输注供体白细胞治疗恶性血液病骨髓移植后复发

异基因骨髓移植 (ａｌｌｏ ＢＭＴ)后复发的治疗措施是非常有限的 ,移植后供者白细胞输注 (ＤＬＩ)可使许多恶性血液病移植后复发患者重新获得完全缓解 (ＣＲ)并长期无病生存。但作为一种治疗方法 ,亦有其局限性。现就ＤＬＩ的历史与现状、临床应用、并发症及防治方法等问题讲述如下。1　历史与现状　　Ｋｏｌｂ等在 1990年首次用供体白细胞输注治疗ａｌｌｏ ＢＭＴ后复发的慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ)患者 ,3例患者全部获得了血液学或细胞遗传学的ＣＲ ,许多研究也已肯定了ＤＬＩ可通过诱导移植物抗白血病 (ＧＶＬ)的产生而使复发患者再次获…     

1例单倍体供体淋巴细胞输注治疗白血病移植术后复发的个案护理

正异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)已成为治疗恶性血液病的主要方法之一,但移植后恶性血液病的复发降低了患者的长期生存率。急性白血病移植后复发是影响患者长期生存的最主要因素,如果复发后放弃治疗,生存时间仅为3~4个月~([1])。目前Allo-HSCT后复发的治疗包括停用免疫抑制剂、供者淋巴     

非清髓性造血干细胞移植研究进展

动物实验及临床均证实经非清髓性预处理可实现异基因造血干细胞移植时供体细胞的成功植入。这种减少毒性的预处理方法降低了移植相关风险及死亡,扩大了异基因移植的适应范围,动物GVHD的发生较常规移植减少,是造血干细胞移植治疗血液系统恶性与非恶性疾病的新进展。     

单倍体相合骨髓移植白血病患者造血重建的临床研究

为研究未去除T细胞的单倍体骨髓移植后造血重建的特点 ,对 15例HLA 2 - 3个位点不匹配骨髓移植亲属供者使用G CSF 3- 4 μg/ (kg·d) ,连续 7天后采髓。预处理方案采用大剂量阿糖胞苷联合环磷酰胺和全身照射。应用环孢菌素A和氨甲喋呤、抗胸腺细胞球蛋白及霉酚酸酯 (MMF)预防移植物抗宿主病。移植后观察血像、骨髓像、行染色体分析及HLA位点鉴定。移植后分别于 3,6和 12个月及 2年追踪鉴定植入状态。结果发现 ,15例患者全部移植物植入 ,移植后中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L和血小板 >2 0× 10 9/L的时间分别为 18(13- 2 3)天及 2 2 (16- 32 )天。骨髓像显示各系造血均恢复。 7例应用染色体检查 ,8例应用HLA位点 ,4例应用血型 ,1例应用DNA指纹检测 ,植入鉴定结果除 1例复发患者于移植后 2个月骨髓复发植入鉴定为供、受者嵌合外 ,其他患者均呈持续全部稳定植入。移植后发生I度急性GVHD 8例 ,II-IV度GVHD 5例 ,可评价的慢性GVHD共 8例。结论 :供者应用G CSF后采髓 ,加大预处理剂量 ,联合应用作用机理不同的多种免疫抑制剂进行HLA单倍体的骨髓移植 ,可跨越人类HLA多样性屏障。     

