深圳市龙华区2016年手足口病流行病学和病原学特征

目的 本研究对深圳市龙华区2016年手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)的流行病学和病原学特征进行分析,为辖区内HFMD预防和控制策略的制订提供重要科学依据.方法 从中国疾病预防控制信息系统获取深圳市龙华区2016年HFMD的流行病学数据;采用荧光定量RT-PCR方法对辖区278例HFMD病例样本进行肠道病毒(Enteroviurs,EV)、肠道病毒71型(Enteroviurs 71,EV-A71)和柯萨奇病毒A16(Coxsackievirus A16,CV-A16)核酸检测,并对非EV-A71非CV-A16的其他肠道病毒进行VP1区序列测定进行亚型鉴定和进化分析.结果 2016年深圳市龙华区HFMD发病率较高的两个街道分别是龙华街道和观澜街道;发病曲线呈双峰分布,分别为5-7月份和9-11月份;5岁以下儿童占全部发病数的96.06％;2016年深圳市龙华区HFMD的优势病原为柯萨奇病毒A16 (CoxsackievirusA16,CV-A16),构成比为41.53％.结论 深圳市龙华区应进一步加强HFMD的流行病学和病原学监测,为进一步完善HFMD防控策略提供科学数据支持.     

深圳市龙华区疱疹性咽峡炎病原学特点

目的 分析深圳市龙华区疱疹性咽峡炎病原学特点,为辖区疱疹性咽峡炎预防和控制策略的制定和调整提供科学依据。方法 采用荧光定量RT-PCR方法对手足口病哨点医院送检的疱疹性咽峡炎临床诊断病例的肛拭子样本进行肠道病毒（enteroviurs,EVs）、肠道病毒71型（enteroviurs -A71,EV-A71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16, CV-A16）核酸检测,并对非EV-A71非CV-A16的其他肠道病毒的VP1区序列进行测定,亚型鉴定和系统进化分析。结果 临床诊断病例肛拭子样本38份中实验室确诊病例29例,确诊率为76.32%（29/38）,病原谱监测共发现有9种人肠道病毒（EV-A71、CV-A16、CV-A6、CV-A10、CV-A2、CV-A4、CV-A5、Echo9和CV-B4）,其中构成比占前3位的病原体分别CV-A2（24.14%,7/29）、CV-A10（20.69%,6/29）和CV-A6（17.24%,5/29）。实验室确诊病例中,男性有19例(65.52%,19/29）,女性有10例(34.48%,10/29）;3岁以下儿童25例（86.21%,25/29）。病例发病时间主要集中在4—6月份,有23例（占79.31%,23/29）。系统进化树分析结果显示,CV-A6属于D3进化分支,CV-A10（66.67%）属于C进化分支,CV-A2属于D进化分支。结论 深圳市龙华区应开展疱疹性咽峡炎常规监测,重点关注3岁以下儿童,并关注病原谱构成及重要病原体进化情况。     

济南市2012~2017年手足口病肠道病毒谱变化及流行特征

目的 阐明济南市手足口病肠道病毒病原谱的构成及变化,探索不同肠道病毒类型的流行特征。 方法 收集2012年1月~2017年12月济南市手足口病标本4 929例,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测EV-A71、柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)、柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)和柯萨奇病毒A组10型(CV-A10);对肠道病毒通用(PE)阳性而未明确分型标本采用巢式RT-PCR方法,扩增肠道病毒5'-非翻译区(5'-UTR),经核苷酸序列测定明确肠道病毒类型。 结果 4 929例标本中共检出27种肠道病毒类型,除EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10外,柯萨奇病毒A组(CV-A2、4、5、9、12、13、21、22、24)、柯萨奇病毒B组(CV-B1~5)、埃可病毒(E3、6、7、9、11、18、24、25、30)均有检出。轻型病例肠道病毒感染率居前4位的是CV-A16(29.03%)、EV-A71(25.67%)、CV-A6(17.58%)和CV-A10(3.10%),重症病例为EV-A71(77.64%)、CV-A16(5.59%)、CV-A6(1.86%)和CV-A10(1.24%)。CV-A6和CV-A10感染者的发病年龄较EV-A71和CV-A16感染者略小,分别为(3.02±2.43)岁、(2.87±1.67)岁、(3.29±2.34)岁和(3.36±2.18)岁,差异有统计学意义(F=3.659,P=0.003)。流行季节研究显示,EV-A71和CV-A16发病高峰为第2或4季度,CV-A6好发于6~12月份,CV-A10病例6~8月份发病较多。平阴县和章丘区肠道病毒阳性检出率较高,分别为93.49%和91.99%。 结论 济南市手足口病肠道病毒谱以EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10为优势型别,27种肠道病毒共存。常年监测非EV-A71非CV-A16肠道病毒的流行特征,及时掌握肠道病毒谱变化,有助于及时完善手足口病疫情的防控措施。     

