CTLA4Ig诱导免疫耐受作用的研究进展

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA 4 Ig)是目前器官移植领域研究得比较透彻的新型免疫抑制剂.单纯使用CTLA 4 Ig已取得了较好的免疫抑制效果,但是CTLA 4 Ig作用机制仍未彻底阐明.目前的研究发现CTLA 4 Ig通过影响细胞因子(IL-2、IL-10等)及其受体的产生,诱导Th1型细胞因子向Th2型细胞因子转化,抑制巨噬细胞、CD8 T细胞和树突状细胞吞噬异体抗原的功能,启动细胞凋亡途径等多种相互关联的机制诱导免疫耐受.联合运用CTLA 4 Ig和其他的单克隆抗体已取得了显著成果,CTLA 4 Ig分别联合CD40 Ig、抗CD4单克隆抗体、TGF-β3均比单纯使用CTLA4 Ig诱导更长效和强效的免疫耐受.CTLA 4 Ig联合脾细胞移植亦可明显延长移植物的存活期.而对CTLA 4 Ig的基因载体的研究也在不断的进步中,脂质体将成为继腺病毒载体介导的CTLA 4 Ig、腺病毒相关载体介导的CTIA 4 Ig后效率更高的新载体.     

诱导器官移植免疫耐受的新进展

免疫耐受是机体免疫系统在接触某种抗原后所产生的对该抗原的特异性免疫无应答状态。抗原刺激机体产生免疫应答是一个复杂的过程 ,涉及到多种免疫细胞和分子间的相互作用。对此过程的各个阶段和环节进行干预和调控从而诱导免疫耐受 ,是近年来移植免疫学领域的研究热点。1　主要组织相容性复合物 (ＭＨＣ)肽段诱导免疫耐受供者ＭＨＣ分子是引起排斥反应的主要抗原。供者抗原被受者抗原呈递细胞 (ＡＰＣ)加工处理成多肽后被Ｔ细胞识别 ,使Ｔ细胞活化、增生和分化 ,介导供者特异性排斥反应。动物和临床研究已证实 ,受者ＡＰＣ所呈递的供者ＭＨ…     

移植免疫耐受诱导途径的研究进展

器官移植最大的问题是移植排异反应。为了防止移植排异反应,受者经常需要长期服用免疫抑制药物。但现用免疫抑制药物为非特异免疫抑制,均有广泛的毒性和不良反应,长期应用会使受者处于免疫低下状态而发生感染、肿瘤和其他并发症。因此,诱导一种持久稳定且无需药物的免疫耐受是迫切需要解决的问题。     

共刺激分子CD28／CTLA—4—B7与1型糖尿病

CD28／细胞毒性T淋巴细胞相关抗原（CTLA）－4与B7的相互作用是T细胞活化的重要调节因子,在自身免疫性疾病的发生、发展中起着不同的作用。其中,CD28－B7的过度表达是自身免疫性1型糖尿病发生的重要原因之一;而CTLA4可使CD28－B7共刺激信号中止,是T淋巴细胞活化的负性调节信号。因此,运用B7单克隆抗体阻断CD28－B7通路或通过加强B7－CTLA－4作用来抑制自身免疫活性T细胞,有可能成为治疗该病的新手段。     

特异性口服免疫耐受诱导的免疫学机制及其临床应用

特异性口服免疫诱导(specific oral tolerance induction,SOTI)是一种将曾经使患者发生过敏反应的食物作为抗原,从极低剂量开始给患者口服,以后逐渐缓慢增大剂量,维持一段时间后使患者对此抗原发生免疫耐受的现象。SOTI的发生发展受到多种免疫机制和诸多因素的影响,对SOTI免疫学机制深入细致地研究将为进一步了解食物过敏反应发生的机制,及其治疗和预防发挥积极的作用。     

