Fmr1基因敲除小鼠血清雌性激素含量的比较研究

目的 测定不同周龄和超排前后雌性Fmr1基因敲除FVB小鼠和背景FVB小鼠血清生殖激素雌二醇(E2)、孕酮(P)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)含量,比较不同周龄和不同状态下敲除基因动物的血清性激素水平,研究敲除基因对动物的发育和生殖生理等方面的影响.方法 用放射免疫分析法测定上述动物不同周龄和超排前后血清E2、P、LH和FSH的含量,测定Fmr1基因敲除小鼠不同周龄时的超排卵数,进行统计学分析.结果 6周龄的雌性Fmr1基因敲除小鼠与FVB小鼠比较,LH、FSH值差异无显著性(P＞0.05),E2的P值差异有显著性(P＜0.05).10周龄的两组动物间血清生殖激素水平和超排卵数均差异无显著性(P＞0.05).10周龄Fmr1基因敲除小鼠的超排卵数与6周龄动物比较差异有显著性(P＜0.05).结论 敲除Fmr1基因对动物雌性激素的分泌有影响,该基因与动物的生殖生理有一定的关联.     

酸性神经肽1对吗啡成瘾小鼠脑内GABA及环核苷酸含量的影响

目的:探讨酸性神经肽1(bovineacidicneuropeptide1,BANP- 1)对吗啡成瘾小鼠脑内γ 氨基丁酸(γ ami nobutyricacid,GABA)及环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量的影响。方法:48只昆明小鼠随机分为4 组,前10d,吗啡成瘾组、戒断组和BANP -1治疗组每d按100mg/kg注射盐酸吗啡,对照组每d注射生理盐水。第 11d,对照组在注射生理盐水后8h断头处死;吗啡成瘾组在注射盐酸吗啡8h后处死;戒断组在注射盐酸吗啡7.5 h后按4mg/kg注射盐酸纳络酮,0.5h后断头处死;治疗组在注射盐酸吗啡6h后按15mg/kg注射BANP- 1,1.5h 后按4mg/kg注射盐酸纳络酮,0.5h后断头处死。取脑组织匀浆,应用滤纸电泳法测定GABA,应用放射免疫法测 定cAMP和cGMP。结果:吗啡成瘾组各项指标与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);戒断组cAMP、cGMP 较对照组升高(P<0.05);BANP 1治疗组GABA及cGMP均高于对照组及戒断组(P<0.01)。结论:BANP- 1可能 通过调节吗啡成瘾小鼠脑内GABA及cGMP水平而发挥治疗作用。     

X线照射对实验性癫痫大鼠脑皮层GABA和GABA_A受体的影响

目的探讨癫痫大鼠放射治疗中γ-氨基丁酸(GABA)及其受体的作用机制并选择合理放射剂量。方法利用慢性点燃癫痫大鼠对照组、放射1组、放射3组进行0、24、6Gy的X线放射,对放射2组、放射4组和放射5组行12Gy的X线放射,每组10只,对照组和放射1组、放射3组于放射后1h断头取脑,放射4组于放射后1天、放射5组于放射后1周进行断头取脑,并观察放射5组其放射后癫痫发作情况,用氨基酸分析仪测定各组癫痫大鼠额叶皮层内的GABA含量变化,利用免疫组织化学方法观察抗GABAA受体阳性率。结果放射5组于照射后1周内癫痫在鼠未出现诱发癫痫发作。放射1组的GABA含量为(254.16±44.68)ng,GABAA受体阳性率为(39.56±7.22)%,均明显高于对照组,12Gy照射后1h、24h、1周后均较对照组间GABA含量高,其中以24h最为明显,分别为(252.09±33.89)ng,(348.73±56.00)ng和(258.02±62.95)ng。抗GABAA受体阳性率在照射后1周内基本稳定于较高水平。结论放射治疗癫痫主要是通过发生快速而持续的GABA与GABAA受体变化发生作用,癫痫大鼠接受12Gy的放射治疗较为合理。     