非清髓性异基因造血干细胞移植治疗高龄白血病

背景：非清髓异基因造血干细胞移植减轻了预处理强度,减少了移植相关的死亡。目的：分析非清髓性异基因造血干细胞移植治疗老年急性白血病的疗效及其安全性。方法：71岁急性单核细胞白血病M5b患者1例,行非清髓性异基因造血干细胞移植。供者为患者同胞弟弟,60岁,HLA5个位点相合,ABO血型相同。预处理用药包括采用氟达拉滨、塞替派、环磷酰胺和马利兰针剂。移植物抗宿主病预防用抗胸腺球蛋白、巴利昔单抗、环孢素A、麦考酚酯肠溶片及丙种球蛋白,移植后并发症防治和支持治疗：更昔洛韦防治巨细胞病毒感染、前列腺素E1、丹参、肝素及熊去氧胆酸防治肝静脉闭塞症,预处理后外周血中性粒细胞低于0.5×10^9L^-1时开始予粒细胞集落刺激因子5μg/（kg·d）促进造血重建。必要时输注辐照的浓缩红细胞和血小板,供者采用粒细胞集落刺激因子,连用7d,第6,7天采集外周血造血干细胞,当天输注给患者。结果与结论：移植后28d完成造血重建。移植后50d,行STR检测结果显示供受者100%一致。移植后＋20～30d陆续出现＂出血性膀胱炎＂、＂败血症（洋葱伯克霍尔德菌胞菌）＂,移植后2个月出现黄疸、肝功能损害,诊断＂急性移植物抗宿主病Ⅲ度（肝脏,3级）＂,经过抗感染、保肝、调整免疫抑制药物治疗后病情缓解。结果表明采用以氟达拉滨为基础的非清髓性外周血造血干细胞移植治疗有多种合并症老年急性白血病是一种有效安全的方法。     

非清髓性骨髓移植诱导异基因受者小鼠免疫耐受的实验研究

本研究通过非清髓性预处理方案联合髓腔内骨髓移植（IBM-BMT）建立异基因小鼠免疫耐受模型,并探讨其诱导耐受的机理.受鼠为雌性C57BL/6（H-2^b,B6）小鼠,于第0天接受^60Co γ线全身照射（TBI）,4小时内输注雄性BALB/c（H-2^d）小鼠来源的骨髓细胞（BMC）,2天后腹腔注射环磷酰胺（CTX）.通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应（MLR）检测耐受状态,并通过体外过继转移实验、IL-2逆转实验等探讨免疫耐受的机制.结果显示,经骨髓移植的B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物平均存活时间（MST）＞150天,较对照组明显延长（P＜0.01）;骨髓移植后第90天,受鼠（黑色）表型开始呈现供鼠（白色）颜色特征.MLR结果证明,B6小鼠获得供体特异性耐受,该耐受可以被IL-2逆转且可被过继转移;所有受鼠均未出现GVHD表现.结论：非清髓预处理联合髓腔内骨髓移植可以有效地诱导异基因小鼠免疫耐受,克隆无能、抑制细胞存在及嵌合体产生均参与耐受的形成.     

非清髓性造血干细胞移植研究进展

动物实验及临床均证实经非清髓性预处理可实现异基因造血干细胞移植时供体细胞的成功植入。这种减少毒性的预处理方法降低了移植相关风险及死亡,扩大了异基因移植的适应范围,动物GVHD的发生较常规移植减少,是造血干细胞移植治疗血液系统恶性与非恶性疾病的新进展。     

供者淋巴细胞输注治疗异基因骨髓移植后血液恶性肿瘤复？…

异基因骨髓移植因复发危险性高而在临床应用上受到限制。原供淋巴细胞输注（ｄｏｎｏｒｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｉｎｆｕｓｉｏｎ,ＤＬＩ）能有效地再次诱导一些异基因骨髓移植后的慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）等复发患的长期缓解。输注的异基因Ｔ细胞被患抗原呈递细胞呈递的白血病特异性抗原激活,在细胞因子和共刺激分子辅助下产生移植物抗白血病效应,从而特异性地清除肿瘤细胞。移植物抗宿主病和骨髓抑制为ＤＬＩ常见并发症     

