涎腺腺样囊性癌转移细胞株的Notch基因表达

目的 筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因,并对其进行初步验证. 方法 限制片段差异显示PCR技术(RFDD-PCR)构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)基因表达谱.生物信息学分析两个表达谱的Notch基因,半定量RT-PCR技术对两细胞株的Notch基因差异表达进行验证. 结果 用RFDD-PCR方法成功构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)的表达谱,共获得5 420个基因片段,其中包含3个Notch基因.半定量RT-PCR证实Notch2、Notch4在ACC-M的表达高于ACC-2,Notchl在两表达谱未见表达,半定量RT-PCR发现其在ACC-M的表达高于ACC-2.Notch3在两个细胞株表达的差别无统计学意义.结论 Notch1、Notch2、Notch4可能与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关.     

FZD2基因与涎腺腺样囊性癌增殖及侵袭转移能力的关系

目的 探讨FZD2基因表达与涎腺腺样囊性癌转移的相互关系及其对癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用免疫组织化学方法分析FZD2基因在转移和非转移的涎腺腺样囊性癌组织样本中的表达,并采用siRNA干扰技术下调FZD2基因的表达,观察FZD2基因表达对涎腺腺样囊性癌细胞增殖能力、侵袭能力的影响.结果 FZD2基因在涎腺腺...     

钙黏素家族相关基因与涎腺腺样囊性癌转移的关系

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的钙黏素（CDH）家族基因。方法对涎腺腺样囊性癌转移能力不同的两个细胞株的基因表达谱进行生物信息学分析,筛选出可能与转移相关的CDH家族基因,通过荧光实时定量PCR技术对相关基因的表达差异进行验证,并用免疫组织化学技术研究有差异的CDH基因在临床样本中的表达及其与转移的关系。结果生物信息学分析发现,表达谱中有14个CDH家族基因在两个细胞株中的表达有差异,实时定量PCR验证发现CDH4、CDH5、CDH12在两细胞株之间的表达差别有统计学意义（P〈0.05）,免疫组织化学发现CDH12在有转移的临床标本中的表达高于没有转移的标本（（P〈0.05）。结论 CDH12可能与涎腺腺样囊性癌的高转移能力有关。     

FZD3基因在涎腺腺样囊性癌转移与复发中的作用

目的探讨FZD3基因的表达在涎腺腺样囊性癌(SACC)转移中的作用及其对SACC增殖能力的影响。方法采用免疫组织化学染色技术分析FZD3基因编码的卷曲蛋白在19例有转移或复发和21例无转移的SACC临床样本中的表达,探讨FZD3基因的表达与SACC转移和复发的关系,并采用siRNA干扰技术,使SACC-M细胞株中FZD3基因表达沉默,观察FZD3基因对SACC-M细胞增殖能力的影响。结果 FZD3在SACC临床非转移病例中的表达高于转移病例(P<0.05);FZD3基因表达沉默后,SACC-M细胞增殖能力提高。结论 FZD3基因可能对SACC发生与发展起抑制作用。     

涎腺腺样囊性癌中Id-1表达的实验研究

目的检测涎腺腺样囊性癌、多形性腺瘤和正常涎腺组织中Id-1的表达,分析Id-1的表达与涎腺腺样囊性癌临床病理之间的关系。方法免疫组化Envison两步法检测54例涎腺腺样囊性癌、12例多形性腺瘤和10例正常涎腺组织Id-1表达。结果Id-1在涎腺腺样囊性癌、多形性腺瘤和正常涎腺组织阳性率分别为72．2％、33．3％、10．00％,涎腺腺样囊性癌与多形性腺瘤以及涎腺腺样囊性癌与正常涎腺比较差异均具有统计学意义（P‘0．05）：转移组和无转移组阳性率分别为81．6％和50．0％,差异具有统计学意义（P〈0．05）;Ⅰ-Ⅱ和Ⅲ-Ⅳ阳性率分别为46．2％和80．5％,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论涎腺腺样囊性癌中Id-1过表达;Id-1与涎腺腺样囊性癌发生和转移有一定关系;Id-1可能作为有效靶点对涎腺腺样囊性癌的治疗提供帮助。     

