大鼠早期肝纤维化α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA及相应胶原蛋白表达的初步研究

应用Northern杂交及免疫组化方法.观察CC1_4诱导的大鼠肝纤维化形成不同阶段α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA表达与相应Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白ColⅠ、ColⅢ及前Ⅲ型胶原端肽(PⅢP)表达间的变化规律及其相互关系。结果表明:①肝纤维化时α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA表达增强,早期以α_1(Ⅲ)mRNA为主;α_1(Ⅰ)及α_1(Ⅲ)前胶原mRNA均于3～4周时呈一过性下降。②Ito细胞是肝纤维化过程中产生Col Ⅰ、ColⅢ及PⅢP的主要来源,肝细胞亦具有一定的合成ColⅢ及PⅢP的能力。③应用Northern杂交技术检测前胶原mRNA表达,能从基因水平了解肝内胶原含量的变化,能更敏感地反映肝纤维化的倾向。     

胸腺素α_1、β_4能提高巨噬细胞的抗原递呈能力

胸腺素α_1(Tα_1)和β_4(Tβ_4)是来源于胸腺素第5组分(TF 5)的多肽,已知Tα_1由28个氨基酸残基构成。分子量3108,Tβ_5由43个氨基酸残基组成,分子量4982。目前二者已能通过化学方法合成。胸腺素对淋巴细胞的多种功能具有调节作用,包括对丝裂原或异体抗原的增殖反应、T 细胞的成熟、抗体的产生、T 及NK 介导的细胞毒等。本文表明Tα_1及Tβ_4的合成制剂能显并提高Mφ)的抗原递呈能力。收集经巯基已醇酸盐诱导的BALB/C小鼠(雌性,6～8周)腹腔Mφ,置平血中     

人、小鼠前胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型和鸡三磷酸甘油醛脱氢酶cDNA探针的鉴定及其与大鼠组织、人胚肺成纤维细胞相应基因同源性分析

由于胶原基因是一个高度保守的基因家族,已知编码20个不同类型的α链的胶原基因的核苷酸序列有很高的同源性,因此对不同胶原基因探针进行鉴定和建立适当的胶原基因杂交体系势在必行。本文对合人Proα_1(Ⅰ)、Proα_1(Ⅲ)、Proα_1(Ⅳ)、含小鼠Proα_1(Ⅰ)、Proα_2(Ⅲ)和食鸡的三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)cDNA片     

多沙唑嗪干预对α_1肾上腺素能受体抗体阳性糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的:探讨多沙唑嗪干预对α1肾上腺素能受体自身抗体(α1R-Ab)阳性糖尿病(DM)大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原表达的影响及其心肌保护作用。方法:Wistar大鼠分为5组:A组(正常对照组,n=10)、B组(DM模型组,n=10)、C组(DM+多沙唑嗪干预组,n=10)、D组(α1R-AbDM组,n=8)和E组(α1R-AbDM+多沙唑嗪干预组,n=8)。腹腔注射链脲佐霉素(STZ)复制T2DM模型。造模成功后,D组和E组于当周、第4、8、12、16周尾静脉注射α1R-Ab注射液(100μg/100g),建立α1R-AbDM模型。C组和E组均从注射α1R-Ab起每日给予多沙唑嗪0.36mg/Kg灌胃,持续16周。A组不予任何处理。16周后处死各组大鼠,取左室心肌组织常规病理切片和超薄切片,采用免疫组化检测左室心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达量,电镜观察心肌超微结构。结果:A组大鼠心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达明显低于B、C、D、E组(均P<0.01),C组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达低于B组(P<0.05),E组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达亦明显低于D组(P<0.05);电镜下,A组心肌未见明显异常;D组心肌线粒体减少,排列紊乱,呈空泡变性,间质胶原增生,微血管基底膜增厚;而E组心肌病变较D组明显减轻;C组心肌病变亦较B组明显减轻。结论:多沙唑嗪可通过抑制α1R-Ab阳性DM大鼠心肌组织中TGF-和Ⅰ型胶原表达,减轻DM大鼠心肌间质纤维化,保护心肌。     

胸腺素α元:大鼠胸腺中胸腺素α_1主要免疫反应型的分离及其性质

应用抗合成胸腺素α_1的抗体建立的放射免疫分析法,从大鼠胸腺分离到在NH_2端含有胸腺素α_1序列的一个约有112个氨基酸残基的多肽.这一新发现的多肽为大鼠胸腺提取物中能与抗胸腺素α_1血清起交叉反应     

普伐他汀对人I型胶原α1(I)链启动子活性调控的研究

目的研究普伐他汀人I型胶原α1(I)链启动子活性的调控 ,从转录水平上了解普伐他汀对Ⅰ型胶原合成的影响。方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代、传代培养。构建含人α1(I)前胶原基因5'侧翼序列 -2.5kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)的重组体 phCOL2.5,用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞 ,CAT -ELISA测定普伐他汀对重组体的作用。结果设对照组的CAT值为1 ,普伐他汀组的CAT值为0.62±0.04 ,普伐他汀能明显抑制I型胶原α1(I)启动子的活性。结论普伐他汀可以在转录水平上调节人α1(I)前胶原基因表达。     

