bcl-x_s促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的　利用促进凋亡基因bcl-xs 降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法　将含有人bcl -xs 基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株 (CNE - 2Z) ,以不含有bcl-xs 基因的质粒转染CNE - 2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果　导入bcl-xs 的细胞与对照细胞相比 ,其对三氧化二砷的IC50 值明显降低 ,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论　bcl-xs 能显著提高鼻咽癌CNE - 2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性     

鼻咽癌化疗现状及进展

鼻咽癌是我国常见的头颈部肿瘤,90%以上为低分化鳞状细胞癌和未分化癌,所以相对于其他的头颈部肿瘤,鼻咽癌对化疗较敏感,放疗联合化疗已成为局部晚期鼻咽癌标准的治疗模式。化疗方式按照其时间和目的的不同可分为诱导化疗、同步放化疗、辅助化疗和姑息化疗。现就鼻咽癌化疗现状及进展综述如下。     

bcl—xs促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的 利用促进凋亡基因bcl-xs降低肿瘤细胞凋亡阈值,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法 将含有人bcl-xs基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株（CNE－2Z）,以不含有bcl-xs基因的质粒转染CNE－2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后,台盼蓝计数法求得各自的IC50,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果 导入bcl-xs的细胞与对照细胞相比,其对三氧化二砷的IC50值明显降低,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 bcl-xs能显著提高鼻咽癌CNE－2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性。     

喜树碱诱导鼻咽癌细胞凋亡的线粒体机制探讨

目的 :了解喜树碱 (CPT)诱导鼻咽癌细胞凋亡是否与线粒体膜电位改变有关。方法 :用 2 μmol/ L 的CPT 处理 CNE- 2 Z细胞 ,经流式细胞仪、Hoechst332 5 8/ PI双重染色鉴定凋亡细胞 ,同时用罗丹明 12 3(Rhodamine12 3)染色后 ,经流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 :CPT可明显降低线粒体膜电位 ,2 μm ol/ L 的CPT处理 CNE- 2 Z细胞 2 4h后 ,罗丹明 12 3摄取量低的细胞明显增加 ,达 (19.0± 3.0 ) % ,与 DMSO对照组的(7.0± 1.4) %相比 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :降低线粒体膜电位可能是 CPT诱导鼻咽癌细胞凋亡的机制之一。     

鼻咽癌组织细胞凋亡的检测

目的 :探讨鼻咽癌组织放疗后病理改变及其临床意义。方法 :采用TdT酶介导的生物素化dutp缺口末端标记技术和HE染色 ,检测 30例鼻咽癌组织放疗前后的细胞凋亡率 ,并比较放疗前后的组织病理改变。结果 :鼻咽癌组织放疗后的细胞凋亡率明显高于放疗前 ;放疗后的癌细胞分化趋好 ,但到放疗中期时凋亡率有所下降。结论 :鼻咽癌放疗一方面可加速癌细胞的凋亡 ,另一方面可能促使增殖的癌细胞朝分化好的方向发展 ,从而达到治疗目的     

基于丝氨酸/苏氨酸激酶信号观察芬太尼对鼻咽癌细胞增殖侵袭的作用机制

目的　基于丝氨酸/苏氨酸激酶（RhoA/Rho）信号通路观察芬太尼（简称芬太尼）对鼻咽癌细胞增殖侵袭的影响。方法　传代培养高侵袭性鼻咽癌细胞系CNE2,分为空白对照组（加入无血清培养基）、抑制剂组（加入RhoA激酶抑制剂C3转化酶）、芬太尼组（加入药物芬太尼）。MTT实验、划痕实验及Transwell检测细胞增殖、迁移 和侵袭能力,采用qRT-PCR法、Western blot法检测 RhoA、Rho的mRNA和蛋白表达。采用Western blot法检测RhoA/Rho激活后的下游效应产物MYPT1蛋白。结果　与空白对照组比较,芬太尼组与抑制剂组细胞克隆数、细胞增殖率、细胞迁移率均显著降低（t =24.947、22.329、5.361、4.789、9.262、8.968,P 均＜0.05）;抑制剂组与芬太尼组RhoA以及Rho的mRNA转录水平显著低于空白对照组（t =7.712、8.261、7.983、7.905,P 均＜0.05）;与空白对照组相比,芬太尼组与抑制剂组的RhoA、Rho以及MYPT1蛋白表达明显降低（t =2.661、3.105、3.862、3.429、4.656、4.648,P 均＜0.05）。结论　芬太尼可抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭,该作用可能与其抑制Roha/Rho激酶信号密切相关。     