涎腺腺样囊性癌组织中内皮细胞特异性分子-1与E钙黏着蛋白的表达

目的探讨内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）和E-钙黏着蛋白（E-cad）在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测52例涎腺腺样囊性癌及11例癌旁“正常”涎腺组织中ESM-1和E-cad的表达。结果涎腺腺样囊性癌的ESM-1高表达率显著高于癌旁“正常”涎腺组织（P〈0.01），与患者性别、肿瘤组织学类型、有无淋巴结转移及侵犯神经无相关性（P〉0．05）。E-cad在涎腺腺样囊性癌中呈低表达，E-cad低表达与涎腺腺样囊性癌组织类型、有无淋巴结转移、侵犯神经显著相关（P〈0．05）。癌组织中ESM-1和E-cad表达间无相关性。结论ESM-1和E-cad均与涎腺腺样囊性癌的发生有相关性。E-cad的表达可作为临床判断涎腺腺样囊性癌恶性程度、评估预后的潜在指标。     

应用抑制性消减杂交技术分析涎腺腺样囊性癌转移相关基因

目的：克隆涎腺腺样囊性癌转移相关的基因。方法：应用mRNA抑制性消减杂交技术，研究涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达上的差异。结果：以高转移细胞ACC-M为测试子，低转移细胞ACC-2为驱赶子，获得高表达的基因序列有7个，均为已知序列同源基因。其中XAGE-1b基因为肿瘤睾丸抗原家族中的一个重要基因。结论：与ACC-2相比ACC-M中部分基因的高表达与涎腺腺样囊性癌高转移特性的获得有关，此结果为进一步探索腺样囊性癌肿瘤转移分子机理以及肿瘤转移控制和基因治疗提供了重要的依据。     

nm23在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的研究肿瘤转移抑制基因nm23在涎腺腺样囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoa,SACC）中的表达,并探讨与SACC的临床特点及转移的关系。方法采用免疫组化通用型二步法检测30例SACC中nm23的表达,分析nm23基因表达变化与涎腺腺样囊性癌的病理特点及其转移的关系。结果12例nm23基因阴性表达病例中11例发生转移,肿瘤转移率91.7%,而18例nm23基因阳性表达病例中5例发生转移,阳性表达者肿瘤转移率仅为38.4%,两者比较有显著性差异（P〈0.05）。经检验等出nm23基因阴性表达者与腺样囊性癌转移有显著相关性,即nm23基因阴性表达者易发生转移,而阳性表达时不易发生转移。并发现nm23基因与患者的年龄、性别、病理类型及肿瘤大小等无关。结论nm23在口腔腺样囊性癌转移中起重要的作用。     

蛋白激酶CK2-α′在腺样囊性癌细胞中的表达

目的 通过检测蛋白激酶CK2-α′在涎腺腺样囊性癌中的表达分布特征,探讨蛋白激酶CK2-α′与涎腺腺样囊性癌的关系及临床病理意义.方法 应用免疫荧光技术对蛋白激酶CK2-α′在同一来源不同转移能力涎腺腺样囊性癌细胞(SACC-83)及涎腺腺样囊性癌肺转移细胞(SACC-LM)的表达进行分析.结果 蛋白激酶CK2-α′在涎腺腺样囊性癌细胞及涎腺腺样囊性癌肺转移细胞中都存在高表达,并且细胞核中的表达都高于在细胞质中的表达.结论 蛋白激酶CK2-α′的表达与涎腺腺样囊性癌的肺转移呈正相关.     

上皮钙黏蛋白、P53和Bcl-2在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及与肺转移、神经浸润的相关性

