大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡的实验研究

目的检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcells,HRCEC)的直接影响。方法HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol/L或25mmol/L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果HRCEC细胞在25mmol/L葡萄糖中培养6d,细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定,凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡,这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。     

牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞凋亡的防护研究

目的观察高糖培养条件及牛磺酸干预视网膜Mueller细胞的凋亡变化，探讨牛磺酸对早期糖尿病视网膜Mueller细胞的保护作用。方法取出生后3d的SD大鼠视网膜，分离纯化培养视网膜Mueller细胞；经预实验选取25mmol／L葡萄糖作为高糖培养条件，实验分为6组：正常组；高糖＋0．1mmoL／L牛磺酸组；高糖＋1mmoL／L牛磺酸组；高糖＋5mmol／L牛磺酸组；高糖＋10mmol／L牛磺酸组，用原位缺口末端标记法（TUNEL）法检测视网膜Mueller细胞凋亡并观察牛磺酸的防护效应。结果神经胶质酸性蛋白（glialfn）rillary acid protein，GFAP）和S-100荧光双染鉴定纯化培养的视网膜Mueller细胞均被双染；牛磺酸干预后TUNEL阳性细胞数量明显减少，并呈一定剂量的关系效应，1～10mmol／L牛磺酸干预TUNEL阳性细胞显著低于高糖培养组（P〈0．01）。结论牛磺酸能够呈剂量依赖性地抑制高糖所致视网膜Mueller细胞凋亡。     

高糖对牛视网膜微血管内皮细胞损伤的实验研究

目的　利用体外培养的牛视网膜微血管内皮细胞来观测高浓度葡萄糖在细胞的损伤中所起的作用。方法体外培养牛视网膜微血管内皮细胞。通过MTT (四唑氮盐 )法及3 H -TDR掺入法研究高糖对牛视网膜微血管内皮细胞的损伤作用。结果　内皮细胞在含高糖 (2 8、 4 0mmol/L)DMEM培养基及不同培养时间 (2d、 7d)下MTT测定结果与对照组 (生理浓度葡萄糖 ,5 5mmol/L)比较有显著性差异P <0 0 5 ,3 H -TDR掺入法研究结果显示高糖对视网膜微血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用 ,亦呈剂量及时间依赖性损伤细胞。结论　高浓度葡萄糖对牛视网膜微血管内皮细胞有显著的损伤作用     

牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜Mller细胞凋亡的防护研究

目的观察高糖培养条件及牛磺酸干预视网膜Mller细胞的凋亡变化,探讨牛磺酸对早期糖尿病视网膜Mller细胞的保护作用。方法取出生后3d的SD大鼠视网膜,分离纯化培养视网膜Mller细胞;经预实验选取25mmol/L葡萄糖作为高糖培养条件,实验分为6组:正常组;高糖 0.1mmol/L牛磺酸组;高糖 1mmol/L牛磺酸组;高糖 5mmol/L牛磺酸组;高糖 10mmol/L牛磺酸组,用原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测视网膜Mller细胞凋亡并观察牛磺酸的防护效应。结果神经胶质酸性蛋白(glia1fibrillary acid protein,GFAP)和S-100荧光双染鉴定纯化培养的视网膜Mller细胞均被双染;牛磺酸干预后TUNEL阳性细胞数量明显减少,并呈一定剂量的关系效应,1～10mmol/L牛磺酸干预TUNEL阳性细胞显著低于高糖培养组(P<0·01)。结论牛磺酸能够呈剂量依赖性地抑制高糖所致视网膜Mller细胞凋亡。     

