抵抗素对肝细胞葡萄糖激酶和磷酸烯醇式丙酮酸激酶活性的影响

目的:观察抵抗素(Resistin)对肝细胞糖代谢关键酶葡萄糖激酶(GK)和磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)活性的影响及剂量效应.方法:正常大鼠的肝细胞,以不加Resistin与加不同剂量的Resistin培养24h,用6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法、乳酸脱氢酶偶联比色法检测不同剂量Resistin对GK和PKPCK的影响.结果:Resistin浓度为10nM/L、50nM/L时,GK活性与空白对照组无明显差异,PEPCK活性明显升高(P＜0.05);当Resistin浓度上升为100nmol/L后,GK活性较空白对照组明显下降(P＜0.01),而PEPCK活性升高更明显(P＜0.01).结论:抵抗素浓度升高使大鼠肝细胞GK活性下降,PEPCK活性升高,从而抑制糖酵解促进糖异生,升高血糖.上述两种酶的活性与抵抗素浓度呈现不同的剂量依赖关系.     

胰岛素、环磷酸腺苷和皮质激素对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶启动子的顺反式调节

目的观察体外环磷酸腺苷(cAMP)、皮质激素(DEX)和胰岛素对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)550 bp启动子片段的顺反式作用.方法将重组的pGL2-PEPCK-Luc荧光素酶表达质粒通过脂质体转染法与内对照质粒pSV-β-Galactosidase共同转染大鼠肝肿瘤细胞系CBRH7919,通过荧光素酶报告系统观察胰岛素、cAMP和DEX对PEPCK启动子的调控作用.结果cAMP和DEX对PEPCK具有明显兴奋作用,两者同时刺激具有叠加效应.生理浓度下,胰岛素对基础状态及cAMP和DEX激活的PEPCK启动子均有明显的抑制作用,并且呈剂量依赖性.结论550 bp(-600- 69)PEPCK调控序列在肝细胞内具有较完善的正负反馈调节机制,可以作为糖尿病基因治疗的候选基因.     

脂联素对大鼠肝细胞葡萄糖激酶与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性影响的研究

目的:探讨脂联素对体外培养大鼠肝脏细胞葡萄糖激酶与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性影响,及其在胰岛素抵抗中的意义.方法:以BRL肝脏细胞株为细胞模型,分别用10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml脂联素处理细胞,用6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法、乳酸脱氢酶偶联比色法检测大鼠肝脏细胞葡萄糖激酶与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性.结果:与对照组比较,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶在脂联素处理24h后活性明显降低,且随脂联素浓度升高作用越明显,P＜0.05.葡萄糖激酶在脂联素处理24小时后,活性与对照组比较没有显著性差异,P＞0.5.结论:脂联素对葡萄糖激酶无明显的调节作用,而对于磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶具有显著的抑制作用.脂联素通过对肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性的调节,降低肝脏葡萄糖异生,减少肝糖输出,改善胰岛素抵抗.     

老化对磷酸烯醇型丙酮酸激酶基因转录作用的影响

使用６￣２６月龄Ｆｉｃｈｅｒ３４４禁食雄性大鼠肝脏研究了老化对磷酸烯醇型丙酮酸激酶（ＧＴＰ）（ＰＥＰＣＫ．ＥＣ．４．１．１．３２）基因表达的影响,结果表明６￣２６月龄大鼠肝脏提取物中的ＰＥＰＣＫ活力约下降５０％,且与年龄相关的ＰＥＰＣＫ活性的下降与ＰＥＰＣＫ ｍＲＮＡ水平的下降相平行。因此,ＰＥＰＣＫ活性的下降可能是因用于进行转译作用的ｍＲＮＡ的转录作用下降,且６月龄到２６月龄大鼠肝脏的ＰＥＰＣＫ     

延边地区朝鲜族和汉族学生不同代谢指标与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1基因单核苷酸多态性的相关性

