X射线对人鼻咽癌CNE2及CNE2/DDP细胞自噬相关基因的影响

目的:研究放疗抵抗与自噬的关系,为使用药物调节自噬水平来提高鼻咽癌放疗敏感性提供理论基础。方法:采用流式细胞术分析CNE2及CNE2/DDP细胞照射前后的细胞周期分布;实时荧光定量PCR和免疫荧光染色检测CNE2及CNE2/DDP细胞中自噬特异性基因Beclin 1及微管相关蛋白轻链3β(MAPLC3β)的表达水平。结果:射线照射后CNE2及CNE2/DDP细胞的G2-M期增多,与放射剂量呈正相关(P<0.05),CNE2/DDP细胞的G2-M期阻滞比CNE2明显(P<0.05)。射线照射后CNE2及CNE2/DDP细胞的Beclin1及MAPLC3β的表达水平增高,与放射剂量呈正相关(P<0.05)。CNE2/DDP细胞的Beclin1及MAPLC3β表达水平均低于CNE2细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自噬性死亡可能是放射治疗后人鼻咽癌CNE2及CNE2/DDP细胞的死亡方式之一,而CNE2/DDP细胞的放射抵抗可能与低水平的自噬有关。     

紫草萘醌衍生物联合放射线照射抑制 人鼻咽癌细胞增殖和诱导凋亡

目的探讨紫草萘醌衍生物（SYUNZ 4）［3,11 bis(2 hydroxyethansulfanyl) 6 isohexeny lnaphthazarin］联合放射治疗对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞生长的协同抑制作用及放疗增敏机制。方法人NPC高分化鳞状细胞癌细胞株CNE1和低分化鳞状细胞癌细胞株CNE2随机分为空白对照组、单纯SYUNZ 4组、单纯放射治疗组及SYUNZ 4联合放射线照射组共4组。单纯放射治疗组仅给予剂量4 Gy放射线照射,单纯SYUNZ 4组仅给予最大非细胞毒性剂量的SYUNZ 4液培养,SYUNZ 4联合放射线照射组在给予4 Gy的放射线照射后,立即给予最大非细胞毒性剂量的SYUNZ 4液培养;然后应用流式细胞术检测SYUNZ 4诱导CNE1和CNE2细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。结果SYUNZ 4对CNE1和CNE2细胞均具有增殖抑制作用,且其作用呈浓度依赖性。与空白对照组相比,单纯放射线照射组及联合治疗组细胞增殖均受到抑制（P<0.05）,且前者G2/M期细胞比例明显增加（P<0.05）,后者S期及G2/M期细胞比例均显著增加（P<0.05）。与单纯放疗组相比,联合干预使CNE1和CNE2细胞增殖受到更明显地抑制（P<0.01）。与对照组相比,放射线照射导致细胞凋亡率明显增加（P<0.05）;而联合治疗组与单纯放疗组和空白对照组相比,联合干预使CNE1和CNE2细胞凋亡率明显增加,组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论紫草萘醌衍生物SYUNZ 4联合放射线照射能显著抑制人NPC细胞的增殖,并导致NPC细胞周期阻滞和诱导凋亡。     