对Ghrelin/GHSR-1a/GABA通路关键因子在胃食管反流病肝郁证模型中表达水平的研究

目的 研究胃饥饿素/生长激素促分泌性受体/γ-氨基丁酸(Ghrelin/GHSR-1a/GABA)通路的关键因子在胃食管反流病肝郁证大鼠模型中的表达情况,建立相关病证结合动物模型.方法 将55只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、胃食管反流病组、肝郁证组、胃食管反流病肝郁证组,每组11只.以食管十二指肠侧吻合术制备胃食管反流病模型,以慢性不可预见性刺激制备中医肝郁证模型,以食管十二指肠侧吻合术联合慢性不可预见性刺激制备胃食管反流病肝郁证模型.进行糖水偏爱实验、旷场实验、食管上皮HE病理观察,检测血清及胃组织Ghrelin、下丘脑GABA和GHSR-1a表达.结果 分别与正常组、胃食管反流病组比较,胃食管反流病肝郁证组大鼠糖水偏好比和旷场实验总穿格数降低(P<0.01)、中央区持续停留时间缩短(P<0.01),血清中Ghrelin含量增高(P<0.01),胃组织中Ghrelin阳性细胞表达数及下丘脑GHSR-1 a蛋白表达增加(P<0.01).与假手术组比较,胃食管反流病肝郁证组大鼠下丘脑中GABA含量降低(P<0.05).结论 食管十二指肠侧吻合术联合慢性不可预见性刺激可以制备胃食管反流病肝郁证模型,该病证结合大鼠模型血清及胃Ghrelin表达增高,下丘脑GHSR-1 a蛋白表达增高、GABA含量降低.     

FMR1基因敲除对雌性小鼠生殖功能的影响

目的利用FMR1基因敲除小鼠,研究FMR1基因缺失对雌性小鼠生殖功能的影响,并对其影响机制进行探讨。方法将成年的KO纯合子、KO杂合子、WT雌鼠分别和成年的WT雄鼠合笼,观察合笼时间及产仔数;随机取10周的上述3种基因型雌鼠,HE染色观察卵巢形态;免疫组化测定NPY和GABA在下丘脑的分布,Image Pro Plus 6.0分析平均光密度值;ELISA测定血清NPY水平。结果 3组小鼠中,KO纯合子雌鼠的产仔数少于WT雌鼠(6.39±2.30)、(7.60±2.69)和(8.00±1.88);KO纯合子雌鼠的卵泡总数少于WT雌鼠(36.00±5)、(39.33±7.87)和(45.45±7.85);KO纯合子雌鼠下丘脑NPY的表达弱于WT雌鼠(0.27±0.016)、(0.29±0.04)和(0.31±0.041);血清NPY及下丘脑GABA的表达三组间差异均无显著性(P>0.05)。结论FMR1基因敲除可导致雌鼠生育功能下降,FMR1基因可能是通过下调NPY的表达来降低其生殖功能的。     

Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响

目的：Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响.方法：挑选10周龄FVB小鼠和Fmr1基因敲除小鼠各20只（雌、雄各半）,采取1∶1同居,全同胞兄妹近交繁殖,测定子代生长发育指标,进行统计分析.结果：Fmr1基因敲除小鼠体质量与体长分别为：0 d,（1.25.4±0.21）g,（38.99±1.74）mm;21 d,（8.17±2.26）g,（122.81±11.42）mm;60 d,（22.93±2.93）g,（180.19±7.46）mm;FVB小鼠体质量与体长分别为：0 d,（1.33±0.23）g,（40.53±3.05）mm;21 d,（7.75±1.56）g,（118.73±7.85）mm;60 d,（21.11±1.99）g,（176.43±5.73）mm.两个品系的小鼠体质量与体长的增长差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：Fmr1基因敲除不影响小鼠正常的生长发育.     

TSHR及活性多肽对BALB/c小鼠甲状腺的影响

目的:探讨促甲状腺激素受体(TSHR)及活性多肽对BALB/c小鼠甲状腺的影响。方法:对BALB/c小鼠腹腔注射血蓝蛋白耦联的人TSHR(hTSHRaa352～366)和从豚鼠脂肪细胞提取的TSHR(gTSHR)进行免疫,每2周免疫1次共6次,每次免疫前2d取血,检测血清T4、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平。12周后处死小鼠,取甲状腺做病理组织学检查。结果:血清T4水平hTSHRaa352～366组从第6周开始下降(P<0.01),而且一直维持到12周,血清TRAb水平明显升高(P<0.01),甲状腺组织显示滤泡上皮细胞扁平、核缺失、皱缩、胶质浓缩等甲状腺功能减退病理改变;gTSHR组血清T4水平在第6周已下降,而12周时有的下降、有的则升高,无统计学意义,血清TRAb水平升高(P<0.01),甲状腺组织出现不均一的病理表现。结论:hTSHRaa352～366刺激BALB/c小鼠产生TRAb和促甲状腺激素受体抑制抗体(TBAb),抑制促甲状腺激素(TSH)与TSHR结合,降低了甲状腺激素T4水平;而gTSHR刺激BALB/c小鼠同时产生TRAb、促甲状腺激素受体刺激抗体(TSAb)和TBAb,引起甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退。     

