去甲斑蝥酸钠对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的观察去甲斑蝥酸钠对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法取常规培养的HepG2细胞,接种于24孔板,SNCID组分别加入5、2．5、1、0．5μg／ml的注射用去甲斑蝥酸钠1ml,对照组不添加任何药物。培养24、48、72h后用流式细胞术检测细胞周期,并计算增殖指数PI。结果SNCID组G0／G1期的细胞比例明显增高,而S期细胞比例、PI降低,此效果呈时间和浓度依赖性（P均〈0．05）。结论去甲斑蝥酸钠培养可阻滞人肝癌HepG2细胞于G0／G1期,抑制HepG2细胞增殖。     

去甲斑蝥酸钠对肝癌异位移植瘤小鼠肠道微生态的影响初探

目的初步探讨去甲斑蝥酸钠对肝癌异位移植瘤小鼠肠道微生态的影响。方法将12只小鼠随机分为去甲斑蝥酸钠注射液和生理盐水处理组及对照组,建立H22肝癌异位移植瘤小鼠模型。造模成功后正常饲养动物2 w,然后采集小鼠粪便,并进行Illumina miseq 2×300 bp高通量测序及生物信息学分析。结果各组样本所包含物种量丰富,且物种丰度和均匀度趋于一致;去甲斑蝥酸钠注射液组与生理盐水处理组或对照组比,存在显著的菌群差异;在门水平上,差异最显著的菌群为变形菌门,去甲斑蝥酸钠注射液组变形菌门所占比例为9.1%,显著高于生理盐水处理组或对照组(分别为2.8%和2.3%,P0.05);在属水平上,差异显著的菌群包括拟杆菌属等,生理盐水处理组拟杆菌属所占比例为26.8%,显著高于去甲斑蝥酸钠注射液组或对照组(分别为13.2%和6.8%,P0.05)。结论去甲斑蝥酸钠对肝癌异位移植瘤小鼠肠道微生态有显著的影响,或许有助于抗肿瘤作用。     

去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的观察去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,探讨其抗胃癌的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制率,其中实验组的去甲斑蝥酸钠浓度分别为0.4、1.0、2.5、6.0 mg/L,对照组不加去甲斑蝥酸钠。采用流式细胞仪检测SGC-7901细胞的增殖周期,并计算细胞增殖指数。结果浓度0.4、1.0、2.5、6.0 mg/L去甲斑蝥酸钠的实验组的OD值均低于对照组(t=2.871、5.295、10.100、13.836,P均0.05)。随着去甲斑蝥酸钠浓度的提高,对SGC-7901细胞的抑制率随之增大。经过流式细胞仪的检测,与对照组相比,实验组的G0/G1期细胞比例显著增高(P0.05),而S期细胞比例和细胞增殖指数明显降低(P0.05),均呈现出时间、浓度依赖性。结论去甲斑蝥酸钠在体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,体现出抗癌活性,在胃癌治疗方面具有广阔的应用前景。     

中医药对肠道微生态的影响

中医药(traditional Chinese medicine, TCM)治疗(中药治疗、针灸治疗、推拿治疗等)在临床上应用广泛、疗效显著,同时越来越多的研究表明众多疾病的预防、发生和治疗都与肠道微生态有关, TCM与肠道微生态关系的研究也越来越多. TCM治疗的基础理论与微生态学的很多理论和观点一致,从两者一致的基础理论出发,对TCM治疗与肠道微生态的关系进行综述,对从肠道微生态出发探讨TCM治疗临床疾病的机理具有重要意义.本文论述TCM治疗与肠道微生态的关系,以及TCM治疗对肠道微生态的影响,以此为中医治疗的传统手段治疗肠道微生态相关的疾病提供新的理论与依据.旨在促进TCM的现代化研究,促进TCM的临床应用和全球化.     

