离体肺组织切片的制备和孵育

目的建立一种简便有效的离体肺组织切片孵育方法.方法利用肺组织精细切片技术制备肺组织切片,以0.5 mL Krebs-Henseleit(K-H)缓冲液作为孵育液,在37 ℃培养箱内分别孵育1、2、3、4 h,测定肺片的四甲基偶氮唑盐(MTT)比色、乳酸脱氢酶(LDH)释放率和三磷酸腺苷(ATP)含量,以反映肺组织活性.结果肺片在37 ℃培养箱内孵育1、2、3、4 h后MTT比色、LDH释放率和ATP含量均无统计学差异(P>0.05).结论应用0.5 mL Krebs-Henseleit(K-H)缓冲液作为孵育液、在37 ℃培养箱对肺片进行孵育时组织活性没有明显变化,可作为一种简便有效的孵育方法用于离体肺片研究.     

过氧化氢对大鼠离体肺组织精细切片活性的影响

目的研究过氧化氢(H2O2)对离体肺组织精细切片活性的影响,建立肺组织氧化损伤的简易模型.方法制备离体肺组织精细切片,以0.5 mL Krebs-Henseleit缓冲液作为孵育液,在37℃培养箱内进行孵育.在孵育液中加人H2O2,使其浓度为2 mmol/L,分别孵育0(对照组)、5、10、15和20 min;然后在不含H2O2的孵育液中进行恢复孵育1 h.测定肺片的四甲基偶氮唑盐(MTT)染色、孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)和肺片组织ATP含量.结果随H2O2损伤时间延长,MTT染色变浅,其吸光度逐渐减小,损伤时间大于10 min组与对照组比较有显著差异(P＜0.01).H2 O2损伤10 min组肺片的LDH释放多于对照组(P＜0.05),损伤时间更长者增加更明显(P＜0.01).H2O2损伤5 min组的肺片组织中ATP含量明显低于对照组(P＜0.05),损伤时间更长者下降更明显(P＜0.01).经偏相关分析发现,肺片MTT染色与LDH释放呈负相关(r=-0.866,P＜0.01),与ATP含量呈正相关(r=0.869,P＜0.01).结论离体肺组织切片在含H2O2的孵育液中进行孵育时,随孵育时间延长其活性降低.此模型简单可靠,可用于肺组织氧化损伤的研究.     

过氧化氢对大鼠离体肺组织精细切片活性的影响

目的研究过氧化氢(H2O2)对离体肺组织精细切片活性的影响,建立肺组织氧化损伤的简易模型。方法制备离体肺组织精细切片,以0.5mLKrebsHenseleit缓冲液作为孵育液,在37℃培养箱内进行孵育。在孵育液中加入H2O2,使其浓度为2mmol/L,分别孵育0(对照组)、5、10、15和20min;然后在不含H2O2的孵育液中进行恢复孵育1h。测定肺片的四甲基偶氮唑盐(MTT)染色、孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)和肺片组织ATP含量。结果随H2O2损伤时间延长,MTT染色变浅,其吸光度逐渐减小,损伤时间大于10min组与对照组比较有显著差异(P<0.01)。H2O2损伤10min组肺片的LDH释放多于对照组(P<0.05),损伤时间更长者增加更明显(P<0.01)。H2O2损伤5min组的肺片组织中ATP含量明显低于对照组(P<0.05),损伤时间更长者下降更明显(P<0.01)。经偏相关分析发现,肺片MTT染色与LDH释放呈负相关(r=-0.866,P<0.01),与ATP含量呈正相关(r=0.869,P<0.01)。结论离体肺组织切片在含H2O2的孵育液中进行孵育时,随孵育时间延长其活性降低。此模型简单可靠,可用于肺组织氧化损伤的研究。     

显示淋巴管的肺组织切片制备方法

肺器官与外界相通,暴露于许多外界因素下,因此,作为机体防御机能一部分的肺淋巴管系统似乎比其它任何器官的淋巴管系统更具意义。另一方面,肺淋巴管系统与许多肺部疾病的发生发展密切相关已是众所周知的事实,如肺水肿、传染性肺疾病、肺癌及转移性肺肿瘤等。可见虽然淋巴管系统参与防御机制,但也参与疾病的形成,其分布和结构与疾病的产生和预后密切相关。     

离体灌流心动物模型的制备和应用

改良并简化灌注装置，制备大鼠离体灌流心脏动物模型。并分别应用于低钾，无钾状态时心肌收缩功能的研究和比较直链脂肪酸碘苯脂十五烷酸（IPPA）与侧链脂肪酸β-甲基碘苯脂十五烷酸（BMIPP）在心肌内的代谢状况，结果显示，在低钾，无钾状态下，心肌收缩力下降，心律紊乱，甚至表现为室颤和停博，直链脂肪酸IPPA在心肌内迅速代谢，侧链脂肪酸BMIPP由于β位上甲基的存在而不能参与β氧化，能较长时间停留于心肌细胞内。表明该动物模型能应用于心肌能量代谢和心肌营养物质对心脏活动影响的研究。     

离体心脏灌注装置的制备

１８９５年ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ制备了离体心脏灌注实验系统，并成功地进行了第１例离体心脏灌注试验。１９６７年Ｎｅｅｌｙ和他的助手们在此基础上获得了很大进展，他们发展了离体左心灌注工作模型。该模型可以通过模拟动物正常生理条件变化以及局部缺血、缺氧、药物和...     

