人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1的建立及鉴定

目的:建立1株人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1并鉴定其基本生物学特性。方法:将所获得的舌鳞状细胞癌患者手术切除的组织块标本进行原代培养,传代后建立舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1,显微镜下观察并记录其细胞形态和生长特性,行基因组DNA短串联重复序列分析,并对其倍增时间、凝集反应、细胞表面标记物、染色体核型和裸鼠成瘤能力等特性进行检测。结果:WU-TSC-1可稳定传代50余代,为人源肿瘤细胞,无其他细胞交叉污染。细胞呈卵圆形或方圆形,失去接触抑制。染色体核型为非二倍体染色体。体外细胞倍增时间为51.15 h,体内具有成瘤能力。结论:该研究成功建立了1株人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1,为揭示舌鳞状细胞癌的发病机制,探索诊断指标和治疗方案提供了新的实验细胞系。     

口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中的SP细胞含量分析

目的探讨两种口腔鳞状细胞癌细胞系KB和Tca8113中的侧群细胞的含量,寻找口腔鳞癌肿瘤干细胞存在的依据。方法采用有限稀释法对口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113细胞株经Hoechst 33342/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染色后,采用流式细胞仪测定,分析两细胞株中侧群细胞的含量。结果口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中具有不同的表型,即侧群细胞和非侧群细胞。在体外培养中,KB和Tca8113细胞株中侧群细胞含量分别为0.6%和2.3%。经维拉帕米阻断后,侧群细胞含量均明显降低,分别降为0和0.1%。结论 KB和Tca8113细胞株中均存在侧群细胞,但含量较少。     

外源性转化生长因子β1对口腔鳞状细胞癌细胞系一氧化氮含量的影响

目的 探讨TGF—βl和口腔鳞状细胞癌侵袭转转的关系。方法 检测了不同浓度的外源性TGF—βl作用于体外培养的口腔鳞状细胞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后细胞增殖能力和NO合成的影响。结果 相同浓度的TGF—βl对两细胞系作用不同；TGF—βl可促进GNM细胞^3H—TdR掺入率，同时GNM细胞中NO含量明显下调；而TGF—βl可抑制TSCCa细胞的增殖，TGF—βl作用于TSCCa细胞后NO含量开始上升，并与TGF—βl有剂量依赖关系。结论 TGF—βl可能通过调节NO的含量在不同转化的口腔鳞状细胞癌细胞中的作用不同。     

骨桥蛋白与口腔鳞状细胞癌细胞生物学特性关系的实验研究

目的　初步探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与口腔鳞状细胞癌（鳞癌）细胞生物学特性关系。方法　体外培养口腔鳞癌细胞株KB和FaDu细胞,MTT法比较2种细胞的增殖活性,基质胶侵袭实验和划痕实验检测比较2种口腔癌细胞的侵袭和迁移能力的差异,免疫组化SP法检测细胞中OPN的表达。结果　KB细胞的增殖、侵袭和迁移能力均高于FaDu细胞,两种细胞中均有OPN的表达,KB的表达量高于FaDu。结论　口腔鳞癌细胞株KB和FaDu细胞生物学特性的差异可能与其OPN表达差异有关,高表达OPN的KB细胞株可以作为体外研究口腔鳞癌中OPN基因作用的实用细胞株。     

口腔鳞癌癌细胞和癌相关成纤维细胞的原代培养、鉴定及其生物学特性研究

目的：对口腔鳞状细胞癌细胞（OSCCs）及癌相关成纤维细胞（CAFs）进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法：取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数培养法分离、纯化细胞,正常口腔成纤维细胞（NFs）和舌鳞癌细胞系Tca8113作为对照组。通过形态学观察、波形蛋白和角蛋白免疫组化染色对纯化的细胞进行鉴定。应用MTT法绘出OSCCs、CAFs、NFs和Tca8113细胞的生长曲线。结果：获得纯化的OSCCs和CAFs,通过对比研究阐明OS-CC和CAFs的生物学特点;OSCCs中免疫组化染色角蛋白呈阳性、波形蛋白呈阴性,CAFs中角蛋白呈阴性、波形蛋白呈阳性。结论：通过本实验研究成功获得纯化的OSCCs和CAFs,对比研究发现CAFs和NFs在形态结构、生长特点等方面不同。     

浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的实验研究

目的 :观察浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡作用 ,探讨浅蓝菌素抗癌的可能性。方法 :TCA 83细胞经浅蓝菌素 (10 μg/ml)处理 2 4h后 ,提取基因组DNA ,行DNA凝胶电泳。舌癌新鲜组织经浅蓝菌素(10 μg/ml)处理 2 4h后 ,行原位细胞凋亡染色 (TUNEL)。 结果 :DNA凝胶电泳得到典型的梯状DNA电泳图 ,TUNEL分析显示 ,浅蓝菌素处理组癌细胞凋亡率明显高于未经浅蓝菌素处理的癌细胞凋亡率 (P <0 .0 0 0 1) ,浅蓝菌素诱导高分化鳞状细胞癌凋亡的作用更强。结论 :浅蓝菌素可直接诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生凋亡 ,为脂肪酸合酶抑制剂的临床应用提供了直接的参考。     

AMD3100对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的探讨CXCR4拮抗剂AMD3100对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响。方法采用MTT法检测细胞的增殖能力。通过趋化实验观察CXCR4特异性拮抗剂AMD3100在口腔鳞状细胞癌细胞的侵袭迁移中的作用。结果 1)口腔鳞状细胞癌细胞在SDF-1作用下增殖反应明显增强,AMD3100可有效抑制肿瘤细胞的增殖。2)趋化实验显示SDF-1可诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生明显迁移,AMD3100能阻断CXCR4受体,从而抑制这种趋化和侵袭转移作用。结论 AMD3100能阻断CXCR 4/SDF-1的相互作用,其可能成为治疗口腔鳞状细胞癌的新方法。     

人颊粘膜鳞状细胞癌BCaCD885细胞系的建立及其生物学特征

BCaCD_(885)细胞系是从一男性颊粘膜鳞状细胞癌患者原发灶所获得组织块,经体外培养2年已传180代以上。作者对原患者组织切片,体外培养不同代细胞和移植瘤用光镜、电镜进行观察,结果是三种细胞都具有鳞状上皮癌组织学特征。BCaCD_(885)细胞系的细胞生长快,失去接触性抑制,在软琼脂中形成克隆;其染色体众数为亚三倍体,畸变率高;在裸鼠体内具有成瘤性。BCaCD_(885)为已建成的恶性生物学特征稳定的确立细胞系。     

人粘液表皮样癌细胞系MEC-1的建立及其生物学特性

粘液表皮样癌为口腔颌面部常见肿瘤之一,因其生物学行为具有特点而为口腔医学及肿瘤医学学者所重视。建立本类肿瘤的细胞系,将有助于对之深入研究。我科自1987年10月至今建立的一株粘液表皮样癌细胞系,现已培养745d、125代,生长稳定。现报道于下。     

化学致癌剂4-NQO饮水法诱导小鼠口腔鳞癌模型的建立

目的 ：使用化学致癌剂4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitro-quinoline 1-oxide,4-NQO）诱导并建立C57BL/6小鼠口腔鳞癌病变模型。方法 将4-NQO加入小鼠饮水,观察小鼠口腔黏膜的变化。于第12、16、20、24周处死,采集病变组织的样本,确定病变性质,并分离、培养肿瘤细胞。结果 实验组小鼠在16周后口腔黏膜有明显的外生性肿物发生,直径约0.2 mm。小鼠口腔黏膜肿物H-E染色结果显示,肿物呈外生性或浸润性生长,可见角化珠和明显的核分裂象。细胞呈多边形,贴壁牢固,CK、Ki-67染色阳性,表明此细胞为鳞癌细胞。结论 该模型诱导过程与人口腔鳞癌发病过程相似,是理想的研究口腔鳞癌发生、发展机制的动物模型。     

Establishment and characterization of a spindle cell squamous carcinoma cell line

BACKGROUND: Spindle cell squamous carcinoma (SCSC) is a rare and peculiar biphasic malignant neoplasm that occurs mainly in the upper aerodigestive tract. It consists of sarcomatoid proliferation of pleomorphic spindle-shaped cells and squamous cell carcinoma. METHODS: Here, we established a SCSC cell line from a tumour arisen in gingiva. We characterized the feature of a SCSC cell line by immunohistochemistry. To know the biological feature, we examined the cell growth, invasiveness and epithelial-mesenchymal transition markers of a SCSC cell line in comparison with oral squamous cell carcinoma (OSCC) cell lines. RESULTS: By immunohistochemical analyses, the primary tumour expressed cytokeratin and vimentin, indicating carcinosarcoma-like characters. This tumour also showed overexpression of p53 protein. Cultured SCSC cells resulted in bypass of crisis and maintenance over passage 100. The established SCSC cell line was spindle-shaped and showed identical immunohistochemical characters to those of primary tumour cells. Similar to the primary tumour, the cell line showed p53 overexpression and had p53 mutation at codon 132: AAG (lys)-->AAT (asp). The SCSC cell line grew slower than two other OSCC cell lines (MSCC-1 and HSC-2), whereas SCSC cells had remarkable invasiveness in comparison with these cell lines. Moreover, SCSC cells expressed wnt-5a and vimentin mRNA at high levels, but did not express E-cadherin mRNA. This expression pattern of the markers was similar to that of mesenchymal cells, not of epithelial cells. CONCLUSION: In the present study, we newly established a SCSC cell line with strong invasiveness. This is the first report on the establishment of SCSC cell line. The SCSC cell line can be a useful cell model for the study to know the cytodifferentiation and nature of SCSC.     

