红花中羟基红花黄色素A的提取工艺及其热稳定性研究

目的:优化红花中羟基红花黄色素A的提取工艺条件及其的热稳定性.方法:以羟基红花黄色素A的含量为指标,采用单因素和正交实验方法,对提取温度、浸取时间、溶剂用量进行考察;通过测量于不同温度下保温不同时间的该成分的吸光度,考察其的热稳定性.结果:最佳提取工艺为:分别加20倍量的水提取2次,在40℃下,2次浸取时间分别为12 h和4 h,过滤,合并滤液;且羟基红花黄色素A不易在高温条件下提取或保存,在低温下具有一定的稳定性.结论:该研究方法合理方便,并可为羟基红花黄色素A提取及保存提供实验依据.     

红花药材及注射液中羟基黄色素A的含量测定

红花为菊科一年生草本植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥管状花,是传统的活血化瘀中药,具有活血通经、去瘀止痛之功效[1,2].现代医学认为红花可以抗凝、防栓、扩张血管,能有效防治心脑血管疾病[3～5].红花中羟基黄色素A是红花主要的活性成分[6],药理实验证明红花羟基黄色素A能明显提高缺氧耐受力,使冠脉扩张,增加冠脉流量,并有明显抑制ADP诱导的家兔血小板聚集作用[7,8].     

红花中羟基红花黄色素A含量测定方法的改进

目的改进现有红花质量标准中羟基红花黄色素A含量测定色谱系统中色谱峰易变形的缺陷,并建立一个新的高效液相色谱方法。方法采用HPLC法,Diamonsil（钻石）C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,甲醇-乙腈-0.4%的磷酸溶液（30：2：68）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为403 nm。结果羟基红花黄色素A在0.03264～0.1984 mg/ml范围内呈良好的线性关系（R2=1）,回收率为100.37%（n=5）,RSD为0.9%。结论本法准确,专属性好,可用作控制红花的质量。     

超声提取羟基红花黄色素A的工艺条件筛选

目的:筛选超声提取纯化羟基红花黄色素A(HSYA)的最佳工艺条件.方法:用超声提取法,以羟基红花黄色素HSYA百分含量为指标+,考查提取时间,提取次数,提取液用量,提取温度对HSYA纯化的影响.结果:红花黄色素A的最佳提取工艺为:加水8倍量,提取温度为30℃,提取次数为3次,时间为1h/次.结论:通过6次验证试验红花黄色素A含量平均值为16157mg/g,表明该工艺稳定,重现性好.     

尿液中羟基红花黄色素A的含量测定

目的:建立高效液相色谱法用于测定人尿液中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用乙腈∶0.2%磷酸水溶液(20∶80 v/v)为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为400 nm。结果:羟基红花黄色素A的线性范围为0.58～57.69μg/mL,羟基红花黄色素A在尿中3个浓度的绝对回收率分别平均为100.3%、100.8%、100.9%。结论:本方法简单快速,准确灵敏,重现性好,适用于羟基红花黄色素A的尿中药物浓度测定。     

HPLC法测定七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC法测定七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用Inertsil OPS-SP(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26:2:72),流速1mL·min-1,柱温25℃;进样量:10μL,检测波长为403nm。结果:羟基红花黄色素A在进样量范围为(0.0265～0.132)μg时,与峰面积线性关系良好;回收率为99.7%,RSD为0.7%。在选定的条件下,羟基红花黄色素A获得较好分离。结论:该方法简便可行、灵敏准确、能用于七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的测定。     

骨风宁片中羟基红花黄色素A的含量测定

目的:建立骨风宁片中羟基红花黄色素A的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法(HPLC),Shim-packC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸溶液(32:68)为流动相,检测波长为403nm,流速1.0ml/min.结果:羟基红花黄色素A在0.1032-0.516μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率98.517%,RSD为1.730%.结论:本方法简便、准确,可作为骨风宁片中羟基红花黄色素A的定量分析方法.     

RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量

目的建立RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量的方法。方法采用反相高效液相色谱,色谱柱：Zirchrom C18（4.6mm×250mm,5μm）,检测波长403nm;柱温30℃;流速1mL/min。结果羟基红花黄色素A在0.0408~0.3264μg内线性良好,y=644726.0154×-2058.0714,r=0.9999,回收率为101.73%,RSD为1.65%。结论采用该方法进行含量测定准确可靠,重现性好,对谷红注射液的质量控制有重要意义。     

羟基红花黄色素A抗氧化作用的研究

红花Carthamus tinctorius L.为活血化瘀药，可活血通经、化瘀止痛，临床上主要以水煎液人药。组织缺血一再灌注等过程中，自由基引发的氧化反应为许多血液循环障碍疾病的重要损伤机制。红花水提液可清除羟自由基，抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化。羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)为红花主要水溶性活血化瘀有效成分，     

羟基红花黄色素A的现代研究新进展

羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)是中药红花提取物中主要的水溶性成分之一,HSYA的活性相继被发现,国内外利用现代分析仪器和分子生物学技术对其结构和作用机制以及相关作用靶点开展了较为深入系统的研究。本文从HSYA的提取、分离、纯化、含量测定、稳定性、药动学以及药理作用等来综述近几年国内外对HSYA的研究成果,以期对HSYA的进一步开发利用提供依据。     

HPLC指纹图谱法评价新疆塔城地区额敏县优质红花内在质量

目的：建立额敏县优质红花的HPLC指纹图谱，以提供鉴别和质量评价方法。方法：采用梯度洗脱法建立额敏县优质红花的HPLC指纹图谱，并采用“中药色谱分析和数据管理系统”专业软件进行数据处理，对额敏县两种优质红花药材的指纹图谱进行分析比较。结果：两种优质红花虽产白同一地区，虽各批次间具有良好的相似度，但两品种色谱峰相似度存在明显差别。结论：建立额敏县红花的指纹图谱可以从整体上反映当地红花的内在质量，为当地红花提供了综合的鉴别和质量评价方法。     

羟基红花黄色素A在大鼠体内的药代动力学

目的:研究羟基红花黄色素A在大鼠体内的药代动力学。方法:羟基红花黄色素A大鼠尾静脉注射给药和灌胃给药,HPLC测定血浆中药物的含量,3P97计算药代动力学参数;大鼠胆管插管收集给药后24 h胆汁;代谢笼收集大鼠给药后24 h尿样和粪便。结果:静脉注射给药符合二室开放模型,胆汁累积排泄量为1.32%,尿中24 h累积排泄率为88.6%,粪便中没有检测到药物。灌胃给药绝对生物利用度是1.2%;胆汁累积排泄量为0.062%;尿中24 h累积排泄率为2.9%;粪便24 h累积排泄率为48%。结论:羟基红花黄色素A大鼠口服吸收较差,有胆汁外排效应;血中药物以肾排泄为主。     

羟基红花黄色素A的吸收机制研究

目的:研究羟基红花黄色素A(羟A)在大鼠体内的吸收机制。方法:大鼠灌胃给药和大鼠胃肠道不同部位分别给药后,用HPLC测定羟A的血药浓度和胃肠道中羟A残留量;大鼠小肠推进实验。结果:橄榄油、维拉帕米和环孢素显著性促进羟A的吸收(P<0.01);橄榄油和川芎挥发油延缓了药物在肠道内的推进速度(P<0.01);羟A在胃内不吸收;羟A在肠道内的吸收程度从高到低依次为:空肠、十二指肠、回肠;羟A在胃肠道内的稳定性从大到小依次为:回肠、胃、空肠、十二指肠。结论:大鼠口服羟A时生物利用度受胃肠道蠕动速度、P-糖蛋白、吸收部位及其在胃肠道内稳定性的影响。     

羟基红花黄色素A对四氯化碳急性肝损伤的保护作用

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对四氯化碳(CCl4)急性肝损伤的保护作用。方法将60只昆明种小鼠随机分为正常对照组和CCl4损伤组、HSYA保护组(2、4、8、16?mg/kg组),每组各10只。CCl4腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型。观察肝组织病理学改变;测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,肝组织匀浆谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)的含量及肝细胞色素P450 2E1(Cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白的表达。结果与CCl4损伤组比较,HSYA保护组肝组织病理改变明显减轻;血清ALT、AST活性明显降低(P<0.05); 肝组织匀浆中GSH、SOD含量明显升高(P<0.05);MDA、TNF α含量明显降低(P<0.05);CYP2E1蛋白表达量增加。综合各指标表明,以8?mg/kg保护组效果最佳。结论HSYA对CCl4急性肝损伤有明显保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化,清除自由基,降低TNF α水平有关。     

