GPER1在EGFR突变的肺腺癌中的表达

  目的  探讨肺腺癌中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）与G蛋白偶联雌激素受体1（G-protein cou? pled estrogen receptor 1,GPER1）/GPR30之间的关系。  方法  采用免疫组织化学方法检测83例术后肺腺癌组织样本中GPER1的表达,同时收集患者的临床病理资料,采用二代基因测序方法检测相应组织中EGFR基因突变状态,并分析GPER1与EGFR之间的相关性,Western blot检测EGFR野生型肺腺癌细胞A549,EGFR突变型肺腺癌细胞PC-9以及使用吉非替尼处理的PC-9细胞的GPER1表达水平。  结果  GPER1的阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、吸烟、分化程度无显著性差异（均P > 0.05）;EGFR突变与肿瘤TNM分期无显著性差异（P=0.542）;GPER1阳性表达与EGFR突变呈正相关（P=0.003）;GPER1在Ⅲ、Ⅳ期肺腺癌中较Ⅰ、Ⅱ期高表达（P=0.008）;在PC-9细胞中使用吉非替尼抑制EGFR活性引起GPER1表达下调。  结论  GPER1在EGFR基因突变型的肺腺癌中的表达高于EGFR野生型肺腺癌,GPER1的表达可能受EGFR活性调控。      

肺腺癌患者中EGFR突变与肺结核的相关性研究

  目的  研究肺腺癌患者中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变与肺结核在肺腺癌中的相关性。  方法  采用PCR扩增及基因测序方法检测506例肺腺癌患者EGFR基因突变情况,分析其与肺结核之间的关系,进一步使用Kaplan-Meier法进行生存分析并行Log-rank检验。  结果  506例肺腺癌患者中有218例患者存在EGFR突变,其中25例患者有感染肺结核病史。在肺腺癌患者中,有肺结核病史的患者EGFR基因突变率,尤其是外显子21缺失显著高于单纯肺腺癌者（P= 0.047,P=0.002）。肺腺癌与结核灶在同一肺叶或同侧肺的患者EGFR基因突变率明显高于二者在不同侧肺,尤其是外显子21突变（P=0.020,P=0.030）。有肺结核病史患者的2年生存率明显高于单纯肺腺癌患者（P=0.039）,且在未经EGFR-TKIs治疗的具有肺结核史的患者中,EGFR突变组与野生型组相比,2年生存率无统计学差异（P=0.948）,经过EGFR-TKIs治疗的患者2年生存率亦差异无统计学意义（P=0.425）。  结论  肺腺癌患者中,有肺结核病史的患者EGFR基因突变发生率明显增高,且EGFR基因突变与其预后无关。      

靶向高通量测序在非小细胞肺癌中的临床应用

  目的  对8种与非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）个性化治疗高度相关的驱动基因进行检测,分析基因变异与临床病理特征的关系。  方法  收集天津医科大学肿瘤医院2016年6月至2017年8月212例NSCLC患者样本,对EGFR、KRAS、BRAF、ALK、MET、ERBB2、ROS1、RET 8种基因进行高通量测序。  结果  8种基因中EGFR基因变异率高达52.8%,其次为KRAS（8.5%）、ALK（8.0%）、ERBB2（6.1%）、MET（3.8%）、BRAF（1.4%）、RET（0.9%）、ROS1（0.9%）,75%样本检出至少1个驱动基因变异,驱动基因变异间呈现强烈互斥。最常见的EGFR突变为19外显子缺失和L858R突变,EGFR T790M突变与前面两个突变位点伴随出现。19外显子缺失患者携带非EGFR T790M突变比例低于L858R突变患者携带非EGFR T790M突变比例（P=0.04）。15.2%EGFR突变伴EGFR扩增,携带EGFR扩增且EGFR突变率 > 40%患者比例高于无EGFR扩增且EGFR突变率 > 40%患者（P < 0.01）。女性、不吸烟、腺癌患者易发生EGFR特别是EGFR敏感突变（P < 0.01）。肺腺癌（P=0.013）、临床分期晚（P=0.048）、淋巴结转移（P=0.027）患者携带EGFR扩增比例高。男性（P=0.009）、左侧肺癌（P=0.048）,吸烟患者（P=0.037）KRAS突变发生率较高。携带非KRAS突变、ALK融合的患者更年轻（P=0.005,P=0.031）,而携带KRAS突变患者年龄较高（P=0.055）。  结论  高通量测序可同时高效检测NSCLC患者中8种与靶向治疗相关驱动基因的变异谱,为临床医生的个体化诊疗提供参考,以多基因为基础的高通量测序为NSCLC诊疗提供更多的可能性。      

