转染外源CC10对肺腺癌细胞系A549的CyclinD1蛋白及mRNA的影响

Objective： To investigate the effects of exogenous CC10 gene transfection on cell cycle and the expression of cyclinD1 protein and mRNA in A549 cells. Methods： A549 cells in all test groups （group A to E） and control group （group F） were transfected with exogenous CC10 gene by liposome for 8, 16, 24, 36, 48 and 0 h respectively. CC10 protein expression was detected in A549 cells by Western blot. The growth inhibitory rate was detected by MTT method. Flow cyometry analysis （FCS） and AnnexinV-PI staining were used to determine the changes of cell cycle progression and apoptosis rate in all groups. CyclinD1 protein and mRNA expression in A549 cells was detected by the methods of immunocytochemistry and RT-PCR. Results： Exogenous CC10 gene could inhibit the growth of A549 cells, and the growth inhibitory rates in all test groups （from group A to E） were 24.7%, 33.1%, 44.3%, 61.7% and 74.2% respectively, and that in group F was 6.24%. CC10 blocked the cell cycle progression at G0/G1 and induced apoptosis gradually. In A549 cells of test groups, the expression of cyclinD1 protein and mRNA was significantly decreased. Conclusion： The inhibitory effects of the transfection of exogenous CC10 gene on G0/G1 cycle of lung cancer cells might be related with the down-regulation of cyclinD1 gene.     

人CC10基因在肺腺癌A549细胞中的表达

目的构建及鉴定人CC10基因真核细胞表达载体。方法采用RT-PCR法,从人肺组织的总RNA中扩增出273bp的人CC10cDNA片段,利用DNA重组技术将其克隆到真核细胞表达载体pcD-NA3.1中,脂质体法转染pcDNA3.1-hCC10到肺腺癌A549细胞,荧光免疫细胞化学法及Westernblot法检测CC10蛋白的表达。结果用酶切重组质粒并行序列鉴定,人CC10基因已经正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,体外染pcDNA3.1-hCC10的肺腺癌A549细胞中CC10蛋白表达明显增高。结论成功构建了CC10基因的真核细胞表达载体pcDNA3.1-hCC10,并获得表达     

内皮抑素对人肺腺癌A549细胞周期及HIF-1表达的影响

目的研究内皮抑素在体外对人肺腺癌细胞A549的影响及机制。方法流式细胞术（FCM）检测内皮抑素治疗后,肺腺癌细胞A549的细胞周期分布;酶联免疫吸附法（ELISA）检测处理前后细胞中HIF-1的表达情况。结果内皮抑素处理肺腺癌A549细胞,可以使该细胞S期和G₂/M期细胞比例增多,抑制HIF-1的表达,且随处理时间的延长,HIF-1的抑制率不断提高。结论内皮抑素可以使A549细胞阻滞在G2/M期及S期的比例明显增加,从而为其他手段抑制A549细胞的增殖或直接杀伤A549细胞提供了基础;内皮抑素可以抑制肿瘤细胞的HIF-1表达,HIF-1是肿瘤细胞耐受放化疗的因素之一,因此联合内皮抑素治疗有可能提高放、化疗疗效。     

人MT1H 基因对肺腺癌细胞A549 增殖的影响及其机制

 目的 研究外源性人金属硫蛋白1H（MT1H）基因稳定转染对肺腺癌细胞A549生长的影响及其机制。方法 构建MT1H基因真核表达质粒pcDNA3．1（-）-MTIH，以脂质体法转染A549细胞，经G418筛选，获得阳性单克隆细胞。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后MT1H mRNA和蛋白表达，MTT实验检测其增殖能力的变化，流式细胞仪分析细胞周期时相分布。然后RT-PCR检测cy-clinD1的表达。结果 MT1H在A549细胞中获得表达。与未转染组和空质粒转染组比较，pcDNA3．1（一）～MT1H转染组细胞增殖速度明显增快，G0／G1期细胞减少，S期细胞增多，cyclinD1 mRNA水平明显升高。结论 MT1H能够促进肺腺癌细胞A549增殖，可能和上调cyclinD1促使细胞进入S期增多有关。     

