异常瘢痕成纤维细胞凋亡研究

目的：明确异常瘢痕成纤维细胞的凋亡特性及激素的机理。方法：以瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤（各６例）为材料,在体外对低血清和氟美松对不同成纤维细胞的细胞凋亡及怀凋亡有关的蛋白Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２的表达的影响进行了研究;同时,对６例增生性瘢痕局部注射康宁克通后３ｄ和７ｄ的细胞凋亡和相关基因ｃ－ｍｙｃ的表达进行了在体研究。结果：在低血清中发生细胞凋亡正常皮肤成纤维细胞多于增生性瘢痕,增生性瘢痕多于瘢痕疙     

35年狼疮性肾炎临床与基础研究

本研究在国内首次发现异常增高的循环白介素－６可导致狼疮性全身病理损害；白介素－６异常增高在狼疮性小管间质损害过程中可能具有重要作用；白介素－６及其信息传递中ＧＰ１３０，ＪｕｎＢ基因异常表达参与了弥漫性增生性狼疮性肾炎（ＬＮ）分子发病过程，并率先发现丹参通过增强ｃ－ｍｙｃ蛋白高水平表达而诱导细胞凋亡，从而对人肾成纤维细胞增殖产生抑制作用。在国内外首次证实巨噬细胞在ＬＮ的病人肾脏局部增殖，且和疾病严重     

人衰老成纤维细胞c—myc原癌基因的损伤修复

目的；观察人衰老成纤维细胞特异因基ｃ－ｍｙｃ的损伤修复，方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法。结果；衰老细胞能有效地修复ｃ－ｍｙｃ基因。结论；衰老细胞有效地修复对细胞存亡至关重要的基因。     

病理性瘢痕中c-myc原癌基因的表达

目的探讨原癌基因ｃ－ｍｙｃ的表达与病理性瘢痕形成的相关性。方法应用免疫组化ＳＰ法检测ｃ－ｍｙｃ蛋白在增生 性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中的表达和分布,并用图像定量分析比较其差异。结果在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的 成纤维细胞中ｃ－ｍｙｃ蛋白呈强阳性表达,与正常皮肤对照组均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中 ｃ－ｍｙｃ蛋白表达升高提示存在ｃ－ｍｙｃ原癌基因的激活,ｃ－ｍｙｃ原癌基因可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与 降解以及对细胞因子的调控,并导致瘢痕增生。     

急性白血病c—myc反义核酸基因治疗的实验研究

ｃ－ｍｙｃ基因是调控细胞增殖与分化的癌基因,在急性白血病细胞株及急性白血病、恶性淋巴瘤患者细胞中出现高表达,是影响这些恶性肿瘤发生、发展的重要基因之一。反义核酸治疗恶性肿瘤在技术上具有高效、简便、不需载体等特点,原理是根据碱基互补,将具有特异序列的反义寡核苷酸导入肿瘤细胞与靶基因上的相应部位结合,抑制和阻断相应基因的转录表达。　目的　应用针对ｃ－ｍｙｃ基因的两个反义核酸１５ｍ ｅｒ和１８ｍ ｅｒ作用于急性白血病细胞株和原代细胞,研究反义核酸对白血病细胞的生长、增殖,ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 表达以及Ｐ６５ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达率的改变,以及对细胞凋亡、分化方面的影响。　方法　采用锥虫蓝染色法测定细胞的拒染率,绘制细胞的生长曲线,用０．８％ 甲基纤维素半固体培养法进行克隆形成试验;用流式细胞仪检测在反义核酸作用前后的Ｐ６５ ｃ－ｍｙｃ 蛋白及凋亡率;用ＲＴ－ＰＣＲ 法检测ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 的表达相对水平;电镜观察凋亡细胞的超微结构;ＤＮＡ 电泳分析凋亡片段;光镜下瑞特染色、ＮＢＴ染色观察细胞分化水平,流式细胞仪检测分化抗原表达,同时ＲＴ－ＰＣＲ检测分化细胞的ｍ ＲＮＡ 表达;ＭＴＴ 法检测反义核酸与化疗药物对细胞联合作用后对     

重组RA538、反义c-myc腺病毒对正常细胞作用的研究

了解重组ＲＡ５３８、反义ｃ－ｍｙｃ腺病毒载体对正常细胞的影响。方法：采用形态学观察、ＭＴＴ、ＲＴ－ＰＣＲ等方法,对腺病毒介导ＲＡ５３８及反义ｃ－ｍｙｃ基因对正常人胚肺成纤维细胞的影响进行研究。结果以Ａｄ－ＬａｃＺ进行组腺病毒转导效率检测发现腺病毒２ＢＳ细胞具有很高的转导效率,ＡｄＲＡ５３８、Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ对正常人胚肺２ＢＳ细胞无生长抑制及凋亡诱导作用,同时Ａｄ－ＲＳ５３８对２ＢＳ内源性ｃ－ｍ     