益气活血方对脑缺血大鼠脑组织Glu、GABA及NR1表达的影响

目的观察益气活血方对急性脑缺血再灌注大鼠缺血脑组织谷氨酸（glutamate,Glu）、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyrate acid,GABA）含量及神经受体1（neuroreceptor1,NR1）表达的影响。方法采用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉复制局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血汤组。采用高效液相色谱法和链霉亲合素-生物素酶复合物（streptavidin-biotinidase complex,SABC）染色法,分别检测Glu、GABA含量和NR1表达水平。结果脑缺血2h再灌注各时间点与假手术组比较,模型组Glu、GABA含量和NR1表达均显著升高（P〈0．05,P〈0．01）;与模型组比较,治疗组脑缺血后6,48,72hGlu、NR1水平显著降低;72h GABA含量显著提高（P〈0．01）。结论益气活血方可能通过调节兴奋性氨基酸Glu和抑制性氨基酸GABA含量的平衡,及减少NR1表达防止脑缺血再灌注损伤。     

人参总皂甙对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区GABA表达及细胞凋亡的影响

目的探讨人参总皂甙对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法将40只Wis-ter大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、治疗组1、治疗组2,采用线拴法制备大鼠脑缺血再灌注模型,在72h断头取脑,石蜡切片行GABA、TUNEL染色,计算凋亡细胞数及GABA阳性反应数。结果治疗组与缺血再灌注组比较海马CA1区凋亡细胞数减少,γ-氨基丁酸(GABA)阳性反应数增多(P<0.01)。结论人参总皂甙能明显增强局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元GABA的表达,抑制神经细胞凋亡,而发挥神经保护作用。     

酸性神经肽1对小鼠大脑氨基酸类神经递质及cGMP影响的实验研究

目的 :探讨酸性神经肽 (bovineacidicneuropeptide 1BANP 1)对小鼠脑内氨基酸类递质 (谷氨酸和γ 氨基丁酸 )及cGMP的影响。方法 :将小鼠随机分为 6组 (每组 15只 ) ,其中 5组按 15mg/kg腹腔注射BANP 1,将小鼠在注射后 0 5h ,1h ,2h ,3h ,4h处死并取脑匀浆 ,另一组为注射生理盐水对照组 ,在注射盐水后 1h处死并取脑匀浆 ,用 75 %冰乙醇抽提氨基酸类物质及cGMP并沉淀蛋白质。应用滤纸电泳法对小鼠大脑谷氨酸 (glutamicacid ,Glu)和γ 氨基丁酸 (γ aminobutyricacid ,GABA)进行测定 ,应用放射免疫法对小鼠大脑环磷酸鸟苷 (cyclicmonophos phateguanosine ,cGMP)进行测定。结果 :腹腔注射BANP 1后 ,各项指标在不同时间的结果分别与对照组比较 :Glu浓度在 1h、2h时明显高于对照组 (P <0 0 1) ,0 5h、3h、4h时差异无显著性 (P >0 0 5 )。GABA浓度在 2h、3h时显著高于对照组 (P <0 0 1) ,0 5h、1h、4h时差异无显著性 (P >0 0 1)。cGMP浓度有一定升高 ,1h 2h时显著升高 (P <0 0 1) ,其余各时间组差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :BANP 1急性用药后在一定时间可升高脑内Glu、GABA及cGMP水平     

Rif1通过BMP4信号传导通路影响小鼠胚胎干细胞自我更新和分化的作用机制

[目的]研究Rif1通过BMP4信号传导通路影响小鼠胚胎干细胞自我更新和分化的作用机制.[方法]从基因表达数据库中下载基因芯片数据(GSE 55129),采用R软件包分别对长期、短期干扰Rif1后的表达谱数据做预处理并筛选差异基因.取长期干扰Rif1的差异基因进行KEGG分析,采用RT-qPCR对KEGG结果进行验证,取短期干扰Rif1的差异基因进行GO分析,选择与胚胎发育有关的基因整合到相关的KEGG通路中.[结果]KEGG分析结果显示,Rif1与TGF-β(BMP4)信号传导通路高度相关(P<0.01);RT-qPCR验证结果证实BMP4表达明显升高(P<0.05);GO分析结果与活化BMP4通路后的效应相一致.[结论]Rif1通过BMP4信号传导通路影响小鼠胚胎干细胞的自我更新和分化.     