高糖诱导的视网膜胶质细胞凋亡以及牛磺酸的防护效应研究

目的通过检测高糖和牛磺酸培养对大鼠视网膜胶质细胞凋亡的影响,探讨牛磺酸保护糖尿病引起视网膜损伤的机制。方法实验分为10组,分别为：5mmol/L葡萄糖培养组（正常葡萄糖）;5mmol/L葡萄糖＋（0.1、1和10mmol/L）牛磺酸培养组;25mmol/L葡萄糖培养组（高葡萄糖）;25mmol/L葡萄糖＋（0.1、1和10mmol/L）牛磺酸培养组;5mmol/L和25mmol/L葡萄糖＋20mmol/L甘露醇组。用免疫细胞荧光双标法鉴定胶质细胞,用Annexin-V/PI双染结合流式细胞检测技术检测大鼠视网膜胶质细胞的凋亡情况。结果与正常对照组相比,25 mmol/L高糖组胶质细胞凋亡明显,高糖组的早期凋亡细胞百分率为20.6%;加入0.1、1、10mmol/L牛磺酸干预后,高糖组细胞凋亡率分别降为16.4%、5.7%和7.6%,牛磺酸干预组胶质细胞凋亡率明显低于高糖组（P〈0.05）。结论体外高糖培养可诱导大鼠视网膜胶质细胞发生凋亡,而牛磺酸对胶质细胞凋亡具有保护效应。上述结果可为牛磺酸用于糖尿病早期视网膜病变的防治提供重要的实验依据。     

牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞凋亡的防护研究

目的 观察高糖培养条件及牛磺酸干预视网膜Müller细胞的凋亡变化,探讨牛磺酸对早期糖尿病视网膜Müller细胞的保护作用.方法 取出生后3 d的SD大鼠视网膜,分离纯化培养视网膜Müller细胞;经预实验选取25 mmol/L葡萄糖作为高糖培养条件,实验分为6组:正常组;高糖 0.1 mmol/L牛磺酸组;高糖 1 mmol/L牛磺酸组;高糖 5 mmol/L牛磺酸组;高糖 10 mmol/L牛磺酸组,用原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测视网膜Müller细胞凋亡并观察牛磺酸的防护效应.结果 神经胶质酸性蛋白(glia1 fibrillary acid protein, GFAP)和S-100荧光双染鉴定纯化培养的视网膜Müller细胞均被双染;牛磺酸干预后TUNEL阳性细胞数量明显减少,并呈一定剂量的关系效应,1～10 mmol/L牛磺酸干预TUNEL阳性细胞显著低于高糖培养组(P＜0.01).结论 牛磺酸能够呈剂量依赖性地抑制高糖所致视网膜Müller细胞凋亡.     

高糖对脑微血管内皮细胞活力和内皮素-1的影响

目的：探讨体外培养条件下高糖状态对大鼠脑皮质微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cells，BMEC）的影响。方法：建立大鼠脑皮质微血管内皮细胞体外培养模型，用透射电镜观察正常浓度（5．05mmol／L）和高浓度（15mmol／L、30mmol／L）葡萄糖培养基中培养24h后内皮细胞的超微结构变化，用MTT法评价内皮细胞活力，采用放射免疫方法测定内皮素-1（Endothelin-1，ET-1）含量，用原位杂交法测定ET-1mRNA表达。结果：高浓度葡萄糖可使内皮细胞超微结构损伤，细胞活力降低，ET-1分泌显著上调，并呈剂量依赖性损伤细胞，但ET-1mRNA表达无明显变化。结论：高糖对脑皮质微血管内皮细胞有显著的损伤作用，ET-1升高在糖尿病微血管病变早期可能起主要作用。     

Ang-1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞单层通透性的影响

目的：利用猴脉络膜-视网膜内皮细胞建立内皮细胞（EC）单层模型,观察高浓度葡萄糖及血管生成素-1（Ang-1）对该模型通透性的影响．方法：待EC于孔径0．8μm的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养：对照组（DMEM培养基含25mmol／L葡萄糖）、高糖组（DMEM培养基含30mmol／L葡萄糖）、Ang-高糖组（DMEM培养基含30mmol／L葡萄糖＋0．25mg／L Ang-1）．于1,3,5,7d4个时间点,以含白蛋白1g／L的D—Hanks液灌注滤膜,检测蛋白质渗透压反射系数（8）及滤过系数（K1）;并于5d和7d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNAladder．结果：3,5,7d时,高糖组EC单层的通透性高于对照组（P〈0．01）;Ang-高糖组与对照组之间EC单层的通透性无差异（P〉0．05）．高糖组EC的琼脂糖凝胶电泳在5d及7d均出现DNA ladder,对照组及Ang-高糖组未见DNA ladder．结论：高糖能够促进细胞凋亡,增加EC单层通透性;Ang-1能抑制EC的凋亡,对抗高糖所致的EC单层通透性增高．     

circFAM73A靶向调控miR-140-3p对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞凋亡、迁移和炎症因子释放的影响

