二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖与凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖、凋亡的影响,探讨其相关分子机制。方法应用1、2．5、5、10、20、40、60mmol／L二甲双胍处理人胰腺癌CFPAC-1细胞24、48、72h,以未处理的细胞作为对照组。采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测磷酸化AMPK（p-AMPK）、FAS、cyclinD1、Bcl-xl、Bax、caspase-3、survivin蛋白的表达。结果二甲双胍呈浓度及时间依赖性抑制CFPAC-1细胞的增殖。40mmol／L二甲双胍处理细胞48h后,G0／G1细胞比例显著增多[（65．93±0.27）％比（42．89±1．02）％],G2／M期、s期细胞比例显著减少[（22．01±2．95）％比（38．28±4．93）％,（13．58±0．43）％比（20．12±3．38）％],差异均有统计学意义（P值均〈0．05）;细胞凋亡率从对照组的（3．01±0．49）％增加到（32．97±3．19）％（P〈0．05）;p-AMPK、Bax、caspase-3表达增强,FAS、cyclinD1、Bcl-xl、survivin表达减弱。结论二甲双胍可以显著抑制CFPAC-1细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路,下调FAS、cyclinD1、survivin表达及Bcl-xl／Bax比值,上调caspase-3表达所致。     

二甲双胍对急性肺损伤细胞凋亡、迁移和上皮-间质转化的影响及机制研究

目的 探讨二甲双胍对急性肺损伤细胞凋亡、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响及机制。方法本实验时间为2022年6—11月。将人肺泡上皮细胞(A549细胞)分为对照组、过氧化氢(H₂O₂)组、2.5 mmol/L二甲双胍组、5.0 mmol/L二甲双胍组、10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组，对照组不做任何干预；H₂O₂组加入400μmol/L H₂O₂作用24 h，以构建急性肺损伤细胞模型；2.5 mmol/L二甲双胍组、5.0 mmol/L二甲双胍组、10.0 mmol/L二甲双胍组在H₂O₂组基础上分别加入2.5、5.0、10.0 mmol/L二甲双胍进行干预；SB203580组在H₂O₂组基础上加入10.0 mmol/L p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制剂——SB203580进行干预，选取细胞活力最佳时的药物浓度进行后续实验...     

二甲双胍对草酸钙诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激及炎症反应调节作用观察

目的 观察二甲双胍对草酸钙诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激及炎症反应的调节作用。方法 将HK-2细胞随机分成对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组，其中对照组给予无血清DMEM培养基，草酸钙组加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液，二甲双胍组1加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液和1.20 mmol/L的二甲双胍晶体悬浮液，二甲双胍组2加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液和0.80 mmol/L的二甲双胍晶体悬浮液，PDTC组加入浓度为100μg/m L的草酸钙晶体悬浮液和100 mmol/L的NF-κB特异性抑制剂PDTC晶体悬浮液。各组细胞继续培养6 h，采用比色法检测细胞上清液中丙二醛（MDA），采用Elisa法检测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白，采用RT-PCR法检测细胞中NF-κB、MCP-1 mRNA。结果 对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组细胞上清液中MDA含量分别为（0.21±0.02）、（1.62±0.09）、（1.04±0.01）、（1.27±0.12）、（0.83±0.0...     