去甲斑蝥酸钠注射液对非小细胞肺癌患者免疫功能的影响

目的探究去甲斑蝥酸钠注射液治疗非小细胞肺癌患者的疗效及其对免疫功能的影响。方法 80例中晚期非小细胞肺癌患者随机分为观察组和对照组,每组40例。对照组采用多西他赛和顺铂(DDP)方案化疗。观察组在对照组的基础上加用去甲斑蝥酸钠注射液。化疗方案为每天静脉滴注75 mg/m2多西他赛注射液和80~120 mg/m2DDP,每间隔3 w为1个周期。比较两组近期疗效、毒副反应、生活质量及治疗前后的免疫功能。结果观察组总有效率(67.5%)明显高于对照组(42.5%)(P0.05)。观察组骨髓抑制的发生率明显低于对照组(P0.01)。治疗后,观察组生活质量改善状况明显好于对照组(P0.01)。治疗后,观察组CD3+、CD4+及CD4+/CD8+的活性较对照组显著升高(P0.05)。治疗后,观察组Ig G较对照组显著升高(P0.05)。结论去甲斑蝥酸钠注射液用于治疗非小细胞肺癌疗效显著,可以改善其免疫功能。     

早期肠内营养联合微生态制剂治疗肝性脑病患者肠道菌群的改变*

目的 探讨早期给予肠内营养联合微生态制剂对肝性脑病（HE）患者肠道菌群的影响。方法 将64例乙型肝炎肝硬化并发HE患者随机分成观察组32例和对照组32例。在抗昏迷治疗的基础上,给予对照组肠内营养治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予双歧杆菌乳杆菌三联活菌片治疗。观察两组2 w。结果 在观察2 w末,观察组和对照组分别死亡3例和4例;观察组生存患者粪便酵母样真菌为（3.2±0.4） CFU/g,显著低于对照组的【（3.9±0.5） CFU/g,P<0.05】,需氧肠球菌和厌氧乳杆菌水平分别为（12.3±1.2）CFU/g和（9.7±0.7）CFU/g,显著高于对照组的【（9.3±1.2） CFU/g和（8.2±0.8） CFU/g,P<0.05】;观察组血清内皮素、血氨、白介素-18和肿瘤坏死因子-α水平分别为（9.4±1.8） EU/mL、（75.4±10.2） μmol/L、（365.3±102.5） pg/mL和（26.3±10.7）n g/mL,显著低于对照组【（14.5±2.2） EU/mL、（109.3±5.5） μmol/L、（597.5±155.8） pg/mL和（42.8±11.2） ng/mL,P<0.05】;观察组血清白蛋白、血浆前白蛋白、转铁蛋白和视黄醇结合蛋白水平分别为（35.3±3.5） g/L、（341.1±35.2） mg/L、（2.5±0.4） g/L和（41.3±5.6） μg/L,显著高于对照组【（31.7±2.9） g/L、（310.1±33.4） mg/L、（2.2±0.4） g/L和（36.8±5.2） μg/L,P<0.05】。结论 早期给予肠内营养联合微生态制剂治疗可以有效改善HE患者肠道菌群失调症、抑制炎症应激反应,有利于营养的吸收和肝功能的恢复。     

唾液酸灌胃干预肠道微生态预防小鼠更年期抑郁症的机制

目的 探讨唾液酸（SA）灌胃干预肠道微生态预防小鼠更年期抑郁症的机制。方法 将60只小鼠按照随机数字表法分为Sham组、模型组、SA低剂量组、SA中剂量组、SA高剂量组及盐酸氟西汀组,各10只。除Sham组外其他五组制备更年期抑郁症模型。造模成功后1～2 d,SA低、中、高剂量组分别给予16、32、64 mg/kg的SA灌胃,盐酸氟西汀组给予2 mg盐酸氟西汀灌胃,Sham组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃14 d。末次灌胃后进行强迫游泳实验（FST）、小鼠悬尾实验（TST）,统计4 min内不动时间;用激光多普勒血流灌注成像仪检测肠壁血流灌注（血流灌注单位）、血流速度;16s rRNA基因测序法分析肠道菌群;Western blotting法检测肠组织糖酸结合免疫球蛋白样受体11(Siglecs)、骨钙素（OC）、组织紧密连接带蛋白1(ZO-1)、紧密连接蛋白4(claudin4)及海马组织色氨酸羟化酶2(TPH2)、酪氨酸羟化酶（TH）、吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）、脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白。结果 与Sham组比较,模型组TST、FST的4 min内...     