供体淋巴细胞输入治疗慢性髓细胞白血病复发的研究进展

毋庸置疑 ,近十年来临床造血干细胞移植中最显著的成就之一是证明同种异体Ｔ淋巴细胞可治疗慢性髓细胞白血病 (ＣＭＬ) ,因此建立新型过继免疫疗法治疗造血系统恶性病已成为这一领域中的研究热点。目前 ,供体淋巴细胞输入(ＤＬＩ)是治疗异基因造血干细胞移植 (ａｌｌｏ ＨＳＣＴ)后ＣＭＬ复发的最有效方法 ,可使大多数患者再次进入缓解期。我们对ＣＭＬ复发后ＤＬＩ治疗的机制、移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)的防治策略以及白血病抗原特异性免疫应答等方面的研究进展进行综述。1　ＤＬＩ治疗ＣＭＬ复发　大量的临床资料表明ａｌｌｏ ＨＳＣＴ有…     

同一供者外周血单个核细胞输注治疗单倍相合骨髓移植后白血病复发

本研究探讨同一供者外周血单个核细胞输注（DMNCI）治疗单倍相合骨髓移植后白血病复发的疗效和安全性。3例单倍相合骨髓移植后白血病复发患者接受G-CSF动员的DMNCI治疗,其中例1和例2骨髓移植前分别为ph＋急性淋巴细胞性白血病伴中枢神经系统侵犯部分缓解及慢性粒细胞性白血病急性变部分缓解,在骨髓移植后这两例均血液学复发,各接受单次DMNCI,单个核细胞剂量分别为8.25×10^8/kg和5.24×10^8/kg;CD3^＋细胞剂量分别为1.87×10^8/kg和1.14×10^8/kg。第3例骨髓移植前为CML急性变,治疗后并达缓解。移植后分子水平复发,接受逐渐提高单次细胞数量的分次输注,首次DMNCI剂量为2.0×10^7/kg,CD3^＋细胞剂量为1.1×10^7/kg。同时观察3例患者输注后白血病缓解情况及并发症。结果显示,3例患者均出现不同疗效,2例血液学复发患者骨髓均暂时缓解,但分别于DMNCI后41、48天死于严重移植物抗宿主病（GVHD）、复发及衰竭。分子水平复发患者分次接受DMNCI,输注2次后达分子水平缓解,STR-PCR测定证实为供者基因型。3例均发生急性GVHD,2例接受单次剂量输注者发生Ⅳ度以上GVHD,1例接受分次输注患者发生Ⅰ度GVHD。3例均未发生明显骨髓抑制,分子水平缓解者随访半年无病生存。结论：DMNCI可能具有抗白血病作用,可用于单倍相合骨髓移植后白血病复发的治疗,对分子水平复发者的疗效较对血液学复发者好;输注MNC为×10^8/kg后GVHD严重。DMNCI起始剂量×10^7/kg并逐渐提高单次剂量的分次输注方法更为安全。     

急性白血病患者HLA半倍相合骨髓移植后供者源复发2例

为了探讨半倍相合骨髓移植后急性白血病患者的复发情况，对2例接受半倍相合骨髓移植后出现白血病复发的急性白血病患者进行了外周血、骨髓检查、骨髓细胞形态观察及HLA基因型和染色体核型分析。结果发现。2例原发病分别为急性淋巴细胞白血病（普通细胞型）和急性巨核细胞白血病，且2例白血病细胞均有染色体畸变或癌基因突变、活化，2例骨髓移植后完全供者源造血重建，但2例复发后白血病细胞均来源于供者源，血型和HLA分型均为供者型，复发后2例诊断为急性淋巴细胞白血病（B细胞型）和急性巨核细胞白血病。这一结果提示，供者源复发可能与移植后应用大剂量免疫抑制剂有关，化疗、放疗以及受者本身造血微环境异常也可能参与了二次白血病的发生过程。异基因造血干细胞移植后供者源复发可能是研究人白血病发生的适宜模式。     