Super-ARMS法检测肺腺癌患者血浆循环肿瘤DNA表皮生长因子受体T790M基因突变的临床研究

  目的  探讨真实世界中Super-ARMS法检测肺腺癌患者外周血标本循环肿瘤脱氧核糖核酸（circulating tumor DNA,ctDNA）中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）T790M基因突变的临床应用价值。  方法  收集2019年1月至2020年6月在首都医科大学附属北京胸科医院确诊的肺腺癌患者307例,突变扩增系统（amplification refractory mutation system, ARMS）检测组织中EGFR基因突变情况,Super-ARMS法检测血浆中EGFR的基因突变情况。通过生存分析比较不同标本检测EGFR T790M基因突变患者的无进展生存时间（progression-free survival,PFS）。  结果  153例患者疾病进展接受再活检。74例进行组织再活检,其中34例（45.9%）检测到EGFR T790M基因突变。141例患者进行液体再活检,其中51例（36.2%）EGFR T790M基因突变。Kaplan-Meier生存分析显示,组织和外周血EGFR T790M突变阳性患者接受第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs）的中位PFS比较差异无统计学差异（16.3个月 vs. 11.4个月,x2=1.138,P>0.05）。组织和外周血EGFR T790M突变阴性患者未接受第三代EGFR-TKIs治疗的中位PFS比较差异无统计学意义（7.0个月 vs. 7.0个月,x2=0.470,P>0.05）。  结论  真实世界中Super-ARMS法检测外周血标本有望应用于检测EGFR T790M 基因突变情况,外周血标本可一定程度上补充组织标本检测EGFR T790M基因突变结果,预测患者对第三代EGFR-TKIs治疗的疗效。      

CSF-ctDNA与TIF-ctDNA检测在脑胶质瘤中的临床应用研究

  目的  探讨脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）来源的循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）与肿瘤间质液（tumor interstitial fluid，TIF）ctDNA检测在脑胶质瘤中的诊断、复发监测、肿瘤标志物及靶向药物筛选方面的应用价值。  方法  收集2019年1月至12月河南省人民医院12例脑胶质瘤患者CSF标本、TIF标本及血液标本。CSF标本、TIF标本进行二代基因测序（next generation sequencing，NGS）检测ctDNA突变，血液标本进行白细胞胚系突变检测，二者对比筛选出肿瘤突变基因。与临床资料结合，对胶质瘤患者CSF-ctDNA与TIF-ctDNA检测结果进行对比及生物信息学分析。  结果  检测到57种基因变异类型共209个，标本总平均突变数为8.7个，CSF-ctDNA平均突变数为4.3个，TIF-ctDNA平均突变数为13个。9例CSF-ctDNA检测阳性率为（75.0%）、11例TIF-ctDNA检测阳性率（91.6%）。同1例患者ctDNA浓度TIF标本高于CSF标本，TIF标本ctDNA平均浓度（3.38 ng/μL）高于CSF标本中ctDNA平均浓度（0.58 ng/μL）。ctDNA检测发现肿瘤基因突变，较影像学发现复发时间平均提前2.9个月。突变基因PIK3CA、PTEN、KRAS、EGFR、TP53、NF1、BRCA1、BRCA2、TSC1、TSC2、IDH1、CDKN2A匹配到靶向潜在获益药物，突变基因PIK3CA、KRAS、EGFR匹配到潜在耐药药物。  结论  CSF-ctDNA与TIF-ctDNA能够比影像学更早发现肿瘤复发，是一种可行的能够在肿瘤的发生和复发的过程反复检测、筛选胶质瘤标志物的方法，对胶质瘤患者基因诊断及靶向治疗有一定临床指导作用。相对于CSF-ctDNA，TIF-ctDNA检测获得样本ctDNA浓度更高，检测患者基因平均突变数更多、检测阳性率与检测效力更高，能够提供更多、全面的肿瘤基因组信息，适合临床用于获取胶质瘤的基因表达信息。      

