Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞株凋亡的实验研究

目的 观察Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞株（SGC7901）增殖、凋亡的作用。方法 人工合成Survivin硫代ASODN，通过脂质体转染胃癌细胞株（SGC7901）后，用MTT法检测细胞毒作用；用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡；用RT-PCR、免疫组化技术检测SurvivinmRNA及蛋白的表达。结果 （1）Survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞增殖呈时间和剂量依赖性；（2）Survivin ASODN处理组SGC7901细胞24h后凋亡率为33．6％，正义寡核苷酸（SODN）组为10．7％，2组相比，有显著性差异（P〈0．05）；（3）SurvivinASODN处理组SGC7901细胞Survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降。结论 Survivin ASODN能够抑制增殖、诱导凋亡，推测可能通过下调Survivin mRNA及蛋白表达而起作用。     

转染反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞XIAP基因表达及细胞周期作用的实验研究

目的研究转染反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）对人胆管癌细胞株QBC939细胞凋亡抑制蛋白基因（X-linked inhibitor of apoptosisprotein,XIAP）表达的抑制作用及对细胞周期凋亡的影响．方法脂质体介导ASODN瞬时转染QBC939细胞,荧光显微镜观察ASODN转染入细胞的情况,并计算转染率;RT—PCR检测转染前后XIAPmRNA表达的变化;流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化和凋亡率．结果转染后24h可达到最佳的转染效果;ASODN组的XIAP基因水平明显低于对照组（P〈0．05）,流式结果显示转染后QBC939G0／G1期细胞高于阴性对照组,凋亡率高于对照组（P〈0．05）．结论脂质体介导转染ASODN能特异性地抑制QBC939细胞中的XIAP基因表达,使其发生G0／G1期阻滞,并诱导胆管癌细胞凋亡,有望成为胆管癌基因治疗新的靶点．     

Survivin反义寡核苷酸诱导人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的实验研究

目的Survivin是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员，在多数恶性肿瘤组织中丰富表达。因此，观察Survivin反义寡核苷酸（ASODN）转染对人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成针对Survivn mRNA特异性的ASODN，透射电镜观察细胞形态变化，流式细胞术检测各组细胞增殖指数（proliferative index，PI）和碉亡指数（apoptotic index，AI），RT-PCR法分析转染后Sur-vivn mRNA及Caspase-3 mRNA的变化，Western Blot法检测各组Survivn蛋白表达情况，荧光分光光度法测定Caspase-3的活性水平；MTT实验测定T24细胞对丝裂霉素（mitomycin，MMC）的敏感性。结果A—SODN转染组透射电镜下观察到凋亡的征象，而各对照组未见凋亡证据；各转染组细胞AI明显高于各对照组，PI明显低于各对照组（P〈0．01），且在一定范围内呈量一效关系，各对照组间差异无显著性（P〉0．05）；各转染组细胞Survivin mRNA、Survivin的表达较各对照组明显下调（P〈0．01），各对照组间差异无显著性（P〉0．05）；Caspase-3 mRNA的表达在各组细胞间差异无显著性（P〉0．05）；各转染组细胞Caspase-3活化水平较各对照组明显提高（P〈0．01），各对照组间差异无显著性（P〉0．05）；MTT实验显示，转染组MMC半数抑制浓度（IC50）较对照组明显下降，ASODN可提高T24细胞对MMC的敏感性。结论Survivin ASODN转染L细胞后可特异性封闭Survivin的表达，对Caspase-3 mRNA的表达无明显作用，能激活Caspase-3无活性前体，从而诱导T24细胞凋亡，抑制细胞增殖，提高T24细胞对化疗药物MMC的敏感性。     

生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组：空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降；ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）；ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达，诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，具有明显的抗癌作用。     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用

目的探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901的凋亡诱导、对多西他赛的化疗增敏作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义寡核苷酸转染对照组（Lip-SODN组）、ASODN转染组（Lip-ASODN组）。转染48 h后,Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞survivin蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0.05）,对多西他赛的IC50值明显低于各对照组（P〈0.05）,细胞生长抑制率明显高于各对照组（P〈0.05）。结论survivin ASODN转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强多西他赛化疗敏感性。     

siRNA沉默livin基因对食管癌细胞生长与凋亡的影响

目的观察小分子干扰RNA（siRNA）沉默livin基因在食管癌细胞中的表达情况,探讨livin基因对食管癌细胞生长、凋亡的影响。方法自行设计两条针对livin基因的siRNA：livin—sh-1,livin—sh-2,构建相应的表达载体分别转染至对数生长期的食管癌,经G418筛选后采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、MTT、TUNEL分别比较检测转染前后食管癌细胞livin基因的表达。结果siRNA对照组与空siRNA载体组的livinw／β mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）;但转染siRNA组Livinl／2mRNA表达显著降低,明显低于siRNA对照组和空siRNA载体组（P〈0．05）。细胞生长曲线测定经F检验三组间差异无统计学意义。转染siRNA载体沉默livina／β表达,细胞凋亡率显著增加。结论siRNA沉默livin基因能抑制食管癌细胞的生长,促进食管癌细胞的凋亡,livin基因有可能成为食管癌治疗的新靶点。     