[目的]分析延边地区朝鲜族和汉族小学生不同代谢指标与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)基因单核苷酸多态性(SNPs)的相关性.[方法]于2011年8月—2013年8月间在延边地区选择3所小学校,随机抽取1 206名小学生(朝鲜族706名,汉族500名)作为研究对象,测量体质量指数(BMI)、腰围(WC)、收缩压(SBP)和舒张压(DBP);检测空腹12 h血清三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血糖(FBG)和胰岛素(FIns)值;提取DNA并检测PCK1基因SNPs rs1042531位点的基因型.[结果]朝鲜族小学生PCK1基因SNP rs1042531位点TT,TG及GG型的频率分别为59.5%,36.0%和4.5%,汉族小学生分别为61.6%,33.2%和5.2%,朝鲜族和汉族小学生基因型分布频率间差异无统计学意义(P=0.567);朝鲜族小学生T和G等位基因频率分别为77.5%和22.5%,汉族小学生分别为61.6%和38.4%,朝鲜族和汉族小学生的等位基因频率分布间差异有统计学意义(P<0.01).PCK1基因SNP rs1042531位点不同基因型朝鲜族小学生HDL-C平均水平间差异有统计学意义(P<0.05),汉族小学生BMI,WC,SBP,DBP,FBG平均水平间差异均有统计学意义(P<0.05);朝鲜族小学生PCK1基因SNP rs1042531位点不同等位基因HDL-C平均水平间差异有统计学意义(P<0.01),汉族小学生BMI,WC,SBP,DBP,FBG平均水平间差异有统计学意义(P<0.01).[结论]延边地区朝鲜族和汉族小学生PCK1基因rs1042531位点具有SNPs,等位基因频率分布特征存在民族差异;不同代谢指标与PCK1基因SNPs的相关性有所不同,且存在民族差异.     

小檗碱对2型糖尿病中国地鼠肝脏葡萄糖激酶、葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA表达的影响

目的研究小檗碱对2型糖尿病中国地鼠肝脏葡萄糖激酶（GcK）、葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）mRNA表达的影响,探讨小檗碱影响糖代谢的分子机制。方法以高脂高热量饲料喂养结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ）的方法制作2型糖尿病中国地鼠模型,成模后随机分成模型组、小檗碱组、二甲双胍组,各药干预9周。同时设立对照组。观察小檗碱疗效及对肝脏GcK、G6P、PEPCK mRNA表达的影响。结果与模型组相比,小檗碱增强胰岛素敏感性,降低血糖血脂,增高肝脏GcK的mRNA表达,降低肝脏G6P、PEPCK mRNA的表达。结论小檗碱降低2型糖尿病血糖的作用机制可能与提高肝脏GcK mRNA的表达和降低G6P、PEPCK mRNA的表达有关。     

lncRNA717对胃癌细胞生物学行为的影响及调控机制研究

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）717对胃癌细胞增殖、转移等生物学行为的影响及其调控机制。方法 收集2021年1至12月宁波大学附属第一医院手术切除或活检的31例胃癌组织及配对癌旁组织，以及胃癌细胞系AGS、HGC-27和人正常胃黏膜细胞系GES-1。采用qRT-PCR法检测lncRNA717在胃癌组织及癌旁组织、各细胞系中的表达水平。采用细胞增殖和毒性检测（CCK-8）法、Transwell法和划痕试验分别评估lncRNA717对细胞增殖、侵袭和迁移中的影响。采用荧光素酶报告基因测定、qRT-PCR法和Westernblot法检测各组标本和细胞中lncRNA717、miR-762和干扰素调节因子（IRF）7表达水平。结果与癌旁组织相比，lncRNA717在胃癌组织中显著下调，与正常细胞相比，lncRNA717在胃癌细胞中显著下调。过表达lncRNA717抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。lncRNA717可以吸附miR-762，上调miR-762能抑制IRF7的表达，促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而过表达lncRNA717后逆转了miR-762对细胞的增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论ln-cRNA717可抑制胃癌细胞的增殖和转移，这可能与调控miR-762/IRF7有关。提示lncRNA717可作为胃癌的潜在生物标志物和治疗靶点。     

铁皮石斛磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆及表达分析

目的 克隆铁皮石斛Dendrobium officinale磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（pepc）基因,并对其在F型和H型铁皮石斛中的表达进行分析,为研究铁皮石斛pepc基因的结构、功能提供依据。方法 基于GenBank上已知的pepc基因的同源序列设计引物,应用RT-PCR和RACE等方法,克隆铁皮石斛pepc基因全长。采用荧光定量PCR方法研究pepc基因在2种铁皮石斛中的表达。结果 成功克隆了铁皮石斛pepc基因,登录号为JF423930,该基因全长为3 560 bp,其中cds序列为2 895 bp,与兰科植物的同源性为80%左右,与其他科属植物的同源性达到70%以上,编码964个氨基酸。pepc基因在F型铁皮石斛中的表达量为H型的5.55倍。结论 成功克隆了铁皮石斛pepc基因,且F型铁皮石斛pepc基因的表达量高于H型。     

丙酮酸乙酯对滑膜细胞HMGB1的影响及机制

目的 探讨丙酮酸乙酯对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞高迁移率族蛋白-1（HMGB1）表达的影响及分子机制.方法 将培养的RA滑膜细胞分为正常对照组、TNF-α组和丙酮酸乙酯＋TNF-α组;采用RT-PCR法检测细胞HMGB1 mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清液中HMGB1、IL-6和IL-8含量;采用Western blot法分别检测滑膜细胞胞质和核内NF-κB变化;采用免疫荧光法观察NF-κB在细胞中的分布.结果 丙酮酸乙酯可抑制TNF-α诱导滑膜细胞IL-6、IL-8、HMGB1的分泌和HMGB1 mRNA的表达,以及NF-κ B（p65）在滑膜细胞核内的表达和移位.结论 丙酮酸乙酯能下调滑膜细胞HMGB1表达和抑制NF-κB信号通路活化,可能对RA发挥抗炎作用.     

