大鼠血清中人参皂甙Rb1的免疫检测

目的建立大鼠血清中人参皂甙Rb1（G-Rb1）的免疫检识方法。方法利用杂交瘤细胞技术制备抗G-Rb1单克隆抗体（mAb）。含G-Rb1的大鼠血清用甲醇沉淀蛋白,制备供试样品．点样于聚醚砜膜上．以乙腈：水：冰醋酸按25：75：1的比例展开;NaIO4处理,与BSA结合,使G-Rbl固定于膜上。将PES膜上的G-Rb1与抗G-Rb1mAb反应后,加过氧化物酶标记的羊抗小鼠kG,用含0．03％H2O2的lmg／ml 4-氯-1-萘酚磷酸缓冲液显色。结果在聚醚砜膜上,在标准品和供试样品的相同位置可清晰地观察到一个青蓝色G-Rb1斑点,该方法检测限为0．25μg。结论这种G．Rb1的免疫检识方法较薄层层析具有更好的专一性和可靠性,灵敏度接近高效液相色谱。且不需要昂贵的仪器．便于操作。     

人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠pJNK表达的影响

目的 探讨人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织c-jun N-末端激酶(pJNK)表达的影响及其意义.方法 将大鼠随机分为假手术组、单纯缺血再灌注组、人参皂甙Rg1 10、20、40 mg/kg组、尼莫地平1 mg/kg组,采用大脑中动脉闭塞法建立脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法检测脑组织缺血再灌注4h后pJNK的表达.结果 人参皂甙Rg1各剂量组大鼠脑组织pJNK表达阳性率分别为(23.89±6.77),(15.19±4.59),(9.15±4.77),均低于单纯缺血再灌注组(27.15±8.46).结论 人参皂甙Rg1防治大鼠脑缺血再灌注损伤的机制可能与抑制脑组织pJNK表达有关,且以高剂量效果较好.     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注丘脑及下丘脑巢蛋白表达的影响

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注后丘脑及下丘脑巢蛋白的表达以及人参皂甙Rb1（Ginsenoside Rb1,GRb1）对巢蛋白表达的影响。方法：阻塞大鼠大脑中动脉2h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组（I／R组）和GRb1给药组（GRb1组）。两组按不同的再灌注时间（3h、12h、1d、2d、3d、5d、10d）分为7个亚组,应用免疫组织化学技术检测丘脑和下丘脑巢蛋白的表达。结果：给予人参皂甙Rb1后的丘脑和下丘脑缺血侧巢蛋白阳性细胞明显增多,细胞形态呈神经元样。结论：人参皂甙可上调缺血再灌注大鼠丘脑和下丘脑巢蛋白表达水平,促进神经干细胞增殖,并向神经元方向分化。     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,探讨GRbl的神经保护作用机制。方法阻塞大鼠大脑中动脉2 h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组)和GRbl给药组(GRb1组),GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射GRb1(40 mg/kg)。两组再按不同的再灌注时间(3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和10 d,每时间点4只)分为7个亚组。分别用HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色观察神经组织病理改变、细胞凋亡、Bcl-2和Bax的表达。结果与I/R组相比,GRb1能减轻缺血侧脑组织的病理改变,减少神经细胞凋亡数(12 h、1 d、2 d和3 d时P<0.05),上调Bcl-2阳性细胞数(12 h、1 d、3d、5 d和10 d时P<0.05)和降低Bax阳性细胞数(3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和10 d时P<0.05)。结论GRbl对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制与抑制神经元凋亡、促进Bcl-2表达和抑制Bax表达有关。     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察人参皂甙Rb1（Ginsenoside Rb1，GRb1）对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响，探讨GRb1的神经保护作用机制。方法阻塞大鼠大脑中动脉2h制备脑缺血再灌注模型，大鼠随机分为缺血再灌注组（I／R组）和GRb1给药组（GRb1组），GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射GRb1（40mg／kg）。两组再按不同的再灌注时间（3h、12h、1d、2d、3d、5d和10d，每时间点4只）分为7个亚组。分别用HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色观察神经组织病理改变、细胞凋亡、Bcl-2和Bax的表达。结果与I／R组相比，GRb1能减轻缺血侧脑组织的病理改变，减少神经细胞凋亡数（12h、1d、2d和3d时P〈0．05），上调Bcl-2阳性细胞数（12h、1d、3d、5d和10d时P〈0．05）和降低Bax阳性细胞数（3h、12h、1d、2d、3d、5d和10d时P〈0．05）。结论GRb1对脑缺血再灌注损伤有保护作用，其机制与抑制神经元凋亡、促进Bcl-2表达和抑制Bax表达有关。     