目的探讨上皮钙黏蛋白（E-cad）、P53和Bcl-2在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及与肿瘤浸润、转移和预后的关系。方法39例确诊的涎腺腺佯囊性癌患者病理标本,按有无神经侵犯分为神经侵犯组（16例）与无神经侵犯组（23例）,按有无肺转移分为有肺转移组（11例）与无肺转移组（28例）,用SP免疫组织化学法检测E-cad、P53和Bcl-2的表达并进行比较。结果涎腺腺样囊性癌神经侵犯组E-cad阳性表达率低于无神经侵犯组（P〈0．05）;神经侵犯组P53阳性表达率高于无神经侵犯组（P〈0,05）;神经侵犯组Bcl-2阳性表达率高于无神经侵犯组（P〈0．05）;肺转移组E-cad阳性表达率低于无肺转移组（P〈0,05）;肺转移组P53阳性表达率高于无肺转移组（P〈0．05）;肺转移组Bcl-2阳性表达率高于无肺转移组（P〈0．05）。结论E-cad、P53和Bcl-2表达与涎腺腺样囊性癌局部侵润、远隔脏器（肺）转移相关,可作为判断预后、指导临床综合治疗的指标。     

熊果酸人腺样囊性癌对ACC-83侵袭与转移的影响

目的探讨熊果酸对人腺样囊性癌ACC-83细胞体外侵袭及转移的影响。方法应用不同浓度熊果酸处理人腺样囊性癌ACC-83细胞,通过Transwell小室模型测定其侵袭力及粘附力,细胞迁移实验测定细胞的运动能力,光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果熊果酸能有效抑制人腺样囊性癌ACC-83细胞侵袭力、粘附力及运动能力（P〈0.05）,呈剂量效应关系（P〈0.05）。同时发现熊果酸处理组悬浮细胞增多,细胞体积变小,形态较圆,伪足数目较少。结论熊果酸具有抑制人腺样囊性癌ACC-83细胞侵袭与转移的作用。     

Effect of Exogenous bFGF on the Proliferation of Human Adenoid Cystic Carcinoma ACC-2 Cells

To observe the effects of basic fibroblast growth factor （bFGF） on human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cell line proliferation and ERK, cyclin D1/p21^waf/cip1 signaling pathways, human adenoid cystic carcinoma cells （ACC-2） were cultured and the influence of bFGF of different concentrations on cell proliferation was determined by MTT. Protein was detected by immuno-precipitation and ERK activity by using ERK agent kit. p-ERK1/2 and down-stream cyclin D1, p21^waf/cip1 expression were detected by Western blotting and the interfering role of mitogen protein-activated kinase （MEK） suppressor U0126 in the afore-mentioned indicators was examined. MTT demonstrated ACC-2 cell proliferation was substantially enhanced by bFGF, immuo-precipitation displayed ERK activity was up-regulated by bFGF, and immuno-imprinting also showed p-ERK1/2, cyclin D1 expression was greatly enhanced and p21^waf/cip1 expression was inhibited by bFGE U0126 suppressed the effect of bFGF. It is concluded that bFGF can promote the proliferation of human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cells, and its pathways are associated with the up-regulated activity and expression of p-ERK1/2, inhibited p21waf/cip1 expression and enhanced cyclin D1 expression.     

人涎腺腺样囊性癌细胞系中RUNX3基因5'-CpG岛甲基化及蛋白表达

目的 探讨人涎腺腺样囊性癌细胞株中RUNX3基因启动子5'-CpG岛甲基化及其表达情况.方法 以定量甲基化特异性PCR(qMSP)检测ACC-2、ACC-3和ACC-M细胞在甲基转移酶抑制剂5-氮脱氧胞苷(5-Aza-dc)处理前后RUNX3基因5'-CpG岛甲基化状况,并分别用反转录-聚合酶链反应、免疫荧光化学和Western印迹法分析RUNX3的表达变化.结果 RUNX3在ACC-2和ACC-3细胞中弱表达,在ACC-M中表达缺失.经5-Aza-dc处理后,RUNX3在ACC-2和ACC-3细胞中表达增加,在ACC-M中恢复表达.激光共聚焦发现RUNX3蛋白主要定位在细胞质中,经300 nmol/L5-Aza-dc处理72 h后,在ACC-2和ACC-3细胞核中出现表达,而在ACC-M细胞中仍定位在细胞质中.RUNX3基因启动子区域5'-CpG岛在ACC-2、ACC-M和ACC-3中均为部分甲基化,其甲基化程度分别为50%、75%和33%.5-Aza-dc处理后,RUNX3基因在三株细胞株中均呈现为非甲基化状态.结论 RUNX3甲基化是ACCs中RUNX3表达缺失的主要原因之一,而RUNX3蛋白在ACCs细胞质中的异位表达,也可能与RUNX3蛋白的功能被抑制有关.     