离体肺冷冻后顺应性的变化

目的:观察家兔离体肺冷冻后顺应性的变化.方法:将32只家兔肺随机均分为对照组、冷冻(0℃)24h组、120h组和240h组.对照组:测定室温条件下的肺顺应性.冷冻组:在相应时间取出冷冻肺,室温条件下复温后,置入生理盐水中,测定注气(或注入生理盐水)和抽气(或抽生理盐水)过程中,肺容积在10ml、20ml、30ml时的顺应性变化.结果:同对照组比较,冷冻24h组向肺内注气10ml,注或抽生理盐水20ml、30ml;冷冻120h组向肺内注气10ml、20ml、30ml,抽气30ml,注生理盐水30ml,抽生理盐水20ml、30ml;冷冻240h组向肺内注生理盐水10ml、20ml、30ml,抽生理盐水20ml、30ml时,差异具有显著性(P＜0.05).其余各组、项与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:冷冻不会使肺顺应性发生明显变化,肺顺应性降低与冷冻的时间无明显关系.     

简易大鼠组织芯片在石蜡切片制备中的应用

目的:探索制作大鼠各主要脏器的组织芯片的简易方法。方法:对SD大鼠多脏器不同组织分类处理,分批脱水,整体包埋,整体切片制作HE染色。结果:镜下观察各种组织结构完整,细胞核呈蓝黑色,细胞质呈桃红色,染色鲜艳,对比鲜明。结论:该法制备组织芯片具有高通量、高效率、低误差、低消耗等优点。     

环磷酰胺对兔离体肺保护的作用

目的 应用兔离体肺再灌注模型研究环磷酰胺对兔离体肺保护的作用。方法 20只实验兔随机平均分为两组,对照组术前腹腔注射生理盐水10 ml,实验组术前腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg（溶解在10 ml生理盐水中）。48 h后进行实验,由实验兔右室流出道尽量抽取兔血,造成肺组织热缺血。1 h后以低钾右旋糖苷肺保护液（LPD）进行肺灌洗及保存,保存4 h后用开始时抽取的兔血进行再灌注。再灌注10 min、30 min、60 min分别测定肺血管阻力（PVR）、肺通气阻力（LR）、以及肺静脉血氧分压（PvO2）,再灌注结束后取肺组织进行肺含水量（LW）测定以了解肺保护效果。结果 实验组再灌注后PVR明显低于对照组（P〈0.05）,PO2明显高于对照组（P〈0.05）。LR、LW两组无明显差别。结论 环磷酰胺对兔离体肺保存具有一定保护作用,其可能的机制是通过免疫抑制以及细胞毒作用减轻了炎性反应。     

吗啡孵育诱导大鼠脑片P糖蛋白表达增加

[摘要] 目的 观察吗啡孵育诱导新皮质和海马脑片后p糖蛋白(pgp)表达的变化。 方法 将大鼠脑新皮质和海马部分切成400 μm脑片,并随机分配到正常孵育组、吗啡孵育3 h组和吗啡孵育6 h组。新皮质和海马吗啡孵育3 h组在吗啡孵育6 h组之后于孵育液中加入吗啡。所有脑片人工脑脊液（含或不含10μmol∕L吗啡）内孵育6 h后,采用Western blot检测pgp表达量。 结果 正常孵育大鼠新皮质脑片pgp表达量显著高于海马脑片（p<0.05）,新皮质脑片pgp表达量是海马脑片的（2.51±0.42）倍。大鼠新皮质脑片采用吗啡孵育3,6 h后pgp表达显著升高;海马脑片吗啡孵育3 h 后pgp表达有所升高,但差异无显著性（p>0.05）,新皮质和海马脑片吗啡孵育6 h后pgp表达明显增加（p<0.05）。 结论 吗啡孵育大鼠离体新皮质和海马脑片可时间依赖性地诱导pgp表达增加,而且此增加呈现一定的脑区差异性;脑片可以作为研究调控pgp表达防治吗啡耐受的理想工具。 [关键词] 吗啡耐受 脑片 P糖蛋白 新皮质 海马     

Fast evaluation of oxidative DNA damage by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry coupled with precision-cut rat liver slices