草氨酸钠抑制细胞自噬对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的　草氨酸钠对鼻咽癌CNE2细胞放射后自噬的影响,以及对放射的增敏作用。方法　鼻咽癌CNE2细胞培养于RMPI-1640 培养液,MTT 法检测 CNE2细胞生长抑制。Western blot检测自噬蛋白LC3Ⅱ表达。结果  0、10、20、40 mmol/L草氨酸钠处理CNE2细胞48小时后,细胞生长抑制率分别为（0.37±0.04）%、（7.28±2.24）%、（6.54±4.161）%、（27.09±5.35）%,各组间具有显著性差异（P 均<0.01）。60 Gy X线照射联合0、10、20、40 mmol/L草氨酸钠处理CNE2细胞48小时后,细胞生长抑制率分别为（31.62±7.24）%、（38.32±10.43）%、（50.28±11.35）%、（62.12±13.16）%,各组间具有显著性差异（P 均<0.05）,细胞克隆抑制率分别为（52.16±11.34）%、（60.27±11.83）%、（77.25±13.16）%、（86.42±13.74）%,各组间具有显著性差异（P 均<0.05）。LC3Ⅱ蛋白灰度扫描分析显示对照细胞、射线处理细胞、射线+10 mmol/L草氨酸钠处理细胞、射线+20 mmol/L草氨酸钠处理细胞、射线+40 mmol/L草氨酸钠处理细胞LC3Ⅱ表达的相对灰度值分别0.104±0.013、0.714±0.183、0.562±0.126、0.414±0.095和0.253±0.052,各组间具有显著性差异（P 均<0.05）。结论　草氨酸钠抑制了放射引起的CNE2细胞自噬,增强了CNE2细胞对放射的敏感性。     

3MA抑制自噬降低头颈鳞癌细胞放疗抵抗性的实验研究

目的探讨6-氨基-3-甲基嘌呤(3MA)对头颈鳞癌细胞放疗抵抗性的影响。方法蛋白印迹法（Western blotting）检测CNE2、6 10B及其放疗抵抗细胞CNE2 Rs、6 10BRs中LC3B蛋白的表达;3MA作用于CNE2 Rs及TU686细胞后LC3B蛋白的表达;克隆集落形成实验检测3MA对头颈鳞癌细胞的放疗抵抗能力及生存分数的改变;细胞免疫荧光法检测3MA对放疗致DNA双链损伤相关指标γ H2AX焦点数量的改变。结果LC3B蛋白在放疗抵抗细胞较亲本细胞中表达增加;3MA能有效抑制自噬膜蛋白LC3B的表达;3MA抑制自噬后CNE2 Rs及TU686细胞克隆集落形成能力减弱,生存分数降低;3MA抑制自噬后CNE2 Rs及TU686细胞放疗组中γ H2AX焦点数量较对照组显著增加。结论3MA抑制自噬后可能影响放疗后DNA双链损伤修复,进而降低头颈鳞癌细胞的放疗抵抗性。     

Beclin1调控鼻咽癌细胞放疗抵抗的体外研究

目的探讨Beclin1基因对鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响。方法Western blotting法检测CNE2、6 10B及其放疗抵抗细胞CNE2 Rs、6 10BRs中Beclin1蛋白的表达,CNE2细胞经不同条件放射线照射后Beclin1蛋白的表达改变;通过脂质体转染Beclin1 cDNA和慢病毒介导的Beclin1 shRNA,在6 10B细胞和CNE2 Rs细胞中分别过表达及沉默Beclin1基因,平板克隆集落形成实验检测鼻咽癌细胞的放疗抵抗能力的改变;细胞免疫荧光法检测DNA双链损伤相关指标γ H2AX表达的改变。结果Beclin1蛋白在放疗抵抗细胞中表达增加,同时随着放疗时间的延长及放疗剂量的增加,Beclin1蛋白表达迅速升高,随后趋于基础水平;Beclin1过表达后6 10B细胞克隆集落形成能力增强,生存分数增加,γ H2AX焦点数量减少;相反,Beclin1沉默后,CNE2 Rs细胞克隆集落形成能力下降,生存分数下降,γ H2AX焦点数量增加。结论Beclin1能促进鼻咽癌细胞的放疗抵抗性,其与放疗后DNA双链损伤修复调控可能相关。     

