神经炎症的作用机制

目的 探究坏死性凋亡抑制剂（necrostatin-1, Nec-1）抑制受体相互作用激酶1(receptor-interacting protein kinase 1, RIPK1)对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的星形胶质细胞神经炎症模型的作用。方法 采用星形胶质细胞（MA细胞）,随机分为4组：Control组、LPS组、Nec-1组及Nec-1+LPS组。使用RIPK1抑制剂Nec-1(50μM预处理30 min,共处理24 h)作为给药手段,使用LPS(0.1μg/mL处理24 h)刺激小鼠星形胶质细胞系（MA细胞）构建神经炎症细胞模型。使用3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四氮唑鎓溴化物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide, MTT]检测细胞活力,以确定LPS的安全浓度;利用免疫印迹（western blotting）法检测RIPK1的表达,以确定LPS和Nec-1的最终工作浓度;使用实时荧光定量PCR(realtime quan...     

枸杞叶及枸杞多糖对星形胶质细胞α7nAChR的表达影响

【目的】 探讨不同剂量枸杞叶和枸杞多糖对5、7个月龄快速老化模型小鼠SAMP8脑海马星形胶质细胞及原代培养的SD大鼠脑海马星形胶质细胞α7nAChR表达的影响。 【方法】 实验一:选用 5、7 个月龄SAMP8,以同龄正常老化SAMR1 为正常对照。SAMP8随机分为给药组和对照组,给药组分为枸杞叶全汁高、低剂量组和枸杞多糖高、低剂量组。给药组灌胃服用高、低剂量枸杞叶全汁或枸杞多糖,每天1次,连续8周,对照组灌胃服用等量蒸馏水;免疫荧光双标染色检测SAMP8脑海马星形胶质细胞α7nAChR的表达。实验二:用含10%、20%枸杞叶及枸杞多糖脑脊液培养海马原代星形胶质细胞,于给药后培养24、36、48、72 h后收集细胞,采用MTS细胞活性检测,免疫荧光及蛋白质印迹法检测α7nAChR的表达。 【结果】 实验一:免疫荧光双标结果显示:(1)5、7 个月龄SAMR1较同月龄SAMP8脑海马区星形胶质细胞和α7nAChR阳性细胞表达均减少;(2)5个月龄SAMP8对照组较7个月龄SAMP8对照组脑海马区星形胶质细胞和α7nAChR阳性细胞表达均减少;(3)5、7个月龄SAMP8各给药组与同月龄SAMP8对照组比较,各给药组脑海马区星形胶质细胞和α7nAChR阳性细胞表达均减少;(4)同月龄高、低剂量组间无明显变化。实验二:(1)细胞活性结果显示:与空白脑脊液组比较,含10%、20%枸杞叶及枸杞多糖脑脊液培养海马原代星形胶质细胞36、48、72 h后,其细胞的活性均增加,但10%枸杞多糖脑脊液组有显著性差异;(2)蛋白质印迹结果显示:与空白脑脊液组比较,含10%、20%枸杞叶及枸杞多糖脑脊液培养海马原代星形胶质细胞36、48 h后,α7nAChR表达均增加,但10%枸杞多糖脑脊液组有显著性差异。 【结论】 不同剂量枸杞叶和枸杞多糖对5、7个月龄快速老化模型小鼠SAMP8及原代培养的SD大鼠脑海马星形胶质细胞α7nAChR表达均有影响。     

