芪丹通脉片预防大鼠急性心肌缺血及对VEGF, bFGF表达的影响

目的: 研究芪丹通脉片 (QDTMT)对大鼠急性心肌缺血预防作用及其可能作用机制. 方法: 采用SD大鼠为研究对象,随机分为假手术组、损伤组、QDTMT大剂量组、QDTMT小剂量组. 各组均用生理盐水配置等体积药液灌胃14 d,每日2次. 冠脉结扎方法制造心肌梗死动物模型,采用心肌酶谱、心梗面积来检测模型,免疫组织化学染色检测缺血心肌血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达. 结果: 与模型组相比,用药组大鼠血清肌酸激酶同工酶含量降低乳酸脱氢酶[LDH: (946±83) U*L-1, (754±75) U*L-1 vs (1582±90) U*L-1, (P<0.01); CPK: (1135±69) U*L-1, (960±39) U*L-1 vs (1513±47) U*L-1, (P<0.01)],心肌梗死面积缩小,VEGF,bFGF表达增加. 结论: QDTMT能够预防急性心肌缺血;刺激心肌分泌VEGF, bFGF可能是其重要的作用机制之一.     

VEGF基因在兔骨髓基质细胞中的表达及活性测定

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因修饰的兔骨髓基质细胞对VEGF基因的表达及表达产物的生物学活性.方法制备真核表达质粒pAdCMV-VEGF165,以Superfect转染试剂介导VEGF基因转染兔骨髓基质细胞,收获转染后24h至6d的转染上清和细胞,采用RT-PCR技术、免疫组化SABC法检测转染细胞中外源性VEGF165基因的转录及表达,用血管内皮细胞增殖试验测定转染细胞培养上清中VEGF的生物活性.结果VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效转录VEGF165,其分泌于培养上清中的表达产物可促进血管内皮细胞增殖,具有很强的生物活性.结论VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效表达具有生物活性的VEGF.     

黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达的影响

目的:观察黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响.方法:(1)小鼠骨髓基质细胞体外培养;(2)倒置相差显微镜动态观察、HE染色光镜及透射电镜观察小鼠骨髓基质细胞的形态;(3)MTT法检测黄芪注射液对骨髓基质细胞增殖的影响;(4)采用流式细胞术检测黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞表面VCAM-1和ICAM-1的表达.结果:(1)MTT法检测黄芪注射液浓度为400μg/mL和600μg/mL均可促进小鼠骨髓基质细胞增殖(P<0.05),且两种剂量组间比较无差异;(2)与对照组比较,黄芪注射液能够增加小鼠骨髓基质细胞表面VCAM-1和ICAM-1蛋白表达(p<0.05).结论:黄芪注射液能促进小鼠骨髓基质细胞的增殖及表面VCAM-1和ICAM-1蛋白的表达.提示黄芪注射液对造血微环境有改善作用.     

VEGF基因在兔骨髓基质细胞中的表达及活性测定

目的 探讨人血管内皮细胞生长因子(VECF)基因修饰的免骨髓基质细胞对VEGF基因的表达及表达产物的生物学活性。方法 制备真核表达质粒pAdCMV-VEGF165,以Superfect转染试剂介导VFGF基因转染兔骨髓基质细胞,收获转染后24h至6d的转染上清和细胞,采用RT-PCR技术、免疫组化SABC法检测转染细胞中外源性VECF165基因的转录及表达,用血管内皮细胞增殖试验测定转染细胞培养上清中VEGF的生物活性。结果 VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效转录VEGF165,其分泌于培养上清中的表达产物可促进血管内皮细胞增殖,具有很强的生物活性。结论 VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效表达具有生物活性的VEGF。     

体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响

目的　研究体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法　抽取兔骨髓基质细胞体外培养 ,倒置显微镜动态观察 ,从原代培养 (P0 )中观察到细胞集落的形态有明显差异 ,提示骨髓基质细胞是一个由多种细胞组成的混合体。在培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF ,5ng/ml)。 结果　第一代细胞(P1)的生长速度增至对照组的 1.5倍。而未经bFGF处理的细胞活跃增殖能力只能保持 4～ 5代 ,随后即发生退化 ;而经bFGF处理的细胞 ,传 10代以上仍能保持活跃的增殖能力。结论　bFGF能促进骨髓基质细胞增殖并长期保持其生物活性。     