灵芝乙醇提取物对宫颈癌细胞生物学行为和JAK1/STAT3信号通路的影响

目的：探讨灵芝乙醇提取物(GLEE)对宫颈癌细胞生物学行为和Janus激酶1 (JAK1)/信号传导和转录激活因子3 (STAT3)信号通路的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将人宫颈癌HeLa细胞随机分为对照组(给予完全培养液)和低、中及高剂量GLEE组(给予25、50、100 mg·L^-1GLEE)。MTT法检测各组细胞增殖抑制率,平板克隆实验检测各组克隆形成率,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中JAK1、磷酸化JAK1 (p-JAK1)、STAT3、磷酸化STAT3 (p-STAT3)、细胞因子信号传导抑制蛋白3 (SOCS3)和活化STAT蛋白抑制因子1 (PIAS1)蛋白表达水平。结果：与对照组比较,低、中和高剂量GLEE组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率升高(P<0.05),细胞克隆形成率、迁移细胞数和侵袭细胞数降低(P<0.05),细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平降...     

Toll样受体2/4-核因子κB信号通路在人结核分枝杆菌侵入小鼠树突细胞2.4中的作用

目的：研究人结核分枝杆菌侵入抗原提呈细胞后诱导树突细胞（DC）成熟的机制。方法：选择小鼠DC2.4细胞株为抗原提呈细胞的效应细胞,建立人结核分枝杆菌H37Rv株的细胞混合培养模型。在不同混合培养时段,采用实时荧光定量PCR检测DC2.4细胞Toll样受体2（TLR2）、TLR4 mRNA的表达量;蛋白质印迹法检测DC的核因子κB(NF-κB)p65蛋白的表达;免疫酶联吸附试验定量检测DC产生α肿瘤坏死因子（TNF-α）的水平;采用间接免疫荧光法和流式细胞术检测DC2.4表面CD80和CD86的表达情况。结果：H37Rv与DC2.4共培养2 h后开始有细菌侵入;共培养 6、8、10、12 h后,细菌侵入率分别为(37.9±5.6)%、(512±7.6)%、(57.2±8.9)%、(639±12.4)%;TLR2、TLR4 mRNA也开始增量,共培养10 h时达高峰,之后开始下降;共培养6 h时,NF-κB p65的表达量明显增高;TNF-α的表达量在共培养6 h开始上调,8 h时达高峰,随后逐渐下降;共培养6 h时,DC2.4表面CD80、CD86表达量明显增高。结论：人结核分枝杆菌侵入DC2.4时,通过激活TLR2/4-NF-κB信号通路,诱导DC成熟,提高其抗原提呈能力。     

激活小鼠ZI区GABA能神经元可促进七氟醚和丙泊酚的麻醉诱导而对麻醉维持及觉醒无影响

目的 探索未定带区（ZI）γ-氨基丁酸（GABA）能神经元对七氟醚和丙泊酚麻醉-觉醒的调控作用。方法 将48只雄性C57BL/6J小鼠分为8组（6只/组）。研究七氟醚麻醉时,化学遗传学实验分为hM3Dq组（注射携带hM3Dq的腺相关病毒）和mCherry组（注射仅携带mCherry的对照病毒）;光遗传学实验分为ChR2组（注射携带ChR2的腺相关病毒）和GFP组（注射仅携带GFP的对照病毒）,注射剂量均为100 nL。研究丙泊酚麻醉时,化学遗传学实验分为hM3Dq组和mCherry组;光遗传学实验分为ChR2组和GFP组。上述各组处理方法同七氟醚。通过化学遗传学和光遗传学技术激活ZI区GABA能神经元,观察其对七氟醚和丙泊酚的麻醉诱导及觉醒的调节作用,通过脑电监测观察其在七氟醚麻醉维持中的作用。结果 在七氟醚麻醉中,与mCherry组比,hM3Dq组麻醉诱导时间显著缩短（P<0.05）,与GFP组比,ChR2组麻醉诱导时间显著缩短（P<0.01）,而两实验中麻醉觉醒时间差异均无统计学意义。在丙泊酚麻醉中,hM3Dq组比mCherry组麻醉诱导时间显著缩短（P<0.05...     