肝癌患者肠道微生态结构变化的特点分析

目的探讨原发性肝癌患者肠道菌群结构的变化。方法选择2017年9月至2018年12月广东省第二人民医院诊疗的原发性肝癌患者87例,另取健康体检者80名作为健康对照。制备微生物基因组DNA后Illumina平台进行高通量测序。结果原发性肝癌组和健康对照组间α多样性差异无统计学意义(P>0.05)。肝癌组拟杆菌门和变形菌门所占百分比为(56.41±4.63)%和(9.26±1.82)%,显著高于健康对照组的(53.32±4.22)%和(7.42±1.16)%(均P<0.05)。肝癌组厚壁菌门和放线菌门所占百分比为(32.62±3.75)%和(0.34±0.05)%,显著低于健康对照组的(37.25±4.13)%和(0.62±0.11)%(均P<0.05)。肝癌组拟杆菌属和大肠杆菌螺旋杆菌属所占百分比为(50.83±4.15)%和(11.35±1.87)%,显著高于健康对照组的(42.45±3.84)%和(8.52±1.71)%(均P<0.01)。肝癌组双歧杆菌属和梭菌属所占百分比为(21.13±3.64)%和(10.44±1.25)%,显著低于健康对照组的(28.54±4.13)%和(14.28±1.52)%(均P<0.01)。结论肝癌患者肠道微生态系统中拟杆菌以及其隶属的拟杆菌门,大肠杆菌螺旋杆菌属属以及其隶属的变形菌门所占比例明显著高于对照组,双歧杆菌属以及其隶属的放线菌门和梭菌属以及其隶属的厚壁菌门所占比例明显著低于对照组。     

中药方剂赤白汤对D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰竭小鼠肠道菌群的影响研究*

目的 探讨中药方剂赤白汤对急性肝衰竭小鼠肠道菌群的影响。方法 将48只小鼠随机分为正常组、模型组、大剂量中药组、中剂量中药组、小剂量中药组和丽珠肠乐组,每组8只。先给动物生理盐水、中药或丽珠肠乐灌胃8 d,采用D-氨基半乳糖/脂多糖腹腔注射诱导急性肝衰竭（ALF）。采用平板活菌计数法检测小鼠粪便肠道菌群。结果 模型组小鼠血清ALT水平为（1983.3±629.0） U/L,显著高于正常组[（36.9±7.5）U/L,P<0.001],肝脏指数为（6.7±0.6）%,显著高于正常组[（5.2±0.3）%,P<0.001],大肠杆菌为（8.7±0.5） lgCFU/粪便和肠球菌为（9.5±0.3） lgCFU/粪便,显著高于正常组[（7.6±0.9）lgCFU/粪便,P<0.01和（8.8±0.2） lgCFU/粪便,P<0.001],乳酸杆菌为（9.3±0.3） lgCFU/粪便和双歧杆菌为（10.1±0.4） lgCFU/粪便,显著低于正常组[（10.4±0.5） lgCFU/粪便,P<0.001和（11.2±0.5） lgCFU/粪便,P<0.001];与模型组比,大、中、小剂量中药和丽珠肠乐处理动物肝组织出血、坏死改善,肠道菌群部分恢复。结论 中药方剂赤白汤具有改善急性肝衰竭小鼠肝功能和肠道菌群紊乱的作用。     