hTR反义寡核苷酸诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的：探讨人端粒酶反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞凋亡的作用。方法：脂质体介导反义寡核苷酸转染鼻咽癌ＨＮＥ１细胞株,采用吖啶橙荧光染色计数,透射电镜观察ＨＮＥ１细胞凋亡改变。结果：反义寡核苷酸转染ＨＮＥ１细胞４８小时后,ＨＮＥ１细胞形态出现改变,细胞娄减少。吖啶橙荧光染色计数及透射电镜分别发现,反义寡核苷酸组较对照组有更多的调亡细胞及更高的调亡指数。结论：针对端粒酶ＲＮＡ的反义寡核苷酸能有效地通过抑制端粒     

γ射线诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察γ射线诱导鼻咽癌细胞亡情况。方法：显微荧光染色法和原位未端标记法治 观察放射线对人鼻咽癌细胞株（ＨＮＥ１）凋亡情况进行研究。结果：γ射线０、３、６、９、１２、２５Ｇｙ照射后ＨＮＥ１细胞凋亡率荧光法分别为５．５％、９．５％、１２％、２５．５％、３５．５％、６５．５％;未端标记法分别为１．５％、１１％、１５．５％、２１．５％、２６．５％及５０．５％。结论：放射诱导凋在ＨＮＥ１放射效应中起重要     

溶酶体与化疗抵抗的关系研究进展

化疗广泛应用于恶性肿瘤的治疗,但化疗抵抗严重影响化疗的效果。同时,化疗抵抗是肿瘤不能治愈的主要原因之一。溶酶体是真核细胞蛋白降解的主要场所,最近研究发现溶酶体与肿瘤化疗抵抗有关。本文对近年来溶酶体与化疗抵抗关系进行综述。     

三氧化二砷对鼻咽癌细胞周期和细胞骨架微丝的影响

目的 研究三氧化二砷（As2O3）对鼻咽癌细胞周期和细胞骨架微丝的影响并探讨其作用机制.方法 采用流式细胞仪（flow cytometry,FCM）、激光扫描共聚焦显微镜（Iaser scanning confocal microscopy,LSCM）和荧光标记技术,检测人鼻咽癌细胞株（nasopharyngeal carcinoma cell line,CNE1）经As2O3诱导后细胞周期和细胞骨架微丝的变化.结果 FCM显示,经浓度为2 μ mol/L、4 μ mol/L As2O3处理后,G1期的细胞显著增加（P＜0.001）;经8 μ mol/L As2O3处理后,出现明显的细胞凋亡峰（P＜0.001）,S和G2/M期细胞显著增加（P＜0.001）.经4 μ mol/L、8 μmol/L As2O3处理后,细胞内纤维型-肌动蛋白（F-actin）含量明显减低（P＜0.001）.LSCM图像观察到,经4 μ mol/L As2O3处理后,标记F-actin的绿色荧光显著减弱;经8 μ mol/LAs2O3处理后,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征.结论 As2O3引起的细胞周期的改变对CNE1细胞的分化和凋亡起重要作用;As2O3诱导的细胞骨架微丝的改变与细胞周期的改变密切相关.     

