硬脂酰辅酶A去饱和酶-1在肝脏脂质代谢中的作用及其调节

硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)在肝脏等脂质代谢中起重要作用,此文就其在肝脏脂质代谢中的作用,以及饮食、维生素和过氧化物酶体对SCD的调节进行综述。     

硬脂酰辅酶A去饱和酶-1在肝脏脂质代谢中的作用及其调节

硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)在肝脏等脂质代谢中起重要作用，此文就其在肝脏脂质代谢中的作用，以及饮食、维生素和过氧化物酶体对SCD的调节进行综述。     

IL-6上调SCD1表达对HepG2细胞脂质合成功能的影响

目的探讨IL-6对HepG2细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)基因的影响及其SCD1基因表达的改变对细胞脂质合成的影响。方法应用rIL-6刺激HepG2细胞,检测细胞内脂质合成以及细胞SCD1基因水平变化。分别构建人SCD1真核表达质粒和小干扰(small interfering) RNA,转染HepG2细胞,观察改变SCD1水平后HepG2细胞脂代谢相关基因表达的变化以及细胞内脂质合成的变化。结果 rIL-6刺激HepG2细胞甘油三酯水平显著高于对照组(P0.05);与空质粒组比,转染真核表达质粒细胞SCD1蛋白表达增加,细胞脂质合成相关基因SREBP1c和FASN相对水平增加1.35倍和1.27倍,脂质氧化代谢相关基因PPARα和ASCL3水平降低12.3%和13.5%;细胞甘油三酯水平显著升高(P0.01),而转染small interfering RNA,再用rIL-6刺激HepG2细胞SCD1蛋白表达显著降低,细胞甘油三酯水平也显著降低(P0.05),脂质合成相关基因SREBP1c和FASN水平显著下降了32.3%和51.9%,脂质分解相关基因PPARα相对水平也下降了80%(P0.05),而ASCL3水平无显著变化(P=0.832)。结论 rIL-6通过上调HepG2细胞SCD1基因表达,引起细胞内脂质合成增加,导致甘油三酯含量增多。     

大鼠硬脂酰辅酶A去饱和酶1重组慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达

硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD 1)是单不饱和脂肪酸(MUFA)生物合成限速酶,与细胞色素b5、细胞色素b5还原酶构成复合酶系共同催化硬脂酰辅酶A(18:0)和软脂酰辅酶A(16:0)等饱和脂肪酸形成油酰辅酶A(18:1)和棕榈油酰辅酶A(16:1)等单价不饱和脂肪酸[1].     

L-谷氨酰胺调节脂质代谢与大鼠非酒精性脂肪肝病的相关性

目的观察L-谷氨酰胺(L-Gln)对高脂诱导的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠血脂、肝功能的影响和对基辅酶A氧化酶(ACOX)1、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)1 mRNA和蛋白表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组(CON组)、NAFLD模型组(NAF组)及L-Gln治疗组(L-Gln),给予NAF组以及L-Gln组大鼠高脂饮食建立NAFLD模型,造模成功后,L-Gln组给予L-Gln灌胃治疗,NAF组给予其生理盐水灌胃辅助参考,CON组不加以干涉,治疗6 w和12 w后处死大鼠,观察其ACOX1、SCD1及血脂、肝功能指标变化。结果 L-Gln组治疗12 w谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(UBIL)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较NAF组有明显降低(P0.05);总胆汁酸(TBA)较NAF组有显著降低(P0.01);总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较NAF组有明显升高(P0.05);NAFLD大鼠ACOX1及SCD1 mRNA和蛋白表达经L-Gln治疗12 w明显升高(P0.05)。结论 L-Gln可以明显提高高脂饮食诱导NAFLD大鼠肝脏ACOX1及SCD1 mRNA和蛋白表达,通过上述酶的表达,调节血脂代谢,进而降低了大鼠肝脏脂肪含量,改善肝功能,可能对NAFLD具有一定的防治作用。     

