鸦胆子油乳对胶质瘤U251作用的研究

目的该实验拟研究鸦胆子油乳注射液对人脑胶质瘤U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法体外培养人脑胶质瘤细胞U251,利用MTT比色法检测鸦胆子油乳注射液对于U251的增殖抑制影响;用流式细胞术(flowcytometry,FCM)分析药物处理前后U251的细胞周期变化;实时荧光定量PCR检测不同处理组中凋亡基因Bcl-2的表达。结果 MTT显示鸦胆子油乳注射液对U251细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,当浓度为10 g.L-1时,对U251细胞增殖的抑制率达到(75.8±2.3)%(P<0.05);流式细胞仪分析显示,用10 g.L-1鸦胆子油乳注射液培养48 h,细胞周期中G1期所占比例增高,S期占细胞周期的比例降低;实时荧光定量PCR结果显示随着鸦胆子油乳注射液的浓度增加凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达逐渐减少。与对照组比较P<0.01。结论中药鸦胆子油乳注射液可显著抑制U251胶质瘤细胞细胞增殖及促进其凋亡。     

MEK信号通路活化在榄香烯致人源U87MG胶质瘤细胞增殖抑制及G0/G1细胞周期阻滞中的作用

目的探讨MKK3和MKK6在榄香烯致人U87MG胶质瘤细胞增殖抑制和细胞周期阻滞中的作用。方法以不同浓度榄香烯作用于人U87MG及U251胶质瘤细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性。West-ern blot检测MEK信号通路中MKK3和MKK6的总蛋白及磷酸化蛋白含量。通过转染显性负突变质粒DN-MKK3和DN-MKK6,抑制MKK3和MKK6的活性。然后分别行MTT法和流式细胞术检测榄香烯对胶质瘤细胞的增殖抑制和细胞周期阻滞作用。结果榄香烯显著抑制了人胶质瘤细胞的增殖,呈时间和浓度依赖性,并可使细胞中MKK3和MKK6的磷酸化水平上调。抑制MKK3和MKK6的活性则可显著削弱榄香烯的抗胶质瘤增殖和G0/G1细胞周期阻滞作用。结论榄香烯可以通过将胶质瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,进而有效地抑制肿瘤细胞增殖,且MKK3和MKK6信号通路的激活在其中发挥着不可或缺的作用。     

山酮类化合物抑制人脑胶质瘤细胞增殖活性及作用机制探讨

目的检测3种山酮类化合物对人脑肿瘤细胞(T-98、U251SP和KT)增殖的抑制作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法研究从3种微生物次生代谢产物中纯化的山酮类化合物对人脑肿瘤细胞增殖的抑制作用。MTT比色法检测细胞增殖抑制率;利用双荧光素酶报告基因检测系统检测p53和Bax报告基因的表达;采用Western blot分析与凋亡相关的蛋白表达变化。结果 Austocystin H对KT细胞的增殖显示极强的抑制活性,呈剂量依赖性,IC50仅为0.69μmol.L-1;Austocystin H可诱导KT细胞内Bax报告基因表达(P<0.01);Western blot分析结果显示由Austocystin H处理的KT细胞中的p53和Bax的表达与对照组相比增加(P<0.05)。结论 Austocystin H具有极强的抑制人脑肿瘤细胞增殖作用,其作用机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

榄香烯抑制Raf/MEK/ERK信号通路诱导人源胶质瘤U87细胞凋亡

目的探讨莪术提取物榄香烯体外诱导胶质瘤细胞凋亡的机制。方法采用流式细胞术、West-ern印迹等方法,分别检测不同浓度榄香烯对人源U87胶质瘤细胞的凋亡诱导及其对U87细胞Raf-1、ERK、癌基因Bcl-2蛋白质表达的影响。结果榄香烯对人源U87胶质瘤细胞具有明显的凋亡诱导作用,该增殖抑制效应呈时间依赖性。榄香烯可明显下调U87细胞的磷酸化Raf-1、ERK、Bcl-2表达。结论体外榄香烯对胶质瘤细胞具有明显的凋亡诱导作用(呈时间依赖性),抑制Raf/MEK/ERK信号通路,从而下调其下游信号癌基因Bcl-2的表达,最终启动凋亡程序可能是榄香烯诱导U87细胞凋亡的机制。     