一氧化氮对鼻咽癌CNE-2细胞株化疗增敏效应的研究

目的 探讨外源性一氧化氮(NO)在顺铂(DDP)作用于CNE-2细胞的过程中是否存在增敏效应,为提高鼻咽癌化疗疗效提供实验和理论依据。 方法 分别使用不同浓度NO供体药物硝普钠(SNP)、DDP及二者联合干预CNE-2细胞,采用硝酸还原酶法检测NO的浓度,镜下观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞增殖抑制率以及流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 (1) SNP呈浓度依赖方式抑制CNE-2细胞的增殖、促进凋亡;(2) 上清液中NO浓度与SNP浓度呈正相关,有统计学意义(r=0.968, P<0.001);(3) DDP+SNP联合组与SNP组和DDP组相比,CNE-2细胞形态学差异显著, 漂浮细胞显著增多,贴壁数量逐渐减少并失去原有形态;(4) 当SNP 600 μmol/L时对细胞增殖无明显影响,然而联合DDP后较单用DDP组细胞抑制率显著提高(t=9.049, P<0.001);(5) SNP组与DDP联用时CNE-2细胞凋亡率上升,较单用SNP、DDP组显著增强(t=-19.816, P<0.001; t=-5.242, P=0.035)。 结论 外源性NO能抑制CNE-2的增殖,其抑制效应与NO浓度呈正相关;合适浓度的外源性NO可在对细胞本身不产生明显毒性的情况下显著增强DDP对CNE-2细胞株的化疗敏感性。     

鼻咽癌组织TRAILmRNA的表达

目的 分析鼻咽癌（NPC）组织细胞凋亡诱导分子TRAILmRNA的表达,方法 从NPC组织提取的细胞总RNA逆转录生成第1条cDNA链后,再用DNA聚合酶链式反应扩增,经电泳、溴乙锭染色后分析TRAILmRNA的表达。结果 20例NPC患者癌组织17例可检测到TRAILmRNA的表达。其表达阳性率为85%。8例非NPC鼻咽组织有5例可检测到TRAILmRNA的表达。表达阳性率为62.5%。临床早期（临床分期Ⅰ-Ⅱ期）NPC组织TRAIL表达阳性率与晚期（临床分期Ⅲ-Ⅳ期）NPC组织的表达阳性率无显著差别。结论 NPC组织存在TRAILmRNA,其表达阳性率与临床分期无密切关系。     

3-溴丙酮酸对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 观察3-溴丙酮酸(3-B r PA)对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 用不同浓度的3-BrPA处理CNE-1细胞,24 h后CCK-8法检测细胞增殖活性,PI染色法流式检测细胞凋亡情况,Western blot检测mTOR和S6及其相应磷酸化蛋白的表达水平.结果 50、100、1...     

田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2生长和凋亡的影响

目的探讨田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制和凋亡作用,为其临床应用提供实验依据。方法SRB法检测田基黄对CNE-2细胞生长的抑制作用,PI分析细胞周期的变化、Annexin V检测细胞凋亡的发生。结果田基黄抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;田基黄诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死;田基黄作用人鼻咽癌细胞后S期细胞的比例增加,G2/M期细胞的比例减少。结论一定浓度的田基黄可明显抑制人鼻咽癌细胞CNE-2生长,并诱导其凋亡,机制可能与阻滞细胞停留在S期有关。     

丹酚酸B对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 研究丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞的半数抑制浓度(IC50);用IC50浓度的丹酚酸B处理人鼻咽癌CNE-2细胞后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;在荧光显微镜下应用Hoechst33258荧光...     