Objective To establish a fast and sensitive method for the detection of 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine (8-OHdG) in precision-cut rat liver slices by HPLC-MS/MS and to investigate isoniazid (INH) -induced oxidative DNA damage. Methods Precision-cut liver slices (300 μm) were prepared from male rats, and incubated with INH (0.018 mol/L) for 2 h after 1 h preincubation. DNA in the slices was extracted and digested into free nucleosides at 37℃ . The samples were injected into HPLC-MS/MS after the proteins were removed. The level of oxidative DNA damage was estimated using the ratio of 8-OHdG to deoxyguanosine (dG). Results The limit of detection of 8-OHdG was 1 ng/mL (S/N=3) and the intra-assay relative standard variation was 3.38% when one transition 284.3/168.4 was used as a quantifier and another two transitions 284.3/140.2, 306.1/190.2 as qualifiers. 8-OHdG and dG were well separated, as indicated by elution at 10.02 and 7.37 min, respectively. INH significantly increased the ratio of 8-OHdG to dG in rat liver slices (P<0.05). Conclusion 8-OHdG in precision-cut liver slices could be sensitively determined by HPLC-MS/MS. HPLC-MS/MS coupled with precision-cut tissue slices is a fast and reliable analytical technique to evaluate oxidative DNA damage of target tissues caused by procarcinogens and cytotoxins.     

肺靶向阿霉素微球的制备及其特性研究

目的制备肺靶向阿霉素明胶微球(ADM-GMS)并考察其特性。方法采用天然可生物降解的明胶为载体材料,液体石蜡为油相,乳化化学交联法制备阿霉素明胶微球。结果微球形态圆整,平均粒径10.8μm,5-15μm的微球占总数的85.5%,载药量为4.05%,包封率为42.3%,体外释药具有缓释特征,(25±2)℃、RH=60%条件下放置6个月,其稳定性良好。结论微球的粒径、形态、堆密度、流动性、载药量和包封率、体外释药性能及稳定性等基本符合肺部靶向的要求。     

谷氨酸对大鼠小脑薄片顶核神经元放电的影响

目的:探讨谷氨酸在小脑顶核神经元中的调节作用。方法:应用大鼠小脑薄片,细胞外记录神经元单位放电,观察谷氨酸对顶核神经元单位放电的影响。结果:谷氨酸对小脑顶核神经元放电有兴奋作用,且这种兴奋作用不被低Ca2+/高Mg2+的人工脑脊液所阻断。结论:谷氨酸对小脑顶核神经元的兴奋作用可能是通过激活顶核神经元谷氨酸受体实现的。     

谷氨酸对大鼠小脑脑片间位核神经元放电的影响

目的：应用细胞外记录单位放电技术，在离体大鼠小脑脑片上观察谷氨酸对间位核神经元单位放电的影响。方法：制备大鼠小脑脑片，细胞外记录小脑间位核神经元单位放电，并观察谷氨酸对大鼠小脑间位核神经元单位放电的影响。结果：谷氨酸对小脑间位核神经元放电有兴奋作用，且这种兴奋作用不能被低Ca^2＋／高Mg^2＋的人工脑脊液所阻断。结论：谷氨酸对小脑间位核神经元单位放电的兴奋作用可能是通过直接激活间位核神经元表面的谷氨酸受体实现的。     

不同产地鳖甲生片与醋鳖甲饮片紫外光谱鉴别

目的探讨不同产地鳖甲生片与醋鳖甲饮片的紫外光谱鉴别特征。方法对不同产地鳖甲生片与醋鳖甲饮片进行紫外光谱鉴别。结果不同产地鳖甲生片均在波长(202±2)nm与(227±2)nm处有2个最大吸收峰,但不同产地鳖甲在同样条件下测定的吸收度(A)值大小差别较大。而鳖甲生片与醋鳖甲饮片的紫外光谱特征明显不同,鳖甲经砂烫醋淬后在(227±2)nm处吸收峰消失,仅在(202±2)nm处有吸收,且吸收度值增加一倍多。结论可将紫外光谱鉴别法作为本品的质量控制指标之一。     

轮状病毒分离与培养方法的建立

①目的探讨建立轮状病毒的分离与培养方法。②方法粪便标本经ELISA检测，离心后接种于MA104细胞株，观察病毒致细胞病变效应。提取病毒RNA．琼脂糖电泳检测。③结果经离心、双抗处理后，轮状病毒可在MA104细胞中克隆增殖．并引起细胞病变（CPE）。④结论MA104作为容纳细胞，可用于轮状病毒的大量扩增。     

去甲肾上腺素对大鼠下丘脑脑片背内侧核神经元放电活动的影响

制备含背内侧核(DMN)的大鼠下丘脑脑片,用玻璃微电极引导DMN神经元的单位放电。灌流含去甲肾上腺素(NE,2×10~(-5)mol/L)的人工脑脊液(ACSF),160个单位中,有77个单位放电减少,48个单位放电增加,其余无明显反应。放电减少和增加的反应均随NE的浓度增加而增强,并且都能被α_2受体阻断剂育亨宾所拮抗。结果表明NE对下丘脑背内侧核神经元单位放电的作用有抑制、增强和无明显影响3种效应。