二甲双胍对脂多糖诱导的THP-1细胞相关炎症因子及凋亡的影响

目的 通过观察二甲双胍对脂多糖诱导的人单核细胞(THP-1)相关炎症因子分泌及凋亡影响的剂量效应关系,探讨二甲双胍的直接抗炎作用.方法 体外培养人THP-1细胞,以1μg/ml脂多糖和不同浓度二甲双胍分别孵育6、24和48 h,收集细胞及培养液上清进行检测.应用乳酸脱氢酶微量释放法检测不同浓度二甲双胍对THP-1细胞的毒性作用,酶联免疫吸附法检测上清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,流式细胞仪Annexin V/碘化丙啶双染色法测定THP-1细胞早期凋亡率.结果 二甲双胍可剂量依赖性地降低上清IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α水平,且48 h作用最为显著.1和5 mmol/L二甲双胍显著降低脂多糖刺激的IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的分泌(P＜0.05或P＜0.01).并且二甲双胍可剂量依赖性地减少THP-1细胞早期凋亡数目(F=4.696,P=0.036);1、5 mmol/L二甲双胍组细胞早期凋亡率明显低于脂多糖组(37.47％、33.35％对49.90％,P＜0.05或P＜0.01).结论 二甲双胍可剂量依赖地降低脂多糖诱导的THP-1细胞炎症因子分泌及早期凋亡率,提示其有一定的直接抗炎作用.     

二甲双胍对胰岛素抵抗状态的小鼠胚胎成纤维细胞中腺苷酸活化蛋白激酶及葡萄糖转运子4表达的影响

目的 观察二甲双胍对IR状态的小鼠胚胎成纤维（3T3-L1）细胞中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）及葡萄糖转运子4（GluT4） mRNA表达的影响. 方法 诱导分化3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞并用油红O染色证明.用地塞米松诱导建立3T3-L1细胞IR模型,以葡萄糖氧化酶法测定不同时段细胞培养基中剩余葡萄糖浓度,以确定IR模型的建立.给予二甲双胍进行药物干预后,测定细胞培养基中剩余葡萄糖浓度并运用实时荧光定量PCR技术检测细胞AMPK和GluT4的mRNA基因水平.结果 药物干预组给予不同浓度二甲双胍后,细胞培养基中剩余葡萄糖浓度均较模型组降低（P＜0.01）.药物干预组AMPK、GluT4 mRNA水平较模型组均增加（P＜0.01）. 结论 二甲双胍上调处于IR状态的3T3-L1细胞中AMPK和GluT4 mRNA水平,增加细胞对葡萄糖利用.     

参芪复方对2型糖尿病GK大鼠胰岛β细胞凋亡及Caspase-表达的影响

目的观察参芪复方对自发性2型糖尿病（T2DM）动物GK大鼠胰岛8细胞凋亡的影响并探讨其可能机制。方法选取4月龄SPF级雄性GK大鼠50只，随机分为模型组、盐酸二甲双胍组、参芪复方低、高剂量组并另设正常对照组。连续灌药4w后，TUNEL染色观察各组胰岛β细胞凋亡指数（AI），并采用免疫组化染色，Mias-2000图像分析系统观察各组大鼠胰岛β细胞Caspase-3阳性物质积分光密度。结果模型及低剂量组β细胞AI较正常组显著增高（P〈0．01），各治疗组β细胞AI显著低于模型组（P〈0．01），高剂量组及二甲双胍组β细胞AI显著低于低剂量组（P〈0．01）且与正常组比较无统计学意义（P〉0．05）；模型及低剂量组胰岛Caspase-3积分光密度显著高于正常组（P〈0．01），高剂量组、二甲双胍组Caspase-3积分光密度显著低于模型组和低剂量组（P〈0．01），且与正常组比较无统计学意义（P〉0．05）。结论参芪复方能够抑制GK大鼠胰岛β细胞凋亡，机制可能与其抑制β细胞Caspase-3表达有关。     