Hypercalcemia in patients of oral squamous cell carcinoma

Purpose  

This study was performed to measure the total and ionic serum calcium levels and incidence of hypercalcemia in patients with Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) and its clinical significance and relevance.     

鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)在口腔鳞癌患者血清中表达的临床意义

用化学发光法检测36例口腔鳞癌、11例口腔颌面部其他恶性肿瘤、45例口腔颌面部良性肿瘤患者以及70例正常人血清中鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)水平。鳞癌组SCC-Ag水平明显高于良性肿瘤组(P<0.01)、正常组(P<0.01)以及其他恶性肿瘤组(P<0.05)。SCC-Ag可作为口腔鳞癌患者辅助诊断指标。     

Establishment of a highly metastatic tongue squamous cell carcinoma cell line from New Zealand White rabbit

OBJECTIVE: Prior to this study, the widely used tongue squamous cell carcinoma cell lines could only initiate tumours in immunodeficient mice, which greatly delayed studies on immune function during carcinogenesis. This study established a new tongue squamous cell carcinoma cell line named 'RSCC-1', which can initiate tumours in both immunocompetent rabbits and immunodeficient nude mice and has high metastatic ability. DESIGN: Primary tongue cancer was induced by DMBA and local mechanical stimulation in New Zealand White rabbits. The induced cancer was serially transplanted into homogeneous rabbits to establish transplanted models. At the same time, cancer samples were collected, cultured and passaged in vitro. Finally, a cell line named 'RSCC-1' was established. Its growth behaviour, cell cycle distribution and tumourigenicity in rabbits and nude mice were investigated. RESULTS: RSCC-1 cells were cultured continuously in vitro for 19 months (165 passages). They contain between 54 and 196 chromosomes, with a modal number of 75. Tumourigenicity rates were 100% in both homogeneous rabbits and nude mice, with 20% lung metastasis and 50% cervical lymph node metastasis in homogeneous rabbits. CONCLUSION: RSCC-1 is a poorly differentiated, highly malignant rabbit tongue squamous cell carcinoma cell line. Its behaviour in the inoculated animal model closely resembles human tongue cancer, and could metastasise to local lymph nodes and remote organs.     

DNA histochemical analysis in oral squamous cell carcinoma

BACKGROUND: Recent years have witnessed an increasing emphasis on the role of nuclear DNA and its application in experimental pathological diagnosis to predict prognosis and management of certain neoplasm. AIMS: to establish objective criteria for the degree of differentiation and histochemical quantitative of nuclear DNA of oral squamous cell carcinoma (OSCC) using microspectrophotometric analysis. MATERIAL AND METHODS: The study was conducted on histologic materials from patient with OSCC. Two histological grading systems were used; Broder's and invasive front grading system were recorded. Microspectrophotometry was applied on Feulgen-stained sections to determine the quality of tumour nuclear DNA content in two different histological grading systems of OSCC. RESULTS: Nuclear DNA content increased significantly with decreasing tissue differentiation as well with increasing tumour size. CONCLUSION: The grading system and DNA content provides more objective and accurate criteria which relate the morphologic finding to biologic activity and growth patterns of oral cancer as compared to histologic differentiation alone.     

