幼稚和记忆T 细胞在NSCLC 放疗患者中的表达及其预后价值

  目的  探讨幼稚和记忆T细胞在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）放疗患者外周血中的表达及其与预后的关系。  方法  采用流式细胞仪检测2014年9月至2016年5月解放军307医院40例接受放疗的NSCLC首诊患者,治疗前外周血中幼稚CD4+T细胞、记忆CD4+T细胞、幼稚CD8+T细胞、记忆CD8+T细胞,与14例健康人进行对比,并分析其与临床病理特征及预后的关系。  结果  与健康组相比,NSCLC患者幼稚CD4+T细胞下降（P=0.031）,记忆CD4+T细胞和记忆CD8+T细胞升高（P=0.014、0.005）。与不吸烟患者相比,吸烟患者幼稚CD4+T细胞较低（P=0.043）,记忆CD4+T细胞较高（P=0.024）。与ECOG评分1～2分者相比,0分者幼稚CD8+T细胞较低（P=0.017）,记忆CD8+T细胞较高（P=0.020）。单因素分析显示幼稚CD4+T细胞较高组放疗后中位无进展生存期（median progression free survival,mPFS）更长（17个月vs. 9个月,P=0.044）、记忆CD4+T细胞较高组放疗后mPFS可能更短（9个月 vs. 15个月,P=0.069）。Cox多因素分析显示幼稚CD4+T细胞与患者放疗后无进展生存期（progression free survival,PFS）独立相关（P=0.009）。  结论  NSCLC患者外周血中幼稚T细胞储备下降,记忆T细胞上升。幼稚CD4+T细胞较高可能预示放疗后PFS更长。      

肿瘤患者外周血调节性T细胞的检测及临床意义

目的:研究肿瘤患者外周血调节性T细胞水平的变化并探讨其临床意义,旨在了解肿瘤患者的免疫功能改变,为肿瘤患者临床治疗及判断预后提供依据。方法:采用流式细胞仪对40例肿瘤患者及40例正常人外周血CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平进行检测。结果:肿瘤患者外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25highT细胞高于正常对照组(P<0.05);CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞亦明显高于对照组(P<0.01)。结论:肿瘤患者细胞免疫功能明显异常,CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞增多可能是肿瘤患者免疫功能受抑的重要原因之一;调节性T细胞水平检测在评价肿瘤患者疗效及判断预后方面具有一定的临床价值。     

肺癌患者外周血调节性T细胞和IL-10的检测及其意义

  目的  探讨肺癌患者外周血调节性T细胞和IL-10检测的诊断意义及与临床特征相关性。  方法  采用流式细胞仪检测60例肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞的表达水平, 同时采用ELISA法检测IL-10的表达水平。并随机选30例健康体检者作为对照组。  结果  肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平明显高于健康对照组（P < 0. 05）; CD4+CD25+T细胞与IL-10的检测结果呈正相关; 肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平与临床分期有关（P < 0. 05）, 与病理类型无关（P>0. 05）。  结论  检测肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平, 有助于肺癌患者病情的评估和治疗。      

晚期非小细胞肺癌患者DC-CIK治疗前的免疫状态与预后的关系

目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(dendritic cellcytokine induced killers,DC-CIK)治疗前外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(regulatory T cells,TRegs)、CD3+CD56+细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIKs)、CD4+/CD8+T细胞比值与预后的关系。方法采用流式细胞仪技术检测45例晚期NSCLC患者DC-CIK治疗前、后外周血CD4+CD25+CD127-TRegs、CD3+CD56+CIKs、CD4+和CD8+T细胞,并与患者临床特征进行相关分析;采用Cox回归模型分析治疗前CD4+CD25+CD127-TRegs、CD3+CD56+CIKs、CD4+/CD8+T细胞比值对患者预后的影响。结果晚期NSCLC患者DC-CIK治疗前、后比较,治疗后患者外周血CD4+T细胞减少,CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+T细胞比值下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);原发病灶瘤体最长直径越大,患者治疗前外周血TRegs越多,CIKs越少(均P<0.05);生存分析显示,治疗前TRegs越多,患者预后越差,生存期越短,且TRegs>7×109/L影响患者的生存(P<0.05)。结论晚期NSCLC患者外周血TRegs是判断预后的独立预测指标。     