广西2010—2018年手足口病流行病学及病原学特征分析

目的 分析广西2010—2018年手足口病流行特征和病原学监测结果,为广西制定手足口病预防控制措施提供科学依据。方法 采用描述流行病学方法,对来源于中国疾病预防控制信息系统2010—2018年广西报告的手足口病例信息进行统计分析;用实时荧光聚合酶链反应方法对肠道病毒进行血清分型。结果 广西2010—2018年共报告手足口病例2 007 297例,年报告发病率范围为308.43/10万~709.87/10 万;发病存在春夏季和秋季流行高峰,报告的重症、死亡病例主要出现在初夏流行季节。2010—2018年共对76 882份标本开展RT-PCR血清分型,肠道病毒阳性 57 098份,阳性检出率为74.27%,其中EV-A71型17 066份（29.89%）,CV-A16型13 673份（23.95%）,非EV-A71/CV-A16其他肠道病毒26 359份（46.16%）。EV-A71是2010、2012、2014年的优势流行株,非EV-A71/CV-A16其他肠道病毒是2013、2015、2017年的主要流行血清型,CV-A16是2011、2018年流行优势血清型,2016年EV-A71、CV-A16与非EV-A71/CV-A16其他肠道病毒在报告患者中所占比例相近。EV-A71在重症、死亡的实验室确诊病例中构成比分别为56.37%、92.93%,但其构成比出现下降趋势;而非EV-A71/CV-A16其他肠道病毒构成比呈上升态势。 结论 广西手足口病流行有明显季节性。流行模式、病原谱正在发生改变,EV-A71流行强度下降,但仍是导致病例死亡的优势病原体;非EV-A71/CV-A16其他肠道病毒流行强度增加,是近年重症病例的主要血清型;要关注、加强对非EV-A71/CV-A16其他肠道的检测和分型。持续的病原学监测有助于掌握手足口病主要病原谱演化规律, 是手足口病精准防控政策制定和相关疫苗研发应用的关键。     

辽阳市手足口病患者标本肠道病毒检测结果

目的 通过对辽阳市2016年手足口病的临床诊断病例的咽拭子标本和粪便标本进行肠道病毒核酸检测和病毒分离培养,比较不同病毒分型下两种标本类型阳性率的差异,探究不同类型标本对手足口病实验室诊断的指导意义。方法 收集107例辽阳市2016年手足口病的临床诊断病例的咽拭子和粪便标本,提取样本核酸,用实时定量PCR法检测肠道病毒通用引物、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型,通过McNemar检验以及Kappa检验对检测结果进行统计学分析。结果 配对采集病例两种类型标本共214份,肠道病毒通用引物、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的咽拭子标本核酸检测阳性率分别为48.6%、8.4%、22.4%;粪便标本的核酸检测阳性率分别为59.8%、11.2%、18.7%。PE、EV71病毒的粪便标本的检出率均大于咽拭子标本的检出率,但CV-A16病毒的粪便标本的检出率却小于咽拭子标本的检出率。其他肠道病毒的咽拭子标本和粪便标本的病毒检出率差异有统计学意义（P<0.05）,粪便标本肠道病毒检测阳性率高于咽拭子标本,同时显示较差的一致性（P<0.05）。结论 在手足口病实验室肠道病毒检测中,粪便标本的肠道病毒检测阳性率高于咽拭子标本,今后的手足口病防治工作中为提高标本检测阳性率,若时间紧迫应首先考虑选择采集粪便标本加以检测。     

惠州市重症手足口病病原谱及EV71型VP1区基因特征分析

目的分析惠州市手足口病重症病例的病原谱构成,了解惠州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征,为科学防治手足口病提供科学依据。方法采集300例重症手足口病(HFMD)患者标本,采用实时荧光RT-PCR检测肠道病毒核酸,并对肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)进行分型检测;选择8株EV71分离株进行VP1区基因全长序列测定,测序结果利用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,并用Mega5.0软件构建亲缘性进化树。结果通过实时荧光RT-PCR特异性检测,EV71阳性结果 154份,阳性率为51.33%;CoxA16阳性结果 38份,阳性率为12.67%。测序结果表明,8株EV71之间的VP1基因核苷酸同源性为96.9%~99.2%,氨基酸同源性为99.3%~100%。VP1区基因遗传进化分析表明,8株EV71分离株与C4基因亚型的代表株处于同一分支,均属于C4基因亚型的C4a进化分支。结论惠州市手足口病疫情主要病原EV71病毒均属于C4a基因亚型,与2004年以来的中国大陆EV71病毒流行的基因型一致,未产生明显的抗原漂移及变异。     