二甲双胍对波动性高糖诱导的内皮细胞功能障碍的逆转作用及其机制

目的探讨二甲双胍对波动性高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）作为研究对象,分为6组：正常葡萄糖对照组、高渗对照组、持续性高糖组、波动J生高糖组、波动性高糖＋二甲双胍组以及波动性高糖＋二甲双胍＋化合物C组,各组均干预72h。以硝酸还原酶法检测细胞上清液亚硝酸盐浓度代表一氧化氮（NO）产生水平;流式细胞仪分析测定细胞内活性氧簇（ROS）水平;Westernblotting检测单磷酸腺苷激活蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（Thr-172,p-AMPK）及三磷酸鸟苷环化水解酶1（GTPCH1）的蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析和Q检验。结果（1）与正常葡萄糖对照组（100％）相比,波动性高糖组细胞内ROS水平增加[（222．4±62．0）％],NO水平下降[（70．3±7．1）％];添加二甲双胍后ROS水平降低[（100．2±17．4）％],NO水平升高[（96．3±9．2）％];添加AMPK抑制剂化合物c后ROS水平增加[（167．2±19．6）％],NO水平降低[（83．3±8．7）％]。差异均有统计学意义（均P〈0．05）。（2）与正常葡萄糖对照组相比,波动性高糖组p-AMPK[（1．72±0．08）比（2．34±0．09）]和GTPCH1[（4．07±0．17）比（7．83±0．56）]表达水平降低;添加二甲双胍后p-AMPK（2．72±0．22）和GTPCH1（10．24±1．05）表达水平增高;添加化合物C后GTPCH1表达水平降低（2．39±0．34）。差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论二甲双胍可通过激活AMPK信号通路,上调GTPCH1表达,从而改善波动性高糖所致的内皮细胞功能障碍。     

二甲双胍联合COX-2选择性抑制剂塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响

目的探讨二甲双胍联合环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度的二甲双胍和塞来昔布处理体外培养的SGC-7901细胞,MTT法检测细胞的存活率。联合实验分为:对照组(未加药)、二甲双胍组(加入浓度为10 mmol/L二甲双胍)、塞来昔布组(加入浓度为100μmol/L塞来昔布)和联合组(加入浓度为10 mmol/L二甲双胍和100μmol/L塞来昔布),药物作用72 h后,采用MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的周期变化和凋亡率,Western blotting检测PCNA、Cyclin D1、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果二甲双胍和塞来昔布均能够呈时间-剂量依赖性抑制SGC-7901细胞增殖。与对照组相比,各加药组细胞的存活率均明显降低(P0.05),且联合组细胞的存活率明显低于二甲双胍和塞来昔布单药处理组(P0.05)。二甲双胍和塞来昔布均可使SGC-7901细胞在G_0/G_1期所占百分比增加,S期百分比减少(P0.05),但二甲双胍对G_2期细胞无明显影响(P0.05),而塞来昔布可使G_2期细胞所占百分比降低(P0.05);两药联用可增强单药处理组对G_0/G_1期的阻滞(P0.05)。二甲双胍和塞来昔布单药处理组细胞的凋亡率明显高于对照组(P0.05),联合用药后细胞的凋亡率明显高于单药处理组(P0.05)。二甲双胍和塞来昔布均能使SGC-7901细胞中PCNA、Cyclin D1和Bcl-2表达降低,而Bax表达升高(P0.05);联合用药后,细胞中PCNA、Cyclin D1、Bax和Bcl-2的表达变化明显高于二甲双胍和塞来昔布的单药作用(P0.05)。结论二甲双胍和COX-2选择性抑制剂塞来昔布联合作用可协同抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调PCNA、Cyclin D1、Bcl-2和上调Bax表达有关。     

二甲双胍对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的　探讨二甲双胍对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响及其可能机制。方法　体外培养人脐静脉内皮细胞,建立缺氧/复氧模型,随机分为5组：正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+不同浓度（0.1、0.5、1.0　mmol/L）二甲双胍干预组。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,实时定量聚合酶链反应检测各组核因子κB/P65　mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测各组上清液中细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的浓度。结果　与对照组相比,缺氧/复氧组细胞凋亡增加（P<0.05）,核因子κB/P65　mRNA增加,同时细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的浓度均升高（P<0.05）;与缺氧/复氧组比较,二甲双胍预处理能减少缺氧/复氧所致人脐静脉细胞凋亡（P<0.05）,减少核因子κB/P65的mRNA的表达,同时细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的浓度均降低（P<0.05）,其中0.5　mmol/L浓度组保护作用最佳。结论　二甲双胍对缺氧/复氧损伤引起的人脐静脉内皮细胞损伤有保护作用,其机制可能与下调核因子κB/P65表达及抑制了细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的释放有关。     