脾细胞门静脉注射诱导免疫耐受的研究

目的利用家犬肾脏移植模型,探讨门静脉注射供体脾细胞诱导免疫耐受的机制。方法应用供体家犬脾细胞行门静脉注射,1w后行肾脏移植,ELISA法测定对照组、门静脉注射组、环孢素组肾移植后生存时间、血肌酐、移植肾病理改变。结果在肾移植后门静脉注射组、环孢素组生存时间高于对照组,血肌酐低于对照组,均有显著性差异;而门静脉注射组与环孢素组之间无差异。移植肾病理改变好于对照组。结论供体家犬脾细胞行门静脉注射可诱导受体家犬产生免疫耐受。     

急性冠状动脉综合征患者B7∶CD28/CTLA4共刺激分子的表达

目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中单核细胞共刺激分子CD28、细胞毒T淋巴细胞抗原(CTLA)4、CD80(B7-1)的变化,探讨这些分子在发病中的意义。方法:采用直接荧光标记流式细胞仪测定23例ACS患者(ACS组)和31例稳定型心绞痛(SA)患者(SA组)入院时外周血CD4 ,CD8 T淋巴细胞CD28、CTLA4、B7-1分子的表达,同时选健康人群15例作为对照(对照组)。结果:与对照组相比,SA组及ACS组发病时CD4 ,CD8 T淋巴细胞表面共刺激分子CD28均显著升高(均P<0.01);SA组与ACS组比较差异无统计学意义。与对照组相比,SA组CD4 ,CD8 T淋巴细胞表面CTLA4表达均显著升高(P<0.01);而ACS组CD4 ,CD8 T淋巴细胞表面CTLA4表达均显著下降(P<0.01)。各组B7-1的表达差异无统计学意义。结论:①共刺激分子B7-1:CD28/CTLA4途径参与了冠心病的发病过程;②ACS的强烈的炎症反应与CT-LA4的低表达有关。     

小鼠髓源性半成熟树突状细胞致免疫耐受的实验研究

三组体外培养的小鼠骨髓细胞,分别采用低剂量粒细胞巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导、高剂量GM—CSF诱导及脂多糖（LPS）刺激、低剂量GM—CSF诱导及LPS刺激,使其分化为树突状细胞（DC）。流式细胞术检测DC表面CD11c、CD25、CD40、CD80和CD86、MHC-Ⅱ,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-10、IL-12,初次和再次混合淋巴细胞实验检测DC刺激T细胞增殖能力,术前回输DC行同种异位心脏移植并观察术后移植心存活时间。结果显示,低剂量GM—CSF能诱导骨髓细胞分化为CD11c^＋、CD25^-、CD40^low、CD80^low和CD36^low、MHC-Ⅱ^low未成熟表型DC,经LPS刺激后分化为CD11c^＋、CD25^-、CD40^mid、CD80^low和CD86^low、MHC-Ⅱ^mid。半成熟表型DC;半成熟表型DC培养上清液中IL-10／IL-12明显升高,该DC可明显抑制同种异型T细胞增殖反应,较未成熟DC更能延长移植心存活时间。认为小鼠骨髓细胞经低剂量GM—CSF体外诱导可分化为未成熟DC,经LPS刺激可转化为半成熟DC,拥有更强的致耐受性。     

CD/Ig融合蛋白研究及应用概况

自80年代以来,由于单克隆抗体、分子克隆等技术的发展,使得免疫细胞膜表面分子的研究进展十分迅速。免疫细胞膜表面分子包括大量重要的抗原、受体或其他分子,其中绝大部分属于ＣＤ分子。充分认识这些分子的结构、特性、分布及功能,对于透彻理解免疫应答规律是至关重要的。人类白细胞分化抗原国际协作组会议将识别同一分化抗原的来自不同实验室的单克隆抗体归为一个分化群,简称ＣＤ(ｃｌｕｓｔｅｒｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ,ＣＤ)。到目前为止,人类白细胞分化抗原的国际协作组会议共举行了6次,ＣＤ的序列号已至ＣＤ166[1]。ＣＤ抗…     