VEGF基因在兔骨髓基质细胞中的表达及与活性测定

目的：探讨人血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因修饰的兔骨髓基质细胞对VEGF基因的表达及表达产物的生物学活性。方法：制备真核表达质粒pAdCMV-VEGF165,以Superfect转染试剂介导VEGF基因转染兔骨髓基质细胞，收获转染后24h至6d的转染上清和细胞，采用RT－PCR技术，免疫组化SABC法检测转染细胞中外源性VEGF165基因的转录及表达，用血管内皮细胞增殖试验测定转染细胞培养上清中VEGF的生物活性。结果：VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效转录VEGF165，其分泌于培养上清中的表达产物可促进血管内皮细胞增殖，具有很强的生物活性。结论：VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效表达具有生物活性的VEGF。     

腺相关病毒介导bFGF基因转染促进人骨髓基质细胞成骨实验研究

目的:观察腺相关病毒介导人碱性成纤维细胞因子(bFGF)基因转染对人骨髓基质细胞(hMSCs)成骨能力的影响。方法:从健康志愿者全骨髓中分离培养人骨髓基质细胞,体外扩增纯化后随机分为4组。①腺相关病毒介导人碱性成纤维细胞因子(AAV-bFGF)组:培养液中加入人碱性成纤维细胞因子基因重组腺相关病毒1×1010OPU/ml,孵育24h后换普通培养液继续培养;②β半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒(AAV-LacZ)组:用半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒替换bFGF,其余处理与AAV-bFGF组相同;③阳性对照组:培养液中添加地塞米松(1nmol/L)、抗坏血酸(10mmol/L)和β-甘油磷酸钠(50mg/L);④空白对照组:不给予特殊处理。各组细胞处理后2wk,免疫组化观察bFGF表达,Von Kossa染色检测人骨髓基质细胞中骨胶原结节形成,全自动生化分析仪检测培养上清碱性磷酸酶(ALP)活性。结果:经多次换液传代,人骨髓基质细胞呈均一梭形形态。处理后AAV-bFGF组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少。AAV-LacZ组和空白对照组形态无明显变化。免疫组化染色见bFGF主要在胞浆内表达,AAV-bFGF组bFGF表达明显强于其他3组。von Kossa染色AAV-bFGF组与阳性对照组可见大量红色骨胶原结节形成,显著多于AAV-LacZ组和空白对照组。培养上清液ALP活性检测AAV-bFGF组与阳性对照组显著高于AAV-LacZ组和空白对照组。结论:基因重组腺相关病毒人碱性成纤维细胞因子转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用。     

不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓基质细胞的影响

目的：观察骨髓基质细胞的培养及不同浓度碱性成纤维生长因子（bFGF）对其生长的影响。方法：采用全麻下抽取兔股骨骨髓，经体外培养的方法并在培养注保加入４种不同浓度的bFGF(0,60,120,240ng/ml)培养后经倒置显微镜观察；并用试剂盒测定细胞碱性磷酸酶的含量。结果：６０、１２０ng/ml的bFGF能明显促进骨髓基质细胞的生长（Ｐ＜0．01），其余两组无明显差异。而4组之间的细胞碱性磷酸酶含量在3天无明显差异，6天时加入bFGF组的细胞碱性磷酸酶含量明显下降。结论：bFGF对骨髓基质细胞的影响是复杂和多方面的；不同剂量浓度对骨髓基质细胞生长的影响亦不一样，并不呈正相关，合适的有效浓度为60－120ng/ml。     

bFGF对骨髓基质干细胞体外培养及诱导分化时生物学特性的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨髓基质干细胞体外培养及定向诱导分化时生物学特性的影响。方法 将兔骨髓基质细胞(BMSC)经淋巴细胞分离液分离培养、传代扩增后，进行定向诱导分化，其中1组的培养液及矿化诱导液中始终含有bFGF。以MTT法描绘细胞生长曲线。结果 MTT法测定结果表明，BMSC加外源bFGF组细胞增殖较BMSC组细胞生长活跃。结论 骨髓基质细胞是一种良好的骨源细胞，具有定向分化能力，bFGF对其定向诱导分化具有良好的促进作用。     

