长非编码RNA lncRNA ADAMTS9-AS2促进唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的研究

目的检测不同转移能力的唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞中差异表达的长非编码RNA(lncRNA),探讨lncRNA在唾液腺腺样囊性癌侵袭转移中的作用。方法以腺样囊性癌高转移细胞株SACC-LM为实验组,低转移细胞株SACC83为对照组,采用lncRNA芯片初步筛选差异表达的lncRNA,通过qRT-PCR进一步验证差异表达的lncRNA。通过侵袭迁移实验检测转染差异表达的lncRNA siRNAs前后腺样囊性癌细胞株侵袭迁移能力的变化。并对差异表达的lncRNA与SACC患者的临床病理特征和预后进行分析。结果芯片筛选出ADAMTS9-AS2在高转移细胞系(SACC-LM)中高表达,实时定量RT-PCR进一步验证了其在高转移细胞系(SACC-LM)显著上调,通过侵袭迁移实验发现在转染后下调ADAMTS9-AS2的表达水平后侵袭迁移能力明显降低(P<0.001)。临床病理资料分析表明,ADAMTS9-AS2在SACC组织中高度表达。高表达的ADAMTS9-AS2与SACC患者预后不良和肿瘤转移率高有关。结论高表达ADAMTS9-AS2促进SACC细胞迁移和侵袭,ADAMTS9-AS2在SACC组织中上调,并且与高转移率和不良预后相关。     

沉默RhoA基因对腺样囊性癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨RhoA基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞的迁移和侵袭能力的影响.方法 将液氮冻存的20例SACC及正常癌旁组织研磨匀浆,分别提取总RNA和总蛋白检测RhoA的表达情况.同时构建RhoA-siRNA转染2个细胞株SACC-LM和SACC-...     

ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响

目的：探讨ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响。方法：采用免疫组化检测15例腺样囊性癌原发灶和相应淋巴结转移组织中ADAM9、ADAM10蛋白的表达情况;采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌高转移潜能细胞系ACC-M、SACC-LM中ADAM9、ADAM10基因的表达,检测该基因沉默后对肿瘤细胞周期及体外增殖、转移能力的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析及Fisher确切概率检验。结果：ADAM9、ADAM10蛋白在腺样囊性癌淋巴结转移组织中的表达比在原发灶组织中显著增高（P〈0.05）;ADAM9、ADAM10基因沉默后细胞增殖能力下降（P〈0.05）,肿瘤细胞出现S期阻滞;并且ADAM9、ADAM10基因沉默后,肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降（P〈0.01）。结论：ADAM9和ADAM10基因表达与腺样囊性癌的转移有关。ADAM9、ADAM10基因沉默可改变腺样囊性癌细胞体外增殖能力、侵袭能力等生物学特性。     

p120连环蛋白对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨p120ctn-shRNA对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及p120ctn-shRNA对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。方法 选取人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83细胞系进行培养,p120ctn-shRNA慢病毒表达载体转染SACC-83,同时转染空载体NC shRNA作为对照组,嘌呤霉素筛选稳定表达p120ctn-shRNA的细胞系。通过RT-PCR和Western Blot检测敲低效果。分别通过CCK8、划痕实验、迁移实验和侵袭实验观察p120连环蛋白基因敲低对人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响。通过RT-PCR和Western Blot检测p120连环蛋白基因敲低对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,实验组p120连环蛋白的基因表达量和蛋白表达量都大幅度降低。与对照组相比,实验组的增殖能力明显降低（P<0.05）,与对照组相比,实验组的迁移能力明显降低。与对照组相比,实验组的侵袭能力明显降低（P<0.01）。E-钙粘蛋白表达略微下降,N-钙粘蛋白表达显著下降。结论 抑...     

miR-181a对唾液腺腺样囊性癌细胞株侵袭和迁移的影响

目的研究与唾液腺腺样囊性癌（SACC）侵袭转移相关的微小RNA（miRNA）,探讨miR-181a对SACC侵袭和迁移的影响。方法选择1对不同侵袭迁移能力的SACC细胞株（SACC-LM/SACC-83）,采用miRNA芯片技术分析细胞株中miRNA的表达差异,初步筛选出与SACC侵袭转移相关的miRNA。再通过过表达或沉默细胞株中miR-181a的表达,进行细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P〈0.05为差异具有统计学意义。结果 miRNA芯片结果显示,高侵袭迁移能力的SACC细胞株miR-181a表达明显下降。细胞划痕和Transwell实验结果表明,SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后体外侵袭迁移能力明显受到抑制（t=-5.235,P〈0.05）;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后体外侵袭迁移能力有所提高（t=7.713,P〈0.05）。结论不同侵袭迁移能力的SACC细胞株中存在多种miRNA的差异表达。miR-181a的表达降低可能导致SACC细胞侵袭迁移能力的增强。     