骨髓干细胞在肾移植中诱导免疫耐受的机制探讨

目的探讨在活体肾移植中骨髓干细胞移植对免疫耐受的诱导作用及机制。方法实验组为夫妻或亲属共5对,供体男性、受体女性,术前均给予他克莫司（FK506）口服,供体皮下注射生白药物3-4 d,复查外周血WBC至20×10^9/L以上,采集WBC并通过外周静脉输注至受者体内,10 d后同法再输注1次,1周内行移植手术,术后复查肾功能;对照组为夫妻或亲属共4对,供体男性、受体女性,进行正常活体肾移植手术,未行骨髓干细胞移植。于半年后采用荧光原位杂交检测两组Y基因片段。结果实验组嵌合体检测4例为阳性,对照组仅1例为阳性。结论应用FK506并输注供体骨髓干细胞,可诱导一定的免疫耐受;移植前输注供体骨髓干细胞形成的嵌合体与免疫耐受有关。     

诱导新生小鼠对Graves病免疫耐受的研究

目的 研究TSH受体(TSHR)289基因诱导Graves病新生免疫耐受的可行性,并初步探索其可能机制.方法 将出生0～24hBALB/c雌性小鼠分为腹腔注射组、肌肉注射组、造模组及正常对照组,腹腔注射组或肌肉注射组分别设低剂量、中剂量、高剂量耐受组及相应对照组,将腹腔注射、肌肉注射不同剂量耐受组及各自对照组给予1×106particles(低)、1×108particles(中)、1×1010particles(高)的Ad-TSHR289或Ad-lacz进行预处理6～7周后,除正常对照组肌肉注射Ad-lacz外,其余各组小鼠均给予Ad-TSHR289免疫,每3周1次,共3次,首次免疫后10d检测血清促甲状腺素受体抗体(TRAb),末次免疫后4周测血清TRAb、TT4、脾CD4+CD25+Foxp3/CD4+比例,并行甲状腺组织学检查.结果 首次注射后10d,腹腔注射及肌肉注射高剂量耐受组均未诱导出针对TSHR的抗体反应,而对照组TRAb滴度明显升高(P＜0.05).末次免疫后4周,腹腔及肌肉注射高剂量耐受组均只有1/10小鼠出现阳性的抗体反应,腹腔注射高剂量耐受组没有小鼠发生甲状腺功能亢进,而肌肉注射高剂耐受量组2/10小鼠出现轻微的TT4升高,其相应对照组却出现了强烈的抗体反应(P＜0.01),TT4水平明显升高(P＜0.05),所有TT4升高的小鼠均出现了甲状腺组织增生性改变.此外,腹腔注射及肌肉注射高剂量耐受组CD4+CD25+Foxp3/CD4+比例与对照组比较明显增高(P＜0.01)腹腔注射及肌肉注射其余组群,与其对照组和造模组比较Graves病发生率差异无统计学意义.结论 TSHR 289基因可以通过腺病毒为载体,腹腔和肌肉注射两种途径诱导新生小鼠成年后对Graves病免疫耐受,抑制Graves病的发生.而高剂量的抗原刺激容易导致耐受产生.CD4+CD25+Foxp3+T细胞在免疫耐受的诱导和维持中可能起重要作用.     

环磷酰胺诱导小鼠对肌球蛋白免疫耐受的初步研究

目的 :应用环磷酰胺诱导小鼠对心肌肌球蛋白免疫耐受 ,探索免疫耐受在心肌炎和扩张型心肌病治疗中的作用。方法 :实验组 ( n =2 0 )于实验第 1,14和 2 8天 3次以猪心肌球蛋白免疫 ,于第1次免疫 2 4h后腹腔注射环磷酰胺 2 2 0 mg/ kg;对照组 ( n =2 0 )按同样方法免疫 ,第 1次免疫 2 4h后以等体积生理盐水代替环磷酰胺腹腔注射。第 35天采集小鼠血清和取心脏标本 ,EL ISA法检测小鼠血清中抗肌球蛋白抗体 ,显微镜下观察心肌病变。结果 :实验组未检测出抗肌球蛋白抗体 ,对照组17例抗体阳性 ,阳性率 85 .5 %。病理结果显示对照组小鼠可见明显炎症病灶 :血管周围炎及心肌间质淋巴细胞、单核细胞浸润。实验组小鼠未见以上病变。结论 :肌球蛋白可以引起小鼠免疫反应及心脏炎性改变 ;环磷酰胺可诱导小鼠对肌球蛋白产生免疫耐受 ,防止心肌损伤。     