血管内皮生长因子与转化生长因子的协同作用诱导兔骨髓间充质干细胞分化

目的 研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的协同作用对兔骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响及其可能机制.方法 将细胞分为4组:对照组、腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)-VEGF组、AAV-TGF-β1组和VEGF+ TGF-β1组.穿刺法抽取兔骨髓液,分离培养原代BMSCs,分别构建AAV-VEGF和AAV-TGF-β1腺病毒载体转染BMSCs,Western blot检测各组细胞中VEGF、TGF-β1的蛋白表达.流式细胞术检测细胞凋亡情况,CCK8法检测细胞增殖能力,Western blot检测髓核细胞标志SOX-9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达,以及P38MAPK信号通路相关蛋白P38、MAPKAPK2和HSP27的表达.加入P38MAPK的特异阻滞剂SB203580预处理BMSCs,检测VEGF和TGF-β1对BMSCs增殖、凋亡、分化及相关蛋白表达的影响.结果 VEGF和TGF-β1可通过调节P38MAPK信号通路抑制BMSCs凋亡,促进BMSCs增殖,并向类髓核细胞分化,且在其协同作用下效果显著.抑制P38MAPK信号通路可反转VEGF和TGF-β1对BMSCs增殖分化能力的促进作用.结论 VEGF和TGF-β1的协同作用能增强BMSCs增殖和分化的能力,提高胶原蛋白和蛋白聚糖等细胞外基质的表达,从而促进退变椎间盘的修复和再生.     

成纤维细胞生长因子及血管内皮生长因子在喉粘膜上皮中的分布及作用

目的：探讨成纤维细胞生长因子超家族成员（ｂＦＧＦ和ＫＧＦ）及血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与喉粘膜上皮与间质相互作用的关系．方法：用免疫组化方法和原位杂交方法，分别观察ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ在喉部正常粘膜（Ｎ）和炎症（ＩＦ）中的分布．结果：ｂＦＧＦ和ＫＧＦ的转录仅在Ｎ及ＩＦ的间质中出现，阳性反应位于血管内皮细胞和成纤维细胞，此外巨噬细胞也见阳性反应，上皮细胞均未见阳性表达．而ＶＥＧＦ不仅在上皮细胞中表达，部分血管内皮细胞及慢性炎性细胞亦表达ＶＥＧＦ．在ＩＦ中，ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ的阳性率和反应程度较Ｎ均有所提高．结论：ｂＦＧＦ，ＫＧＦ和ＶＥＧＦ通过自分泌或（和）旁分泌途径促进上皮细胞生长及间质中的血管形成，在上皮与间充质细胞的交互作用中发挥着重要的作用．     

肝细胞生长因子在子宫内膜异位症的表达及其与血管内皮生长因子的关系

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在子宫内膜异位症(内异症)发生发展过程中的作用及HGF与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法应用免疫组织化学技术检测33例异位子宫内膜组织和10例正常子宫内膜组织中的HGF和VEGF的表达及微血管密度(MVD)。结果异位内膜HGF表达的平均光度值为0.264±0.026,正常内膜HGF表达为0.219±0.017,两者比较有显著性差异(P<0.05);异位内膜中HGF的表达与VEGF表达呈正相关(r=0.408,P<0.05)。结论HGF在异位内膜的血管生成中具有重要作用;HGF和VEGF在子宫内膜异位症的发生发展中发挥协同作用。     

表皮生长因子对TPN大鼠小肠隐窝表皮生长因子受体表达的影响

目的：研究给予外源性表皮生长因子（ＥＧＦ）对完全胃肠外营养（ＴＰＮ）大鼠小肠隐窝ＥＧＦ受体表达的影响以及与小肠粘膜细胞增殖的关系．方法：采用大鼠ＴＰＮ模型，小肠组织切片ＨＥ染色，测定隐窝细胞数及有丝分裂指数；采用免疫组织化学结合计算机图像分析的方法，测定隐窝细胞ＥＧＦ含量及ＥＧＦ受体的表达．实验共使用２００～２５０ｇ体重ＳＤ大鼠２４只，随机分组：对照组（ｎ＝８），仅行虚拟手术，即行右颈静脉结扎，每日饲以普通饲料及水；ＴＰＮ组（ｎ＝８），禁食水，输注常规ＴＰＮ；ＴＰＮ－ＥＧＦ组（ｎ＝８），输注常规ＴＰＮ溶液，并每日按０．１μｇ／（次·ｇ）皮下注射ＥＧＦ２次．各组均观察１４ｄ．结果：ＴＰＮ大鼠小肠隐窝ＥＧＦ含量及ＥＧＦ受体表达显著减少（Ｐ＜０．０１），隐窝细胞数和有丝分裂指数也明显降低（Ｐ＜０．０５）；当给予外源性ＥＧＦ后，隐窝ＥＧＦ含量、ＥＧＦ受体表达以及隐窝细胞数、有丝分裂指数均未降低．结论：ＥＧＦ能预防ＴＰＮ大鼠小肠隐窝ＥＧＦ受体表达及ＥＧＦ含量下降，维持细胞生成率．     