Testin基因对鼻咽癌5-8F细胞放疗敏感性的研究

目的 探讨Testin(TES)基因对鼻咽癌5-8F细胞放疗敏感性的影响。方法 鼻咽癌5-8F细胞系(未转染组)、稳定转染空载体的5-8F细胞系(空载体组)、稳定转染TES的5-8F细胞系(TES组),经过0、2、4、6、8、10 Gy放射剂量照射后,进行细胞克隆形成实验,使用Linear-quadratic模型计算拟合剂量生存曲线,计算放射增敏比(SER)。MTT实验检测放疗后细胞增殖能力,流式检测细胞凋亡变化。结果 分别行放射剂量 2、4、6、8、10 Gy照射后,TES组与未转染组和空载体组间细胞增殖率比较,差异有统计学意义(F=24.157、47.429、78.641、45.215、16.751,P均<0.01)。TES组的生存曲线较空载体组和未转染组下移,克隆形成率明显下降,说明TES可提高鼻咽癌细胞的放疗敏感性。MTT实验结果显示,经过6 Gy剂量放疗照射后,与空载体组和未转染组比较,TES组细胞增殖下降,且于第3天下降明显,显著低于其他两组(F=15.743,P<0.01),说明过表达TES能够抑制放疗后鼻咽癌5-8F细胞株的增殖。流式实验结果：未转染组、空载...     

放疗诱导的Hep-2细胞凋亡及X染色体连锁的凋亡抑制蛋白的表达变化

目的：观察放疗后Hep-2细胞的凋亡率和细胞内X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（XIAP）的变化,并分析二者之间的关系。方法：体外培养Hep-2细胞,不同剂量、不同时间放疗后MTT法检测细胞生存抑制率;流式细胞仪检测XIAP荧光指数及细胞凋亡率,并分析二者的相关性。结果：体外培养Hep-2细胞,不同剂量照射后48h检测结果表明,随着照射剂量增加,细胞抑制与凋亡逐渐增加,二者呈正相关（r=0．99,P〈0．05）;XIAP荧光指数随照射剂量增加而增加;同一剂量（4Gy）照射后不同时间（12、24、48h）检测结果表明,随时间延长细胞凋亡逐渐增加。但24h结果与12h结果相比无明显差异,而48h结果与其他2组比较有明显差异,相应的XIAP荧光指数随照射后时间增加而增加,而且在24h内XIAP表达增加明显,细胞凋亡与XIAP呈显著负相关（r=0．915,P〈0．01）。结论：7射线可抑制喉癌Hep-2细胞的生长,射线引起细胞死亡的主要方式是凋亡,且有剂量与时间依赖性。XIAP表达增加可能是Hep-2细胞放射凋亡反应延迟的原因之一。     

喉癌细胞来源外泌体通过微小核糖核酸-21-5p促进巨噬细胞M2极化的作用及机制研究#br#

目的　研究喉癌患者术前及术后血清来源外泌体及其微小核糖核酸-21-5p（miR-21-5p）的变化，探讨喉癌细胞通过miR-21-5p促进巨噬细胞M2极化的机制。方法　收集正常人群血清以及喉癌患者术前和术后1个月及6个月血清样本，分离外泌体，纳米流式细胞仪揭示粒子粒径和数量，BCA和Western blot分析外泌体的含量和标记分子表达。建立人喉癌细胞系AMC-HN-8和巨噬细胞共培养体系 以及外泌体处理巨噬细胞体系，流式分析巨噬细胞极化情况，qRT-PCR检测外泌体和细胞中miR-21-5p水平。结果  喉癌术前和术后1个月及术后6个月血清来源外泌体CD9、CD63和CD81阳性表达，术前喉癌血清来源外泌体数量和蛋白浓度均高于对照组，而患者术后血清来源外泌体数量和蛋白浓度均比术前低。细胞水平发现AMC-HN-8与巨噬细胞共培养或者其来源外泌体处理巨噬细胞均降低了M1型巨噬细胞比例，提升M2型细胞比例。分子水平检测发现术前喉癌血清来源外泌体中miR-21-5p水平升高，术后则明显下降，AMC-HN-8与巨噬细胞共培养或其来源外泌体处理巨噬细胞均能升高巨噬细胞中miR-21-5p水平。抑制AMC-HN-8中miR-21-5p水平，其分泌的外泌体中miR-21-5p也受到抑制，处理巨噬细胞后，巨噬细胞中miR-21-5p水平和M2型细胞比例下降，而M1型细胞比例有所恢复。结论  喉癌患者血清外泌体含量以及miR-21-5p水平较高，喉癌细胞可通过外泌体传递miR-21-5p作用于巨噬细胞，促进巨噬 细胞M2极化。     