晚期肺腺癌EGFR突变状态对培美曲塞疗效的影响

  目的  研究晚期肺腺癌EGFR突变状态对培美曲塞疗效的影响。   方法  收集经病理学确诊且有可评价病灶的晚期肺腺癌患者40例,所有病例均有表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）突变状态检测结果,均采用含培美曲塞方案化疗,以总有效率（ORR）、疾病控制率（DCR）、无进展生存期（PFS）为研究终点进行回顾性分析,比较两组间的疗效差异。   结果  EGFR野生组和突变组总有效率分别为44.4%（8/18）和31.8%（7/22）（P=0.412）,疾病控制率分别为88.9%（16/18）和81.8%（18/22,P=0.673）。EGFR野生组中位PFS较突变组延长（8.9 vs. 5.3个月,P=0.046）。   结论  晚期肺腺癌EGFR突变状态对培美曲塞的疗效有影响。      

PAP动态监测血浆cfDNA在进展期非小细胞肺癌患者治疗中的应用

  目的  探讨焦磷酸化激活聚合反应（pyrophosphorolysis-activated polymerization,PAP）动态监测血浆cfDNA在进展期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者治疗中的应用。  方法  收集2016年3月至2017年6月就诊的进展期NSCLC患者85例,采用PAP核酸扩增实时荧光PCR法与扩增阻滞突变系统（amplication refractory mutation system, ARMS）实时荧光PCR法检测血浆cfDNA的EGFR突变状况,比较组织与血浆及PAP法与ARMS-PCR检测结果的一致性;对突变阳性的38例患者采用PAP动态监测血浆基因突变状况。  结果  血浆与组织突变检测结果差异无统计学意义（P=0.092）。PAP与ARMS-PCR突变检测结果差异亦无统计学意义（P=0.210）。血浆cfDNA EGFR基因突变的检出率,在疾病进展者中较未进展者中高（62.5% vs. 21.3%,P < 0.001）。  结论  PAP可用于血浆cfDNA突变检测及动态监测以提前获得疾病进展的信息。      

晚期非小细胞肺癌EGFR突变与18F-FDG PET/CT代谢参数的相关性及其对预后评估的影响

  目的  探讨晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者18F-FDG PET/CT代谢参数及临床资料与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变状态的相关性。同时探究EGFR基因突变状态对PET/CT代谢参数评估晚期NSCLC患者预后的影响。  方法  回顾性分析2017年1月至2018年12月在重庆医科大学附属第一医院接受18F-FDG PET/CT检查并有EGFR基因突变检测  结果  的109例晚期NSCLC患者。根据患者EGFR基因检测  结果  分为EGFR突变型组（n=48）与EGFR野生型组（n=61）,比较两组间PET/CT代谢参数及临床信息的差异并分析其与EGFR突变状态的关系。随访患者的无进展生存（progression free survival,PFS）状态,分析EGFR突变状态对PET/CT代谢参数评估PFS的影响。  结果  多因素Logistic分析发现,女性（OR=12.154,P < 0.001）、腺癌（OR=4.822,P=0.019）、低最大标准摄取值（maximum standardized uptake value,SUVmax）（≤9.58,OR=4.347,P=0.005）是EGFR突变的独立预测因子。ROC生存曲线分析肿瘤代谢体积（metabolic tumor volume,MTV）（AUC= 0.749,P=0.000 2）,糖酵解总量（total lesion glycolysis,TLG）（AUC=0.747,P=0.000 3）对患者的PFS状态具有预测价值。Cox回归分析发现,在EGFR基因突变型组中,MTV>14.85的患者疾病进展风险更高（HR=2.724,P=0.004）;EGFR野生型组中,MTV>12.48的患者疾病进展风险更高（HR=3.195,P=0.002）。  结论  对于晚期NSCLC患者,EGFR突变与更低的FDG摄取相关,体积代谢参数具有重要的预后预测价值,但对于EGFR基因突变不同状态,可以考虑不同的标准。      