外周血T淋巴细胞亚群与不同分子分型乳腺癌患者无病生存的相关性研究

  目的  观察不同分子分型浸润性乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的表达情况, 分析乳腺癌患者免疫状态与不同分子分型乳腺癌的相关性。  方法  选取2008年1月至2009年8月初诊于天津医科大学肿瘤医院乳腺中心的患者372例。均对入组患者采血, 采用流式细胞术分析外周血的T淋巴细胞的亚群CD4+T细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg细胞)及自然杀伤(NK)细胞水平。分析CD4+/CD8+比值的大小、调节性T细胞、自然杀伤细胞的免疫相关指标与乳腺癌不同分子分型Luminal A、Luminal B、HER-2过表达型以及三阴性乳腺癌患者临床病理特征之间的相关性。  结果  372例乳腺癌患者中, Luminal A型为133例(35.8%)、Luminal B型为124例(33.3%)、HER-2过表达型为48例(12.9%)、三阴性为67例(18.0%)。在三阴性乳腺癌中外周血CD4+/CD8+比值越高, 患者的无病生存时间越长(P < 0.05), Treg细胞含量越低, 患者的无病生存时间也越长(P < 0.05), 但CD4+/ CD8+比值与Treg细胞含量并非三阴性乳腺癌无病生存的独立预后因素。而其他三种类型的乳腺癌中, CD4+/CD8+比值、Treg细胞含量与患者无病生存率无关(P>0.05)。NK细胞含量与以上4种分子分型乳腺癌患者的无病生存率并无明显的相关性(P>0.05)。  结论  外周血CD4+/CD8+比值、Treg细胞含量可有效预测三阴性乳腺癌的无病生存率, 但并非其独立的预后因素。      

卵巢癌腹水CD4+ CD25+调节性T细胞免疫抑制功能及机制的研究

  目的  研究卵巢癌患者腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）免疫抑制功能与患者临床病理特点的关系及其与患者初治及复发状态是否相关,并进一步探讨卵巢癌腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）发挥免疫调节性作用的具体机制。  方法  应用免疫磁珠分选法分选28例卵巢癌患者腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞及CD4+ CD25- T细胞,采用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidylester,CFSE）标记CD4+ CD25- T细胞,CD4+ CD25+ Treg与自体CFSE标记CD4+ CD25- T细胞以1:1比例共培养,经流式检测CFSE表达及Modfit软件分析CD4+ CD25- T增殖指数（PI）,计算各标本内Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率。应用中合性抗IL-10抗体及中合性抗TGF-β1抗体探究腹水内CD4+ CD25+ Treg介导免疫逃逸作用是否通过抑制性细胞因子IL-10或TGF-β1发挥作用。  结果  Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌腹水内CD4+ CD25+ Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率为（75.72±17.04）%,较Ⅰ~Ⅱ期Treg抑制率（59.61±16.97）%显著增强（P < 0.05）。复发卵巢癌患者腹水内Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率为（85.89±7.07）%,较初治卵巢癌患者腹水Treg抑制率（52.82±8.18）%显著增强（P=0.000 1）。共培养体系内加入中合性抗IL-10抗体或/及中和性抗TGF-β1抗体,Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率较对照组均显著降低（P < 0.05）。  结论  卵巢癌腹水内CD4+ CD25+ Treg介导免疫逃逸能力与肿瘤分期及复发、初治状态相关,且发挥免疫逃逸作用可能是与分泌抑制性细胞因子IL-10及TGF-β1有关。      