阿司匹林诱导小鼠脾源性树突状细胞产生免疫耐受的机制

目的探讨阿司匹林(ASP)诱导小鼠脾源性树突状细胞(DCs)产生免疫耐受的机制。方法将16只小鼠随机均分为空白对照组(对照组)、ASP1组、ASP2组、ASP3组[分别腹腔注射ASP 0.01、0.02、0.03 mg/(kg.d)]各4只。1个月后取各组小鼠脾脏制备脾细胞,观察细胞生长情况,计算脾源性DCs数量,检测脾源性DCs表型变化、脾源性DCs刺激T细胞增殖的能力、DCs培养液中的IL-10、IL-12表达。结果除对照组外,ASP1组、ASP2组、ASP3组大部分细胞有典型树枝样突起;与对照组比较,ASP组脾源性DCs表型33D1表达、DCs培养液中的IL-10表达升高,CD80与CD86表达、T细胞增殖活性、DCs培养液中的IL-12表达降低(P均<0.05),以ASP3组变化最明显。结论小鼠体内输注ASP后,其脾源性DCs表型33D1表达升高,CD80、CD86表达降低,刺激T细胞增殖能力减弱,DCs培养液中IL-10升高、IL-12降低。     

NOD鼠口服胰岛素诱导免疫耐受的疗效及形态学观察

目的 评价口服胰岛素诱导免疫耐受在防治自身免疫性糖尿病方面的效果。方法 雌性NOD鼠120只，随机分为胰岛素组和对照组各60只，6周龄始分别口服猪胰岛素500ul或磷酸盐缓冲液（PBS）500ul，至40周龄。6、12、20、25、30周龄分别测定两组未发病NOD鼠血清胰岛素（insulin)水平，并观察胰岛形态学变化。结果 40周龄糖尿病累计发生率对照组为91％，胰岛素组为11％，两者具有显著性差异（P＜0．01）。未发病NOD鼠中，20、25、30周龄对照组胰岛炎明显重于胰岛素组，血清胰岛素水平显著低于胰岛素组（P均＜0．05）。发病的NOD鼠中，对照组NOD糖尿病鼠血清胰岛素水平显著低于胰岛素组糖尿病鼠（P＜0．05）。结论 口服胰岛素可明显延迟NOD鼠糖尿病的发病时间，降低糖尿病发生率，缓解动物发病后的病情。     

CD28:CTLA4/B7及CD40/CD40L在炎症性肠病发病机制中的作用

炎症性肠病(IBD)是一组病因未明的累及肠道的免疫反应异常性疾病,T细胞功能失调与IBD发病密切相关。CD28：CTLA4/B7及CD40/CD40L是重要共刺激分子,对调节免疫具有非常重要的作用,可能在IBD发生和发展中起着关键作用。     

CTLA4-Ⅰg对老年支气管哮喘病人CD4^＋CD45RO^＋T细胞功能的影响

目的 研究老年支气管哮喘病人周围血CD4^＋CD45RO^＋T细胞表达IL4及IL-13的情况及CTLA4-Ⅰg对其影响。方法 用ELISA方法测定老年支气管哮喘病人CD4^＋CD45RO^＋T细胞产生IL-4和IL-13的水平及CTLA4-Ⅰg对其影响。结果 老年支气管哮喘病人CD4^＋CD45RO^＋T细胞分泌IL4、IL-13增多，IL-13增多较IL-4更为明显（P〈0．01），CTLA4-Ⅰg可有效抑制老年哮喘病人CD4^＋CD45RO^＋T细胞分泌IL-4和IL-13（P〈0．01）。结论 CD4^＋CD45RO^＋T细胞产生的IL-4和IL-13在老年哮喘发病中起重要作用，CTLA4-Ⅰg可有效抑制IL-4和IL-13的分泌。     