芦荟凝胶外涂对大鼠浅度烫伤创面愈合及其相关因子表达的影响

目的:研究芦荟对大鼠浅度烫伤创面愈合及表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法:建立大鼠浅度烫伤模型,制备芦荟凝胶。实验动物分两组:自然愈合组(对照组);芦荟凝胶组(试验组)。通过免疫组化染色及图像分析,测定伤后2、6、10、18、24d的创面愈合率及创面组织中EGF、bFGF的表达。结果:1创面愈合率:芦荟凝胶组在10、18、24d各时相点的创面愈合率较自然愈合组高,差异有显著性(P<0.05)。尤以24d时相点更明显(P<0.01)。2EGF的表达:芦荟凝胶组总体的EGF表达量高于自然愈合组,差异有显著性(P<0.05)。芦荟凝胶组伤后10、18d时EGF表达高于自然愈合组,差异有显著性意义(P<0.05)。3bFGF的表达:芦荟凝胶组总体的bFGF表达量高于自然愈合组,差异有显著性(P<0.05)。芦荟凝胶组伤后18、24d时bFGF表达高于自然愈合组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:芦荟凝胶外涂对大鼠浅度烫伤的愈合有促进作用,其机制可能与促进EGF、bFGF的表达有关。     

感觉神经肽P物质对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子与成纤维细胞生长因子-2及受体的调控作用

目的 从基因水平探讨感觉神经肽SP对肉芽组织成纤维细胞表达表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）及受体的调控作用。方法 由在体和离体实验两部分组成。在体实验采用Wistar大鼠50只,随机分为辣椒素组和对照组。辣椒素组大鼠皮下注射辣椒素50mg/kg毁损感觉神经,1周后行皮肤全层切割伤,采用免疫组化结合图像分析,观察伤后3-12d伤口肉芽组织内神经肽P物质（SP）含量。采用原位杂交方法观察EGF、表皮生长因子受体（EGFR）、FGF-2、成纤维细胞生长因子受体-1（FGFR-1）的基因表达,对照组除不化学毁损感觉神经外,余处理同辣椒素组。离体实验采用RT-CPR技术观察不同浓度（10^-9～10^-5mol/L)SP作用于培养肉芽组织成纤维细胞后,上述生长因子及受体的表达。结果 在体实验示,肉芽组织SP免疫阳性染色与EGF、FGF-2及其受体表达有关,化学毁损感觉神经,肉芽组织SP免疫阳性染色减弱,上述因子及受体的表达也明显抑制。离体实验发现,上调培养肉芽组织成纤维细胞内源性EGF和EGFR mRNA表达的SP浓度为10^-8～10^-6mol/L和10^-6～10^-5mol/L,上调FGF-2和FGFR-1 mRNA表达的SP浓度分别为10^-9～10^-5mol/L和10^-6～10^-5mol/L。结论 伤口愈合中,感觉神经释放的SP参与肉芽组织成纤维细胞表达EGF、FGF-2及受体mRNA的调控。     