中西医结合治疗肝衰竭对肠道微生态的影响研究

目的 观察中西医结合方案治疗肝衰竭的临床疗效及其对肠道菌群丰度和多样性的影响。方法 采用随机对照临床研究方法,将2019年6月至2020年12月在成都市公共卫生临床医疗中心住院治疗且符合条件的77例肝衰竭患者简单随机抽样分入试验组(39例)和对照组(38例),同时设健康对照组20例。试验组采用中西医结合治疗,对照组采用西医治疗,疗程4周,观察两组患者治疗前后肠道菌群丰度和多样性变化情况,以及与健康对照组肠道菌群的差异。结果 与健康对照组相比,肝衰竭患者菌群丰度有显著差异(P <0.05),在门水平上厚壁菌门减少,变形菌门增加,在属水平上克雷伯氏菌属、链球菌属、埃希菌属等条件致病菌属增多。经β多样性分析,试验组治疗前后的肠道菌群多样性存在差异(P <0.05);经LEfSe分析,试验组治疗后患者肠道乳酸杆菌等有益菌的相对丰度升高,克雷伯氏菌属、埃希菌属等条件致病菌属的相对丰度降低。结论 肝衰竭患者存在肠道微生态紊乱,表现为条件致病菌增多、有益菌减少,经中西医结合治疗可提高肠道乳酸杆菌等有益菌相对丰度、降低条件致病菌属相对丰度,改善肠道微生态。     

基于肠道微生态对中医外感寒湿伤脾理论的初步探讨

外感寒湿邪气最易伤脾阳,影响脾主运化与脾的散精功能.人体肠道菌群广泛参与肠道及胃肠消化生理机能的调节.因此,本文通过现代研究对肠道微生态与"脾"的相关性的普遍认识,探讨机体胃肠消化功能紊乱发生的过程中肠道菌群应对寒湿环境随机暴露的响应机制,认为肠道微生态失调可能是中医外感寒湿伤脾的形成机制之一.     

灵芝多糖对HepG2细胞诱导的肝癌小鼠肠道菌群及其菌群代谢功能的调节作用

目的 研究灵芝多糖对HepG2细胞诱导的肝癌小鼠肠道菌群及其菌群代谢功能的调节作用.方法 采用HepG2细胞构建肝癌小鼠模型,将21只造模成功的肝癌小鼠随机分为模型组、灵芝多糖(GLP)和益生菌处理组,每组7只,另选择正常小鼠7只作为对照组,给予药物处理组动物GLP或益生菌灌胃,另两组采用生理盐水灌胃,连续干预2 w....     

肠易激综合征与肠道微生态的研究现状分析

肠易激综合征(IBS)发病机制复杂,目前没有统一的理论能解释IBS的发病,也没有单一的药物能缓解IBS的所有症状。此文就肠易激综合征与肠道微生态研究现状作一综述。     

脾虚型复发口疮伴便秘患者肠道菌群的变化

目的研究脾虚型复发口疮伴便秘患者肠道菌群的特征。方法选择肠道菌群中具有代表性的细菌共8种进行培养和计数．选择30例正常人为健康对照组,30例为脾虚型复发口疮便秘组,取当日首次定量大便作活性菌培养,检测两组相同菌种进行比较。结果脾虚型复发口疮患者便秘组的类杆菌、双岐杆菌、优杆菌、乳杆菌比对照组要显著减少（P〈0．01或P〈0．05）,而消化链球菌、梭菌、葡萄球菌、肠杆菌则要比对照组显著增多（P〈0．01或P〈0．05）,但肠球菌和酵母样菌在两组间无显著差异（P〉0．05）。结论脾虚型复发口疮患者便秘与肠道菌群失调有关。     