存活蛋白反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的观察存活蛋白反义寡核苷酸转染对食管癌细胞凋亡、增殖、对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成特异性存活蛋白反义寡核苷酸（ASODN）。食管癌EC109细胞系分为6组：空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、160、200、240nmol／L ASODN转染组。作用20h后收获各组细胞,Western blot法检测各组细胞生存素表达情况。TUNEL法检测各组细胞的凋亡情况。结果各ASODN转染组细胞存活蛋白表达有不同程度减弱,细胞变圆、折光增强、细胞碎片形成等,而各对照组细胞生长良好。各ASDON转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组（P〈0．05）,以240nmol／L转染组最明显（P〈0．05）。结论封闭食管癌细胞存活蛋白基因,能下调存活蛋白的表达,从而诱导食管癌细胞凋亡,抑制食管癌的发展。     

白英提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的：探讨白英提取物（Solanum lyratum Thunb extract，STE）对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响。方法：体外培养sGC-7901细胞，以2．5、5、10mg／LSTE处理sGC-7901细胞48小时，并以2．5mg／L顺铂（DDP）作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率，TUNEL法检测凋亡率，二步法免疫组化检测Survivin和Caspase-3表达。结果：与正常对照组相比，STE各浓度组细胞抑制率显著上升（P〈0．001），细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），Caspase-3蛋白表达显著上升（P〈0．05或P〈0．01），Survivin蛋白表达明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论：STE具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用，其分子机制可能与上调Caspase-3及下调Survivin蛋白熹主夭有姜．     

癌基因H—ras启动子区重新甲基化抑制胃癌细胞生长的实验研究

目的：探讨癌基因启动子区域重新甲基化对胃癌细胞生长的影响。方法：用S-腺苷甲硫氨酸（SAM）使胃癌细胞系MGC-803中癌基因H—ras启动子区域重新甲基化,MTT法检测肿瘤细胞生长状态;MSP法检测H—ras启动子区域甲基化状态;细胞免疫荧光染色检测H—RAS蛋白的表达。结果：胃癌细胞系MGC-803经SAM处理后癌基因H—ras启动子区域重新出现甲基化;经SAM处理的胃癌细胞组与对照组相比,细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义（P〈0．05）;H—RAS蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：SAM能够使MGC-803中癌基因H—ras启动子区域重新甲基化,降低H—RAS蛋白的表达水平,且有效抑制了肿瘤细胞的生长,从而为肿瘤治疗提供了新的靶点。     

Survivin siRNA对人脐静脉内皮细胞的survivin基因及蛋白表达与凋亡的作用

[摘要] 目的 探讨Survivin siRNA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的Survivin基因与蛋白表达与凋亡的影响。方法 合成Survivin siRNA转染混合物,以不同浓度转染HUVEC细胞, MTT法测定细胞生长抑制率, RT-PCR、Western blot检测HUVEC细胞Survivin mRNA及蛋白的表达变化,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 HUVEC细胞转染荧光标记的FAM-siRNA后,细胞内有绿色荧光表达。分别以10,30,50nmol/L Survivin siRNA转染细胞后,细胞生长抑制率、Survivin mRNA表达、Survivin蛋白表达与对空白照组、阴性对照组、脂质体对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。细胞凋亡率与对照组比较明显下降(P<0.01)。随着Survivin siRNA浓度的增加,细胞抑制率与细胞凋亡率呈上升趋势,Survivin mRNA及Survivin 蛋白的表达呈逐渐降低趋势。结论 Survivin siRNA能抑制HUVEC的Survivin基因表达与并促进其凋亡。     

舒林酸抑制胃癌BGC-823细胞生长的实验观察

目的:观察舒林酸对胃癌BGC-823细胞生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法:将舒林酸设置不同的作用浓度和作用时间于人胃癌BGC-823细胞共培养.采用MTT比色法检测胃癌细胞抑制率,流式细胞术检测胃癌细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组化检测细胞增殖(ki-67)、凋亡抑制基因(survivin)及还氧合酶(COX-2)蛋白的表达.结果:舒林酸使胃癌BGC-823细胞的生长受抑制,出现G0/G1期比例增高,S期比例降低,同时使细胞凋亡率显著上升;而ki-67、survivin及COX-2蛋白表达阳性率显著降低,上述作用均呈时间和剂量依赖性(P＜0.01).结论:舒林酸可抑制胃癌BGC-823细胞生长,其机制涉及影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡及抑制COX-2、ki-67及survivin蛋白的表达.     

Aspirin suppresses growth of human gastric carcinoma cell by inhibiting survivin expression

Regular use of aspirin (ASA) could reduce the risk of gastric cancer although the precise mechanism remains unclear.Down-regulation of survivin may be one of the cyclooxygenase-independent mechanisms whereby ASA induces apoptosis of gastric cancer cell.In this study,we investigated the effect of ASA on the growth,apoptosis and survivin expression of gastric cancer cell line SGC7901.The survival of cells treated with 3.0 and 10.0 mmol/L ASA for 24 h was decreased by 44.6% and 88.5%,respectively.ASA at 3.0 mm...     