PinX1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探索PinX1基因在胃癌中的表达情况,并观察PinX1表达水平改变对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。 方法 通过PinX1质粒转染及RNAi干扰技术,分别上调和下调胃癌细胞中的PinX1基因表达水平,然后运用Western Blot技术在蛋白水平检测正常胃癌细胞、PinX1基因上调组和PinX1基因敲低组胃癌细胞目标蛋白PinX1的表达情况,并通过CCK8法检测不同处理组胃癌细胞增殖曲线。选取36对胃癌组织和癌旁正常胃黏膜的组织,检测PinX1的表达情况并计算其与肿瘤分期之间的相关性。采用SPSS软件进行统计分析并绘制统计图。 结果 胃癌细胞系SGC7901及MKN28中PinX1的表达水平低于正常胃黏膜细胞株GES-1中PinX1的表达水平,PinX1基因在MKN28转染组胃癌细胞较正常MKN28细胞中表达上调,MKN28胃癌细胞生长速度相应的减缓(P＜0.05),而干扰组胃癌细胞PinX1基因表达下调,SGC7901胃癌细胞生长速度相应的增快(P＜0.05)。PinX1在胃癌组织中的表达率低于癌旁组织的表达率(P＜0.05),且PinX1表达水平与胃癌T分期呈现出一定的相关性。 结论 PinX1在胃癌组织和胃癌细胞中低表达并负性调控胃癌细胞恶性生物学行为。      

沉默PARP-1对卵巢癌上皮细胞耐药性及肿瘤相关生物学行为的影响

目的 研究探讨沉默聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)后,卵巢癌上皮细胞对顺铂药物的敏感性及相关生物学行为的变化。 方法 以人卵巢癌细胞株A2780为研究对象,采用小RNA干扰技术,沉默PARP-1的表达后,采用Western blot实验、RT-PCR实验、MTT实验等观察PARP-1蛋白、mRNA的表达及细胞存活率的变化趋势,采用方差分析进行比较。 结果 PARP1小RNA干扰序列(PARP1-siRNA)转染组PARP-1 mRNA表达量明显低于A2780组和阴性对照组接种转染组(NC-siRNA),3组PARP-1 mRNA表达量分别为(45.22±3.99)%、(24.13±5.24)%、(46.28±6.19)%(P＜0.05);PARP1-siRNA转染组PARP-1蛋白表达IOD值明显低于A2780组和NC-siRNA转染组(P＜0.05);与0 μmol/L相比,5 μmol/L和10 μmol/L组的PARP-1蛋白表达IOD值明显降低(P＜0.05);随着顺铂浓度的增高,PARP1-siRNA转染组的细胞存活率下降的速度最快。 结论 PARP1-siRNA转染明显下调人卵巢癌细胞株A2780的PARP-1表达后,该细胞对顺铂药物的敏感性增强,细胞的存活率明显下降。      

“cell-in-cell”对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探究胃癌肿瘤细胞与免疫细胞cell-in-cell的形成对胃癌细胞生物学行为的影响。 方法 胃癌细胞与单核淋巴细胞（PBMC）的共培养体系分为对照组、1∶1组和5∶1组。PBMC和BGC823细胞分别以1∶1和5∶1的接种到24 孔板中（共5×10 4个）。通过吉姆萨染色检测“cell-in-cell”构建情况。分别检测各组细胞增殖、凋亡和侵袭能力。 结果 1∶1组的“cell-in-cell”构建率为（8.65±1.06）%。5∶1组的“cell-in-cell”构建率为（12.92±1.32）%，显著高于1∶1组（P＜0.05）。3组细胞的生物学行为水平比较差异显著（P＜0.05）。1∶1组的增殖和侵袭能力显著高于对照组，而凋亡率显著低于对照组（P＜0.05）。5∶1组的增殖和侵袭能力显著高于1∶1组和对照组，而凋亡率显著低于1∶1组和对照组（P＜0.05）。 结论 胃癌细胞与免疫细胞形成的“cell-in-cell”结构会促进胃癌细胞的增殖和侵袭并抑制凋亡。     