调节性T细胞在口腔鳞癌患者外周血及癌组织中的表达和意义

目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）在口腔鳞癌患者外周血及癌组织中的表达和意义。方法 选取初诊的30例口腔鳞癌患者,按临床分期分为A、B两组,A组为Ⅰ、Ⅱ期患者,B组为Ⅲ、Ⅳ期患者,10例健康志愿者为对照组（C组）。分别采集三组受试对象晨起空腹外周血3 ml,采用流式细胞术测定外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、CD80、CD86和HLA-DR的表达情况;取试验组及对照组手术标本,利用免疫组织化学法测定Foxp3+调节性T细胞的浸润情况。结果 CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞占CD4+ T淋巴细胞比例在三组中分别为（2.80±0.90）%(A组)、（5.09±1.72）%（B组）、（0.57±0.15）%（C组） , 组间比较差异具有统计学意义（P=0.000）。A、B组外周血中单个核细胞表面共刺激分子CD80+CD86+、 CD80+HLA-DR+及CD86+HLADR+细胞的表达明显低于C组;CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞所占比例与CD80+CD86+、CD80+HLA-DR+和CD86+HLA-DR+表达率进行直线相关分析,相关系数分别为-0.512、-0.430、-0.461,均有统计学意义。免疫组织化学结果显示,Foxp3在口腔鳞癌组织中主要分布在黏膜固有层肿瘤间质,其中Foxp3+调节性T细胞在高分化和中分化口腔鳞癌中少,在低分化口腔鳞癌中多,两者间差异有统计学意义。结论 检测口腔癌患者外周血和肿瘤组织中CD4+CD25+Foxp3+调节性T胞,有助于对机体抗肿瘤免疫水平、病变进展情况和肿瘤预后进行评估,为临床生物治疗提供佐证。     

食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在食管癌局部及全身免疫中的作用.方法:流式细胞仪检测97例食管癌患者外周血和20例肿瘤组织的CD4+CD25+调节性T细胞比例,比较不同病理类型、不同分期等食管癌患者外周血及肿瘤局部组织的CD4+CD25+调节性T细胞的分布变化.结果:食管癌患者肿瘤组织CD4+CD25+调节性T细胞比例为(18.97±2.38)%,高于患者外周血比例[(17.57±3.99)%],差异无统计学意义,t=1.511,P＞0.05;食管癌患者肿瘤组织及外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的比例,均高于同期健康对照组患者外周血的比例(9.35±1.41)%,差异有统计学意义,t值分别为12.111和8.332,P值均＜0.01.CD4+CD25+调节性T细胞水平与临床分期(F=9.384)、有无淋巴结转移(t=2.326)有关,P值均＜0.05.结论:食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常,推测CD4+CD25+调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展.     

健择联合顺铂化疗对非小细胞肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节T细胞的影响

目的探讨健择联合顺铂对非小细胞肺癌患者免疫耐受的调控作用。方法38例经病理学或细胞学确诊的NSCLC患者,采用健择、顺铂联合化疗方案,应用流式细胞仪检测化疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞(Treg)占CD4+T细胞的百分率。结果化疗前NSCLC患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞(Treg)占CD4+T细胞的比率明显高于健康对照组(P<0.05);化疗后NSCLC患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞(Treg)占CD4+T细胞的百分率较化疗前显著降低(P<0.05);但鳞癌、腺癌及腺鳞癌3组间化疗前、化疗后各项指标之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论健择联合顺铂化疗可调控晚期非小细胞肺癌机体的肿瘤免疫耐受,改善患者的免疫功能。     