Survivin反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞放疗的增敏作用

目的探讨SUrvivin在放疗诱导喉癌细胞凋亡中的作用以及Survivin反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASODN）技术对HeP-2细胞株增殖、凋亡及其放疗敏感性的影响。方法人工合成硫代SurvivinASODN,通过脂质体法转染人喉鳞状细胞癌Hep一2细胞株后,采用：①流式细胞法测定SurvivinASODN转染Hep一2细胞的转染率;②RT-PCR法检测基因转染后SurvivinmRNA的表达情况变化;③流式细胞仪检测射线照射后细胞凋亡率及Survivin蛋白的变化。结果①各浓度带FITC标记的SurvivinASODN转染细胞后6小时,取转染细胞制成的单细胞悬液,于流式细胞仪进行检查,发现转染效率均为94％～98％;②各浓度SurvivinASODN作用于Hep-2细胞24小时后,均出现SurvivinmRNA的表达下调,并呈剂量依赖关系,同时伴有细胞凋亡率的升高;③放疗~DSurvivinASODN转染组细胞凋亡率均显著高于单纯放疗组细胞凋亡率（P〈0．05）,随着SurvivinASODN剂量的增加,细胞凋亡率逐渐增加（P〈O．01）。放疗加ASODN转染组细胞Survivin蛋白表达率低于单纯放疗各组细胞Survivin蛋白表达率（P〈0．05）。各实验组与对照组中凋亡率的变化与Survivin蛋白荧光指数的变化呈负相关。结论喉癌细胞对放疗的抵抗作用与Survivin蛋白的表达水平有关,Survivin反义寡核苷酸转染Hep-2细胞株能够提高细胞对放疗的敏感性。     

前庭神经鞘膜瘤外泌体对小鼠耳蜗基底膜的影响研究

目的 研究前庭神经鞘膜瘤（vestibular schwannoma, VS）外泌体对小鼠耳蜗基底膜的影响,探讨其在VS患者听力下降中的潜在作用。方法 收集2020年9月至2021年6月于上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科手术治疗的6例Ⅱ、Ⅲ期中小型VS患者的肿瘤组织及临床资料,根据AAO-HNS听力分级分为听力好组（Good Hearing, GH）和听力差组（Poor Hearing, PH）;采用超速离心法提取VS原代细胞上清中的外泌体,通过Western-blot、透射电镜、纳米流式鉴定外泌体;免疫荧光染色技术探究VS外泌体对小鼠耳蜗基底膜毛细胞形态及数量的影响。结果 在一定浓度下,PH组外泌体造成小鼠基底膜毛细胞数量减少,细胞形态异常,细胞排列紊乱;而GH组外泌体对毛细胞的形态及数量几乎无影响;当外泌体浓度下降,PH组外泌体仅造成毛细胞出现极少数量的丢失。结论 VS外泌体具有不同程度的耳毒性,对小鼠耳蜗毛细胞的损伤具有浓度依赖性。     

miR-218-5p靶向聚腺苷二磷酸核糖聚合酶9对喉鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡影响