多西他赛抑制胃癌MKN45细胞增殖的研究

目的: 探讨多西他赛治疗胃癌细胞的作用机制.方法: 采用不同浓度的多西他赛处理胃癌MKN45细胞后,四唑盐比色试验检测癌细胞生长,分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡,采用荧光实时定量PCR和Western blot检测存活素(survivin)基因mRNA、蛋白表达情况.结果: 多西他赛抑制胃癌MKN45细胞的恶性增殖,且呈浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳和TUNEL显示,多西他赛处理组出现凋亡现象,且呈浓度依赖性.多西他赛处理组存活素基因mRNA、蛋白表达下调,且呈时间和浓度依赖性.结论: 多西他赛体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖,与诱导凋亡,下调存活素基因表达有关.     

β-tubulinⅢ及survivin蛋白在胃癌中的表达及相互关系的研究

目的 探讨β-微管蛋白Ⅲ（β-tubulinⅢ）、生存素（survivin）在各期胃癌组织中的表达及两者之间的相互关系.方法 检测60例不同分期、分化程度胃癌组织标本中（胃癌组） β-tubulinⅢ、survivin的表达情况,并与30例正常无病变的胃黏膜标本（对照组）作比较.利用Bradford法定量检测β-tubulinⅢ与survivin在不同分化程度胃癌组织中的表达.结果 胃癌组β-tubulinⅢ阳性表达率36.7%,明显高于对照组的0%（P＜0.01）;胃癌组survivin阳性表达率58.3%,明显高于对照组的3.3%（P＜0.01）.β-tubulinⅢ在高、中、低分化胃癌组织中的表达率分别为11.11%、33.33%、44.44%,而survivin在高、中、低分化胃癌组织中的表达率分别为33.33%、53.33%、66.67%,差异有统计学意义（P＜0.05）.胃癌组织中β-tubulinⅢ与survivin表达的相关性,经Spearman分析两者呈正相关（P＜0.05）.结论 胃癌组织标本中存在β-tubulinⅢ、survivin的高水平表达,且与组织分化程度有关,两者表达呈正相关,β-tubulinⅢ、survivin可能共同导致了胃癌肿瘤细胞的异常增殖和异常凋亡,β-tubulinⅢ和survivin抑制剂与基因治疗可能会成为今后胃癌防治的一个主要方向.     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

DADS诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其与$mac和survivin表达的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导胃癌BGC823细胞凋亡及其机制。方法实验分DADS处理组和DADS未处理组．进行体外细胞培养,通过MTr法检测DADS对胃癌BGC823细胞生长的影响、通过流式细胞术检测细胞周期的分布、通过免疫组化检测smac和survivin蛋白的表达。结果MTT实验显示DADS作用于BGC823细胞后,细胞生长抑制率呈时间、浓度依赖性增高,流式细胞术显示DADS明显将细胞周期阻滞于G2/M期,且呈浓度、时间依赖性。免疫细胞化学显示处理组较未处理组snlae表达明显增加,而survivin蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论DADS可体外抑制人胃癌BGC823细胞增殖,使该细胞阻滞于G2／M期,其机制可能与上调smac及下调survivin的表达有关。     

胃癌细胞中miRNA-204过表达的作用

目的观察过表达miR-204对胃癌细胞生长、凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR检测胃癌细胞系中miR-204的表达,将其转染入胃癌细胞系,采用MTS及流式细胞术测定肿瘤细胞的生长、凋亡状况。结果 miR-204在不同胃癌细胞系中均是低表达,与组织中情况一致;过表达miR-204,未出现胃癌细胞生长减慢、凋亡增加的情况。结论过表达miR-204对胃癌细胞系的生长、凋亡无明显影响。     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

PTEN、survivin基因表达与胃癌化疗药物敏感性的相关性研究

目的研究原代培养胃癌细胞对化疗药物的敏感性,并进一步探讨其敏感性与胃癌组织中PTEN(phos-phatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)及survivin基因表达的关系,为胃癌的临床化疗提供个体化用药的实验资料和依据。方法取手术切除的新鲜胃癌组织标本,用MTT法检测经羟基喜树碱(HCPT)、顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、丝裂霉素(MMC)药物作用后肿瘤细胞活力及代谢活性的变化;同时取胃癌组织制成石蜡切片,用免疫组化检测PTEN、survivin蛋白的表达。结果 PTEN阳性表达与五种化疗药物的敏感性无关(P<0.05)。survivin阳性表达与5-FU及ADM耐药有关(P<0.05);survivin阳性表达与PTEN蛋白阳性表达呈负相关关系(rs=-0.668,P=0.000);结论 1、胃癌组织中survivin阳性表达者与5-FU及ADM耐药有关,提示survivin可作为胃癌原发性耐药标志之一。2、胃癌组织中PTEN的表达与survivin的表达呈负相关关系,提示两者在胃癌的发展中可能具有协同作用,两基因除各自直接作用外还可通过负性调节对方基因的表达而间接发挥功能。