二甲双胍对肺腺癌耐厄洛替尼细胞株A549ER的耐药逆转作用

目的 探讨二甲双胍对人肺腺癌耐厄洛替尼细胞株A549ER的耐药逆转作用.方法 将人肺腺癌细胞株A549细胞设为亲本组;将耐厄洛替尼细胞株A549ER细胞分为空白对照组、厄洛替尼组、二甲双胍组和联合用药组（厄洛替尼±二甲双胍组）,采用CCK8法检测不同浓度药物作用下各组细胞的50％抑制浓度（IC50）,计算耐药倍数和逆转倍数.采用流式细胞术检测各组A549ER细胞的凋亡率和细胞周期,计算增殖指数.结果 在0 ～ 20 mmol/L浓度范围内,二甲双胍对A549细胞及A549ER细胞均有生长抑制作用,抑制率随二甲双胍浓度升高而增加.厄洛替尼对A549细胞和A549ER的IC50分别为15.15 μmol/L和118.8 μmol/L,A549ER的耐药倍数为7.84.联合用药组A549ER细胞IC50为73.55 umol/L,耐药倍数为4.85.二甲双胍对A549ER厄洛替尼耐药性的逆转倍数为1.62.空白对照组、厄洛替尼组、二甲双胍组和联合用药组的凋亡率分别为（5.53±3.00）％、（7.51±3.73）％、（10.25 ±4.23）％和（16.92±1.20）％.根据细胞周期结果计算空白对照组、厄洛替尼组、二甲双胍组和联合用药组的增殖指数分别为0.84±0.15、0.78 ±0.10、0.73±0.08和0.60 ±0.09.结论 A549ER细胞较A549细胞对厄洛替尼有明显的耐药性;二甲双胍对A549ER细胞厄洛替尼的耐药性具有逆转作用;二甲双胍通过抑制细胞生长、促进细胞凋亡、减缓细胞周期进程等途径逆转A549ER细胞耐药.     

二十碳五烯酸抑制棕榈酸诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及机制

目的 探讨二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid，EPA)对棕榈酸（palimitate，PAL）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 以PAL诱导的乳鼠心肌细胞为模型，分为对照组、PAL组、EPA+PAL组、EPA+PAL+Compound C组；采用MTT法检测细胞存活率，TUNEL化学染色检测细胞凋亡率，Western blot检测乳鼠心肌细胞cleaved caspase 3、动力相关蛋白(Dynamin-related protein,Drp)1表达水平和腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）的磷酸化水平。结果 不同浓度PAL刺激细胞24 h，与对照组相比，400 μmol/L PAL诱导后细胞活性显著降低，凋亡率明显增加（P<0.05），凋亡相关蛋白cleaved caspase-3活性上调(P<0.05)，同时AMPK磷酸化水平降低(P<0.05)，Drp1表达增加(P<0.05)。但50 μmol/L EPA处理却通过激活AMPK磷酸化，抑制Drp1的表达，进而逆转PAL诱导的细胞凋亡（P<0.05）。AMPK阻断剂Compound C则通过抑制AMPK，激活Drp1活性，增加凋亡相关蛋白cleaved caspase 3的活性，从而削弱了EPA抵抗PAL诱导的细胞凋亡（P<0.05）。结论 EPA可通过激活AMPK，减少Drp1表达水平，从而抑制PAL诱导的乳鼠心肌细胞凋亡，这些结果为深入认识EPA的心肌保护作用提供了新的实验依据。     

Sevoflurane pretreatment inhibits the myocardial apoptosis caused by hypoxia reoxygenation through AMPK pathway:An experimental study