柯萨奇病毒A10型致手足口病的研究进展

手足口病由多种肠道病毒引起,一直以来对中国婴幼儿的健康重大公共问题造成巨大的威胁。2008年国家将手足口病定为法定传染病以来,人们对手足口病的研究逐渐增多。起初,肠道病毒71(Enterovirus,71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CoxA16)是引起手足口病的病原体。2011年后柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CoxA6)和柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CoxA10)成为引起中国手足口病的主要病原体,引起了人们的关注。CVA10能引起手足口病的重症病例,因此现就CVA10的病原学、流行病学、乳鼠模型、疫苗的研究等做一综述。     

长沙市2013—2016年HFMD重症病例肠道病毒谱及其基因特征

目的 了解2013年至2016年长沙市手足口重症病例感染柯萨奇病毒A组6型(CAV 6)和柯萨奇病毒A组10型(CAV 10)肠道病毒的流行趋势,并对其VP1基因进化概况进行分析。方法 运用描述性统计学分析方法对全市重症手足口病流行病学资料进行整理。CAV 6和CAV 10型肠道病毒阳性咽拭子、肛拭子或粪便标本用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增VP1基因片段,序列比对后用MEGA软件构建进化树。结果 2013—2016年全市共检测111份重症手足口病例标本,肠道病毒阳性标本80份,检出率为72.07%。80份肠道病毒阳性标本中,CAV 6型10株, CAV 10型8株。核苷酸序列的同源性分析发现,CAV 6型肠道病毒核苷酸序列之间存在0.8%~6.6%的差异。CAV 10型肠道病毒核苷酸序列之间存在1.1%~5.6%的变化差异。8株CAV 6型毒株均位于D2分支,1株处于D1分支。6株CAV 10型毒株位于E分支。结论 CAV 6和CAV 10肠道病毒在基因水平并未发生明显突变。重症病例中出现CAV 6型和CAV 10型感染高峰年份,但2016年有所降低,应将CAV 6和CAV 10型肠道病毒纳入常规监测,降低手足口发病风险。     

四川省德阳市柯萨奇病毒A组5型基因特征分析

目的 分析四川省德阳市手足口病病例中的柯萨奇病毒A组5型（coxsackievirus A5,CVA5）的基因特征,为防控CVA5提供科学依据。方法 对德阳市2013—2021年手足口病监测中收集到的疑似病例咽拭子标本,采用实时荧光聚合酶链反应（real-timefluorogenicquantitativepolymerasechainreaction,Q-PCR）进行肠道病毒核酸检测,选择Q-PCR检测结果 CT值<30的非肠道病毒71型（EV-A71）/柯萨奇病毒A组16型（CVA16）的其他肠道病毒核酸阳性标本,分别进行VP4/VP2区和VP1区基因扩增和核苷酸测序,再用MEGA 7.0. 26软件构建CVA5系统进化树,分析其基因特征。结果 2013—2021年德阳市共收集手足口病疑似病例标本3 115份,经Q-PCR检测非EV-A71/CVA16的其他肠道病毒核酸阳性标本为1314份;选择其中的353份标本进行VP4/VP2区和VP1区核苷酸测序,在280份标本中检测出8种肠道病毒型别,其中10份为CVA5。德阳市10份CVA5标本之间,VP1区核苷酸序列相似性为91...     

珠海市2013年肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型基因特征

目的分析2013年珠海市手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）患者中,肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）的分子流行病学特征。方法采集珠海市2013年HFMD临床诊断病例粪便标本215份,选取其中Real time RT-PCR检测EV71病毒核酸阳性的18份和Cox A16病毒核酸阳性的8份标本,进行VP4区基因扩增,并进行核苷酸序列和遗传进化关系分析。结果 16份EV71扩增测序成功,与C4a基因亚型代表株具有最高的核苷酸序列同源性（95.2%-99.5%）和氨基酸同源性（91.3%-100%）;5份Cox A16扩增测序成功,有2份与B2a亚型代表株具有最高的核苷酸序列同源性（98.6%-99.0%）和氨基酸同源性（97.1%-98.5%）,3份与B2b亚型代表株具有最高的核苷酸序列同源性（96.6%-97.1%）和氨基酸同源性（100%）。结论 2013年珠海市流行的EV71属于C4a基因亚型,Cox A16为B2a和B2b两种基因亚型。     