辛伐他汀联合干扰miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞迁移和侵袭的影响

目的: 探讨辛伐他汀（simvastatin, SIM）联合干扰miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞株（SACC-LM）迁移、侵袭的影响。 方法: 体外培养SACC-LM细胞,随机分为阴性对照组（negative control,NC）、IC₅₀辛伐他汀组（SIM）、miR-21抑制剂转染组（simiR-21）和联合处理组（simiR-21+SIM）。利用qRT-PCR检测4组细胞中 miR-21的表达水平,CCK8法检测不同浓度辛伐他汀（0、10、20、30、40、50、60 μmol/L）作用48 h后的细胞活性,得出48 h的IC₅₀;观察干扰miR-21后SACC-LM对辛伐他汀的耐药性变化。Transwell法观察细胞迁移（不加基质胶）、侵袭能力（加入基质胶）的变化。Western免疫印迹检测EMT途径相关蛋白E-Cadherin、Snail1的表达。应用SPSS 22.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。 结果: 与阴性对照组相比,转染组及联合作用组中miR-21表达显著下调（P<0.01）,单独药物组中miR-21表达无显著变化（P>0.05）。辛伐他汀使SACC-LM细胞的生长受到明显抑制,与药物浓度呈正相关关系。干扰miR-21后,SACC-LM对辛伐他汀的耐药性显著降低（P<0.05）。联合作用组中细胞的迁移、侵袭活性较其他处理组相比均受到显著抑制 (P<0.01),Western免疫印迹结果显示,联合作用组中E-Cadherin蛋白的表达较其他对照组显著升高（P<0.01）,Snail1蛋白表达显著降低（P<0.001）。 结论: 干扰miR-21能有效降低SACC-LM对辛伐他汀的耐药性,通过与辛伐他汀的联合作用,SACC-LM细胞的迁移、侵袭能力受到明显抑制,其机制可能与Snail1表达下调、E-Cadherin表达上调有关。     

星形细胞上调基因1在唾液腺肿瘤中的表达和意义

目的: 探讨星形细胞上调基因1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在唾液腺肿瘤中的表达和意义。方法：免疫组化检测唾液腺良性肿瘤(多形性腺瘤)、恶性肿瘤(黏液表皮样癌和腺样囊性癌)组织中AEG-1的表达,探讨AEG-1的表达与唾液腺肿瘤临床病理特征的相关性。选取同期15例非肿瘤手术切除的正常唾液腺组织作为对照。采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。结果：肿瘤组织中AEG-1阳性率显著高于正常唾液腺组织(P=0.001),恶性肿瘤组AEG-1的阳性率显著高于良性肿瘤组织(P=0.033),晚期恶性肿瘤(T3+T4)AEG-1阳性率显著高于早期肿瘤(T1+T2)(P=0.035)。结论：AEG-1可能在唾液腺肿瘤的发生和恶变过程中起着一定作用。     

CD147在唾液腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

目的：研究CD147在唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）中的表达及与腺样囊性癌临床病理特征、患者预后的关系。方法：采用免疫组化Envision^TM法检测72例唾液腺腺样囊性癌组织和20例正常唾液腺组织CD147的表达,应用SPSS16．0软件包对实验数据进行统计学分析。结果：CD147在腺样囊性癌中表达阳性率为62．5％,显著高于正常唾液腺组（25．0％）,P〈0．01。CD147表达与腺样囊性癌大小、病理分型、临床分期、神经侵袭、血管侵袭及肿瘤转移显著相关（P〈0．05）,与患者性别、年龄及肿瘤复发无显著性相关忪0．05）。单因素分析显示．CD147表达强阳性组累积生存率显著低于弱阳性及阴性表达组（P〈0.0001）。多因素分析显示,CD147表达及肿瘤病理分型、血管侵袭、肿瘤转移是影响腺样囊性癌患者总生存期的独立预后因素（P〈0．05）。结论：CD147的表达与腺样囊性癌临床病理特征密切相关,对腺样囊性癌诊断和预后评估有重要参考价值。     