目的　探讨miR-218-5p对喉鳞状细胞癌（简称喉鳞癌）细胞的增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法  实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印记（Western blot）检测人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞和正常喉上皮细胞NPEC中miR-218-5p和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶9（Poly ADP-Ribose polymerase 9,PARP9）的表达水平。构建过表达miR-218-5p或敲减PARP9的Hep-2细胞株,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-218-5p和PARP9的靶向 调控关系。结果　与NPEC细胞相比,Hep-2细胞中miR-218-5p的表达水平显著降低（t =19.540,P <0.05）,PARP9的表达水平显著升高（t =25.381,P <0.05）。与miR-con组比较,miR-218-5p组Hep-2细胞存活率显著降低（F =37.167,P <0.05）,凋亡率显著升高（F =670.506,P <0.05）。与si-con组比较,si-PARP9组Hep-2细胞存活显著降低（F =61.813,P <0.05）,凋亡率显著升高（F =650.225,P <0.05）。miR-218-5p靶向负性调控PARP9表达。与miR-218-5p+pcDNA-con组比较,miR-218-5p+pcDNA-PARP9组Hep-2细胞存活显著升高（F =44.216,P <0.05）,凋亡率显著降低（F =329.517,P <0.05）。结论　miR-218-5p通过靶向PARP9抑制喉鳞癌 细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

EB病毒BHRF1基因抗辐射作用的研究

为了解EB病毒编码基因BHRF1的表达对鼻咽癌细胞抵抗放射线损伤能力的改变，构建携有BHRF1的高表达载体，并转染鼻咽癌细胞株CNE2细胞，观察转染前后的癌细胞在放射线照射后于裸鼠体内成瘤能力改变的情况。结果发现，在放射线照射前，BHRF1表达细胞在裸鼠体内形成肿瘤时间较晚，肿瘤重量较轻（P＜0．01）；而经放射线照射后，BHRF1表达细胞在裸鼠体内的成瘤能力强于对照组（P＜0．01），经原位末端标记检查发现其凋亡指数小于对照组（P＜0．01）。提示BHRF1的表达能通过阻止细胞的凋亡，增强鼻咽癌细胞抵抗放射线对其DNA的损伤作用。     

MTDH促进头颈鳞癌细胞放疗抵抗的实验研究

目的探讨星形胶质细胞上调基因1（astrocyte elevated gene 1,AEG 1,又称MTDH）对头颈部鳞状细胞癌（简称头颈鳞癌）放疗抵抗的影响。方法Western blotting检测放射线照射后头颈鳞癌细胞MTDH蛋白表达的改变。通过脂质体转染的MTDH cDNA和慢病毒介导的MTDH shRNA,分别在不同头颈鳞癌细胞中过表达和抑制MTDH,平板集落形成实验检测头颈鳞癌细胞放疗抵抗能力的改变,细胞免疫荧光染色检测DNA双链损伤指标γH2AX的表达。结果MTDH在头颈鳞癌细胞中的表达随着放射性照射剂量的增加和时间的延长逐渐升高。在CNE 2细胞中过表达MTDH,其体外集落形成能力增强;相反,在Tu686细胞中抑制MTDH的表达,其体外集落形成能力减弱。同时,细胞免疫荧光显示Tu686细胞在MTDH抑制后,其DNA双链损伤指标γH2AX的表达增加,表明DNA双链损伤修复过程受阻。结论MTDH能促进头颈鳞癌细胞放疗抵抗的形成,与其对DNA双链损伤修复的调控作用相关。     

EGCG对鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤的放疗增敏作用以及对Survivin表达的影响

目的研究凋亡抑制基因Survivin的表达与EGCG对鼻咽癌CNE 2裸鼠移植瘤放疗增敏作用的关系。方法将低分化鼻咽癌细胞CNE 2接种于4～6周龄的雌性裸鼠皮下,待移植瘤生长至4～6?mm时,随机分为4组,分别采用NS、EGCG［50?mg/(kg·w）］、放疗（15?Gy）、EGCG给药24?h后再行放疗等方法分别处理各组裸鼠,处理前后分别测量裸鼠移植瘤的短径、体积。21?d后处死裸鼠,取出肿瘤并称重,将肿瘤组织分成两份,分别用来进行病理切片TUNEL染色以及RT PCR检测Survivin mRNR的表达。结果EGCG＋放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制最为明显,肿瘤生长抑制率为89.3%,消退率为40.0％。与对照组EGCG组、放疗组相比,EGCG＋放疗组的凋亡指数均明显增加（P＜0.05),同时,伴有Survivin mRNR的表达显著下降（P＜0.05）。结论EGCG对鼻咽癌裸鼠移植瘤可能具有放疗增敏作用,这种作用可能与凋亡抑制基因Survivin的表达下调有关。     