人参皂苷Rb3对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的探讨3种人参皂苷Rb3对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用。方法将48只大鼠随机分成6组：假手术组、模型组、人参皂苷Rb320、40、80 mg/kg组和阳性对照药血栓通注射液（XST）组;采用插线法使大脑中动脉闭塞（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血模型,于造模24 h后进行行为学评分,测定脑组织含水量以及脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量,计算脑梗死面积百分比,并进行组织病理学检查。结果人参皂苷Rb340、80 mg/kg能明显缓解脑缺血大鼠的行为学症状,减轻其脑水肿程度,降低血清中MDA含量,升高SOD含量,并能减少其脑梗死面积,减轻组织病理学损伤。结论人参皂苷Rb3对大鼠局灶性脑缺血损伤有较明显的保护作用。     

单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：用缺血－再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法（TUNEL）。结果：缺血－再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞。Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低。结论：缺血－再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡。     

人参皂甙Rb1抑制扩张型心肌病发生中的HB-EGF表达和纤维化

目的 HB-EGF过表达可促进心肌纤维化及心肌细胞凋亡,本文研究人参皂甙Rb1对cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠发病过程中的HB-EGF表达和心肌纤维化的影响. 方法将cTnTR141W转基因小鼠随机分为模型组和人参皂甙Rb1组(70 mg/kg/d),连续给药7个月,取野生型小鼠作为对照组.用Kaplan-Meier法进行生存分析.心脏超声检测心功能及心脏几何构型.计算心重指数.光镜观察心肌细胞及间质变化.Western blot检测心脏HB-EGF,pSTAT3表达水平. 结果 Rb1长期给药能显著改善该模型的心功能和心脏几何构型,将死亡率降低50%.Rb1治疗组心重指数降低11.3%(P<0.05),光镜观察显示Rb1能减轻心肌细胞排列紊乱以及间质纤维化.Western blot结果显示Rb1能够显著降低模型中的HB-EGF及pSTAT3的表达.结论 Rb1抑制心肌病发生中的HB-EGF表达及抑制下游信号pSTAT的激活,并改善扩张型心肌病模型的心功能及心脏重构.     

人参皂甙Rb1、黄芪抗大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡研究

目的研究人参皂甙Rb1、黄芪对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护机理。方法应用Neurobasal加B27 Supplement体外培养大鼠大脑皮层神经细胞;流式细胞仪检测神经细胞凋亡率;Hoechst33342荧光染色法检测神经细胞凋亡率。结果(1)流式细胞仪测定结果:正常对照组神经细胞凋亡率为0.78%,凋亡阳性组细胞凋亡率为31.61%,人参皂甙Rb1 1、2、3组细胞凋亡率分别为8.52%、4.86%、1.43%,黄芪注射液1、2、3组细胞凋亡率分别为16.06%、7.03%、1.22%;(2)神经细胞凋亡阳性组可见有明显的凋亡梯状条带,而正常对照组、人参皂甙Rb1 2组、黄芪注射液2组未见有明显的凋亡梯状条带;(3)Hoechst 33342荧光染色结果:正常对照组神经细胞凋亡率为(8.24±0.31)%,凋亡阳性组细胞凋亡率为(41.30±2.56)%;与凋亡阳性组比较,缺氧前加BDNF组细胞凋亡率为(21.06±0.72)%(P<0.05),缺氧后加BDNF组细胞凋亡率为(27.82±3.65)%(P<0.01);缺氧前加人参皂甙Rb1 3组细胞凋亡率为(12.57±1.61)%(P<0.05),缺氧后加人参皂甙Rb1 4组细胞凋亡率为(23.71±2.24)%(P<0.01);缺氧前加黄芪注射液1、2、3组细胞凋亡率分别为(20.28±1.00)%、(18.67±0.57)%、(13.84±0.79)%(P<0.05),缺氧后加黄芪注射液4组细胞凋亡率为(26.46±2.18)%(P<0.01)。结论人参皂甙Rb1在100μg/mL,黄芪在10~100 mg/mL的浓度范围內,具有抗缺氧的神经细胞凋亡的作用。     