2021年济宁市柯萨奇病毒A16型流行特点及全基因组特征

目的 了解济宁市2021年柯萨奇病毒A16型(CV-A16)流行特点和全基因组特征。方法 2021年1月至12月采集济宁市疑似手足口病患者粪便标本513份,进行CV-A16型病毒核酸检测和病毒分离,对分离的4株CV-A16进行全基因组测序和生物信息学分析。结果 共检出CV-A16型36例,阳性率为7.02%(36/513),其中7～9月阳性率最高。4株毒株VP1基因位于B1a和B1b两个进化分支。与原型株G-10(CAU05876)相比,4株毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为77.5%～78.0%和94.7%～94.9%。4株毒株编码蛋白均发生多处氨基酸变异。结论 CV-A16是2021年引起济宁市手足口病的主要病原体之一,在济宁市流行的主要是B1a和B1b两个亚型,需要加强手足口病监测力度。     

EV-A71疫苗接种预防儿童手足口病有效性分析

目的：分析EV-A71疫苗接种预防儿童手足口病与EV-A71病毒感染的有效性。方法：选取发病年龄0.5～6.0岁的300例手足口病儿童作为研究对象,分为接种组122例,未接种组178例。采集患儿的咽拭子和/或粪便进行EV-A71、CV-A16、CV-A6肠道病毒核酸检测。统计EV-A71疫苗与各类型病毒感染手足口病的相关情况。结果：接种组EV-A71感染率明显低于未接种组(P<0.01);在CV-A16、CV-A6及其他感染方面,接种组与未接种组感染率差异均无统计学意义(P>0.05)。接种1剂EV-A71疫苗的患儿EV-A71感染率高于接种2剂的患儿(P<0.05);接种1剂EV-A71疫苗的患儿CV-A16、CV-A6及其他感染率与接种2剂的患儿感染率差异均无统计学意义(P>0.05)。接种疫苗后EV-A71病毒感染患病的严重程度与未接种疫苗者差异无统计学意义(P>0.05)。结论：全剂次预防性EV-A71疫苗接种是EV-A71病毒感染引起的手足口病的保护因素,但与其他病毒感染引起的手足口病无关。     

夫西地酸钠抗肠道病毒EV-A71的活性分析

目的 分析夫西地酸钠在细胞水平上的抗肠道病毒活性并分析其抗EV-A71的作用机制。方法 通过空斑分析测定夫西地酸钠在RD细胞中抗EV-A71和CV-A16的量-效曲线;通过加入时间分析（time of addition）、病毒吸附及内吞实验、反转录-定量PCR（RT-qPCR）测定病毒RNA水平在复制周期中的变化、携带GFP的病毒RNA（EV-A71-GFP RNA）转染合并荧光观察以及双报告基因分析初步确定夫西地酸钠阻断EV-A71复制的作用机制。结果 夫西地酸钠可以显著抑制EV-A71和CV-A16在RD细胞中的复制,MOI为0.001时IC₅₀ 分别为3.56 μmol/L和5.41 μmol/L。夫西地酸钠抑制EV-A71复制主要发生在复制早期阶段,降低了病毒RNA的丰度和病毒蛋白的合成水平,但不影响病毒的吸附和内吞;与未经药物处理的对照组相比,EV-A71感染5 h和8 h时,夫西地酸钠导致EV-A71 RNA相对丰度降低了大约70%;EV-A71-GFP RNA在292A细胞中的翻译明显受到夫西地酸钠的抑制,GFP阳性细胞明显减少;夫西地酸钠对EV-A71 5′-UTR所驱动的报告基因翻译抑制程度为30%。结论 夫西地钠酸具有抗肠道病毒活性,主要通过直接或间接抑制病毒基因组RNA复制以及干扰病毒蛋白合成或加工而发挥抗EV-A71活性。     