多次5 ALA介导光动力下存活鼻咽癌细胞的生物学行为分析

目的 评价多次5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulinic acid, 5-ALA）介导光动力下（5-ALA-PDTs）存活鼻咽癌（NPC）细胞亚株CNE2和5-8F的生物学行为。方法 采用半数致死剂量（LD50）对细胞亚株CNE2和5-8F间断进行3次PDT处理,收集存活细胞传代扩增,然后分别评价细胞增殖、黏附、迁移能力和血管生成素1、2(Ang-1, Ang-2)表达的变化。结果 多次5-ALA-PDTs后存活的CNE2和5 8F在增殖、粘附、迁移能力上均有下降,Ang-1和Ang-2表达下调（P＜0.05）。结论 多次5-ALA-PDTs可使存活NPC细胞的恶性生物学行为稳定下降,具有减少淋巴转移的潜在价值。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对小鼠变应性鼻炎治疗的作用与机制研究

目的　探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferators-actived receptor,PPAR）γ激动剂对小鼠变应性鼻炎的治疗作用及机制。方法　采用卵清蛋白（OVA）建立变应性鼻炎小鼠模型,观察吡格列酮（PIO）对变应性鼻炎症状的改善;取鼻腔组织行HE染色,采用real time PCR检测脾脏Foxp3、T-bet、GATA-3 mRNA表达;流式细胞仪检测脾脏中CD4+Foxp3+T细胞含量。结果　小鼠变应性鼻炎组（AR组）喷嚏和搔鼻频率明显高于对照组（control组）,经PIO治疗后症状得以改善;AR组小鼠鼻黏膜上皮连续性破坏,黏膜下大量炎症细胞浸润;PIO治疗后炎症细胞浸润明显减少,同时上皮完整性修复良好;PIO组Foxp3 mRNA表达高于AR组（P <0.001）,GATA-3则较AR组明显降低（P <0.001）,而T-bet 无统计学差异;AR组CD4+Foxp3+T细胞含量（4.43%±0.25%）较control组（5.19%±0.39%）降低（P <0.001）,PIO治疗后CD4+Foxp3+T细胞含量（6.35%±0.37%）高于control组及AR组。结论　PPARγ激动剂能够有效缓解小鼠鼻过敏症状,调节Th1/Th2平衡;PPARγ激动剂可能是通过促进Foxp3表达,进而扩增调节性T细胞达到治疗变应性鼻炎的作用。     

HIF-1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌hep-2细胞放疗的增效作用

目的：通过HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株,观察细胞凋亡及对放疗的反应情况。方法：体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株,脂质体介导反义寡核苷酸转染,6h后4Gy7射线照射。低氧培养24h后RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达,流式细胞仪检测HIF-1α蛋白水平及细胞凋亡率,MTT检测细胞存活情况。结果：低氧使人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射的敏感性下降;低氧并未影响HIF-1αmRNA的表达,HIF-1α蛋白在低氧6h时表达已开始升高,低氧36h时达高峰,之后表达逐渐下降;放射刺激对HIF-1α蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）;各浓度的反义寡核苷酸转染组降低HIF-1α的转录及蛋白水平;MTT结果显示随反义核苷酸浓度增高,其增殖抑制效应越强（P〈0．05）,正义对照核苷酸及脂质体对照没有显著的抑制效应（P〉0、05）,但转染浓度在400nmol／L以上时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用（P〈0．05）;放疗后反义寡核苷酸转染组蛋白表达下降明显,较对照组及单纯放射组细胞凋亡率增加（P〈0．01）。结论：低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射有抵抗作用,这种抵抗作用与低氧时HIF-1α蛋白表达上调有关,而放射本身并未上调HF-1α蛋白的表达;HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株能够降低HIF-1α蛋白表达,提高低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放疗的敏感性。     