羟基红花黄色素A对慢性束缚应激模型小鼠抑郁样行为及海马GABAAR表达的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A, HSYA)对慢性束缚应激模型小鼠抑郁样行为及海马γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)A型受体(type A GABA receptor, GABAAR)表达的影响。方法将健康雄性SPF级C57BL/6C小鼠按照随机数字表法分为对照组、HSYA组、模型组、模型+HSYA组、模型+氟西汀组, 每组12只。采用慢性束缚应激方法建立抑郁小鼠模型, HSYA组和模型+HSYA组小鼠腹腔注射给予HSYA(20 mg/kg), 模型+氟西汀组小鼠腹腔注射氟西汀(10 mg/kg), 对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液, 1次/d, 连续给药14 d。采用强迫游泳实验和悬尾实验评价动物的抑郁样行为, Western blot检测小鼠海马组织内GABAAR不同亚型的蛋白表达水平。采用SPSS 19.0和GraphPad Prism 8.0软件分析数据和制图, 多组间比较采用单因素方差分析, 进一步两两比较采用Tukey-HSD检验。结果 (1)在行为学实验中, 5组小鼠在强迫游泳实验中的...     

补肾调肝法对自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢促卵泡生成素受体mRNA表达的影响

目的旨在探讨补肾调肝法对自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢促卵泡生成素受体(FSHR)mRNA表达的影响。方法随机将60只小鼠分为6组,5组制作免疫性小鼠卵巢早衰模型(分别为模型组、西药组、中药高剂量组、中药中剂量组和中药低剂量组),另设1组为空白对照组。造模成功后第6天开始各药物组灌胃给药。连续灌胃4周后摘眼球取血,取卵巢组织待测。采用RT-PCR方法研究免疫性卵巢早衰小鼠的卵巢FSHR mRNA表达。结果卵巢FSHR mRNA表达模型组高于空白对照组,用药后表达均降低,总体趋势:中药高剂量组>西药组>中药中剂量组>中药低剂量组。结论补肾调肝方剂对自身免疫性卵巢早衰小鼠有一定的治疗作用,其治疗机理主要通过纠正紊乱的生殖内分泌轴,调动下丘脑—垂体—卵巢的生殖功能,改善临床症状,进一步对免疫性卵巢早衰起到一定的防治作用。     

胰腺β细胞生长激素受体基因敲除对STZ诱发1型糖尿病小鼠的影响

目的：利用胰腺β细胞组织特异性生长激素受体（GHR）基因敲除小鼠结合链脲佐菌素(STZ )诱导1型糖尿病模型,从基因水平研究胰腺β细胞GHR缺失对1型糖尿病的影响。方法： 实验小鼠分4组,包括LLc对照组［胰腺β细胞特异敲除GHR小鼠（βGHRKO,LLc）、LL对照组［含有GHR等位基因纯合子小鼠(LL)］、LLc STZ组及LL STZ组（LLc 小鼠和LL小鼠分别给予STZ注射造模）,小鼠餐后血糖≥25 mmol•L^-1为造模成功。对小鼠进行葡萄糖耐量实验（GTT）、小鼠胰腺组织HE染色和免疫组织化学检测。结果：STZ注射后,LL STZ组和LLc STZ组小鼠血糖出现上升趋势,16 d后达到1型糖尿病诊断标准。GTT,LL STZ组和LLc STZ组小鼠血糖值分别较LL对照组和LLc 对照组小鼠血糖值明显升高（P<0.05）,HE染色,与LL 对照组比较,LLc 对照组小鼠胰岛形态及结构无明显变化;LL STZ和LLc STZ组小鼠胰岛萎缩,β细胞数量明显减少。免疫组织化学检测,LL STZ组较LL对照组小鼠胰岛素分泌显著减少,LLc STZ组较LLc 对照组小鼠胰岛素分泌显著减少。结论：在STZ诱导1型糖尿病条件下,胰腺β细胞GHR基因敲除对1型　糖尿病小鼠血糖及β细胞功能无明显影响。