TGF-β1对人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨TGF-β1在腺样囊性癌的增殖、迁移和侵袭、浸润过程中的作用和相关机制。方法:以腺样囊性癌ACC-2细胞株为研究对象,采用TGF-β1刺激ACC-2细胞,MTT法检测ACC-2细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western蛋白印迹检测ACC-2细胞MAPK(P38、JNK、ERK)的活化及MMP-2表达的变化,实时定量PCR检测ACC-2细胞中MMP-2的mRNA表达变化。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:TGF-β1刺激后,ACC-2细胞增殖能力无显著变化(P>0.05),但迁移、侵袭能力增强(均为P<0.01);同时,ACC-2细胞p-ERK1/2、p-P38和MMP-2蛋白表达升高(均为P<0.05),MMP-2 mRNA表达亦升高(P<0.01),但p-JNK1/2蛋白无显著变化(P>0.05)。结论:TGF-β1可增强人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞的迁移和侵袭能力,活化p-ERK1/2和p-P38,上调MMP-2的表达。TGF-β1/MAPK/MMP-2通路可能参与人唾液腺腺样囊性癌ACC-2细胞侵袭能力的调节。     

MicroRNA-320a调控唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的实验研究

目的：探讨microRNA-320a（miR-320a）对唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移能力的调控作用。方法：以唾液腺腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M为实验样品,通过脂质体介导,将miR-320a的拟似物（miR-320a mimics）转染至ACC-M细胞,升高miR-320a的表达水平。采用荧光实时定量RT-PCR检测转染前、后ACC-M中miR-320a的表达变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变,并通过细胞计数试剂盒-8检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测miR-320a对细胞凋亡的影响,Western印迹检测miR-320a的靶基因整合素β3（integrinβ3,ITGB3）的表达变化。应用SPSS13.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。结果：转染miR-320amimics后的ACC-M中miR-320a的表达明显上调（P〈0.001）。ACC-M细胞的侵袭迁移能力显著降低（P〈0.001）,而细胞的增殖和凋亡无显著变化。Western印迹检测结果显示,Integrinβ3在低转移细胞株ACC-2表达阴性,在ACC-M中高表达;升高miR-320a在ACC-M中的表达,Integrinβ3表达明显降低。结论：低表达miR-320a有助于维持ACC的侵袭转移特性,调高其表达水平能有效抑制ACC-M的侵袭迁移能力。miR-320a可能通过调控其靶基因Integrinβ3的表达而发挥作用。     

miR-181a抑制唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移机制的实验研究

目的 探讨miR-181a在唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭、转移中的作用。方法 利用QRT-PCR检测miR-181a在一对不同侵袭、迁移能力细胞株中的表达水平。过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。利用激光共聚焦显微镜观察转染后细胞骨架的改变。Western免疫印迹检测转染后侵袭、转移相关因子的表达。通过尾静脉注射miR-181a mimics和mimics NC细胞,建立裸鼠肺转移模型。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 QRT-PCR结果显示,miR-181a在低侵袭、迁移能力SACC-83细胞中的表达量显著高于高侵袭、迁移能力的SACC-LM细胞。SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后,细胞呈梭形,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平下调;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后,细胞变圆,体积变小,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平升高。裸鼠肺转移模型miR-181a mimics组,细胞形成肺转移灶面积显著小于mimics NC组（P<0.05）。结论 miR-181a能抑制SACC的侵袭和转移。     

M期促进因子在唾液腺腺样囊性癌中的表达

目的：研究M期促进因子（MPF）的表达与唾液腺腺样囊性癌（SACC）临床病理特点之间的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测40例SACC组织及40例正常唾液腺组织中MPF的表达。应用Westem印迹测定SACC细胞系SACC-83和SACC肺高转移细胞系SACC-LM中MPF的表达。采用SPSS11．5统计软件包,分别应用χ^2检验、配对t检验和线性相关分析进行统计学处理。结果：SACC组织中MPF的表达明显升高,与正常唾液腺组织之间存在显著差异（P〈0．05）。MPF的表达与SACC的病理类型有关（P〈0．05）。体外培养的SACC细胞系SACC-LM中MPF的表达显著高于SACC-83中MPF的表达（P〈0．05）。结论：MPF在SACC组织中呈高表达,其表达与SACC的发生密切相关,MPF的异常激活是SACC恶性增殖的原因之一,MPF与SACC的转移能力有关。     