腺病毒介导的P~(53)基因对涎腺腺样囊性癌细胞系生长的影响

目的研究P53基因对涎腺腺样囊性癌细胞系生长的影响。方法以人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83、SACC-LM、ACC-2、ACC-M和NACC为实验对象,将载有人野生型P53cDNA的重组腺病毒(Ad5CMV-P53)感染涎腺腺样囊性癌细胞系,观察Ad5CMV-P53对涎腺腺样囊性癌细胞生长的影响。结果5种涎腺腺样囊性癌细胞系转染Ad5CMV-P53病毒后,均可以诱导其发生凋亡,使细胞系生长受到明显的抑制。结论Ad5CMV-P53介导的野生型P53基因,可能是一种有效的治疗涎腺腺样囊性癌的辅助手段。     

埃克替尼通过p38-MAPK信号通路对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的凋亡诱导作用

目的：探讨埃克替尼对人涎腺腺样囊性癌细胞ACC-M凋亡的影响,阐明埃克替尼对涎腺腺样囊性癌的治疗作用机制。方法：ACC-M细胞随机分为对照组,2、4、8 μmo1/L^-1埃克替尼组,促分裂原活化蛋白激酶（APK）抑制剂SB203580(20 μmol/L^-1)组,SB203580(20 μmol/L^-1 )+埃克替尼(4 μmol/L^-1 )组。4 h后收
集细胞,采用MTT法检测各组ACC-M细胞的生长抑制率,用caspase-3活力检测试剂盒检测ACC-M细胞的凋亡情况（ 即caspase-3活力）,采用
Westernblotting法检测p-p38-MAPK蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,埃克替尼组ACC-M细胞生长抑制率明显升高(P<0.05),caspase-3活力显著增强（P<0.05）,
p-p38-MAPK蛋白表达水平增加（P<0.05）。与4 μmol/L^-1 埃克替尼组比较,SB203580+埃克替尼组p-p38-MAPK蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,caspase-3活力显著降低（P<0.05）。结论：埃克替尼可通过上调p-p38-MAPK信号的表达诱导ACC-M细胞凋亡。     

siRNA干扰survivin表达对腺样囊性癌细胞株ACC-M的抑制作用

目的探讨靶向survivin基因RNAi对腺样囊性癌增殖的抑制效应。方法设计、合成siRNA(small interfering RNA),构建表达载体pGenesil-shRNA-survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-M细胞株。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot法分别检测转染后的ACC-M细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法来检测细胞的增殖。结果测序证实表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-survivin的ACC-M细胞株中,survivin mRNA及蛋白表达明显降低,ACC-M细胞增殖受到抑制。结论pGenesil-shRNA-survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性癌细胞增殖。     

miR-26a靶向EZH2抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的增殖活性

目的 探讨miR-26a对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖能力的影响及其与EZH2的靶向关系. 方法 构建pcD-NATM6.2-pre-miR-26a、pmirGLO-EZH2野生型（pmirGLO-EZH2-WT）和突变型（pmirGLO-EZH2-MT）重组质粒,并采用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测pre-miR-26a在ACC-M细胞中的转染效率,并与未处理组（control组）进行比较.同时采用MTT法分析miR-26a过表达对ACC-M细胞增殖活性的影响,并采用双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot检测miR-26a与EZH2的靶向关系. 结果 将测序结果采用NCBI BLAST进行序列比对,结果显示pre-miR-26a、EZH2-WT和EZH2-MT重组质粒均构建成功,无碱基缺失或突变.qRT-PCR显示转染pre-miR-26a的ACC-M细胞其miR-26a的表达显著高于未处理组（P＜0.001）.MTT分析显示miR-26过表达可以明显抑制ACC-M细胞的增殖活性（P＜0.05）.此外,双荧光素酶报告基因系统（P=0.001）、qRT-PCR和Western blot均证实miR-26a能够显著下调EZH2的mRNA（P=0.001）和蛋白的表达（P=0.006）. 结论 miR-26a能够显著抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系.