NTRK突变肺癌患者的临床特征和预后分析

  目的  探讨NTRK基因突变肺癌患者的临床特征、治疗情况以及与预后的关系。  方法  回顾性分析2016年10月至2019年11月就诊于华中科技大学同济医学院附属同济医院胸部肿瘤科且NGS检测伴有NTRK突变的原发性肺癌患者的临床资料，应用Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行单因素生存分析。  结果  研究共纳入28例患者，27例为Ⅳ期，基因检测结果均为NTRK点突变或拷贝数扩增；1例为ⅢC期，基因检测结果为AEN-NTRK3（A1:N18）融合。单因素分析结果显示，接受一线治疗的NTRK突变患者无进展生存期（progression-free survival，PFS）与肿瘤组织病理类型相关（腺癌vs.鳞癌:9.4个月vs.2.5个月，P < 0.05），而与年龄、性别、吸烟史、NTRK突变位点、突变类型、是否合并经典突变无关（均P>0.05）。一线接受表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗的NTRK1突变合并EGFR突变患者PFS明显长于NTRK3突变合并EGFR突变患者，中位PFS分别为12.4个月和3.0个月，差异具有统计学意义（P < 0.05）。  结论  接受一线治疗的NTRK突变肺腺癌患者PFS较鳞癌患者长。EGFR突变合并NTRK3突变肺癌患者接受EGFR-TKIs治疗的预后较差，合并NTRK3突变可能是EGFR突变肺癌预后不良的因素之一。      

肺腺癌患者外周血中外泌体EGFR突变检测及其临床意义北大核心

目的:探讨肺腺癌患者外周血中外泌体检测EGFR的临床意义。方法:采用PCR方法检测肺腺癌患者外周血中外泌体、ctDNA和癌组织中EGFR突变情况,分析肺腺癌患者外周血外泌体中EGFR突变及其与临床病理特征的关系,比较外周血中外泌体、ctDNA和癌组织中检测EGFR突变的一致性。结果:肺腺癌患者外周血外泌体中检测EGFR突变型肺腺癌21例,EGFR野生型肺腺癌23例。肺腺癌外泌体中EGFR突变与性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学类型及淋巴结转移情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺腺癌组织检测25例EGFR突变中,外泌体中检测出EGFR突变19例,一致率为76%;19例肺腺癌组织EGFR野生型中,外泌体检测出EGFR突变2例。25例肺腺癌组织EGFR突变中,ctDNA中检测出EGFR突变16例,一致率为64%。kappa分析显示,外泌体、ctDNA与癌组织检测一致性较好,前者一致性优于后者。结论:外泌体可用于肺腺癌血浆中EGFR突变检测,对指导临床用药具有一定意义。     

血清癌胚抗原与非小细胞肺癌患者EGFR突变的关系及其对预后的影响

  目的  探讨血清癌胚抗原（CEA）水平与非小细胞肺癌患者EGFR基因突变的关系及预测价值,分析CEA水平对肺癌患者术后生存期的影响。  方法  选取2009年3月至2011年3月于天津医科大学肿瘤医院肺部肿瘤科行外科手术治疗的患者387例,术前行CEA等肿瘤标志物检测,术后常规行EGFR基因突变检测,分析CEA等肿瘤标志物与EGFR突变关系及其与患者预后的关系。  结果  全组患者中出现EGFR基因突变的患者共168例,突变阳性率43.4%,EGFR突变在女性、非吸烟、腺癌以及年龄 < 60岁的患者中更加常见（P < 0.05）,另发现EGFR突变情况与肿瘤标志物及化疗敏感性指标相关,EGFR野生型患者的Cyfra21-1、SCC升高、ERCC1阳性表达更常见（P < 0.05）,而EGFR基因突变患者的CEA升高则更常见（P=0.015）,并且随着CEA水平的升高,EGFR基因突变阳性率更高（血清CEA水平 < 5 μg/L、5~20 μg/L及>20 μg/L 3组的阳性率分别为40.1%、47.5%和66.6%,P=0.003）。Logistic回归分析发现CEA水平是预测EGFR基因突变的独立因素,并且血清CEA水平也是影响非小细胞肺癌患者预后的独立因素（CEA水平升高组与正常组2年生存率分别为75.9%和88.4%,P < 0.01）。  结论  血清CEA水平高低可以预测手术切除的非小细胞肺癌患者的预后,并且与非小细胞患者EGFR突变相关,可以初步指导EGFR突变情况。      