miR-21对HepG2细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响*

目的 研究miR-21对HepG2 细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。方法 体外培养HepG2细胞,并将细胞分为增强组、抑制组和对照组,分别给予Lipofectamine 2000和Hsa-miR-21 mimics （50 nm/L）、Lipofectamine 2000和Has-miR-21 inhibitor（100 nm/L）转染或者给予Lipofectamine 2000处理干预。采用Western blot法检测B细胞异位基因2（BTG2）蛋白表达,采用CCK-8法检测细胞增殖,使用流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡变化。结果 增强组细胞BTG2 蛋白表达水平最低,抑制组细胞BTG2 蛋白表达水平最高,对照组细胞BTG2蛋白表达水平强于增强组而低于抑制组,组间差异比较有统计学意义（P<0.05）;抑制组细胞增殖率较增强组和对照组明显降低（P<0.05）,增强组较对照组明显增强（P<0.05）;与增强组或对照组比,抑制组细胞周期S期明显减少（P<0.05）,而G2期则明显增多（P<0.05）,与对照组比,增强组S期明显增加,而G2期明显较少（P<0.05）;与增强组和对照组比,抑制组细胞凋亡率显著增加（P<0.05）,而与对照组比,增强组细胞凋亡率显著减少（P<0.05）。结论 miR-21可能通过直接靶向调控BTG2表达而影响HepG2细胞的生长,可能成为干预肝癌生长的新途径。     

鹅去氧胆酸对高果糖喂养大鼠肾脏脂质合成和分解代谢的影响

目的通过观察高果糖喂养大鼠肾组织中固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)-1、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α及酰基辅酶A氧化酶(ACO)的变化,探讨其对脂质合成代谢和分解代谢的影响并观察鹅去氧胆酸(CDCA)的保护作用。方法将48只大鼠分为对照组,高果糖组及CDCA组,每组16只,8、16 w时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖(FPG)、血脂及24 h尿微量白蛋白(UMA);检测大鼠肾皮质甘油三酯(TG)含量;SREBP-1c、SCD-1、PPAR-α及ACO基因和蛋白的表达分别采用实时荧光定量PCR分析技术及Western印迹法。结果与对照组比较,高果糖组大鼠左肾重/体重,血中TG和极低密度脂蛋白(VLDL)水平明显升高,24 hUMA增加,肾组织中TG水平明显增高,且随时间延长而加重(P<0.05);SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达明显增加,且随时间延长其表达更多(P<0.01);PPAR-α和ACO基因及蛋白表达明显减少,且随时间延长其表达更少(P<0.01)。CDCA组上述指标明显改善(P<0.05)。结论高果糖饮食喂养可导致大鼠高TG血症、高VLDL血症、高尿酸血症和UMA水平增加,可引起大鼠肾皮质TG蓄积。高果糖促使肾组织脂质合成代谢增强,分解代谢减弱,进而导致肾脏损伤。CDCA可下调SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达,上调PPAR-α和ACO基因及蛋白表达,减少脂质合成,促进脂质分解,减轻肾损伤。     

miR-363靶向调控E2F3表达影响HepG2细胞增殖和凋亡研究*

目的 探讨微小RNA-363（miR-363）靶向调控E2F转录因子3（E2F3）的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平。结果 对照组HepG2细胞增殖率为（96.4±9.7)%,显著高于抑制剂处理组【（72.3±6.5）%,P<0.05】,凋亡率为（8.2±1.4）%,显著低于抑制剂处理组【（9.7±0.8）%,P<0.05】;对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.2）,P<0.05】,E2F3蛋白表达量为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.1）,P<0.05】,而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为（0.4±0.0）和（0.5±0.1）,均显著低于抑制剂处理组【（0.6±0.1）和（0.7±0.0）,P均<0.05】。结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡。本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据。     

硫化氢上调ABCA1的表达促进HepG2细胞载脂蛋白形成

目的探讨硫化氢对HepG2细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白及载脂蛋白形成的影响。方法将硫化氢供体硫氢化钠(NaHS)以不同浓度(25、50、100、200及400μmol/L)处理HepG2细胞24h后,采用MTT法检测NaHS对HepG2细胞细胞存活率的影响;HepG2细胞以100μmol/LNaHS处理4、12及24h,实时定量PCR检测NaHS对HepG2细胞ABCA1及载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白A2(ApoA2)mRNA的影响,Westernblot检测NaHS对ABCA1、ApoA1及ApoA2蛋白的影响。结果 MTT结果显示,除400μmol/L以外,25、50、100及200μmol/LNaHS对HepG2细胞的生长无抑制作用;Westernblot量效结果显示,NaHS呈浓度依赖性地上调ABCA1蛋白的表达;时效结果显示,100μmol/LNaHS作用4、12及24h,均能上调ABCA1表达及促进培养上清ApoA1、ApoA2的分泌,但不具时间依赖性;实时定量PCR结果显示,ABCA1、ApoA1及ApoA2的mRNA均增加,其变化与蛋白表达变化一致。结论硫化氢可以促进HepG2细胞ABCA1表达,进而促进载脂蛋白形成。     