榄香烯阻碍大鼠胶质瘤C6细胞ERK信号通路中Hsp90/Raf-1分子复合体的形成

目的探讨莪术提取物榄香烯抑制胶质瘤细胞体外增殖的机制。方法采用细胞计数、免疫共沉淀、Western印迹等方法,分别检测不同浓度、不同作用时间榄香烯对C6胶质瘤细胞的增殖影响、对C6细胞中与Raf-1结合形成分子复合体的Hsp90水平的影响、对C6细胞Hsp90、Raf-1、ERK蛋白质表达的影响。结果榄香烯对大鼠C6胶质瘤细胞具有明显的抑制增殖作用,该增殖抑制效应呈剂量、时间依赖性。榄香烯可明显下调C6细胞中与Raf-1结合的Hsp90水平及C6细胞的磷酸化Raf-1、ERK表达,但不影响总Hsp90的表达水平。结论榄香烯能有效抑制胶质瘤细胞的体外增殖,破坏Hsp90的分子伴侣功能,阻碍Hsp90/Raf-1复合体的形成,使Raf-1不能被活化,最终下调胶质瘤细胞赖以生存的Raf/MEK/ERK通路,这可能是榄香烯抑制C6细胞增殖的机制。     

蟾毒灵对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响

摘 要 目的：探讨蟾毒灵(Bufalin)对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响。方法: 采用四甲基偶氮蓝（MTT）比色法检测Bufalin对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响;倒置显微镜观察各组细胞数目、形态及活性的变化;膜联蛋白（AnnexinV）碘化丙啶（PI）标记法检测其对细胞凋亡的影响。结果: 不同浓度Bufalin对U251细胞增殖活性具有不同程度的抑制作用,在0.001～10 μmol·L^-1浓度范围内呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,Bufalin给药组对U251细胞的凋亡率均显著增高（P<0.01）。结论:Bufalin可显著抑制U251细胞的生长增殖,并在一定范围内呈浓度和时间依赖性,诱导其凋亡。     

GMF-β与MEK信号通路cross-talk介导榄香烯的抗胶质瘤作用

目的探讨神经胶质成熟因子-β(Glia Maturation Factor-β,GMF-β)在榄香烯致人U87MG胶质瘤细胞增殖抑制中的作用。方法以不同浓度榄香烯作用于人U87MG胶质瘤细胞,噻唑蓝(Methyl Thiazolyl Tet-razolium,MTT)法检测细胞活性。免疫沉淀联合Western blot法检测经榄香烯处理的U87MG细胞中总GMF-β及磷酸化GMF-β(p-GMF-β)蛋白的表达水平。通过RNA干扰技术使GMF-β的表达沉默,然后以MTT法检测榄香烯的抗胶质瘤增殖能力。Western blot法检测榄香烯对丝裂原活化蛋白激酶激酶3/6(Mitogen-activated Protein Ki-nase Kinase 3/6,MEK3/6)的激活作用是否因GMF-β的沉默而受到影响。结果榄香烯显著抑制了人U87MG细胞的增殖,并可使GMF-β、MEK3和MEK6的磷酸化水平上调。沉默GMF-β的表达导致MEK3和MEK6的磷酸化水平下调,榄香烯的抗胶质瘤细胞增殖作用减弱。结论 GMF-β与MEK信号通路的交互作用(cross-talk)介导了榄香烯的抗人胶质瘤细胞增殖作用。     

白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白表达的影响

探讨白藜芦醇对U251人脑胶质瘤细胞生长的抑制和相关蛋白的表达及其意义.采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响;采用ABC免疫组化法检测相关Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白的表达.结果显示,白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞生长有抑制作用,且呈时间、剂量相关;白藜芦醇作用于U251脑胶质瘤细胞后Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1、STAT-3蛋白表达下降,同时细胞形态也发生改变.白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖,能诱导细胞凋亡.     

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂致U251细胞周期阻滞、凋亡及其机制的研究

目的探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)2,2,3,3-四甲基环丙酰硫脲(TCCT)诱导人脑胶质瘤U251细胞周期阻滞、凋亡及其作用机制。方法以不同药物浓度与U251细胞共同培养48 h后,采用MTT法检测药物作用48 h后肿瘤细胞的增殖。药物作用24 h后,采用RT-PCR检测肿瘤细胞的p21WAF1/CIP1与Cyclin D1 mRNA的表达,Western blot检测HDAC3、HDAC4、Cyclin D1与p21WAF1/CIP1蛋白的表达,PI单染法分析细胞周期,Annexin V-PI双染法检测肿瘤细胞凋亡。结果 TCCT对U251细胞增殖具有明显抑制作用,药物干预48 h时的IC50为(0.461±0.108)mmol·L-1,并呈现剂量依赖性。TCCT药物干预24 h后U251细胞p21WAF1/CIP1mRNA表达上调,Cyclin D1 mRNA下调;组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)和组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)表达下调,Cyc-lin D1蛋白表达弱下调,p21WAF1/CIP1蛋白表达上调;S期细胞比例明显提高(P<0.05);细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。结论 TCCT对U251细胞增殖有明显的抑制作用,引起肿瘤细胞S期阻滞和凋亡。其作用机制可能与其下调HDAC3、HDAC4表达,促进组蛋白乙酰化,而影响p21WAF1/CIP1和Cyclin D1的基因、蛋白的表达有关。     