Objective:To study whether sevoflurane pretreatment inhibits the myocardial apoptosis caused by hypoxia reoxygenation through AMPK pathway.Methods:H9c2 myocardial cell lines were cultured and divided into control group(C group),hypoxia reoxygenation group(H/R group),sevoflurane pretreatment+hypoxia reoxygenation group(SP group) and sevoflurane combined with Compound C pretreatment+hypoxia reoxygenation group(ComC group),and the cell proliferation activity and apoptosis rate,myocardial enzyme levels in culture medium as well as the expression of apoptosis genes and p-AMPK in cells were determined.Results:p-AMPK expression in cells of H/R group was significantly lower than that of C group,SP group was significantly higher than that of H/R group;cell proliferation activity value and Bcl-2 expression in cells of H/R group were significantly lower than those of C group,SP group were significantly higher than those of H/R group,Com C group were significantly lower than those of SP group;apoptosis rate,LDH,CK and AST levels as well as the Bax and Caspase-3 expression in cells of H/R group were significantly higher than those of C group,SP group were significantly lower than those of H/R group,ComC group were significantly higher than those of SP group.Conclusions:Sevoflurane pretreatment can activate AMPK signaling pathway to inhibit the myocardial apoptosis caused by hypoxia reoxygenation.     

二甲双胍及甘精胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨二甲双胍（Met）、甘精胰岛素（Gla）或二者联合对入子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响. 方法 不同浓度Met、Gla或二者联合干预人子宫内膜癌Ishikawa细胞株不同时间.CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果 与对照1组比较,Met各浓度均可抑制Ishikawa细胞增殖,小剂量（5 mmol/L）可使增殖率下降18.4％.Met可诱导Ishikawa细胞凋亡,高浓度（20mmol/L）晚期凋亡率升高最显著（26.11％）.Gla可促进人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖,细胞凋亡率降低.Gla联合不同浓度Met,与同浓度同时间Gla干预对比,可抑制增殖,增加凋亡率. 结论 Met可抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖,促进其凋亡,并可阻断Gla对人子宫内膜癌细胞的促增殖作用.     

N-乙酰半胱氨酸通过AMPK/SIRT1途径抑制缺氧诱导的大鼠脑血管内皮细胞损伤

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对缺氧诱导脑血管内皮细胞损伤的调节作用及分子机制。方法选择SD大鼠分离培养脑血管内皮细胞,分为常氧组、缺氧组、0. 5 NAC组(缺氧+0. 5 mol/L NAC)、1. 0 NAC组(缺氧+1. 0 mol/L NAC)、NAC+8-bAMP组(缺氧+1. 0 mol/L NAC+1. 0 mol/L 8-bAMP)。采用MTS法检测细胞增殖活力,采用TUNEL染色检测凋亡率,采用试剂盒检测氧化应激指标,采用Western blot检测凋亡基因、AMPK/SIRT1通路分子的表达量。结果缺氧组细胞OD490值、T-AOC含量及B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、p-AMP活化蛋白激酶(pAMPK)、去乙酰化酶Sirtuin1(SIRT1)表达量均明显低于常氧组;缺氧组细胞凋亡率、细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)含量及bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt-C)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达量均明显高于常氧组。0. 5 NAC组、1. 0 NAC组细胞OD490值、T-AOC量及Bcl-2、pAMPK、SIRT1表达量均明显高于缺氧组; 0. 5 NAC组、1. 0 NAC组细胞凋亡率、ROS、MDA、8-OHDG含量及Caspase-3、Cyt-C、Bax的表达量均明显低于缺氧组。NAC+8-bAMP组细胞OD490值、T-AOC及Bcl-2、p-AMPK、SIRT1表达量均明显低于1. 0 NAC组; NAC+8-bAMP组凋亡率、ROS、MDA、8-OHDG含量及Caspase-3、Cyt-C、Bax的表达量均明显高于1. 0 NAC组。结论 NAC能够通过激活AMPK/SIRT1通路来减轻氧化应激及线粒体凋亡介导的脑血管内皮细胞损伤。     