肺癌患者外周血 T- 淋巴细胞亚群 NK 细胞的基线数值及其与预后的关系*

目的:对比肺癌患者与健康者之间淋巴细胞亚群差异,评估肺癌患者外周血T 淋巴细胞亚群及自然杀伤细胞（NK）之基线值与预后的关系。方法:收集2006年2 月至2013年3 月就诊于天津医科大学肿瘤医院病例资料完整的肺癌患者105 例,其中非小细胞肺癌（NSCLC ）86例、小细胞肺癌（SCLC）19例,另选健康对照35例,对比接受治疗前肺癌患者和健康对照者外周血中的CD3+T 细胞、CD4+T 细胞、CD8+T 细胞及NK细胞所占百分比,并回顾性分析86例NSCLC 患者初治时外周血淋巴细胞亚群与预后的关系。结果:肺癌患者外周血CD3+T 细胞、CD4+T 细胞、NK细胞及CD4/CD 8 比值均明显低于健康对照组（P = 0.011,P = 0.007,P <0.001,P=0.025）,而CD8+T 细胞比例高于健康对照组（P = 0.013）。 当CD8+T ≥ 31.8% 及CD4/CD 8< 1.28时NSCLC 患者可以获得一个更长的OS（中位OS分别为36.2 m vs . 20.0 m ,P = 0.010;30.8 m vs . 20.0 m ,P = 0.035）。 而CD3+T 细胞、CD4+T 细胞及NK细胞百分比对NSCLC 患者预后无显著影响。结论:外周血CD8+T 细胞基线水平较高的NSCLC 患者生存较长,此基线水平可能对NSCLC 患者预后有指示作用。      

非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞检测及临床意义

[目的]探讨非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）表达及临床意义。[方法]流式细胞术检测30例非小细胞肺癌组患者及12例健康志愿者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg百分比。[结果]肺癌组外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比（6.24%±2.01%）高于健康对照组（4.83%±0.85%）（P〈0.05）,外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比在肺癌患者不同性别、年龄、病理、KPS及肿瘤标志物正常与否之间比较无差异（P〉0.05）,Ⅳ期患者表达高于Ⅰ～Ⅲ期患者（P〈0.05）,带瘤患者表达高于无瘤患者（P〈0.05）,有气虚证、血瘀证患者高于无气虚证、血瘀证患者（P〈0.05）。[结论]检测肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg表达在了解患者肿瘤进展情况和机体免疫功能状态方面有一定价值,其表达升高与患者出现气虚证和血瘀证有关。     

The variation of CD4+CD25+ regulatory T cells in the periphery blood and tumor microenvironment of non-small cell lung cancer patients and the downregulation effects induced by CpG ODN

The aim of the study was to observe the variation of CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells in periphery blood and tumor microenvironment of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients and the effects of CpG ODN. The proportion of CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells, Foxp3 gene expression, levels of tumor growth factor-β (TGF-β) and immunoreactive fibronectin-γ (IFN-γ) in the periphery blood of 30 NSCLC patients and 30 healthy volunteers were compared. These indicators were compared before and after CpG ODN treatment. Foxp3 gene expression in the tumor microenvironment of NSCLC patients was also observed. The results showed CD4⁺CD25⁺ regulatory T cell proportion, Foxp3 expression and TGF-β levels in the periphery blood of NSCLC patients were higher than those of healthy volunteers (p < 0.05), and these indicators of patients were significantly decreased after CpG ODN 2006 treatment (p < 0.05). Foxp3 expression in the metastatic lymph nodes was higher than that in the non-metastatic ones of NSCLC patients (p = 0.000). In conclusion, a rise in the proportion of CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ regulatory T cells was demonstrated in the periphery blood and tumor microenvironments of NSCLC patients. CpG ODN 2006 downregulated the CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ regulatory T cells proportion and TGF-β levels in the periphery blood of these patients.     