HDAC1 siRNA转染对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的:多项研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)抑制剂对人非小细胞肺癌细胞株有抑制增殖和诱导凋亡作用.而HDAC抑制剂对HDAC Ⅰ型和Ⅱ型均有抑制作用,在非小细胞肺癌细胞株中尚未明确HDACs中哪一类受抑制能影响肿瘤生长.本研究通过HDAC1 siRNA转染肺腺癌细胞株A549,观察HDACs中HDAC1对肺腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,明确HDAC1在肺腺癌细胞生长中的作用.方法:MTT法检测不同时间点HDAC1 si RNA转染对A549细胞体外增殖的影响,流式细胞术检测RNA干扰后细胞周期及凋亡率的变化;Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平的变化.结果:HDAC1 siRNA转染A549细胞后,HDAC1在转录和表达水平均下降,组蛋白H4乙酰化表达增高.siRNA干扰后A549细胞的体外生长抑制呈时间依赖性,流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡增加.结论:HDAC1 siRNA转染能有效地抑制HDAC1在A549细胞中的表达,增加A549细胞中组蛋白的乙酰化,并影响A549细胞相关生物学行为,抑制肺腺癌细胞的生长,为HDAC1基因治疗应用于肺腺癌奠定了基础.     

榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达的影响

目的：观察榄香烯乳对人肺腺癌细胞株A549细胞hnRNP A2／B1 mRNA及蛋白表达的影响。方法：选用A549细胞株，应用MTT法检测细胞增殖，显微镜下观察细胞形态变化，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测hnRNPA2／B1mRNA表达，蛋白印迹法检测hnRNP A2／B1蛋白表达。结果：榄香烯乳对A549细胞体外增殖有显著抑制作用，且呈时间和剂量依赖性，其IC50值为15μg／ml，hnRNPA2／B1mRNA及蛋白表达水平均有下降。结论：榄香烯乳可抑制肺腺癌A549细胞增殖，致其hnRNPA2／B1的mRNA和蛋白表达水平均有下降。     

HSV_1-TK转染人肺腺癌细胞A549的实验研究

目的　体内外观察HSV1 TK/GCV对人肺腺癌细胞A5 49的杀伤效应。方法　构建含TK基因的逆转录病毒表达载体 ,电穿孔法转化肺癌细胞A5 49。MTT法检测转染细胞对GCV的药物敏感性 ,并观察旁观者效应 ;电镜、FCM、TUNEL法检测GCV诱导转染细胞凋亡变化 ;PCR和细胞原位杂交分别检测转染细胞TK基因整合和表达 ;活体内观察GCV对转染细胞、亲代细胞接种裸鼠皮下肿瘤治疗效果。结果　转基因细胞变得较不规则 ,多角型 ,易形成空泡。A5 49、A5 49 PLXSN、A5 49 TK三种细胞体外倍增时间分别为 ( 3 6.15± 3 .2 7)、( 4 0 .82± 3 .75 )和 ( 4 2 .0 6± 4.12 )小时 (P >0 .0 5 )。转染细胞对GCV的敏感性比亲代细胞提高 46倍 (P<0 .0 0 1)。旁观者效应在高细胞密度接种 ( 1× 10 4细胞 /孔 )较低细胞密度接种 ( 1× 10 3细胞 /孔 )明显。电镜发现转染细胞有凋亡小体、核呈半月征。FCM、TUNEL均能检测到转染细胞凋亡发生率明显高于对照细胞 (P<0 .0 0 1)。PCR及原位杂交表明转染细胞有TK基因整合和表达。体内实验表明GCV能明显抑制转染细胞接种的肿瘤 ,而亲代细胞接种的肿瘤未受抑制。结论　转TK基因细胞在体内外都获得了对GCV的敏感性。TK/GCV系统杀灭肿瘤可能与诱导细胞凋亡有关。GCV能在活体内抑制转TK基因细胞裸鼠移     