高密度Oligo基因芯片检测榄香烯对胶质瘤U251细胞凋亡相关基因的影响

目的应用高密度Oligo基因芯片技术检测榄香烯对胶质瘤U251细胞凋亡相关基因的影响。方法实验分2组,实验组用含有终浓度为0.062mg/ml榄香烯作用于U251细胞24h,对照组为未行任何处理的U251细胞。抽提2组U251细胞的总RNA并逆转录合成Cy5、Cy3标记的cDNA,混合后杂交含22000个人类基因的人类高密度Oligo基因芯片,经过洗片和扫描,获得荧光信号图像并用计算机分析,随机抽取4种差异表达基因用PCR验证。结果按差异显著性标准,从22000条基因中筛选出差异表达基因179条,其中11个凋亡相关基因表达上调,15个凋亡相关基因表达下调。主要包括细胞周期蛋白、细胞凋亡、细胞骨架和运动蛋白等相关基因。结论榄香烯能够影响胶质瘤细胞相关凋亡基因的改变,而基因芯片技术有效分析其基因表达谱,有助于认识胶质瘤药物治疗的机制。     

HEF1对神经胶质瘤细胞U251的增殖﹑凋亡、侵袭和迁移的研究

目的：探讨HEF1对神经胶质瘤细胞U251增殖、凋亡、侵袭和迁移影响情况。方法通过RT-PCR、Western Blot检测脑组织正常标本与胶质瘤细胞U251中HEF1的表达水平,化学合成HEF1基因小干扰RNA（siRNA）下调其基因表达,检测siRNA对U251细胞的生物学行为的影响。MTT法、Transwell、Hochest染色分别检测细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡。结果HEF1基因在正常脑组织标本中的表达水平明显低于胶质瘤细胞。与对照组相比,干扰HEF1的表达,神经胶质瘤细胞U251增殖、侵袭和迁移能力受到显著抑制,细胞凋亡明显增强。结论HEF1促进神经胶质瘤恶性增殖及侵袭,抑制细胞凋亡,有可能成为分子治疗有效靶点。     

氯普鲁卡因通过调控长链非编码 RNA TTN?AS1表达对胶质瘤细胞增殖和转移的影响

目的 探讨氯普鲁卡因(CP)对胶质瘤细胞增殖和转移的影响及分子机制.方法 用浓度为1 mmol/L、3 mmol/L、9 mmol/L的CP培养U251细胞作为CP低、中、高浓度组;未经任何处理的细胞作为对照组;此外将U251细胞分为si-NC组、si-TTN-AS1组、CP+pcDNA组、CP+pcDNA-TTN-AS1组.噻唑兰(MTT)检测细胞增殖抑制率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA TTN-AS1表达水平.结果 CP处理胶质瘤U251细胞后,细胞增殖抑制率升高,细胞迁移侵袭数以及TTN-AS1表达水平降低(P<0.05).抑制TTN-AS1表达可抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭.TTN-AS1过表达逆转了CP对U251细胞的作用.结论 CP通过下调lncRNA TTN-AS1表达抑制胶质瘤细胞增殖和转移.     