固醇辅酶A去饱和酶1(scd1)基因突变对老年小鼠血脂、血糖的影响

目的探讨scd1基因突变对老年小鼠血脂、血糖及体重的影响。方法选取56周龄老年scd1基因突变小鼠及同龄正常对照KM小鼠,分别测定其血清甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血糖水平及体重等指标。结果56周龄雄性scd1突变鼠TG水平与同龄同性别的KM小鼠相比极显著降低(P<0.01);TC、LDL-C和HDL-C水平有显著差异(P<0.05)。雌性scd1突变鼠仅TG水平与同龄同性别的KM小鼠相比显著降低(P<0.05)。scd1突变鼠血糖水平无显著性变化。与正常对照小鼠相比,雄性scd1突变鼠体重极显著降低(P<0.01),雌性鼠体重显著降低(P<0.05)。结论scd1基因突变可引起小鼠血脂降低、体重下降。     

他莫昔芬体外促进HepG2细胞脂肪变性观察

目的：研究他莫昔芬（TAM）对体外培养的HepG2细胞脂肪变性以及脂类代谢调控关键因子表达的影响。方法应用油酸（50μmol/L）处理HepG2细胞,诱导细胞脂肪变性体外模型,同时给予不同浓度的TAM （5～20μmol/L）干预72 h;采用油红O染色和甘油三酯含量测定检测HepG2细胞内脂质聚集情况;应用蛋白印迹法检测固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）、肉酯软脂酰基转移酶（CPT1）和微粒体甘油三酯转移蛋白（MTP）的表达;采用细胞活性检测试剂盒测定细胞活性。结果在干预72 h后,模型组细胞内甘油三酯含量为（16.53＆#177;0.17） mg/100 mg蛋白质,在5μmol/L TAM处理细胞内甘油三酯含量为（17.77＆#177;0.05） mg/100mg蛋白质,与模型组无显著性差异,但在10μmol/L和20μmol/L TAM处理组较模型组分别增加了31%[（21.57＆#177;0.16） mg/100 mg蛋白质]和44%[（23.82＆#177;0.44） mg/100 mg蛋白质],（P＆lt;0.05）;TAM上调细胞内SREBP-1c、FAS、SCD和MTP蛋白表达,但并不改变CPT1蛋白表达;TAM在5～20μmol/L范围内不影响HepG2细胞活性。结论 TAM可促进油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其主要机制可能是通过上调SREBP-1c及其下游基因,如FAS和SCD的表达而增加了脂肪酸的合成。     

小泛素样修饰物特异性蛋白酶3通过调节脂滴水平体外促进HepG2细胞丙型肝炎病毒复制

目的 探究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞小泛素样修饰物特异性蛋白酶3(SENP3)对脂滴水平的调节及其对HCV复制的影响。方法 以感染性HCV病毒颗粒感染人HepG2细胞,采用Western blot法检测感染前后SENP3蛋白表达水平。采用脂质体法转染SENP3-siRNA至HepG2细胞,在感染HCV后采用Western blot法检测HCV核心蛋白表达量,采用qRT-PCR法检测HCV RNA水平,采用油红O染色观察细胞脂滴水平。以软脂酸处理敲低SENP3后的HepG2细胞,采用qRT-PCR法检测感染HCV后HCV RNA水平。结果 在HCV感染HepG2细胞后1 d、3 d和6 d,HCV 核心蛋白相对表达量分别为0.01±0.00、0.17±0.02和0.43±0.04,SENP3蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、0.42±0.03和0.46±0.04,差异显著(P<0.05);转染SENP3-siRNA可有效降低SENP3表达并降低HCV感染后细胞HCV核心蛋白表达水平;SENP3敲低细胞HCV RNA相对水平为54.2±11.4%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01);敲低SENP3蛋白表达后细胞脂滴数量显著减少;敲低SENP3的HepG2细胞感染HCV后HCV RNA相对水平为58.2±5.2%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01),而以软脂酸处理敲低SENP3的HepG2细胞,在感染HCV后HCV RNA相对水平为74.6±6.4%,较未经软脂酸处理细胞显著升高(P<0.01)。结论 在HCV感染肝细胞时SENP3可通过调节脂滴代谢促进HCV复制。     

Diallyl disulfide improves lipid metabolism by inhibiting PCSK9 expression and increasing LDL uptake via PI3K/Akt-SREBP2 pathway in HepG2 cells