去外泌体血清对脂肪干细胞及胃癌细胞生物学活性的影响

目的 研究一种去除血清外泌体( exosomes, Exos)的超离方法,以及去外泌体血清对脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)和肿瘤细胞(胃癌细胞)的增殖、衰老、周期和凋亡的影响,为用于外泌体机制研究的细胞培养方法提供新方案.方法 超离法去除胎牛血清中的外泌体,Wester...     

miR-124对胃癌细胞的生物学功能影响

目的:探讨miR-124对胃癌细胞增殖、凋亡与迁移的影响及其相关调控机制。方法:收集确诊为胃癌的癌组织和癌旁组织42组,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测癌和癌旁组织以及正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞株BGC-823、MGC-803、SGC-7901、AGS中miR-124的相对表达量;在胃癌细胞株BGC-823中过表达miR-124,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移,Western blot检测过表达miR-124前后磷酸化PI3K/AKT的变化。结果:胃癌组织中miR-124水平低于癌旁组织(0.70±0.15 vs. 1.14±0.27,t=10.14,P=0.000),胃癌细胞株中miR-124水平低于GES-1(F=38.012,P=0.000);过表达miR-124后细胞BGC-823的增殖与迁移能力均减低(0.94±0.09 vs. 0.62±0.06,t=6.615,P=0.000;152.33±14.05 vs. 53.67±12.58,t=9.061,P=0.001),而细胞凋亡率增加(2.10±0.56 vs. 8.30±0.31,t=16.777,P=0.000);过表达miR-124后p-AKT、p-PI3K蛋白表达均出现下调(118.90±10.51 vs. 34.87±4.23,t=12.847,P=0.000;158.53±10.94 vs. 71.07±4.51,t=12.802,P=0.000)。结论:miR-124在胃癌中低表达;miR-124抑制胃癌细胞的增殖、迁移,促进胃癌细胞凋亡,可能是靶向PI3K/AKT信号通路实现的。     

长链非编码RNA HSALNT0000015对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）HSALNT0000015对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测80例结直肠癌组织及配对的15例癌旁组织,同时检测人结直肠癌细胞（Lovo、SW480、HT-29、HCT116）和正常人肠黏膜上皮细胞HIEC中lncRNA HSALNT0000015的表达水平;将HCT116细胞分为空白组、对照组及实验组,分别不感染慢病毒、只感染空载质粒及感染sh-HSALNT0000015-慢病毒,采用MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法检测转录因子Slug、上皮钙黏素（E-Cadherin）及波形蛋白（Vimentin）的表达。结果 结直肠癌组织lncRNA HSALNT0000015表达水平高于癌旁组织（P?<0.05）。结直肠癌细胞中lncRNA HSALNT0000015的表达水平均高于正常人肠黏膜上皮细胞（P?<0.05）。细胞培养12、24、48及72 h后,实验组光密度值（490 nm）低于空白组和对照组（均P?<0.05）。敲减lncRNA HSALNT0000015后,HCT116迁移及侵袭能力下降（均P?<0.05）,E-cadherin表达水平上升（P?<0.05）,转录因子Slug和Vimentin表达水平下降（均P?< 0.05）。结论 lncRNA HSALNT0000015可能通过上皮间质转化过程促进结直肠癌细胞迁移及侵袭。     

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。      

双氢青蒿素对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

研究双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法采用噻唑蓝（methylthiazoletetrazolium,MTT）法检测DHA对人胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用;用流式细胞技术、荧光显微镜、透射电子显微镜检测经DHA处理后BGC-823细胞的凋亡率及形态特征的变化;Western印迹方法检测凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8表达的变化。 结果MTT分析表明,DHA作用可明显抑制BGC-823细胞的增殖,抑制率随药物浓度的增加而增大,且随着时间的延长而增大,具有显著的剂量和时间依赖性（P＜0.01）,半数抑制浓度(IC50值)为3.4 μmol/L。流式细胞术检测结果显示,随着DHA药物浓度的增加,凋亡峰愈加明显,并呈现出剂量依赖性（P＜0.01）。形态学的观察结果：BGC-823细胞在DHA作用下出现典型的凋亡形态。Western印迹显示：Bax、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达随着DHA给药浓度的增加而增高。 结论DHA对BGC-823细胞增殖有抑制作用;DHA通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-8表达促进BGC-823细胞凋亡。     

仑伐替尼对甲状腺癌TPC-1细胞生物学行为的影响

目的:探讨仑伐替尼对甲状腺癌TPC-1细胞生物学行为的影响.方法:TPC-1细胞分为阴性对照组(不处理)与仑伐替尼组(20μmol/L仑伐替尼处理),采用克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞克隆和凋亡情况;TPC-1细胞分为阴性对照组(不处理)与仑伐替尼组(40μmol/L仑伐替尼处理),应用...