暴发性肝衰竭小鼠细菌侵袭肠黏膜方式的研究

目的 通过研究细菌侵袭肠黏膜屏障的方式,探讨暴发性肝衰竭(FHF)并发自发性腹膜炎(SBP)的机制.方法 取240只雄性BALB/c小鼠,分为等渗盐水(NS)组(40只)、脂多糖(LPS)组(40只)、氨基半乳糖(GalN)组(40只).FHF模型组(120只).分别腹腔注射相同体积的NS、LPS(10μg/kg)、GalN(800 mg/kg)、LPS(10μg/kg)/GalN(800 mg/kg).注射处理后,分别于2、6、9、12 h和24 h处死小鼠(每个时间点处死8只小鼠).实验小鼠均在相应时间点摘取眼球,留取血清,并断头处死动物,留肝脏及大肠组织标本.用全自动生物化学分析仪检测ALT;对肝组织和大肠组织进行HE染色检测;透射电镜观察大肠黏膜超微结构及细菌侵袭肠黏膜的方式.用SPSS13.0统计软件进行数据分析,两组间ALT水平的分析采用Mann-Whitney U检验.结果 FHF模型组ALT水平、肝组织病理学检测结果及病死率和临床表现均符合FHF的诊断标准.4组小鼠注射处理后9 h,HE染色发现大肠组织仅有轻微水肿及少量炎性细胞浸润,此时,透射电镜下观察发现FHF模型组肠上皮细胞微绒毛断裂、脱落、变短,紧密连接(TJs)不完整,细胞器变化明显,HE染色发现FHF模型组肝脏呈成片的出血性坏死,残存的肝细胞肿胀,出血坏死区见较多炎性细胞浸润,但NS组、LPS组、GalN组肝脏组织病理形态及大肠黏膜超微结构变化不明显.FHF模型组注射处理后6～9 h,细菌以胞饮的形式穿入肠壁,细菌穿入肠壁区域的肠道黏膜绒毛脱落,TJs出现断裂,注射处理后12 h发现穿入的细菌以囊胞的形式存在.结论 LPS(10μg/kg)/GalN(800 mg/kg)联合注射建立的FHF小鼠模型是成功的.FHF时,肠黏膜TJs的断裂可能为肠道内细菌进入肠黏膜提供了条件,TJs的断裂可能是FHF并发SBP的原因之一.

Abstract：

Objective To explore the mechanism of fulminate hepatic failure (FHF) complicated with spontaneous peritonitis (SBP) through the research of bacteria invading the intestinal mucosa barrier.Methods 240 BalB/c male mice were divided into four groups as isotonic NS group (n = 40), lipopolysaccharide (LPS) group (n = 40), galactosamine (GalN) group (n = 40) and FHF model group (n = 120). Each mouse received same volume of NS, LPS (10 μ g/kg), GalN (800 mg/kg) or LPS (10 μ g/kg)/GalN (800 mg/kg)intraperitoneal injection according to its group. 8 mice were executed at 2, 6, 9, 12 and 24 hours after injection, respectively, and the liver and intestinal tissue samples were taken at the same time. ALT was measured by automatic biochemical analyzer and was compared between groups using Mann-Whitney U test.Liver and intestinal tissue received HE staining. The ultrastructure of intestinal mucosa and the method by which bacteria invaded the intestinal mucosa were observed by transmission electron microscopy. All data were analyzed by SPSS13.0 statistic software. Results ALT level, results of hepatic pathology, mortality and clinical manifestations of mice in the FHF model group met the diagnostic criteria of FHF. Intestinal tissue was found with slight edema and little inflammatory cells infiltration through HE staining in all the 4 groups of mice 9 hours after injection. Microvilli were found broken, shed and shorten in the intestinal epithelial cells with incomplete tight junction (TJs) and obviously changed organelles in the FHF model group of mice observed by transmission electron microscope. Mass hemorrhagic necrosis of liver cells with remnant liver cells swelling and many inflammatory cells infiltration by HE staining in the FHF model group. But the changes in hepatic pathology and intestinal mucosa ultrastructure were not so obvious in the mice of NS, LPS and GalN groups. Bacteria penetrated the intestinal wall by pinocytosis 6-9 hours after injection in the FHF model group, the microvilli were broken off and TJs turned rupture in the areas that the bacteria penetrated.The bacteria were found in the form of cyst 12 hours after injection. Conclusions LPS (10 mg/kg)/GalN (800 mg/kg) combined injection was successful in establishing the FHF mice model. The rupture of TJs may provide conditions for intestinal bacteria to penetrate the intestinal mucosa in FHF. Rupture of TJs may be one of the reasons why FHF was complicated with SBP.     