氯喹增强口腔癌CAL-27细胞对顺铂化疗敏感性的观察

目的利用氯喹（chloroquine,CQ）及顺铂（cisplatin,DDP）作用于CAL-27细胞,探讨自噬在口腔癌化疗中的作用及机制,为临床增强口腔癌化疗敏感性提供理论依据。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法比较药物对CAL-27细胞的生长抑制作用,采用激光共聚焦显微镜观察自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ的表达,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞术观察细胞周期的分布。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果不同浓度氯喹及顺铂处理CAL-27细胞不同时间后,细胞生存率逐渐降低,呈浓度和时间依赖性。5 mg/L氯喹联合顺铂在IC₅₀浓度（5 mg/L）处理后,与单独顺铂处理相比,显著降低了CAL-27细胞的生存率（P<0.05）。氯喹或顺铂作用于CAL-27细胞48 h后,自噬在细胞中分布清晰,顺铂组（DDP组）细胞平均荧光强度高于对照组、氯喹处理组（CQ组）及氯喹与顺铂联合处理组（CQ+DDP组）（P<0.05）;氯喹组细胞平均荧光强度显著低于其他3组（P<0.05）。氯喹或顺铂作用于CAL-27细胞48 h后,与对照组相比,DDP组和CQ+DDP组细胞凋亡率显著提高（P<0.05）;与顺铂单独作用相比,CQ+DDP组细胞凋亡率显著提高（P<0.05）。氯喹和顺铂作用于CAL-27细胞48 h后,DDP组和CQ+DDP组G1期细胞明显增多,出现G1期阻滞,CQ+DDP组G1期细胞数显著高于DDP组（P<0.05）。结论抑制自噬能够提高CAL-27细胞对顺铂的化疗敏感性,CAL-27细胞本身的自噬是产生化疗耐药的重要机制。自噬抑制剂有望成为口腔癌化疗的增敏剂。     

模拟微重力条件HN13细胞的生长特点

目的:观察口腔鳞状细胞癌细胞HN13在模拟微重力条件下的形态学特点和生长情况,检测肿瘤细胞分化和侵袭相关基因的表达,并分析其生物学意义。方法:将HN13细胞接种于聚乳酸-羟基乙酸(poly lactic-co-glycolicacid,PLGA),应用旋转细胞培养系统(rotary cell culture system,RCCS)进行模拟微重力培养14d,光学倒置显微镜下观察细胞的形态,以实时定量PCR检测分析立体培养和平面培养细胞中,HIF1α、TGFβ1、VEGF-C、NF-κB和CCND1等基因的表达。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:细胞贴附于PLGA材料表面呈立体生长,表现为典型角化细胞形态,并形成类角化珠样结构,与口腔鳞状细胞癌细胞形态相似。HIF1α,TGFβ1和NF-κB表达降低(P<0.05),VEGF-C表达升高(P<0.05),CCND1表达无显著改变(P>0.05)。结论:模拟微重力条件下三维培养的细胞更接近体内细胞的真实形态,模拟微重力可作为构建体外细胞三维培养模型的方法。     

B7-H3在口腔鳞癌细胞中的表达及其意义

目的：研究B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的表达差异,以及B7-H3对口腔鳞癌细胞生物学的影响。方法：RT-qPCR、免疫组化检测B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织的表达差异;构建B7-H3腺病毒表达载体,感染人舌鳞癌细胞Tca8113,CCK-8、PI染色流式细胞仪检测B7-H3高表达对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果：RT-qPCR结果显示,口腔鳞癌组织B7-H3 mRNA表达为3.021±0.2310,显著高于正常口腔黏膜组织（0.6002±0.1010）;与对照组比较,10、50、100感染复数组在作用24h呈现促进细胞增殖作用,S期细胞比例显著增加,72h时增殖作用最强（P〈0.05）;与感染复数1组比较,同时间段50、100组促细胞增殖作用和S期细胞比例显著增加（P〈0.05）,50与100组比较无显著差异（P〉0.05）。结论：口腔鳞癌组织B7-H3mRNA和蛋白表达显著高于正常口腔黏膜组织;B7-H3高表达,可促进口腔鳞癌细胞增殖。     

姜黄素联合紫杉醇对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨姜黄素和紫杉醇对人口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖和凋亡的影响.方法:培养人口腔鳞癌细胞系CAL27,采用不同浓度的姜黄素和紫杉醇及联合用药处理细胞24 h、48 h及72 h.MTT法检测对细胞增殖的影响,Tunel法检测对细胞凋亡的影响,Western印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和活性caspase-3表达的影响.采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:相对于姜黄素或紫杉醇对CAL27的单独作用,两者联合用药能更显著地抑制CAL27细胞增殖和促进CAL27细胞凋亡,更显著地下调Bcl-2表达和Bcl-2/Bax表达比例,上调Bax和活性caspase-3的表达.结论:相比于单一用药,姜黄素和紫杉醇联合用药对CAL27有更好的增殖抑制和凋亡诱导作用.