小鼠H-2单倍相合非清髓骨髓移植后细胞因子表达的动态研究

为了探讨H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植后细胞因子表达变化在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发生发展中的意义，建立了H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植模型，环孢菌素A（CsA）联合霉酚酸酯（MMF）预防aGVHD，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测移植后不同时间点上小鼠脾脏中IL-2、INF-γ、IL-4及IL—10的mRNA的表达。结果显示：仅接受非清髓性预处理小鼠的脾脏中各因子的mRNA表达较预处理前略有升高。未做aGVHD预防给药的小鼠（第2组）IL-2、IFN-γ的mRNA表达水平在移植后急剧升高，分别在21天、14天达峰值，之后显著下降，35天时基本恢复至移植前水平。接受GVHD预防给药的小鼠（第3组）IL-2、IFN-γ的mRNA表达的变化趋势与第2组相似，但峰值明显低于第2组。第2组和第3组小鼠IL-4的mRNA表达水平均在移植后14天达峰值，但第3组的峰值较第2组为高，且在此后的下降中较第2组缓和。IL—10的mRNA表达水平在移植后逐渐升高，在14天达到一个高峰，21天时下降，之后再次升高直至35天。结论：H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植后脾脏内IL-2、IFN-γ、IL-4及IL—10均呈上调表达，应用CsA和MMF则可下调IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平，从而降低了aGVHD的发生率和严重程度。     

单倍相合骨髓移植术后中枢神经系统并发症

为了探讨单倍体骨髓移植术后神经系统并发症的发生情况,对10例单倍相合骨髓移植术后神经系统并发症的发生时间、病因、治疗措施及预后等临床资料进行了总结分析.结果表明：74例接受单倍体相合骨髓移植病人中10例发生并发症,其中3例病人出现脑出血,感染3例（真菌感染,CMV脑炎,单纯疱疹病毒性脑炎各1例）,癫痫、格林-巴利综合征、脑病和精神分裂症各1例,因神经系统并发症直接导致死亡的患者4例.结论：神经系统并发症是单倍相合骨髓移植术后常见的严重并发症之一,并导致较高的死亡率,尤其是脑出血对病人的威胁较大;单倍相合骨髓移植术后免疫重建缓慢,对相关感染并发症和周围神经的病变应引起重视.     

非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究

本研究目的是探讨经受者皮肤致敏后的异基因供者淋巴细胞输注(DLI)是否能在促进形成完全供者嵌合(CC)的同时减轻移植物抗宿主病(GVHD)。以C57BL/6小鼠(H-2b,B6)为受者,于第0天接受60Coγ线全身照射(TBI),总剂量为5.5Gy,照射当天移植经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的BALB/c小鼠(H-2d,BA)外周血干细胞(2×107个),移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示,致敏后DLI的受鼠(黑色)无1例出现GVHD,60天时转变为完全供者嵌合,表型明显呈现为供鼠(白色)特征,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降,半月后有所升高,但仍低于正常水平;未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD,嵌合率稍有上升,仍表现为混合嵌合体(MC),CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高,后期降至正常水平。结论:经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率,CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。     

单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症

为了探讨单倍体相合骨髓移植术后不同时期肺部并发症发生情况，对18例单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症的发生时间、病因、治疗措施及预后等临床资料进行了总结分析。结果表明：70例接受单倍体相合骨髓移植病人中18例发生肺部并发症，其中细菌性肺炎7例，发生在移植后3-12月，治疗过程中继发真菌感染4例；肺真菌病5例，CMV肺炎4例，均发生在移植后2-3月；阻塞性细支气管炎伴机化性肺炎1例，发生在移植后12月；原发肺炎综合征1例，发生在移植后50天；因肺部并发症直接导致死亡8例。结论：单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症是移植术后常见并发症，主要是真菌肺炎，对病人威胁较大。     