二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响

背景:近年发现二甲双胍具有潜在抑制肿瘤的作用,但其在消化系肿瘤尤其是胃癌中的研究较少。目的:研究二甲双胍对人胃癌细胞株MKN45增殖和迁徙的影响,并初步探讨其可能机制。方法:体外培养人胃癌细胞株MKN45.予10mmol/L二甲双胍进行干预(联合或不联合5-氟尿嘧啶),以MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位,细胞划痕实验检测迁徙速率,RT-PCR检测AMPKα1、cyclin D1、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果:与对照组相比,二甲双胍作用后,MKN45细胞存活率显著降低,并呈浓度-时间依赖性,细胞凋亡率显著增加,线粒体膜电位显著下降,平均迁徙速率显著降低,cyclin D1、MMP-2、MMP-9mRNA表达均显著减少,Bcl-2、BaxmRNA表达显著增加但两者之比降低,AMPKα1 mRNA表达无明显差异。二甲双胍与5-氟尿嘧啶联用对MKN45细胞的存活率无明显协同作用。结论:二甲双胍能抑制人胃癌细胞株MKN45增殖、迁徙,可通过改变线粒体膜通透性促进细胞凋亡。     

山楂酸减少高糖介导的心肌细胞损伤和凋亡及其机制

目的 探讨山楂酸处理对高糖介导大鼠心肌细胞H9c2损伤和凋亡分子机制影响。 方法 以高糖诱导大鼠心肌细胞 H9c2为模型,采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤情况,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测AMPK的磷酸化水平以及Bcl-2、Bax的表达水平,免疫荧光检测细胞活性氧（ROS）的生成。 结果 ①与对照组相比,高糖组细胞LDH活性和细胞凋亡比率显著增高（P<0.05）,山楂酸处理却能抑制高糖诱导的H9c2细胞LDH的积累,降低细胞凋亡（P<0.05）。②Western blot检测显示,与对照组相比,高糖组p-AMPK、Bcl-2下调（P<0.05）,Bax上调（P<0.05）;与高糖组相比,山楂酸处理组p-AMPK、Bcl-2上调（P<0.05）,Bax下调（P<0.05）,给予AMPK阻断剂 Compound C后可以抑制山楂酸诱发的这些效应（P<0.05）。③ROS检测显示,山楂酸能够抑制高糖刺激的ROS的产生（P<0.05）,而AMPK拮抗剂compound c却能够拮抗山楂酸对ROS的抑制（P<0.05）。 结论 山楂酸能通过激活AMPK信号通路,从而增强BCl-2表达、抑制Bax和ROS生成,拮抗高糖诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡,对心肌细胞起保护作用。     

乙酰半胱氨酸对小鼠肺成纤维细胞系3T3增殖及胶原合成的影响

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)对小鼠肺成纤维细胞3T3增殖、凋亡和胶原合成的影响.方法 培养小鼠肺成纤维细胞3T3,不同浓度NAC处理后,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,RT-PCR检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化.结果 ①5、10、20、40 mmol/L NAC对3T3细胞生长均有明显抑制作用,且呈剂量依赖性;②5、10、20、40 mmol/L NAC作用24 h后,细胞凋亡率分别为(27.64±17.22)%、(33.73±14.82)%、(42.30±9.81)%和(69.27±11.50)%,均高于对照组(3.48±1.13)%(P<0.05或P<0.01);③5、10、20、40 mmol/L NAC能够引起G0/G1期细胞比例明显升高,S期比例明显降低(P值均<0.01);④5、10、20、40mmol/L NAC处理组3T3细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达均低于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 NAC可直接抑制小鼠肺成纤维细胞增殖,诱导其发生凋亡,并降低其胶原合成.     