过表达miRNA-495联合替莫唑胺对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响 #br#

目的探讨过表达微小RNA（miRNA）-495联合替莫唑胺（TMZ）对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及其 作 用 机 制 。 方法 将 miRNA-495 类 似 物（miRNA-495 mimics）以 及 阴 性 对 照 序 列（miRNA-495 NC）应 用 LipofectamineTM 2000转染至神经胶质瘤U251、A172细胞中,并设空白对照组。采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测 转染后miRNA-495、高迁移率族核小体结合域5（HMGN5）mRNA的相对表达量;Western blot法检测HMGN5及基质金 属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达水平;CCK-8检测神经胶质瘤细胞的增殖能力。miRNA-495 mimics和TMZ单独或联 合作用于U251细胞后,应用CCK-8、流式细胞术检测神经胶质瘤细胞增殖及凋亡情况。 结果在神经胶质瘤U251、 A172 细胞中,与空白对照组和 miRNA-495 NC 组比较,miRNA-495 mimics 组 miR-495 相对表达量升高,HMGN5 mRNA相对表达量及HMGN5、MMP-9蛋白表达量均降低;且细胞增殖能力明显减弱（P＜0.05）。在神经胶质瘤U251 细胞中,与TMZ组和miRNA-495 mimics组比较,TMZ+miRNA-495 mimics组细胞增殖能力明显被抑制,细胞凋亡明 显增加。 结论过表达miRNA-495与化疗药物TMZ联合应用可协同抑制神经胶质瘤细胞增殖、促进细胞凋亡;其机 制可能是通过抑制HMGN5/MMP-9信号通路实现的。     

吗啡对增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达的影响

目的 :研究吗啡对培养的大鼠胶质细胞瘤C6的增殖抑制作用及其机制。方法 :3H -TdR掺入法测定吗啡对细胞增殖的影响 ;RT -PCR方法观察吗啡对细胞PCNA基因表达的影响。免疫组织化学法观察吗啡对细胞PCNA蛋白质水平的影响。结果 :不同浓度吗啡 (0 0 0 1- 10 0mg·L- 1 )作用于培养C6细胞 2 4h后 ,3H -TdR掺入量剂量依赖性降低。不同浓度吗啡 (0 0 0 1- 10 0mg·L- 1 )作用于培养C6细胞 2 4h后 ,细胞PCNAmRNA的相对含量与对照组相比均明显减少 (P <0 0 1)。 10mg·L- 1 吗啡作用细胞 6 - 4 8h后 ,不同时间点吗啡组细胞的PCNAmRNA的相对含量与对照组相比均明显减少 (P <0 0 1)。10mg·L- 1 吗啡作用细胞 2 4h后 ,与相邻吗啡组比较细胞内PCNA蛋白质水平明显降低 (P <0 0 1)。结论 :吗啡对胶质细胞瘤C6的增殖具有抑制作用 ,其机理可能与吗啡使细胞中PCNA的基因表达水平降低有关。     

榄香烯哌嗪对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的研究榄香烯哌嗪的抗肿瘤作用及其对免疫功能的影响。方法采用小鼠S180肉瘤移植性肿瘤动物模型,以抑瘤率为指标考察榄香烯哌嗪的体内抗肿瘤活性。并用四氮唑盐(MTT)法对荷瘤小鼠进行脾淋巴细胞增殖能力和自然杀伤(NK)细胞活性测定,考察其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果榄香烯哌嗪对小鼠肉瘤S180的生长有明显的抑制作用(P<0.01),502、5 mg.kg-1剂量组抑瘤率分别为48.74%和37.60%。榄香烯哌嗪各种剂量对荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数无明显影响,但榄香烯哌嗪剂量为502、5 mg.kg-1可显著提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,对荷瘤小鼠NK细胞活性也有明显的提高作用。结论榄香烯哌嗪具有一定的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用可能与激活体内免疫系统有关。     

榄香烯静脉输注浓缩液对G422小鼠神经胶质瘤疗效的实验研究

目的测定榄香烯静脉输注浓缩液小鼠体内实验抗肿瘤疗效。方法用CremophorEL作增溶剂配合丙二醇制成2%榄香烯静脉输注浓缩液。以静脉注射(40、20、10mg/kg)或腹腔注射(80、60、40mg/kg)途径给药,静脉给药组每天2次,腹腔给药组每天1次,连续给药5d进行榄香烯注射液动物脑瘤G422(颅内接种)模型抗肿瘤疗效实验。结果榄香烯静脉输注浓缩液体内对动物脑瘤G422(颅内接种)模型肿瘤生命延长率为:静脉给药方案:高剂量组为56·07%~59·16%,中剂量组为45·55%~47·98%,低剂量组为31·25%~38·22%,生命延长率比较明显;腹腔给药方案:高剂量组为12·0%~24·0%,中剂量组35·1%~37·0%,低剂量组为30·9%~36·1%。若以静脉给药80mg/kg,每天1次,连续10d给药,结果显示其生命延长率为52·60%~57·07%。结论榄香烯静脉输注浓缩液对小鼠神经胶质瘤G422(颅内接种)模型有一定的抑制作用。