MicroRNA-10b对人肺腺癌细胞株A549增殖及侵袭能力的影响

目的探讨miRNA-10b对人肺腺癌细胞A549的增殖及侵袭能力的影响。方法用脂质体法将miRNA-10b真核表达质粒转染入A549,实验设置空白对照组、阴性对照组和miRNA-10b质粒转染组,转染后荧光显微镜下观察转染效率,实时定量PCR检测各组细胞miRNA-10b的表达,细胞增殖实验检测各组细胞的增殖情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。结果与空白对照组和阴性对照组相比,miRNA-10b质粒转染组细胞转染后增殖速度加快,细胞侵袭能力增强(P<0.05)。结论 miRNA-10b可以促进A549细胞的增殖及侵袭能力。     

MIF重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞及其对CyclinD1表达的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor, MIF）重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞后MIF的表达及其对CyclinD1表达的影响。方法 构建并鉴定重组真核表达质粒pEGFP-N1-MIF,转染人宫颈癌SiHa细胞;ELISA法检测细胞上清液中MIF的表达;real-time PCR及免疫细胞化学法检测细胞中MIF、CyclinD1 mRNA及蛋白的表达水平;MTT法及Boyden小室法分别检测细胞增殖和体外迁移能力。结果 重组质粒pEGFP-N1-MIF成功构建并转染至SiHa细胞;ELISA证实转染pEGFP-N1-MIF的实验组细胞上清液中MIF表达均高于各对照组（P<0.01）;real-time PCR及免疫细胞化学法证实实验组细胞中MIF、CyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平均高于各对照组（P<0.01）;MTT法和Boyden小室法检测到转染pEGFP-N1-MIF后细胞体外增殖、迁移能力明显高于各对照组（P<0.01）。结论 转染重组质粒pEGFP-N1-MIF后SiHa细胞中MIF表达水平增高,MIF过表达可增强SiHa细胞体外增殖、迁移能力,并上调 CyclinD1的表达。     

Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达

目的:探讨Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达情况,为肺癌干细胞的基因靶向治疗提供理论依据。方法:应用干细胞无血清培养技术培养A549细胞肿瘤细胞球,采用克隆形成实验检测肺癌肿瘤球细胞增殖能力,流式细胞术检测ABCG2在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况,Western blotting检测Id1在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况。结果:与贴壁细胞相比,人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞具有较强的克隆能力,且高表达ABCG2,符合肺癌干细胞的特点,Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞中高表达。结论:Id1可能成为靶向肺癌干细胞肺癌治疗的靶点。     

Viili多糖对人肺癌A549细胞中MAGEA10表达的影响北大核心CSCD

目的探讨Viili多糖对肿瘤特异性抗原基因MAGEA10表达量的影响及其机制。方法利用MTT技术检测不同浓度Viili多糖刺激A549细胞24 h、48 h、72 h后对其存活率的影响,qRT-PCR法检测Viili多糖浓度为10 mg/L、25 mg/L、50 mg/L时与正常生长A549细胞相比较MAGEA10 mRNA相对表达量的变化,并用Western blot检测Viili多糖10 mg/L、25 mg/L、50 mg/L刺激A549细胞后MA-GEA10表达抗原肽的情况。通过MAGEA10 mRNA表达量与抗原肽表达量分析探讨Viili多糖对MAGEA10表达的影响及其表达过程中的可能机制。结果 (1)Viili多糖作用A549细胞后,存活率下降,在0mg/L～50 mg/L范围内其浓度与细胞存活率呈负相关,且作用48 h效果最显著。(2)与未用Viili多糖刺激的空白组相比,Viili多糖浓度为50 mg/L时MAGEA10 mRNA相对表达量上升。(3)与空白组相比,Viili多糖浓度为50 mg/L时MAGEA10蛋白表达量上升。结论 Viili多糖对A549细胞的生长具有一定的抑制作用,上调A549细胞中MAGEA10的转录和翻译水平,两者机制尚需进一步研究,但可能是相互独立的。本研究通过提高癌症的非特异性免疫来提高特异性免疫概率,为癌症辅助治疗提供更多的科学依据。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