Background and aimDiallyl disulfide (DADS), a volatile sulfide extracted from garlic, has been suggested as a chemical of anti-atherosclerotic drugs, while its molecular mechanism for this benefit has not fully been understood. The aim of the present study was to investigate the effects of DADS on lipid metabolism and its potential mechanisms in HepG2 cells induced by lipopolysaccharides (LPS).Methods and resultsHepG2 cells were treated with LPS with or without different concentrations of DADS (0, 20, 40, 80, 160 μg/ml) for 24 h. The cell activity was detected by CCK8, and Dil-LDL uptake assay was used to examine the LDL uptake. Real-time PCR and Western blot were used to detect the expression of LDLR, PCSK9 SREBP2 and HMGCR. In addition, we examined the effect of the combination of DADS with atorvastatin on PCSK9 expression. The results showed that LPS significantly increased PCSK9 and SREBP2 expressions in a dose-dependent manner in HepG2 cells. DADS attenuated PCSK9, SREBP2 and HMGCR expressions and up-regulated the expression of LDLR. Moreover, DADS reversed the expressions of PCSK9, SREBP2, HMGCR and LDLR induced by LPS and DADS could promote the LDL uptake in HepG2 cells. Furthermore, DADS decreased the expression of PCSK9 by activating the PI3K/Akt-SREBP2 signal pathway. Notably, DADS could reduce PCSK9 expression induced by atorvastatin in HepG2 cells.ConclusionDADS could significantly attenuated PCSK9 expression in a dose-dependent manner induced by LPS and increased the LDLR expression in HepG2 cells, which was associated with the activation of PI3K/Akt-SREBP2 signaling pathway.     

Partial Beclin 1 silencing aggravates doxorubicin- and Fas-induced apoptosis in HepG2 cells

AIM: To investigate the role of Beclin 1 on the susceptibility of HepG2 cells to undergo apoptosis after anti-Fas antibody or doxorubicin treatment. METHODS: Beclin 1 silencing was achieved using RNA interference. DNA ploidy, the percentage of apoptotic cells and the mitochondrial membrane potential were assessed by flow cytometry. Levels of Beclin 1, Bcl-XL and cytochrome c, and the cleavage of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) were assayed by using Western blots. RESULTS: Beclin 1 expression decreased by 75% 72 h after Beclin 1 siRNA transfection. Partial Beclin 1 silencing significantly increased the percentage of subG1 cells 24 and 40 h after treatment with doxorubicin or antiFas antibody, respectively, and this potentiation was abrogated by treatment with a pan-caspase inhibitor. Partial Beclin 1 silencing also increased PARP cleavage, mitochondrial membrane depolarization and cytosolic cytochrome c. The pro-apoptotic consequences of partial Beclin 1 silencing were not associated with a decline in Bcl-XL expression. CONCLUSION: Partial Beclin 1 silencing aggravates mitochondrial permeabilization and apoptosis in HepG2 cells treated with an anti-Fas antibody or with doxorubicin.     

溶癌水泡性口炎病毒体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的:研究一株实验室减毒水泡性口炎病毒(VSV)对HepG2细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法:首先将水泡性口炎病毒以1.0感染复数(MOI)的接种密度感染HepG2细胞,同时设接种相同体积培养液的Mock感染组,在不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞增殖活性;AO/EB结合Hoechst/PI染色观察细...     

HepG2与HepG2．2．15细胞中P53表达及活性的比较

目的探讨HBV对抑癌基因P53表达及活性的影响。方法选用HepG2及转染了HBV表达质粒的HepG2．2．15细胞，采用Western blotting法检测两种细胞P53的表达状况；磷酸钙法将报告基因质粒PG13-CAT和P21-LUC分别转染细胞，通过检测报告基因的表达观察各细胞中P53的活性。结果HepG2．2．15细胞中P53蛋白表达水平高于HepG2细胞，而且两种报告基因的表达在HepG2．2．15细胞中也较高。结论HBV在肝癌细胞内的复制对P53的表达及功能具有一定的增强作用。     

HepG2细胞电转染条件的优化

目的优化HepG2细胞电转染条件,进一步提高HepG2细胞的转染效率。方法采用电穿孔方法将pcDNA3．1-EGFP导入HepG2细胞中,在500μL电转染体系中,在不同电场强度、细胞数目、脉冲频率、脉冲时间、电转质粒数目、电转缓冲液、培养基血清浓度条件下,分别将pcDNA3．1-EGFP质粒电转染HepG2细胞,检测不同条件下细胞存活率和转染率。结果电转前4℃孵育电转体系混合液10min,方波电转条件在1个电脉冲、电压270V、细胞数为2×10^6个、质粒20μg、脉冲时间20ms、电转缓冲液为优化缓冲液、电转后置于37℃、含15％FBS的DMEM高糖培养基中培养48h,可获得高转染率（60．68±1．87）％。结论优化电穿孔法的电转染条件能够有效提高HepG2细胞的电转染效率。本研究为外源基因电转染HepG2细胞提供了可靠的试验参数。