肺癌患者外周血及胸腔积液调节性T细胞的表达及其临床意义

目的探讨肺癌患者胸腔积液及外周血CD＋4CD＋25调节T细胞、T细胞亚群的特点及其临床意义。方法采用流式细胞术检测68例肺癌患者外周血和其中32例并发胸腔积液患者的胸腔积液及56名健康对照者外周血中CD＋4CD＋25T细胞和淋巴细胞亚群的水平。结果不同TNM分期肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群表达比例不同,其中Ⅰ＋Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CDIcD击细胞占cD刍细胞比例分别为（19．52±3．32）％、（27．28±8．26）％、（32．31±15．60）％,均高于健康对照组的（11．12±3．32）％,差异均有统计学意义（t=31．0040、-7．9688、-4．9770,均P〈005）。合并胸腔积液患者胸腔积液CDICD嘉细胞占CD＋34细胞比例为（34．12±18．63）％,高于其外周血的（26．36±16．25）％,差异有统计学意义（t=21．164,P〈0．05）;合并胸腔积液肺癌患者胸腔积液及外周血CD＋4细胞比例分别为（25．32±13．45）％及（34．68±12．34）％,低于健康对照组的（43．24±8．68）％（t=7．3104、4．8818,均P〈0．05）,CD＋56细胞比例分别为（8．24±7．38）％及（11．23±7．65）％,低于健康对照组的（18．23±9．23）％（t=-14．7549、-11．7216,均P〈0．05）,CD＋4／CD＋8分别为（1．02±0．56）％及（1．32±0．82）％,低于健康对照组的（1．89±0．32）％,差异均有统计学意义（CD＋4／CD＋8;t=-24．78、-4．4564,均19〈0．05）。结论肺癌患者胸腔积液及外周血CD＋4CD＋25T细胞水平升高,与肿瘤患者免疫功能低下及肿瘤的发生、发展密切相关。     

EGFR单抗及小分子酪氨酸激酶抑制剂联合放疗对非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)单抗及EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)联合放疗对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞放疗敏感性的影响,并分析其作用机制。方法将83例非小细胞肺癌患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组41和观察组42例。对照组给予EGFR-TKI联合放疗,观察组在对照组治疗基础上给予EGFR单抗治疗,比较2组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群水平(CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺)、血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、癌胚抗原(CEA)水平,不良反应,NSCLC细胞放疗敏感性及平均无疾病进展生存时间。结果治疗8周后,对照组CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平较治疗前明显下降,观察组CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平显著高于对照组(P<0.05)。治疗8周后,2组血清MMP-9、CEA水平均显著下降(P<0.05),且观察组血清MMP-9、CEA水平均低于对照组(P<0.05)。观察组不良反应发生率与对照组无显著差异(P>0.05),放疗敏感性、平均无疾病进展生存时间均高于对照组(P<0.05)。结论EGFR单抗与EGFR-TKI具有协同作用,联合放疗可增强NSCLC细胞放疗敏感性,提高疗效。     

老年肾癌患者血清T淋巴细胞亚群变化对其预后及生存的影响

目的:探讨分析老年肾癌患者血清T淋巴细胞亚群变化对其预后及生存的影响。方法:选择2013年4月至2015年3月我院收治的78例老年肾癌患者，再选择同期来我院体检的健康人群50例作为对照组，术前以及术后2周采用流式细胞技术检测肾癌患者外周血T淋巴细胞亚群水平变化情况，并与对照组比较。对患者进行随访分析，采用Kaplan-Meier生存分析术后不同T淋巴细胞亚群水平对患者生存预后的影响。结果:肾癌组患者术前、术后2周外周血CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+水平均显著低于对照组（P＜0.05）。肾癌组术后2周外周血CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+水平较术前有显著升高（P＜0.05）。CD3+>48%肾癌患者总体生存情况显著优于CD3+≤48%患者（P＜0.05）。CD4+>30%肾癌患者总体生存情况显著优于CD4+≤30%患者（P＜0.05）。CD8+>25%肾癌患者总体生存情况与CD8+≤25%患者生存情况无差异（P＞0.05）。CD4+/CD8+>1.0肾癌患者总体生存情况显著优于CD4+/CD8+≤1.0患者（P＜0.05）。结论:老年肾癌患者存在广泛的细胞免疫功能紊乱现象，手术治疗后能够有效去除瘤负荷而从一定程度上逆转免疫功能，术后免疫功能指标可反映患者预后情况，免疫功能状态越差的患生存情况越差。