酒精性肝炎小鼠肝肠组织变化与内毒素血症的关系探讨

目的酒精性肝病常伴发肠源性内毒素血症,但两者孰因孰果尚不明确。本研究的目的是探讨肠源性内毒素血症与酒精性肝病的关系。方法 20只C57BL/6小鼠被随机分为对照组和模型组,采用饲喂Lieber-Decarli无酒精和含酒精液体法制备酒精性肝炎模型。6周后取小鼠肝脏和结肠组织进行病理学观察;采用酶联免疫吸附法检测血清内毒素、二胺氧化酶和D乳酸含量;采用高效液相色谱法分析尿中乳果糖和甘露醇含量比值,以动态观察小鼠肠道通透性的变化。结果模型组动物肝细胞明显脂肪变,说明模型制备成功;模型组动物结肠粘膜变薄,萎缩,肠上皮细胞脱落,病理学评分(3.41±0.59)与对照组(2.36±0.43)比,差异有统计学意义(P=0.04);模型组和对照组动物血清内毒素水平分别为0.40±0.07Eu/L和0.14±0.03Eu/L(P=0.02),二胺氧化酶分别为4.17±0.88 U/mL和2.09±0.39U/mL(P=0.03),D乳酸分别为8.53±1.10mg/L和6.58±1.00mg/L(P=0.04),差异均有统计学意义;模型组小鼠1~6周末尿乳果糖/甘露醇(L/M值)排泄率分别是2.28±0.33(P>0.05)、2.55±0.40、2.49±0.18、2.51±0.55、2.46±0.59和2.59±0.44,对照组则分别是2.16±0.30、2.34±0.33、2.27±0.24、2.01±0.27、2.24±0.26和2.17±0.31,后5周两组比,均有显著性差异(P<0.05)。结论肠道通透性的增加早于肝脏损伤,肠道通透性增加引起的内毒素血症是酒精性肝炎的关键诱发因素。     

Exploring choices of early nutritional support for patients with sepsis based on changes in intestinal microecology

BACKGROUND Sepsis exacerbates intestinal microecological disorders leading to poor prognosis.Proper modalities of nutritional support can improve nutrition, immunity, and intestinal microecology.AIM To identify the optimal modality of early nutritional support for patients with sepsis from the perspective of intestinal microecology.METHODS Thirty patients with sepsis admitted to the intensive care unit of the General Hospital of Ningxia Medical University, China, between 2019 and 2021 with indic...     

小檗碱对酒精性肝炎小鼠“肠漏”的保护作用*

目的 探讨小檗碱（BBR）对酒精性肝炎小鼠“肠漏”的保护作用。方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、酒精组、BBR组和酒精联合BBR组,饲养8 w。采用ELISA法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和内毒素（LPS）水平。常规行组织病理学和透射电镜检查肝组织学改变和肠上皮细胞间紧密连接（TJ）超微结构。体外培养肠上皮细胞Caco-2,采用免疫荧光法检测经酒精和BBR处理后的细胞间紧密连接主要结构蛋白occludin表达。结果 酒精处理组小鼠血清ALT、AST和LPS水平分别为（46.5± 5.9） U/L、（57.0± 6.1） U/L和（0.40± 0.05） ng/ml,显著高于对照组（P< 0.01）;酒精联合BBR组血清ALT、AST和LPS水平分别为（27.6± 4.2） U/L、（31.8± 4.1） U/L和（0.24± 0.03） ng/ml,均显著低于酒精组（P< 0.05）,而与对照组无显著性差异（P> 0.05）;酒精联合BBR组肝组织细胞变性和炎细胞浸润较酒精干预组明显改善;电镜下,可见酒精处理组小鼠肠上皮细胞间紧密连接结构模糊、缝隙明显增宽,酒精联合BBR组以上改变明显减轻;酒精处理组Caco-2细胞膜occludin分布减少、中断,部分进入胞浆内,酒精联合BBR组分布虽也减少,但仍连续,无中断。结论 小檗碱能改善慢性乙醇摄入诱导的细胞膜occludin减少和上皮细胞间紧密连接结构破坏,改善“肠漏”而具有保护肝脏作用。*基金项目：北京市自然科学基金资助项目(编号：7154194）;国家自然科学基金资助项目（编号：81570536）作者单位：150086 哈尔滨市 哈尔滨医科大学附属第二医院体检中心（王洪岩）;北京市首都医科大学附属北京天坛医院消化内科（李鑫,迟程,徐有青）第一作者：王洪岩,女,31岁,医学博士,住院医师。主要从事酒精性肝病的防治研究。E-mail: xinglin_freedom@126.com