猕猴非清髓单倍相合造血干细胞移植模型的建立

为了研究用非清髓预处理是否能建立猕猴单倍相合造血干细胞移植模型，采用健康、单倍相合的亲代猕猴为供者，子代为受者。受体用氟达拉滨＋环磷酰胺＋全身照射＋兔抗人胸腺细胞球蛋白作非清髓性预处理；用环胞菌素A、霉酚酸酯、鼠抗人CD25单克隆抗体作为移植物抗宿主病（GVHD）预防方案；第0天输注供者动员后的外周血造血干细胞；定期监测造血恢复、造血嵌合水平和GVHD发生等情况。结果表明：4例猕猴用非清髓性预处理后，移植后8天内造血均能恢复，早期均有供者造血干细胞植入；例3、例4植入成功，在移植后12、14天出现Ⅱ-Ⅲ度GVHD；例1在移植后7天低比例供者植入，最后出现移植排斥；例2在移植后7天供者成分占50％，后因肾衰早期死亡。结论：用非清髓性预处理可以跨越单倍相合猕猴的MHC屏障，成功建立了单倍相合造血干细胞移植的模型。为进一步买验研究奠定了基础。     

环孢菌素A联合霉酚酸酯预防小鼠H-2半相合非清髓性骨髓移植后GVHD的发生

为探讨环孢菌素A(CSA)联合霉酚酸酯 (MMF)方案对小鼠主要组织相容性抗原 (H 2 )半相合非清髓性骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的预防作用 ,建立了H 2半相合小鼠 (供鼠为C5 7BL/6J,受鼠为C5 7BL/6J×BALB/C杂交F1代小鼠 )的非清髓性骨髓移植模型。采用CSA +MMF或CSA +MTX作为aGVHD预防方案 ,观察 5 0天 ,记录受鼠发生aGVHD情况。结果显示 ,未做aGVHD预防的小鼠在移植后 2 2 - 2 5天出现典型的aGVHD症状 ,aGVHD发生率为 75 % (15 /2 0 ) ,致死率为 10 0 % (15 /15 )。接受aGVHD预防的小鼠 ,aGVHD症状和病理表现均明显减轻 ,CSA +MTX方案组aGVHD发生率为 4 0 % (8/2 0 ) ,致死率为 6 2 .5 % (5 /8) ,CSA +MMF方案组aGVHD发生率为 30 % (6 /2 0 ) ,致死率为 5 0 % (3/6 ) ,均显著低于未预防组 (P <0 .0 5 ) ,但两预防组之间无显著性差异。结论 :CSA +MTX预防方案能有效降低H 2半相合非清髓性骨髓移植小鼠aGVHD的发生率和致死率 ,而CSA +MMF方案能进一步减轻aGVHD的症状及病理损害程度。     

异基因反应性NK细胞在供者淋巴细胞输注治疗单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发中的作用研究

本研究旨在探讨预处理中并基因反应性NK细胞（allo—reactive NK cells,Allo—NK）在供者淋巴细胞输注（DLI）治疗单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发中的作用。采用免疫磁珠富集F1供鼠（H-2^d/b）脾脏allo—NK,流式细胞术和LDH法检测其异体反应性。建立小鼠单倍体相合造血干细胞移植后肺癌复发模型,采用放射性核素标记法追踪DLI的体内分布。比较不同处理组小鼠的肿瘤大小、淋巴细胞浸润程度,采用RayBio小鼠细胞因子抗体芯片检测血清中22种细胞因子的变化。结果表明：在移植后24—48小时,allo—NK组的回输供者淋巴细胞在受者肺脏、脾脏、肾脏中明显蓄积,浓度最高,时间最长。化疗＋DLI组与化疗＋PBS组的肿瘤体积相比无明显区别,但allo．NK＋DLI组的肿瘤体积显著小于化疗＋DLI组（P〈0．05）和allo—NK＋PBS组（P〈0．01）组,且镜下可观察到肿瘤局部较多的淋巴细胞浸润。allo—NK＋DLI组中MCP-1、IL-17、IL—12和MCP-5较对照组分别升高1．56、1．36、1.20、1．17倍;而IL-10降低42．8％。结论：allo-NK可以延长DLI在宿主体内停留时间,促进炎性因子和Th1类细胞因子分泌,抑制肿瘤生长,提高DLI治疗移植后肺癌复发的疗效。