静脉麻醉药对脂多糖诱导的神经胶质细胞产生TNF-α的影响

目的:神经胶质细胞介导的炎性反应与中枢神经系统多种病理过程有关,本研究旨在探讨静脉麻醉药对神经系统炎性损伤可能的保护作用.方法:本研究采用体外原代培养神经胶质细胞,以细菌脂多糖(LPS)诱导神经胶质细胞的炎性反应,实验分为8组:空白对照组(C组)、LPS对照组(L组)、100 μmol/L氯胺酮加LPS组(K1组)、1 000 μmol/L氯胺酮加LPS组(K2组)、30 μmol/L丙泊酚加LPS组(P1组)、300 μmol/L丙泊酚加LPS组(P2组)、3 μmol/L咪唑安定加LPS组(M1组)和30 μmol/L咪唑安定加LPS组(M2组),放射免疫法检测神经胶质细胞的炎性介质TNF-α的产生.结果:L组、K1组、K2组、P1组、P2组、M1组和M2组TNF-α较C组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).K1组和K2组较L组TNF-α的生成减少,差异有统计学意义(P＜0.05),P1组、P2组、M1组和M2组与L组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:氯胺酮可抑制神经胶质细胞的炎性反应中的TNF-α的释放,由此产生一定的抗炎作用.而丙泊酚和咪唑安定对LPS诱导的神经胶质细胞的TNF-α的产生无明显影响.     

星形胶质细胞抑制T细胞增殖及机制探讨

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞分别与PHA刺激活化的小鼠T细胞进行共培养,观测其对T细胞增殖的影响,并分析可能的机制。结果小鼠原代星形胶质细胞在非活化状态下组成性表达B7.2和B7H1mRNA,在LPS和IFNγ刺激活化24h后B7H1的表达减少,而同时诱导表达MHCⅡ和B7.1mRNA,而TNFα作用不明显;非活化的星形胶质细胞对PHA刺激活化的T细胞增殖具有明显的抑制作用,而活化的星形胶质细胞的抑制作用减弱。结论小鼠星形胶质细胞在非活化及活化状态下对T细胞增殖具有不同的作用,其机制可能与其表达不同的免疫分子有关。     

神经肽Y对小神经胶质细胞活化状态和生成TNF-α的影响及其作用机制

目的：探讨神经肽 Y（neuropeptide Y,NPY）对原代小神经胶质细胞生物活性及生成肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的影响及其作用机制。方法培养原代大鼠皮层小胶质细胞,将细胞分为 Control组、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组、NPY＋LPS 组、NPY 组和 BIBP3226＋NPY＋LPS 组,分别用无血清胶质细胞培养液、含 LPS 的无血清胶质细胞培养液、含 NPY 和 LPS 的无血清胶质细胞培养液、含 NPY 的无血清胶质细胞培养液和含 BIBP3226、NPY 和 LPS 无血清胶质细胞培养孵育细胞6 h。经免疫细胞化学荧光染色后,显微镜下观察小胶质细胞的形态学变化。ELISA 方法检测培养液中 TNF-α蛋白含量,RT-PCR 方法检测小胶质细胞中TNF-αmRNA 表达水平。结果 LPS 组 TNF-α的含量及细胞中 TNF-αmRNA 表达水平显著高于 Control 组（P ＜0．05）,小胶质细胞处于活化状态;LPS＋ NPY 组与 LPS 组相比,TNF-α蛋白和 mRNA 表达水平明显降低（P ＜0．05）,小胶质细胞活化水平降低;BIBP3226＋NPY＋LPS 组与 LPS＋NPY 组相比,TNF-α蛋白和 mRNA 表达水平显著增高（P ＜0．05）;LPS 组与 BIBP3226＋NPY＋LPS 组差异无统计学意义;NPY 组与 Control 组差异无统计学意义。结论 NPY 可以降低小神经胶质细胞的生物活性,抑制其生成 TNF-α,作用机制可能与 NPY Y1受体有关。     