体外贮存对人富血小板血浆生物学活性的影响

目的:探索各种贮存条件对人富血小板血浆(human platelet-rich plasma,hPRP)生物学活性的影响,研究hPRP释放生长因子的浓度作为评价hPRP生物学活性指标的可行性,为最终确定一整套应用hPRP的标准化方法奠定基础.方法:制备健康志愿者的hPRP,记录血小板计数.将每份hPRP释放生长因子分为3组,分别贮存在4 ℃,-20 ℃和-70 ℃,在制备后0,2,4,6,8,10 d测定3组标本中转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和血小板衍生生长因子AB(platelet-derived growth factor AB,PDGF-AB)的浓度.同时,应用不同温度(4 ℃,-20 ℃,-70 ℃)贮存10 d的hPRP释放生长因子培养人脂肪基质细胞,以MTT法比较各组标本促进细胞增殖的生物学活性.结果:在体外贮存过程中,hPRP释放生长因子TGF-β1和PDGF-AB的浓度下降很快.低温是保存hPRP释放生长因子相对适宜的环境.当贮存10 d后,在-20 ℃和-70 ℃贮存的标本其TGF-β1的浓度分别为(238.55±36.00)μg/L和(261.12±55.10)μg/L,PDGF-AB的浓度分别为(46.03±17.67)μg/L和(50.78±18.70)μg/L,显著高于贮存在4 ℃时两种生长因子的浓度[(113.03±16.29)μg/L和(23.27±8.22)μg/L(P＜0.01)].MTT实验结果显示,不同温度贮存hPRP,其生物学活性也有显著差异,且与生长因子浓度差异基本一致.结论:hPRP释放生长因子只能在低温环境中短时间贮存,生长因子定量分析是评价hPRP生物学活性较为可靠的指标.     

碱性成纤维细胞生长因子治疗褥疮疗效观察

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)应用于褥疮的治疗效果。方法 120例褥疮患者,分为对照组和观察组,对照组患者采用清洁创面、无菌敷料无压力包扎,早期选用足量有效抗生素,同时给予改善微循环、营养及护理支持等常规治疗;观察组患者除常规治疗外联合应用bFGF局部喷涂,治疗1个月后,观察2组患者疗效。结果观察组总有效率(93.5%)高于对照组(50.0%)(P<0.05);治疗过程中未出现不良反应。观察组患者褥疮治愈时间短于对照组,差别有统计学意义(P<0.01)。结论 bFGF应用能明显提高褥疮患者的痊愈率和缩短治愈时间。     

糖尿病视网膜病变患者血中VEGF及IGF-1的定量测定与分析

目的 检测糖尿病视网膜病变（DR）患者外周血中的VEGF和IGF-1水平,并探讨其临床意义。方法 选取30例健康者作为对照组,2型糖尿病患者120例为试验组;试验组再分为无糖尿病视网膜病变（NDR）组30例,单纯型糖尿病视网膜病变（BDR）组33例,单纯型糖尿病视网膜病变合并黄斑水肿（macular edema ME）组22例,增生型糖尿病视网膜病变（PDR）组35例。用ELISA法检测血浆VEGF和IGF-1水平。结果2型糖尿病患者外周血中VEGF及IGF-1水平明显高于正常者,差异有统计学意义（P〈0.01）。而在2型糖尿病患者中,单纯型DR组血清VEGF及IGF-1水平明显高于无DR组,差异有统计学意义（P〈0.05）;单纯型并黄斑水肿组及增生型组血清VEGF水平明显高于单纯型DR组,差异有统计学意义（P〈0.01）,而血清IGF-1水平明显高于单纯型DR组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而单纯型并黄斑水肿组和增生型组血清VEGF及IGF-1水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 2型糖尿病患者血清中VEGF及IGF-1水平随着DR的发生、黄斑水肿以及DR的加重而逐渐升高,对其进行监测有利于糖尿病视网膜病变的早期诊断和治疗。     

老年高血压病患者脉压指数与胰岛素样生长因子-1相关性研究

目的探讨老年高血压病患者脉压指数(PPI)与胰岛素样生长因子1(IGF-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的关系。方法老年高血压病患者160例。同步检测血中IGF-1、TGF-β1;用超声心动图仪测定并计算左室重量指数(LVMI),计算出PPI并按照PPI高低分成正常PPI组和高PPI组。比较两组间IGF-1、TGF-β1的差异并用直线相关和多元线性回归分析PPI与其他指标的相关性。结果高PPI组血中IGF-1水平较正常PPI组高(P<0.05);PPI与血中IGF-1水平正相关(P<0.05),但非独立相关。结论老年高血压病患者PPI与血中IGF-1水平的关系受多种因素影响。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-3在子宫肌瘤组织中的表达及意义

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）与子宫肌瘤生长的关系。方法采用免疫组化法检测60例患者子宫肌层和子宫肌瘤组织IGFBP-3的表达强度。结果IGFBP-3在子宫肌瘤组织中的表达较在正常肌层中的表达减弱,在多发肌瘤的肌层中的表达较单发肌瘤者减弱。结论IGFBP-3与子宫肌瘤的发生呈负相关,测定IGFBP-3在肌瘤组织中的含量对预测肌瘤的发生、发展有重要的意义。