人参皂甙Rb1对马桑内酯癫痫的作用及海马蛋白组表达的影响

目的：观察人参皂甙Rb1（GRb1）对马桑内酯（CL）所致大鼠癫痫及海马神经元损伤的作用,运用双向电泳（2-DE）技术获得可能与CL癫痫发作及GRb1神经保护作用有关的蛋白质成分,探讨海马组织蛋白质在癫痫发生发展过程中的作用和地位及GRb1对其的影响。方法：雄性成年SD大鼠随机均分为对照组、CL组和GRb1＋CL组（n=10）。GRb1＋CL组在实验前3d,大鼠每日灌胃GRb1（1.5mg/ml,30mg/kg）,另2组灌胃等量生理盐水;实验日CL组和GRb1＋CL组腹腔注射CL（1mg/ml,4mg/kg）,对照组腹腔注射等量生理盐水。观察各组大鼠的行为学变化3h。各组半数动物麻醉后灌注固定,HE染色观察海马组织学改变。半数动物,断头处死剥离海马组织并提取蛋白,双向电泳（2-DE）分离,ImageMaster 2D Platinum v5.0软件差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定蛋白质。结果：①癫痫发作的行为表现：对照组大鼠未见痫性发作;CL组痫性发作程度较高（Ⅲ～Ⅴ级）;与CL组相比,GRb1＋CL组大鼠的痫性发作程度明显减低,潜伏期变长,持续时间变短（P〈0.01）。②海马组织学（HE染色）改变：对照组大鼠海马组织结构正常;CL组大鼠可见海马神经元变性坏死,尤以CA3区和齿状回最明显;GRb1＋CL组大鼠海马神经元结构无明显改变。③获得大鼠海马组织蛋白质组双向电泳图谱;差异表达蛋白质组分析显示GRb1＋CL组与对照组差异蛋白斑点84个,GRb1＋CL组与CL组差异蛋白斑点120个。④鉴定出6个蛋白质分别是：脑肌酸激酶（brain creatine kinase）、吞蛋白A1（endophilin-A1）、UPF0628蛋白C10orf96同源物（UPF0628 proteinC10orf96 homolog）、细胞色素P-450（cytochrome P-450）、磷导素样蛋白（phosducin-like protein）及桥整合蛋白3（bridging inte-grator 3）。其中前3个蛋白质在GRb1＋CL组表达低于CL组,后3个蛋白质在GRb1＋CL组表达低于对照组。结论：GRb1可减轻CL所致大鼠癫痫的发作程度及海马神经元损伤。CL组、GRb1＋CL组和对照组的表达蛋白质组相比存在明显差异。鉴定出的差异表达的蛋白质brain creatine kinase、endophilin-A1、UPF0628 protein C10orf96 homolog可能与CL所致癫痫发作有关;cytochrome P-450、phosducin-like protein及bridging integrator 3可能与GRb1的神经保护作用有关。     

HPLC法测定复方丹参片中人参皂甙Rb1的含量

目的测定复方丹参片中人参皂甙Rb1的含量。方法HPLC法，流动相：乙腈一水（30：70），检测波长204nm。结果人参皂甙Rb1的线性范围：0．075mg～1．20mg，r=0．9925，回收率为99．3％，RSD为3．1％。结论本法灵敏、准确，可作为该产品的质量控制指标。     

人参皂甙单体Rb1对大鼠在体心脏收缩性能的影响

本文作者为进一步探讨人参皂甙单体Rb1对心肌收缩的影响,完善人参对心肌保护作用的系统性研究,拟在在体工作鼠心上,以心肌收缩性能为指标,对比观察Rb1对心肌收缩的影响.     

GDNF基因修饰的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血后GFAP表达的影响

目的探讨胶质源性神经营养因子（glial cell line-derived neural factor,GDNF）基因修饰的神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植对大鼠脑缺血后（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的表达的影响。方法建立大鼠暂时性大脑中动脉梗塞模型（middle cerebral artery occlusion,MCAO）,再灌注3d,并将其随机分为：生理盐水移植组（NS）、神经干细胞移植组（NSCs）和GDNF基因修饰的神经干细胞移植组（GDNF/NSCs）。采用脑立体定位仪将移植入大鼠的右侧脑室。再灌注1、2、3、5、7周的各时间点,处死大鼠,取同侧大脑半球,用Western blotting观察GFAP的表达。结果 GDNF/NSCs组、NSCs组和NS组GFAP蛋白均在2周达到高峰,后逐渐降低。而再灌注1~7周,GDNF/NSCs组的GFAP蛋白显著高于NS组（P〈0.001）;GDNF/NSCs组GFAP蛋白显著高于NSCs组（P〈0.01）。再灌注1~5周,NSCs组GFAP蛋白显著高于NS组（P〈0.001）。结论 GDNF/NSCs移植治疗大鼠缺血再灌注的神经保护作用,其机制可能与促进GFAP的表达有关。     