LPS诱导小鼠脑星形胶质细胞激活及Bcl-2表达的变化

目的:探讨神经元和星形胶质细胞对外源性内毒素脂多糖(lipopolysacchride,LPS)刺激的反应,以及在对抗炎症反应时二者的相互关系.方法:成年C57BL/6J小鼠分成实验对照组和实验组,采用免疫组织化学和GFAP和Bcl-2免疫荧光双重标记技术,观察小鼠单次注射LPS入侧脑室后,GFAP和Bcl-2在脑内的分布、表达及时程变化,以及GFAP阳性星形胶质细胞与Bcl-2阳性神经元之间的关系.结果:PBS注射的对照组动物脑内GFAP阳性的星形胶质细胞主要分布于海马、梨状皮质、内嗅皮质、隔区、纹状体、杏仁核及主要的纤维束.LPS注射2 d后,GFAP阳性的星形胶质细胞明显被激活,尤其在脑室周围的脑实质,表现为细胞胞体相对增大,突起变粗.Bcl-2阳性神经元在注射后1 d出现表达,2 d明显增加,4 d为表达高峰.Bcl-2阳性神经元分布在第一、二运动皮质和躯体感觉皮质、隔、斜角带核、海马和中脑红核等.LPS注射4 d后,GFAP和Bcl-2免疫荧光双重标记染色切片显示:在脑内没有发现GFAP和Bcl-2双标细胞,但可见GFAP阳性星形胶质细胞和Bcl-2阳性神经元重叠.星形胶质细胞的突起可见于Bcl-2免疫荧光阳性神经元的鞘中.结论:LPS能诱导脑室周围的脑实质星形胶质细胞和神经元的激活,激活的星形胶质细胞和神经元可能参与脑内的免疫调节和保护性反应.星形胶质细胞的突起可见于Bcl-2免疫荧光阳性神经元的鞘中,表明两者之间关系密切.     

与缝隙连接43蛋白相关的星形胶质细胞通过外泌体对神经元保护作用的机制研究

目的:观察缝隙连接43(Cx43)蛋白参与星形胶质细胞来源的外泌体对神经元保护作用的机制.方法:采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取星形胶质细胞及神经元,建立共培养(Co-Culture)模型,给予神经元过氧化氢(H2O2)损伤,星形胶质细胞给予Cx43特异性阻断剂Gap26,分别建立(Co-Culture+H2O2)组及(Co-Culture+H2O2+Gap26)组,同时设单纯神经元损伤(Neuron+H2O2)组,通过蛋白免疫印记(WB)法,测定神经元骨架相关的紧密连接蛋白(ZO-1)、α-肌动蛋白(α-actin)、谷氨酸转运蛋白-1(GLT-1)、外泌体标记蛋白CD63和凋亡相关的Bax/Bcl-2比例的变化,采用高效液相色谱仪(HPLC)观察神经元谷氨酸(Glu),采用ELFA法检测氧化应激因子腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAPDH)氧化酶活性.结果:与(Neuron+H2O2)组相比,(Co-Culture+H2O2)组的神经元ZO-1、α-actin、GLT-1和CD63的表达明显上调,而Bax/Bcl-2比例、NAPDH氧化酶活性则明显降低(P<0.05).在给予Gap26后,可明显抑制以上星形胶质细胞对神经元的此种作用(P<0.05).结论:Cx43蛋白可促进星形胶质细胞的外泌体被神经元吸收,可产生稳定细胞形态结构、加强兴奋性氨基酸转运及降低神经元凋亡和氧化应激损伤等神经保护功能.     

阿魏酸钠抑制脂多糖引起的星形胶质细胞IL-1β的表达

目的 研究阿魏酸钠(SF)对脂多糖(LPS)引起的培养星形胶质细胞(AC)白细胞介素-1β (IL-1β)表达的抑制作用及机制.方法 将培养星形胶质细胞分为对照组、LPS组、SF(50,100,200μmol·L-1)组.细胞成熟后分组给药处理,ELISA法测定培养液中IL-1β表达,Western蛋白印迹法检测细胞IL-13、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达.结果 星形胶质细胞在LPS (10 mg·L“)刺激下IL-1β的释放量、IL-1β蛋白以及磷酸化JNK1、磷酸化C-Jun蛋白表达水平较对照组明显增高(P＜0.01).应用SF(50,100,200 μmol·L-1)预处理6h明显降低培养液中IL-1β含量,抑制星形胶质细胞IL-1β、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达水平.结论 SF可能通过下调JNK信号通路抑制星形胶质细胞IL-1β表达.