表达反义N-myc逆转录病毒载体对神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的影响

目的研究反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染后人神经母细胞瘤细胞在神经生长因子处理后的诱导分化情况,探讨Ｎ－ｍｙｃ在神经生长因子诱导分化中的意义。方法用基因重组技术构建表达反义Ｎ－ｍｙｃ的逆转录病毒载体。用ＴｒａｎｓｆｅｃｔａｍＲｅａｇｅｎｔ等多种基因转染方法,转染已经基因转染恢复了神经生长因子受体表达的人神经母细胞瘤系,建成表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系。用神经生长因子处理转化细胞系,观察ＮＧＦ是否能诱导分化。同时用ＴＵＮＥＬ原位凋亡检测技术及超微结构技术研究表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系凋亡的情况。结果表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系经单链ＲＮＡ探针杂交,证实其Ｎ－ｍｙｃ的表达明显降低。用神经生长因子处理这些转化细胞系,细胞出现明显的形态学分化。ＴＵＮＥＬ技术及超微结构研究表明,经反义Ｎ－ｍｙｃ转染的细胞系细胞凋亡增多。结论反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能有效抑制Ｎ－ｍｙｃ的表达,进而促进神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞的分化。反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能使神经母细胞瘤细胞凋亡增多。     

鬼臼叉甙诱导HL－60细胞分化时c－myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关系。结果：与ＲＡ一样，小剂量ＶＰ－１６能诱导ＨＬ－６０细胞向粒系分化。并且在ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ蛋白水平明显降低。ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞其ｃ－ｍｙｃ蛋白降低与其诱导分化作用呈负相关。结论：实验结果提示，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化可能是ＶＰ－１６诱导ＨＬ－６０细胞分化的机制之一。     

原癌基因c—myc与肿瘤

原癌基因ｃ－ｍｙｃ是ｍｙｃ家族的重要成员，它编码细胞核内磷酸化蛋白质。ｃ－ｍｙｃ基因在维持正常细胞功能活中起重要作用，参与细胞的增殖，分化及凋亡过程。ｃ－ｍｙｃ与人类肿瘤有密切关系，在许多肿瘤组织中均可以检测到原癌基因ｃ－ｍｙｃ及其蛋白表达产的的异常。而且体外实验证实ｃ－ｍｙｃ基因可与其他癌基因协同转化多种细胞。     

放疗前、中c-myc蛋白表达与宫颈癌细胞凋亡和增殖的关系

目的：探讨在放射治疗前、中宫颈癌细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达与细胞凋亡和增殖的关系。方法：对 ４８例宫颈癌患者分别于放疗前、放疗 ２０Ｇｙ／２周取活检,石蜡包埋。应用原位ＤＮＡ缺口未端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测细胞凋亡,应用免疫组化法对ｃ－ｍｙｃ蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测。结果。 ４８例宫颈癌患者放疗前、放疗 ２０Ｇｙ凋亡阳性率分别为６７％、８５％,有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。放疗前ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性表达率为 ７８％,ＰＣＮＡ阳性表达率为８６％,放疗２０Ｇｙ其表达率分别为４３％和５５％,放疗前、中比较均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与凋亡有明显相关性。放疗前及放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与ＰＣＮＡ表达有相关性。结论：ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与宫颈癌细胞增殖有关,亦与放射诱导宫颈癌细胞凋亡有关。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中c—myc蛋白表达与细胞凋亡的关系

利用原位脱氧核糖核酸末端转移酶标记技术和ＳＰ免疫组化方法检测了肝细胞癌和癌旁肝组织中细胞凋亡和ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果显示，癌组织中凋亡细胞密度明显氏于癌旁组织（Ｐ〈０．０１），ｃ－ｍｙｃ蛋白在癌组织和癌旁肝组织中的阳性率分别为４０％（１２／３０）和８６．７％（２６／３０），差异有显著性，其表达强度亦以癌旁肝组织为强（Ｐ〈０．０１）。结果提示，ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达既可诱导细胞凋亡又可促进细胞增殖     