肠内菌对人参皂甙Rb1的代谢特点

人参(Radix Ginseng)是五加科人参属植物人参的干燥根,作为传统药物具有悠久的历史.从人参中分离出来的人参皂甙被认为是人参主要的有效成分之一,药理实验证明其在心血管、免疫调节及抗衰老[1-2]方面有广泛的生物活性.由于自古以来人参的主要给药途径是经口服用,因此从肠内菌代谢的角度研究人参皂甙,对于揭示其真正的药理学活性物质具有重要意义.本文通过离体和在体实验观察了人和大鼠肠内菌对G-Rb1的代谢特点.     

人参皂甙Rb1抗脑缺血损伤作用的实验研究

目的　研究人参皂甙Rb1对脑缺血损伤的保护作用。方法　观察大鼠海马脑片在缺血条件下顺向群峰电位 (orthodromicpopulationspike ,OPS)的变化及人参皂甙Rb1对它的影响。结果　使用人参皂甙Rb1(6 0 0 μmol/L)后 ,可使缺氧损伤电位 (hypoxicinjurypotential,HIP)发生率明显减少 (P <0 .0 1) ,OPS恢复率和OPS恢复程度与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　人参皂甙Rb1有明显的抗脑缺血损伤作用     

人参皂甙Rb1对阿霉素致心力衰竭大鼠心脏凋亡相关蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨人参皂甙Rb1(Gs-Rb1)是否改善慢性心力衰竭(CHF)大鼠的心功能以及是否通过改善心脏凋亡相关蛋白和mRNA介导其效应。方法在构建阿霉素CHF大鼠模型成功后,将其随机分为Gs-Rb1组[70 mg/(kg.d),n=17]和CHF组(n=15),另外选取同龄健康大鼠作为对照组(n=10)。第4周评估心脏功能和采用Western blot、RT-PCR等方法检测Bax、Bcl-2、Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果(1)与CHF组相比,Gs-Rb1组左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)显著改善(P值分别为0.015,0.022);(2)对照组不表达Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、Caspase-3蛋白,但微量表达相应mRNA;与CHF组相比,Gs-Rb1组Bcl-2蛋白和mRNA表达显著增加,而Bax、Fas、Fas L、Caspase-3蛋白和mRNA表达均显著下降(P<0.05);(3)LVEF与Bcl-2/Bax蛋白(r=0.451,P=0.017)及mRNA(r=0.411,P=0.021)呈显著正相关,而与Fas(r=-0.324,P=0.027;r=-0.507,P=0.022)、Fas-L(r=-0.417,P=0.031;r=-0.309,P=0.022)、Caspase-3(r=-0.351,P=0.029;r=-0.508,P=0.031)蛋白及mRNA均呈显著负相关。结论在GS-Rb1改善CHF大鼠心功能的效应中,GS-Rb1既可通过调高Bcl-2蛋白和mRNA,又可通过降低Bax、Fas-L、Fas、Caspase-3蛋白和mRNA等介导其保护作用。     

人参皂甙单体Rb1对豚鼠心肌细胞ICa^2＋电流阻滞作用的研究

研究人参单体Ｒｂ１对ＩＣａ＾２＋电流的影响。采用全细胞电压钳技术记录了豚鼠心室肌细胞ＩＣａ＾２＋电流，给出了电流－电压关系曲线。在保持电压－５０ｍＶ时，阶跃命令在－５０－＋６０ｍＶ，０ｍＶ时电流最大，并发现Ｒｂ１时ＩＣａ＾２＋电流有明显的阻滞作用。而且在１００μｍｏｌ／Ｌ，２００μｍｏｌ／Ｌ，３００μｍｏｌ／Ｌ，４００μｍｏｌ／Ｌ范围时有剂量依赖关系。