2019年云南省文山州柯萨奇病毒A16型的基因特征

  目的  对云南省文山州2019年手足口病（hand，foot and mouth disease，hfmd）病原分离情况和14株柯萨奇病毒a16型（coxsackievirus a16，cv-a16）的基因特征进行分析。  方法  对文山州2019年hfmd实验室送到云南省疾病预防控制中心hfmd实验室的595份手足口病患者粪便标本进行病毒分离，并对分离到的74株肠道病毒（enterovirus，ev）vp1区基因进行扩增和测序定型，对cv-a16病毒进行基因特征和分子流行病学分析。  结果  共从595份标本中分离到74株ev，ev分离率为12.44%（74/595），其中a组病毒（enterovirus species a，ev-a）72株，占97.30%（72/74），ev-b组病毒2株，占2.70%（2/74），未分离到ev-c和ev-d组病毒。ev-a组病毒中，cv-a6病毒最多，共44株，占ev-a组分离数的61.11%（44/72），cv-a16次之，共14株，占ev-a组病毒的19.44%（14/72），ev-a10 9株，占12.50%（9/72）。基因进化分析表明，14株cv-a16均为b1基因亚型（subgenotype b1）。它们分为2个不同的进化分支（b1a和b1b），其中8株为b1a，6株为b1b。  结论  2019年文山州hfmd病原以cv-a6组为主，cv-a16次之。cv-a16病毒b1a和b1b两个分支同时在文山州流行。     

漳州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征分析

目的了解漳州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征。方法对2010年漳州市的5株肠道病毒71型分离株进行VP1区基因全长序列测定,测序结果利用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,并用Mega4．0软件构建系统发生树。结果5株肠道病毒71型分离株的VP1区核苷酸序列全长均为891bp,且与2008年安徽阜阳流行株Fuyang．Anhui．P．R．C-17．08-2的VP1区核苷酸序列同源性和氨基酸序列同源性最高,分别为98．2％-98．8％和99．7％-100．0％。5株肠道病毒71型分离株间的核苷酸序列同源性为97．2％-99．8％．氨基酸序列同源性为99．3％～100．0％。氨基酸在98位和218位这两个位点发生了特异性变异。VP1区基因遗传进化分析表明,漳州市所有分离株均属于C4基因亚型的C4a进化分支。结论5株肠道病毒71型分离株均属于C4基因亚型的C4a进化分支．与2004年以来的中国大陆EV71病毒流行的基因型完全-致。     

新疆2011-2013年肠道病毒71型VP1区基因特征分析简

目的了解新疆肠道病毒71型（EV71）分离株VP1区基因特征。方法选取2011-2013年新疆部分地州手足口病病例标本,临床标本或其病毒培养物经实时荧光PCR鉴定后,通过RT—PCR法进行VP1区编码基因扩增,并对扩增产物进行序列测定,所得序列用ChromasPro1．7．4,BioEdit7．1．11和MEGA5．1软件进行序列校正、拼接、整理和分析,并与EV71各型及亚型参考序列构建基于VPl序列的系统进化树。结果新疆EV71分离株之间核苷酸和氨基酸序列同源性在92．8％～100．0％和97．9％～100．0％,22株病毒株与安徽阜阳和山东临沂C4a基因参考株最为相近,核苷酸和氨基酸序列序列同源性在93．9％～98．6％和98．6％～99．6％。而与A、B基因型参考株差异较大,核苷酸和氨基酸序列序列同源性在82．1％～84．8％和95．9％～98．3％。直接用临床标本进行核酸提取、扩增和序列测定的阳性率为30．0％,低于用病毒培养物的阳性率（100．0％）。结论2011—2013年新疆EV71分离株均为C4a基因型,与安徽和山东分离的EV71毒株可能有相同的起源。直接用临床标本进行核酸提取、扩增和序列测定可用于肠道病毒的分型鉴定。     

深圳市社区人群EV71和CoxA16隐性感染的流行病学分析

目的为了解肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）在深圳市健康人群中的隐性感染情况,进一步探讨隐性感染在儿童手足口病（HFMD）中的传播特征及危害性。方法实验采用酶联免疫（ELISA）法检测不同年龄层（0～59岁之间）的健康人群血清中抗肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）的IgM和IgG抗体水平,并采用荧光定量PCR检测IgM阳性的样本中病毒核酸的阳性率。结果抗EV71和CoxA16 IgG抗体的阳性率都随着年龄段的增长呈下降趋势,0～5岁儿童组的IgG抗体阳性率最高,其中抗EV71的IgG抗体阳性率为79.7%,抗CoxA16的IgG抗体阳性率为91.93%。30岁以下者,两种病毒的抗体阳性率在70%以上,显著高于30岁以上人群,P〈0.01。5岁以下儿童抗EV71抗IgM抗体阳性率达15.9%。49份抗EV71 IgM阳性样本中有42份EV71的核酸阳性,阳性率为85.7%;31份抗CoxA16 IgM阳性样本中有25份CoxA16核酸阳性样本,阳性率为80.6%。结论人群对EV71和CoxA16普遍容易感染,健康人群中存在较高的隐性感染,隐性感染率与人群的年龄分布存在相关性,因此隐性感染人群也是病原体传播的传染源之一。