Metformin influences cardiomyocyte cell death by pathways that are dependent and independent of caspase-3

Aims/hypothesis Metformin has been shown to increase fatty acid oxidation, an effect mediated by AMP activated protein kinase (AMPK). We hypothesised that metformin could prevent both caspase-3 activation and apoptosis when induced by palmitic acid.Materials and methods Cardiomyocytes were incubated with 1 mmol/l palmitic acid, in the absence or presence of metformin (1–5 mmol/l). Following 1 to 16 h, cell damage was evaluated by measuring lactate dehydrogenase released into the incubation medium, and Hoechst staining. To investigate the mechanism of metformin’s effect on cardiomyocytes, substrate utilisation and phosphorylation of AMPK and acetyl-CoA carboxylase were measured. Intracellular mediators of apoptosis were also evaluated.Results Incubation of myocytes with palmitic acid for 16 h increased apoptosis, an effect that was partly blunted by 1 and 2 mmol/l metformin. This beneficial effect of metformin was associated with increased AMPK phosphorylation, palmitic acid oxidation and suppression of high-fat-induced increases in (1) long chain base biosynthesis protein 1 levels, (2) ceramide levels, and (3) caspase-3 activity. Unexpectedly, 5 mmol/l metformin dramatically increased apoptosis in myocytes incubated with high fat. This effect was associated with a robust increase in glycolysis, lactate accumulation, and a significant drop of pH in the myocyte incubation medium.Conclusions/interpretation Our study demonstrates that metformin reduces high-fat-induced cardiac cell death, probably through inhibition of ceramide synthesis. However, at high concentrations, metformin causes proton and lactate accumulation, leading to cell damage that is independent of caspase-3.     

高胰岛素对近端肾小管上皮细胞利用β-羟丁酸供能的影响

目的研究高胰岛素对低糖环境下近端肾小管上皮(HK2)细胞利用β-羟丁酸(BHB)供能的影响及其机制。方法在无糖及低糖环境下,用不同浓度BHB(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)干预HK2细胞24 h,检测BHB对HK2细胞增殖能力的影响。在不同时间(0、6、12、24、48 h)下,检测2.0 mmol/L BHB对HK2细胞三磷酸腺苷(ATP)产生的影响。将HK2细胞分为正常对照(NC)组、低糖(LG)组、BHB干预(LG+BHB)组和高胰岛素(LG+BHB+HI)组,检测HK2细胞促凋亡基因Bax mRNA表达水平,抗凋亡基因Bcl2 mRNA、细胞凋亡数量、回吸收白蛋白、ATP产生、线粒体数量以及过氧化物酶体增殖物激活受体共激活因子-1α(PGC1α)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体动力相关蛋白1(DRP1)蛋白及mRNA表达水平变化。采用不同浓度的胰岛素(5、50 ng/ml)干预HK2细胞,检测Na+偶联单羧酸转运蛋白1(SMCT1)蛋白及mRNA表达水平。两组间比较采用t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。结果在无糖环境下,与0 mmol/L BHB组相比,2.0 mmol/L BHB组HK2细胞增殖能力增加(P<0.05);在低糖环境下,与0 mmol/L BHB组相比,2.0 mmol/L BHB组细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。与2.0 mmol/L BHB干预0 h组相比,2.0 mmol/L BHB干预24 h组HK2细胞ATP产生明显增加(P<0.05)。与NC组相比,LG组HK2细胞Bax mRNA表达、细胞凋亡数量、DRP1 mRNA表达均增加(P<0.05),Bcl2 mRNA表达水平、细胞回吸收白蛋白、ATP产生、PGC1α、Mfn1蛋白表达均降低(P<0.05);与LG组相比,LG+BHB组HK2细胞Bax mRNA、细胞凋亡数量、DRP1 mRNA表达均降低(P<0.05),Bcl2 mRNA表达、细胞回吸收白蛋白、ATP产生、PGC1α、Mfn1 mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);与LG+BHB组相比,LG+BHB+HI组HK2细胞Bax mRNA、细胞凋亡数量和DRP1 mRNA表达均增加(P<0.05),Bcl2 mRNA、细胞回吸收白蛋白、ATP产生、PGC1α、Mfn1 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。与5 ng/ml胰岛素干预组相比,50 ng/ml胰岛素组细胞SMCT1蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05)。结论高胰岛素可抑制近端肾小管上皮细胞对酮体的利用,机制可能与其抑制酮体回吸收蛋白SMCT1的表达有关。