叶酸受体1在鼻咽癌细胞抵抗紫杉醇化疗药物中的作用

目的 研究叶酸受体1(folate receptor 1,FOLR1)在鼻咽癌细胞和永生化正常鼻咽细胞(NP69)中表达的差异,及FOLR1的表达与鼻咽癌紫杉醇耐药的相关性,为FOLR1介导的肿瘤靶向治疗及耐药逆转提供实验依据.方法 利用基因芯片技术,反转录聚合酶链反应(RT-PCR),Western blot和免疫细胞化学技术检测FOLR1在永生化正常鼻咽细胞(NP69),鼻咽癌细胞系(CNE-1)及紫杉醇耐药细胞系(CNE-1/Taxol)中表达的差异;利用小干扰RNA(siRNA)技术抑制CNE-1/Taxol中FOLR1的表达后,观察其耐药能否逆转.结果 基因芯片结果 显示CNE-1/Taxol中FOLR1的表达为2636.0,CNE-1的表达为176.0;RT-PCR和Western blot结果 显示FOLR1在NP69中无表达,而在CNE-1及CNE-1/Taxol中呈阳性表达,并且与耐药指数呈正相关(r2=0.8719);免疫细胞化学结果 也证实了FOLR1在鼻咽癌CNE-1/Taxol中高表达;利用siRNA技术抑制CNE-1/Taxol中FOLR1的表达后,耐药细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,其IC50值降低了59.6%(t=6.92,P<0.001).结论 实验结果 提示FOLR1的表达与鼻咽癌发生及紫杉醇耐药密切相关.FOLR1基因将可能成为鼻咽癌治疗及紫杉醇耐约逆转的靶分子之一.     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

水疱口炎病毒诱导人类鼻咽癌凋亡和抗肿瘤作用的体外研究

目的:通过体外培养,探讨水疱口炎病毒(VSV)对人类鼻咽癌HNE-1细胞株的抗肿瘤作用和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法:体外培养HNE-1细胞,实验组分别给予浓度梯度不同的VSV(以感染复数moi为单位),即0.1moi、1.0moi、10.0moi、100.0moi组和空白对照组。分别在24h和48h于倒置显微镜下观察各组肿瘤细胞出现的细胞病变,MTT实验分析VSV处理导致的肿瘤细胞杀伤作用,HO33258染色荧光显微镜检测VSV诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡。结果:不同浓度的VSV实验组与空白对照比较,实验组肿瘤细胞出现了细胞病变,MTT实验证实VSV杀伤肿瘤细胞的作用随VSV感染复数增加、作用时间延长而增强。HO 33258染色荧光显微镜检测发现VSV能诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡,并且凋亡率随VSV的增加而增加。结论:体外实验的结果表明VSV具有杀伤肿瘤细胞的能力,能够一定程度地诱导人鼻咽癌HNE-1细胞凋亡。     

程序性细胞死亡在鼻咽癌中的研究进展

无论是正常细胞还是癌细胞,在生长代谢过程中均可通过某种细胞死亡形式来维持机体的内环境平衡。许多癌症中已经明确了某些关键调节蛋白作为预后生物标志物的潜力,鼻咽癌占据我国头颈肿瘤发病率之首,近些年对它的治疗以及相关分子机制的研究获得了巨大发展。本文主要回顾近年来程序性细胞死亡形式在鼻咽癌中的生物学机制及潜在治疗研究进展,探究如何应用特定方法诱导恶性细胞死亡且不损伤或者少量损伤正常细胞,并对鼻咽癌与程序性细胞死亡研究进展做一综述。     

介入化疗对鼻咽癌细胞凋亡和增殖的影响

目的：观察介入化疗对鼻咽癌细胞凋亡（ＡＰＯ）和细胞增殖的影响,并评价其疗效。方法：对１０例鼻咽癌患者经颞浅动脉逆行颈外动脉插管,选择肿瘤供血血管灌注化疗药物５－氟嘧啶、顺铂、平阳霉素及烟酰胺。分别;于化疗前、化疗后７ｄ取肿瘤组织,检测调亡细胞和增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）结果：介入化疗后临床缓解率为６３％。化疗后７ｄ细胞凋亡指数（ＡＩ）１．２４％,高于治疗前的０．５２％。细胞增殖指数化疗前为４２．４％