羟基红花黄色素A人工抗原的制备

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的偶联方法,获得具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。方法通过偶联物透析液的颜色变化、紫外图谱、红外扫描图谱及动物免疫试验来鉴定制备的人工抗原。结果HSYA-BSA人工抗原在紫外扫描中表现出HSYA和BSA的特征吸收峰;在红外扫描中HSYA-BSA具有HSYA特征官能团的吸收峰和氨基酸的特征吸收峰;间接ELISA检测结果显示产生抗HSYA的特异性抗体,血清效价可达1∶3 200;标准曲线方程计算得BSA和HSYA的结合率是1∶50。结论通过直接偶联法成功制备出具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。     

羟基红花黄色素A促内皮细胞增殖的机制研究

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对低氧条件下犬血管内皮细胞(VEC)血管内皮生长因子(VEGF)相关信号传导通路的影响.方法 在低氧条件下以ELISA法观察VEGF抗体及其两种酪氨酸受体(Flt-1和KDR)的抗体对HSYA促VEC增殖作用及分泌VEGF水平的影响;生物分子相互作用分析法检测HSYA与VEGF、Flt-1和KDR的相互作用;硝酸还原酶法测定VEC培养液中NO、NOS的量.结果 10μg/mL VEGF、Flt-1和KDR的抗体均能明显抑制HSYA的促EC分泌VEGF作用;生物分子相互作用分析结果证实,HSYA与VEGF、Fit-1及KDR均无明显结合;HSYA在1mmol/L浓度下能够明显促进低氧条件下VEC培养中的NO水平,而对NOS水平没有明显影响.结论 在低氧条件下,HSYA促VEC增殖的作用与VEGF及其相关信号传导通路有关,但HSYA与VEGF及其受体无明显结合,提示可能存在与VEGF及其相关信号传导通路相关的HSYA作用靶点.     

大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A

目的 建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素(safflor yellow，SY)及有效成分羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)的方法。方法 室温水提减压浓缩所得红花水提液上D-4020型非极性大孔树脂柱，水洗脱糖类等杂质，以30％和10％乙醇洗脱分别得SY和HSYA；采用分光光度法和HPLC法分析水洗脱除糖过程中SY和HSYA的损失率及醇洗脱SY和HSYA的回收率。结果 聚酰胺薄膜色谱结果显示SY和HSYA洗脱液分别可见4～5个和1个黄色荧光斑点。HPLC分析结果表明，两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92．4％和83．0％。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中，损失率和回收率分别为SY：7．5％和80．6％，HSYA：1．64％和77．3％。结论 本法适于大规模制备SY和HSYA。     

羟基红花黄色素A对实验性心肌梗死大鼠的保护作用及机制

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠缺血心肌的保护作用及其作用机制。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型,观察HSYA对大鼠心肌梗死面积(MIS),血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓烷B2(TXB2)和血管紧张素(Ang)的影响。结果与模型组比较,HSYA明显减小急性心肌梗死大鼠MIS,显著提高血清NOS活性,明显增加NO及6-Keto-PGF1α的量,显著降低血清CK-MB、LDH、TXB2及Ang水平。结论HSYA对急性缺血心肌具有保护作用,其机制与HSYA调节NO、6-Keto-PGF1α、TXB2和Ang的水平,从而增加心肌供血供氧,减轻心肌细胞损伤、凋亡有关。     

羟基红花黄色素Ａ抗谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对谷氨酸(Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法以体外原代培养Wistar胎鼠大脑皮层神经元为实验材料，进行形态学观察，采用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst33342/PI双荧光探针染色、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量检测、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及免疫细胞化学法检测细胞色素C（CytC）荧光强度，综合评价HSYA对Glu氧化性神经损伤的保护作用。结果与Glu损伤组相比，HSYA能显著提高细胞相对存活率，维持细胞内较高SOD和GSH水平，降低Glu引起的细胞凋亡率及线粒体内CytC向胞质的释放，以160μg/mL浓度的 HSYA保护效果最为显著。结论HSYA对Glu氧化性神经损伤有显著的保护作用，其机制与抗氧化、抑制细胞凋亡有关。