非小细胞肺癌PTEN基因突变的临床特征

  目的  了解非小细胞肺癌中PTEN基因突变的分布状况及其临床特征。  方法  选取2003年9月至2009年12月间182例在广东省人民医院收治的非小细胞肺癌患者的手术或穿刺标本,抽提RNA后,逆转录成cDNA,再进行PCR扩增PTEN 1~9外显子及EGFR 18~21外显子,用直接测序法检测基因突变。  结果  182例标本中,PTEN基因的突变率为9.9%（18/182）,PTEN基因的突变率女性为6.5%,男性为11.0%（P=0.549）;吸烟者为13.0%,非吸烟者为6.7%（P=0.15）;腺癌为7.8%,鳞癌为9.9%（P=0.628）,差别均无统计学意义。常见的突变类型有点突变、插入突变及缺失突变,共11例,主要分布在第8外显子,也可见于第4、5、9外显子;其中10例为男性吸烟者,1例为男性非吸烟者;8例为鳞癌,1例腺癌,2例大细胞癌;此外,发现7例大片段缺失突变,缺失片段位于第1~7外显子,约250~539 bp碱基丢失,突变率为3.8%（7/182）,除了1例为大细胞癌外,其余6例均为腺癌;PTEN基因突变率与性别、吸烟状态分布无统计学相关性;其中4例大片段缺失伴随EGFR基因敏感突变。  结论  具有不同PTEN基因突变类型的NSCLC可能是两种不同的疾病类型,不同突变类型的PTEN基因在NSCLC中的作用机制不同。PTEN基因的大片段缺失可能是突变型EGFR对TKI原发耐药的原因之一      

多发肺部磨玻璃样结节EGFR突变状态的研究

  目的  探讨同期多发肺部磨玻璃样结节（synchronous multiple ground-glass nodules,SMGGNs）不同病灶间表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的突变情况并分析其与临床特征的关系。  方法  回顾性分析2017年1月至2018年12月河北医科大学第四医院行手术治疗的35例SMGGNs患者的临床病例资料。应用二代测序（next generation sequencing,NGS）技术对手术标本进行检测,检测EGFR基因第18、19、20及21外显子的突变状态。分析病变的EGFR突变状态与患者性别、年龄、病变位置、结节影像学表现和病理学类型的关系。  结果  全部患者的EGFR突变率为65.7%（23/35）。女性及不吸烟患者具有更高的EGFR突变率（P=0.015,P < 0.001）。浸润性腺癌（ivasive adenocarcinoma,IAC）的EGFR突变率高于非典型腺瘤样增生（atypical ade-nomatoid hyperplasia,AAH）、原位腺癌（adenocarcinoma in situ,AIS）以及微浸润腺癌（minimally ivasive adenocarcinoma,MIA）（P < 0.001）。19和21外显子突变为EGFR基因最常见的突变亚型。不同病理亚型的EGFR基因突变状态无显著性差异（P=0.707）。27例具有多个可检测EGFR突变状态结节的患者中,EGFR突变状态的不一致率为85.2%（23/27）。  结论  SMGGNs患者不同病灶的EGFR基因突变谱不同,提示各枚结节的发生发展为独立事件。而EGFR基因的突变与磨玻璃样结节（ground glass nodule,GGN）发生发展过程,尤其是肿瘤的侵袭过程密切相关。