BDNF/TrkB在唾液腺腺样囊性癌上皮-间质转化过程中的表达及意义

目的 研究BDNF、TrkB和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌（SACC）细胞系中的表达,初步探讨BDNF、TrkB和E-cadherin与SACC高转移性及神经侵袭性之间的关系。方法 以SACC高、低转移细胞系SACC-LM和SACC-83为研究对象,利用实时荧光定量 PCR和Western 免疫印迹技术检测BDNF、TrkB和E-cadherin在其中的表达差异;在SACC-83细胞系中加入外源性BDNF因子、TrkB抑制剂k252a,分析BDNF/TrkB通路在SACC侵袭转移过程中的生物学作用;利用实时荧光定量 PCR、Western 免疫印迹、细胞形态观察、细胞迁徙和侵袭实验评估SACC细胞上皮-间质转化（EMT）进程。应用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 BDNF 和TrkB在SACC-LM中的表达高于SACC- 83,E-cadherin在SACC-LM中的表达低于SACC- 83;外源性BDNF刺激能有效诱导TrkB的激活和表达,降低E-cadherin的表达,提高N-cadherin的表达,使细胞形态呈长梭形改变,促进SACC-83细胞的迁徙、侵袭能力;而TrkB受体抑制剂k252a可有效抑制BDNF的各种作用,降低SACC-83细胞形态变化和迁徙、侵袭能力。结论 BDNF/TrkB信号通路通过介导SACC的EMT过程,促进SACC的迁徙、侵袭能力。     

CCL5/CCR5生物轴在涎腺腺样囊性癌细胞嗜神经侵袭中的作用

目的 探讨CCL5/CCR5生物轴在涎腺腺样囊性癌（SACC）细胞嗜神经侵袭中的作用。方法 应用细胞免疫荧光技术和流式细胞术检测SACC-LM细胞中趋化因子受体CCR5的表达;应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测周围神经细胞培养上清液中趋化因子CCL5的表达。应用流式细胞术检测CCL5对SACC-LM细胞内F肌动蛋白的作用,并通过划痕和侵袭实验观察趋化因子CCL5和其受体CCR5对SACC-LM细胞运动能力和侵袭能力的作用。结果 SACC-LM细胞高表达趋化因子受体CCR5;周围神经原代培养上清液中趋化因子CCL5质量浓度为（359.2±15.8）、（696.4±22.6） pg·mL^-1;趋化因子CCL5和其受体CCR5结合后对SACC-LM细胞的运动能力和侵袭能力可以产生促进作用。结论 CCL5/CCR5生物轴可能在SACC细胞嗜神经侵袭中起着重要的作用。     

GAL/GALR2促进涎腺腺样囊性癌细胞神经侵袭的研究

目的:探究甘丙肽(Galanin,GAL)和甘丙肽2型受体(GALR2)在涎腺腺样囊性癌(SACC)神经侵袭中的作用.方法:将SACC细胞与小鼠背根神经节(DRG)共培养.qRT-PCR、Western Blot检测SACC细胞GALR2的表达;CCK-8、流式细胞术、划痕、Transwell检测GAL对SACC细胞增...     

微小RNA-181a抑制唾液腺腺样囊性癌细胞株增殖能力的研究

目的探讨微小RNA（miR）-181a对唾液腺腺样囊性癌（SACC）细胞增殖能力的体内外作用影响。 方法通过过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。实时荧光定量PCR检测转染后SACC细胞株中miR-181a的表达水平。MTT法检测miR-181a对SACC细胞体外增殖能力的影响。Western blot检测转染后生长因子因子表达的改变。裸鼠皮下移植瘤模型检测miR-181a对SACC细胞体内增殖能力的影响。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P<0.05为差异具有统计学意义。 结果实时荧光定量PCR结果示,转染后SACC-LM细胞中miR-181a表达升高（t = -9.198,P = 0.012）,而SACC-83细胞中miR-181a表达降低（t = -7.241,P = 0.019）;SACC-LM细胞增殖能力降低（t = -4.58,P = 0.045）,而SACC-83细胞增殖能力提高（t = 3.016,P = 0.03）;SACC-LM细胞中转化生长因子β2（TGF-β2）、神经生长因子（NGF）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平均下调,而SACC-83细胞中TGF-β2、NGF和VEGF的表达水平均升高。裸鼠皮下移植瘤模型结果显示,miR-181a mimics组移植瘤瘤体明显小于mimics NC组（t = -4.692,P = 0.043）。 结论miR-181a能抑制SACC细胞体内体外的增殖能力。     

盘状结构域受体1与基质金属蛋白酶2在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:检测唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma, SACC）组织中盘状结构域受体1（discoidin domain receptor 1,DDR1）与基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）的表达,探讨两者在SACC中的表达意义及相关性。方法:应用SP免疫组织化学方法检测54例SACC标本和30例正常唾液腺组织中DDR1与MMP2的表达情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:DDR1在SACC中的阳性表达率为87.0%,显著高于正常唾液腺组织（10%,P<0.01）。DDR1的高表达与SACC的神经侵袭、淋巴结转移相关（P<0.05）。MMP2在SACC中的阳性表达率为68.5%,显著高于正常唾液腺组织（13.3%,P<0.01）。经Spearman等级相关分析,DDR1与MMP2呈现显著正相关（r=0.332, P<0.05）。结论:在SACC中,DDR1与MMP2共同高表达,与SACC的发生与发展相关。