RNA干扰供体大鼠库普弗细胞B7分子表达对受体大鼠淋巴细胞激活的影响

目的:观察RNA干扰供体Lewis大鼠库普弗细胞(KC)B7分子表达对受体BN大鼠淋巴细胞增殖和生成IL-2的影响.方法:分离培养供体Lewis大鼠KC, 设计大鼠B7分子的干扰片段, 构建并鉴定含B7干扰片段的RNA干扰载体Psilencer 3.1H1-Neo-B7, 将RNA干扰载体转染供体大鼠的KC, 转染后采用RT-PCR方法检测KC上B7分子表达的变化. 将转染后的KC分为3组, 对照组(A); 空载体组(B); RNA干扰B7表达组(C). 分离培养受体BN大鼠的淋巴细胞, 将以上各组细胞分别与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养, 采用MTT法检测各组淋巴细胞的增殖情况. 采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-2的含量.结果: 分离培养的供体Lewis大鼠KC得率为5×107, 活率大于98%. 构建的RNA干扰载体经酶切和测序鉴定正确. RNA干扰KC后其B7的表达降低了22%(P<0.01). 将干扰B7表达的KC与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养, 与对照组相比, 受体BN大鼠的淋巴细胞增殖降低了49%(P<0.01), 细胞培养上清中IL-2的分泌量下降了67%(P<0.01).结论:RNA干扰供体Lewis大鼠KC B7分子的表达可明显抑制受体BN大鼠淋巴细胞的增殖和IL-2的产生.     

LPS诱导的DCs成熟在小鼠免疫耐受中的作用研究

目的探讨LPS诱导DCs成熟对于过敏原致耐受中的作用。方法分离、培养、纯化DCs,加入LPS100 ng/m l诱导DCs成熟,然后加入OVA共同孵育24 h后收集DCs,按每鼠106/m l气管内接种。以PBS作为阴性对照,以未加LPS刺激、与OVA共同培养的DCs气管内接种作为阳性对照。接种次日后将小鼠置于雾化箱内以1%OVA雾化,连续5 d。结果 LPS刺激后DCs对OVA的吞噬能力下降（其吞噬能力在30 m in时,分别为75.7%和34%;60 m in分别下降为71%和29.7%）,将这些DCs接种于气管内不能诱发典型的肺部过敏性炎症,与注射PBS相似;而未经LPS处理的DCs与OVA共培养后再接种于气管,经雾化激发后可引起典型的过敏性炎症。结论 LPS诱导的DCs成熟后对过敏原的递呈能力下降可能是机体免疫耐受中的主要原因。     

口服Ⅱ型胶原蛋白诱导佐剂性关节炎大鼠免疫耐受的研究

目的：对口服可溶性Ⅱ型胶原蛋白（typeⅡcollagen，CⅡ）诱导佐剂性关节炎（adju-vantarthritis，AA）大鼠免疫耐受的治疗作用及其机制进行研究，并与雷公藤多甙的疗效进行比较。方法：建立大鼠AA模型，观察其口服CⅡ雷公藤多甙后关节肿胀度及病理学变化；检测相关的免疫学指标，包括迟发型超敏反应、循环免疫复合物、血清中抗CⅡ抗体的抗结核杆菌抗体水平。结果：①口服CⅡ能缓解AA大鼠的四肢关节症状和全身症状，减轻关节腔内滑膜增生及炎细胞浸润，效果较雷公藤多甙显著。②口服CⅡ使AA大鼠迟发型超敏反应减弱，循环免疫复合物及血清中抗CⅡ抗体水平降低。结论：口服CⅡ对AA大鼠有明显的近期治疗效果，其作用机制可能与抑制Th1细胞介导的细胞免疫，增强Th2细胞介导的体液免疫有关。     

移植心脏特异性免疫耐受的实验研究——供体脾细胞诱导大鼠移植心脏特异性免疫低反应的研究

本实验采用大鼠异位心脏移植模型,观察到:术前多次输注供体大鼠脾细胞可显著延长移植心存活时间,其作用呈供体抗原特异性,作用机理与受体大鼠T亚群改变及血清免疫抑制因子的产生有关。结果提示术前单用供体抗原难以达到移植心免疫耐受。