脂质体介导c—myc反义核酸对HL—60细胞作用的研究

原癌基因ｃ－ｍｙｃ参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在白血病细胞株ＨＬ－６０ 中有很高的表达。ｃ－ｍｙｃ通过扩增活化或基因重排而异常激活,在白血病的发生和发展中可能起着重要的作用。　目的　通过脂质体介导ｃ－ｍｙｃ反义核酸转染ＨＬ－６０ 细胞,观察其抑制细胞生长增殖、促进分化、诱导凋亡,降低ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 和蛋白表达水平,探讨反义核酸的抗肿瘤作用机制。　方法　ＨＬ－６０ 细胞在３７℃、５％ＣＯ２ 条件下,培养于１０％ 小牛血清１６４０ 培养液中,细胞接种密度为４×１０７／Ｌ,反义核酸终浓度为１μｍ ｏｌ／Ｌ,反义核酸与脂质体比例为１ μｍ ｏｌ（６．５ μｇ）∶１０ μｇ,无血清转染６ ｈ。实验同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体无义组等对照组。连续培养４ 天。通过锥虫蓝拒染实验测定细胞的生长能力;ＮＢＴ还原实验和瑞特－姬姆萨染色测定细胞的分化能力;免疫细胞化学染色检测ｃ－ｍｙｃ蛋白表达;ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 水平;吖啶橙／溴化乙锭染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;ＤＮＡ抽提及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成。　结果　脂质体转染ｃ－ｍｙｃ反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０     

C—myc反义寡脱氧核苷酸抑制人乳腺癌细胞系生长的研究

采用胎盼蓝染色法，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验和流式细胞计数分析技术研究了ｃ－ｍｙｃ，ｍＲ－ＮＡ帽区反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系增殖及其ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响，结果表明：ｃ－ｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系生长和增殖，这种抑制作用有明显的剂量依赖性，同时也能抑帛ＭＣＦ－７细胞ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。     

C-myc反义寡脱氧核苷酸抑制人乳腺癌细胞系生长的研究

采用胎盼蓝染色法，３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验和流式细胞计数分析技术研究了ｃ－ｍｙｃｍＲ－ＮＡ帽区反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系增殖及其ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响，结果表明：ｃ－ｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系生长和增殖，这种抑制作用有明显的剂量依赖性，同时也能抑制ＭＣＦ－７细胞ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。此外，本文对ｃ－ｍｙｃ基因调控细胞增殖及反义核苷酸的可能机制进行了探讨。     

鬼臼叉甙诱导HL—60细胞分化时c—myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（１８ｍｅｒ，２１ｍｅｒ）对人白血病ＨＬ－６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达的抑制作用。用ＨＬ－６０活细胞计数，ＲＮＡ含量的ＲＴ－ＰＣＲ测定和ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的免疫组化染色检查，结果：两个反义核苷酸都以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，增殖抑制率为１１－７５％。反义核酸还抑制ｃ－ｍｙｃＲＮＡ和Ｍｙｃ蛋白的表达，而对ｃ－ｍｙｃ基因正常表达的红白血病细胞Ｋ５６２的增殖和ＰＨＡ刺激的人淋巴细胞的增殖     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

促癌剂对基因表达的影响

用狭缝印迹杂交方法在体内、外模型中观察促癌剂对基因表达的影响。结果表明，促癌剂ＴＰＡ可诱导小鼠成纤维细胞ＢＡＬＢ／３Ｔ３及大鼠肝脏中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ的表达，降低ＢＡＬＢ／３Ｔ３的ＲｂＲＮＡ水平及大鼠肝脏中α１－Ｉ３ＲＮＡ水平。苯巴比妥对大鼠肝脏的长期促癌作用表明，ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ表达有改变，α１－Ｉ３ｍＲＮＡ水平下降。苯巴比妥的短期作用对大鼠肝脏ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ的表达改变不明显，     

VP—16诱导PC—3细胞凋亡和bcl—2及kc—myc基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导ＰＣ－３细胞凋亡和癌基因ｂｌｃ－２及Ｃ－ｍｙｃ表达的关系。方法 用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡,以免疫组化方法研究ｂｃｌ－２及Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果 ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测表明,ＰＣ－３细胞的凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用时间延长而升高;免疫组化结果显示：ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的阳性百分率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用     

反义c-myc寡脱氧核苷酸对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

为研究硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃＯＤＮ、正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ进入体外培养的大鼠主动脉ＳＭＣ内，观察其对ＳＭＣ细胞ｃｍｙｃ表达、增殖、迁移和凋亡的影响。结果：①反义ＯＤＮ降低ｃｍｙｃ蛋白的表达。②反义ｃｍｙｃＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖、迁移，并诱导ＳＭＣ凋亡。而正义ＯＤＮ及错配ＯＤＮ则无上述作用。结果提示：应用反义技术抑制ｃｍｙｃ表达在防治经皮腔内冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）术后再狭窄中具有潜在作用。