GW843682X增加肺癌A549细胞对紫杉醇化疗敏感性的体外研究

[目的]研究GW843682X对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响。[方法]培养肺癌A549细胞,均等浓度接种于6孔板,分四组：1空白对照组;2紫杉醇处理组：48μg/ml紫杉醇处理48h;3GW843682X处理组：0.5μmol/L GW843682X处理48h;4联合用药组：48μg/ml紫杉醇联合0.5μmol/L GW843682X处理48h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化。流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。RT-PCR检测plk1在mRNA水平的变化。Western blot检测plk1在蛋白质水平的变化。[结果]紫杉醇或GW843682X均能够抑制A549细胞的增殖,倒置显微镜下发现细胞形态变化明显,联合用药组变化更明显。流式细胞仪检测结果发现各组细胞凋亡率分别是2.5%,9.4%,5.8%和22.1%。RT-PCR结果显示紫杉醇或GW843682X均能下调plk1mRNA表达水平,联合用药组下调最明显。Western blot结果显示紫杉醇或GW843682X抑制了plk1蛋白表达水平,联合用药组下调最明显。[结论]GW843682X能够通过抑制plk1的表达增加肺癌A549细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

Exogenous p53 Upregulated Modulator of Apoptosis (PUMA) Decreases Growth of Lung Cancer A549 Cells

Purpose: To investigate the influence of exogenous p53 upregulated modulator of apoptosis (PUMA) expressionon cell proliferation and apoptosis in human non-small cell lung cancer A549 cells and transplanted tumor cellgrowth in nude mice. Materials and Methods: A549 cells were divided into the following groups: control, noncarrier(NC), PUMA (transfected with pCEP4- (HA) 2-PUMA plasmid), DDP (10μg/mL cisplatin treatment)and PUMA+DDP (transfected with pCEP4-(HA)2-PUMA plasmid and 10μg/mL cisplatin treatment). The MTTmethod was used to detect the cell survival rate. Cell apoptosis rates were measured by flow cytometry, andPUMA, Bax and Bcl-2 protein expression levels were measured by Western blotting. Results: Compared to thecontrol group, the PUMA, DDP and PUMA+DDP groups all had significantly decreased A549 cell proliferation(p<0.01), with the largest reduction in the PUMA+DDP group. Conversely, the apoptosis rates of the three groupswere significantly increased (P < 0.01), and the PUMA and DDP treatments were synergistic. Moreover, Baxprotein levels significantly increased (p<0.01), while Bcl-2 protein levels significantly decreased (p<0.01). Finally,both the volume and the weights of transplanted tumors were significantly reduced (p<0.01), and the inhibitionratio of the PUMA+DDP group was significantly higher than in the single DDP or PUMA groups. Conclusions:Exogenous PUMA effectively inhibited lung cancer A549 cell proliferation and transplanted tumor growth byincreasing Bax protein levels and reducing Bcl-2 protein levels.     

DEC1通过调控cyclinD1抑制肺癌细胞系A549和BE1的增殖

目的:分析differentiated embryonic chondrocyte expressed gene 1(DEC1)在肺癌细胞系A549和BE1中对肿瘤增殖的调控作用.方法:应用siRNA和过表达质粒双向调控DEC1的表达后,通过MTT和克隆形成实验观察肿瘤细胞增殖的变化.并通过Real-time PCR和Western blot,在mRNA和蛋白水平,检测DEC1对细胞周期调控蛋白cyclinD1的调控作用.结果:在肺癌细胞系A549中,通过siRNA敲除内源性DEC1的表达后,cyclinD1在mRNA和蛋白水平的表达上调.同时,MTT和克隆形成实验的结果表明肿瘤的增殖能力显著增强;在肺癌细胞系BE1中,通过转入DEC1过表达质粒上调DEC1的表达后,cyclinD1的表达下调.同时,MTT和克隆形成实验的结果表明肿瘤的增殖能力显著降低.结论:在肺癌细胞系A549和BE1中,DEC1通过负向调控细胞周期蛋白cyclinD1,进而抑制肿瘤的增殖.