目的:探讨circFAM73A靶向调控miR-140-3p对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞凋亡、迁移和炎症因子释放的影响及作用机制。方法:将人视网膜血管内皮细胞分别采用5.5 mmol/L葡萄糖(NG组)或25 mmol/L葡萄糖(HG组)处理，在HG组分别转染si-circRNA FAM73A和miR-140-3p inhibitors后，RT-qPCR检测circRNA FAM73A、miR-140-3p、TNF-α和IL-6表达水平；流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡情况和凋亡相关分子Cleaved caspase 3的表达水平；Transwell检测细胞迁移情况；双荧光素酶报告实验与RIP检测circRNA FAM73A和miR-140-3p的靶向结合情况。结果:circFAM73A的表达水平在高糖处理人视网膜血管内皮细胞后显著升高，miR-140-3p的表达水平显著下降(均P<0.05);沉默circFAM73A能够显著抑制高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞凋亡、迁移、炎症因子TNF-α和IL-6的释放(均P<0.05);低表达miR-140-3p能...     

自发性高血压大鼠视网膜微血管稀少与细胞凋亡

目的：研究自发性高血压大鼠（SHR）视网膜毛细血管细胞凋亡的发生情况,探讨细胞凋亡与高血压视网膜微血管病变之间的关系,为研究高血压视网膜病变发病机制提供形态学依据。方法：10只雄性自发性高血压大鼠（SHR组）和10只雄性正常血压（WKY）大鼠（WKY组）分别在13周龄和18周龄取眼球做视网膜消化铺片,采用核苷酸末端转移酶介导dUTP缺口翻译法（TUNEL法）检测视网膜微血管细胞凋亡变化情况,HE染色及图像分析,动态观察视网膜微血管形态的改变及测定视网膜毛细血管面积及密度的改变。结果：①TUNEL法标记显示SHR各周龄大鼠视网膜微血管均出现阳性反应细胞,且18周龄大鼠阳性细胞与13周龄大鼠比较明显增多;WKY组大鼠视网膜微血管未见TUNEL阳性细胞。②血管铺片HE染色显示SHR组部分毛细血管闭塞,内皮细胞和周细胞丢失,出现无细胞毛细血管,毛细血管密度较WKY组显著降低。结论：在高血压发展过程中,视网膜毛细血管内皮细胞和周细胞均可发生凋亡,同时伴有微血管稀疏,细胞凋亡可能在高血压视网膜病变的过程中扮演重要的角色。     

罗格列酮对高糖刺激下肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1表达的影响

目的 观察罗格列酮(ROS)对肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1 (integrin β1)水平的影响.方法 将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞分为空白对照组、正常血糖(5 mmol/L)组、高糖(30 mmol/L)组、ROS (10 μmol/L)组、高糖(30 mmol/L) ROS (5 μmol/L)组和高糖30 mmol/L ROS 10 μmol/L 6组, 采用流式细胞仪检测细胞培养后24、48、72 h的凋亡情况、Western blot及RT-PCR检测不同浓度的ROS对高糖刺激下integrin β1蛋白质和mRNA表达的影响.结果 integrin β1的蛋白质和mRNA的改变趋势相同,高糖组较对照组及正常血糖组增加(P＜0.05) ,经ROS处理后integrin β1的表达较高糖组降低,且与ROS浓度呈剂量相关.各实验组在48 h、72 h的细胞凋亡率与空白对照组相比均降低(P＜0.05);48、72 h的细胞凋亡率低于24 h(P＜0.05),但48 h与72 h间的比较差异无统计学意义.结论 ROS可明显抑制高糖刺激下肾小管上皮细胞integrin β1的表达,且有明显剂量依赖关系,而ROS对细胞凋亡的影响可能与 integrin β1的参与有关.     

氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为4组:对照组、P53抑制剂组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L,P53抑制剂浓度为50μmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为25mmol/L)和高糖+P53抑制剂组(P53抑制剂浓度为50μmol/L).噻唑盐比色法(MTT法)检测心肌细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞P53、BAX和Caspase-3进行半定量分析.结果 与对照组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与P53抑制剂组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多;高糖+P53抑制剂组心肌细胞活力也有所降低,凋亡率升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与高糖组相比,高糖+P53抑制剂组的心肌细胞活力增高,凋亡率明显降低,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达减少.结论 高糖可能通过介导P53转位到线粒体激活凋亡通路,引起心肌细胞凋亡.     

不同葡萄糖浓度对小鼠胰岛β细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨不同葡萄糖浓度对小鼠胰岛β细胞株MIN-6细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度葡萄糖培养MIN-6细胞72h,MTT法观察不同浓度葡萄糖作用后MIN-6的细胞活性增殖率,Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果低浓度（5.6mmol/L、11.1mmol/L）及高浓度葡萄糖（33.3mmol/L）作用72h后可抑制MIN-6细胞的生长;5.6mmol/L、11.1mmol/L、33.3mmol/L组处理72h后,细胞凋亡明显（P〈0.05）。结论低浓度（5.6mmol/L）及高浓度（33.3mmol/L）葡萄糖均可抑制小鼠MIN-6细胞增殖并使其凋亡增加。     

葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响

目的：观察高浓度葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响。方法：用不同浓度葡萄糖（Glu）作用体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECS）24h、48h、72h，绘制细胞增殖曲线，用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化。结果：高浓度Glu(20mmol/L、40mmol/L)对内皮细胞的生长增殖有明显抑制作用，使G0/G1期细胞比例增加，S和G2/M期细胞比例下降，同时诱导了内皮细胞的凋亡，并随作用浓度增加、时间延长更为明显。结论：高糖使培养的HUVECS凋亡加速，同时抑制细胞增殖。细胞可能被阻滞在G1/S转变期。     

牛磺酸对同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨牛磺酸对同型半胱氨酸引起的血管内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞,分为空白对照组、同型半胱氨酸组（0.5 mmol／L、1.0 mmol／L、1.5 mmol／L ）及牛磺酸＋同型半胱氨酸组（牛磺酸20 mmol／L＋同型半胱氨酸1.0 mmol／L）,48 h后以TUNEL法及流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果同型半胱氨酸明显增加内皮细胞的凋亡率,而牛磺酸能拮抗同型半胱氨酸引起内皮细胞的凋亡作用。结论牛磺酸对同型半胱氨酸引起的血管内皮细胞凋亡有拮抗作用。     

降钙素基因相关肽对血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的观察降钙素基因相关肽(calcitonin-gene-relatedpeptide;CGRP)对高浓度葡萄糖(高糖)诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用。方法用MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果当CGRP浓度为10-8mol/L时,高糖对细胞的损伤已明显得到保护。高糖组细胞活力为60%,而CGRP处理组细胞活力为80%。流式细胞术检测结果显示,CGRP处理组细胞凋亡率明显下降。结论CGRP可对高糖诱导的内皮细胞凋亡起到保护作用。     

泛素在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达

目的检测高浓度葡萄糖对血管内皮细胞凋亡的影响和泛素表达的变化.方法ECV-304细胞在高糖(25 mmol/L)和正常糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养液中分别培养24、48、72 h,用MTT法检测细胞活力,用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡特异性的DNA片段,并用Northern blot检测泛素mRNA的变化.结果高糖24、48、72 h组细胞OD值比正常浓度组均显著下降(P＜0.05);1.8%琼脂糖凝胶电泳在高糖48、72 h组检测到细胞凋亡特异性DNA片段;泛素mRNA在高糖24、48、72 h组分别增加25.37%、53.47%和63.93%(P＜0.05).结论高浓度葡萄糖可增加血管内皮细胞凋亡,泛素mRNA在高糖诱导的内皮细胞凋亡中表达上调,且发生在凋亡形态学改变之前,泛素参与调节高血糖诱导的细胞凋亡.