Avastin联合重组腺病毒胸苷激酶自杀基因抗鼻咽癌的体内外实验

目的通过体内外实验初步探讨重组人血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）单克隆抗体Avastin和重组腺病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷（adenovirus—thynidine kinase／Ganciclovir，Ad-TK／GCV）自杀基因系统在鼻咽癌治疗中的价值。方法采用人VEGF ELISA试剂盒检测鼻咽癌CNE1细胞分泌的VEGF水平，四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl terazolium，MTT）法检测Avastin和Ad—TK／GCV对CNE1细胞的抑制作用，流式细胞仪和Hoechst 33342染色法探讨其作用机制。建立CNE1细胞荷瘤裸鼠移植瘤模型，分组在裸鼠肿瘤局部注射磷酸盐缓冲液、Avastin、Ad—TK／GCV、对照Ad—Lac—Z／GCV和Ad—TK／GCV＋Avastin。观察治疗后移植瘤生长情况、抑瘤率和肿瘤组织病理学改变。结果CNE1细胞分泌VEGF；Avastin对CNE1细胞无直接作用。随着Ad—TK感染复数和前体药物浓度的增加，Ad—TK／GCV对CNE1细胞的杀伤作用逐渐增强，旁观者效应的存在增强了这种杀伤作用。流式细胞仪分析显示Ad—TK组与对照组相比，死亡细胞的比率差异有统计学意义（t值分别为30．812和41．006，P值均为0．000）。Hoechst33342染色法显示Ad—TK组与对照组相比，凋亡细胞的比率差异有统计学意义（t=47．351，P=0．000）。CNE1细胞裸鼠体内实验显示Avastin组、Ad—TK／GCV组和Ad—TK／GCV＋Avastin组肿瘤增长缓慢，肿瘤体积在不同时间点小于对照组（P〈0．05或P=0．000）；平均瘤重均明显低于对照组（P值均为0．000）。病理检查示Ad—TK／GCV组、Ad—TK／GCV＋Avastin组肿瘤呈片状坏死，经Avastin治疗的鼻咽癌移植瘤边缘血管生成明显减少。结论体外实验观察到Avastin对鼻咽癌CNE1细胞无直接作用；Ad—TK／GCV系统通过引起细胞坏死和细胞凋亡杀伤CNE1细胞，旁观者效应的存在增强了自杀基因的杀伤作用。Avastin及Ad—TK／GCV自杀基因系统对鼻咽癌CNE1细胞荷瘤裸鼠移植瘤的生长有一定抑制作用，两种治疗联合产生协同作用。     

近致死量照射CNE1后存活克隆生物学性状初步分析

目的 放疗后残存癌细胞重新克隆是鼻咽癌放疗复发的主要原因，本实验旨在分析照射残存癌细胞的生物学特征。方法 MTT法测定6MV-X射线照射人鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE1的近致死剂量，用近致死量照射获得残存癌细胞存活克隆，然后用流式细胞仪检测存活克隆与亲本细胞株的细胞周期分布，应用二维电泳和质谱技术分析两者的蛋白质表达改变。结果 用15Gy近致死量照射CNE1得到了照射存活克隆，并命名为CNEI-15GyR。CNE1-15GyR与亲本细胞株相比：G1／G0期比例增高而G2／M期比例降低；有98个蛋白质表达差异点，其中76个蛋白质斑点上调，22个蛋白质斑点下调；对其中上调的20个蛋白质斑点进行了质谱鉴定，发现细胞间叶来源的中间丝蛋白Vimentin在存活克隆CNE1—15GyR中表达增高。结论照射筛选的存活克隆CNE1—15GyR与亲本细胞株CNE1相比生物学性状发生了改变，细胞间叶来源的中间丝波形蛋白Vimentin在CNE1-15GyR克隆中表达增高，可能与G1／G0期比例增高有关。