人神经母细胞瘤细胞株Nav1.5 Na~+通道编码基因Nav1.5/SCN5A的克隆

目的克隆人神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB-1)细胞河豚毒抵抗型(TTX-R)Nav1.5Na+通道编码基因Nav1.5/SCN5A。方法使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对NB-1细胞TTX-R Nav1.5Na+通道α亚单位编码基因Nav1.5/SCN5A进行克隆。结果人神经母细胞瘤Nav1.5Na+通道编码基因Nav1.5/SCN5A命名为hNbR1,其开放阅读框架可编码2016个氨基酸残基。序列分析显示其与心肌Nav1.5/SCN5A基因(hH1)编码的氨基酸相似性达99.1%;在DⅠ/SS1-SS2之间,存在一个半胱氨酸(c373)残基,提示hNbR1为TTX-RNa+通道;DⅠS3-S4之间一个位于第3号染色体的新的外显子(第6A外显子)编码了该通道α亚单位。另外,一个删除了DⅡ-Ⅲ之间第18外显子的选择性剪接体(hNbR1-2)被发现。结论 Nav1.5/SCN5A基因新的变构体参与编码神经肿瘤组织Nav1.5Na+通道,同时发现该基因的一个新外显子参与编码该通道,且发现Nav1.5/SCN5A基因比以往所知具有更加广泛的表达。     

用抗α_2-M单克隆抗体ELISA技术测定尿液中α_2-M(摘要)

有关生理与病理情况下尿液中的α_2-M含量,至今未见正式报告。我们应用本科自制鼠抗人α_2-M单克隆抗体,建立ELISA技术,对尿液中α_2-M含量进行测定,发现此法敏感性高,可直接从尿液中测出低迷26ng/ml的α_2-M,批内误差(cv)为11％,现将结果报告如下: 料材和方法 1.鼠抗人α_2-M单克隆抗体、羊抗人α_2-M多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记兔抗羊IgG均由本科自制。     

普伐他汀对人Ⅰ型胶原α 1(Ⅰ)链启动子活性调控的研究

目的研究普伐他汀人Ⅰ型胶原α1(Ⅰ)链启动子活性的调控,从转录水平上了解普伐他汀对Ⅰ型胶原合成的影响.方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代、传代培养.构建含人α 1(Ⅰ)前胶原基因5'侧翼序列-2.5kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体phCOL2.5,用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞,CAT-ELISA测定普伐他汀对重组体的作用.结果设对照组的CAT值为1,普伐他汀组的CAT值为0.62±0.04,普伐他汀能明显抑制Ⅰ型胶原α1(Ⅰ)启动子的活性.结论普伐他汀可以在转录水平上调节人α1(Ⅰ)前胶原基因表达.     

α_1肾上腺素受体中仅α_(1a)亚型参与对心肌DNA合成的促进作用

目前普遍认为儿茶酚胺引起心肌蛋白质合成与心肌肥大的作用是通过激动α_1肾上腺素受体(α_1受体)来达到的。本工作的目的是确定α_1受体的两种亚型——α_(1a)与α_(1b)是否都参与上述作用。取1-3d乳鼠心脏,经胰酶消化后差速贴壁1.5h,取悬浮细胞以0.6-1.0×10~6/ml密度植入24孔培养板,在常规DMEM液中培养48h后加药,分为     

α_1抗胰蛋白酶缺乏症的产前诊断

α_1抗胰蛋白酶(α_1-AT)是广泛分布于人血清及其它体液和组织中的一种蛋白水解酶抑制剂,能抑制血清中蛋白酶活力的90%。它是一种由肝脏合成的糖蛋白,正常血浆中含有180～250mg/dl。在代谢旺盛的情况下,如肿瘤、妊娠等,血中α_1-AT水平明显增高。应用区带电泳技术分析人类α_1-AT电泳的迁移率,发现人群中存在着多态现象,最常见的为MM型,同时还观察到这种MM型的不同亚型在一些种族中有所差异。现已鉴定出近50种α_1-AT的变异类型,其中有些变异类型如S、Z等可导致α_1-AT的遗传缺陷。α_1-AT缺陷的结果与肺气肿、婴儿早期肝硬化和脉管炎,肾炎等病的发生发展有关。大量的研究表     

α_2-巨球蛋白(α_2M)对白细胞促凝血活性的影响

<正> α_2M是血液中一种具有重要生物学活性的大分子糖蛋白,由四个结构与分子量均相同的亚单位组成,由淋巴细胞、单核细胞及成纤维母细胞合成和释放。在体外实验中α_2M能改变网状细胞对各种刺激的反应,并在白细胞与红细胞生成过程中起作用。近年来研究发现,α_2M是血浆中一种重要的蛋白酶抑制因子,可抑制四种内肽酶活性。α_2M     

α_1—蛋白酶抑制剂(α_1—抗胰蛋白酶)对PHA刺激淋巴细胞转化率的影响

已经证实,天然的和人工合成的蛋白酶抑制剂可以改变免疫学许多现象的发生。其中具有抗蛋白酶活性的血清蛋白由于它可能参与体内淋巴样组织细胞生物活性的调节而占有特殊的地位。作者着重研究了α_1—抗胰蛋白酶(α_1—AT)对人外周血PHA刺激淋巴细胞转化率的影响。方法:按Liener氏方法从供者枸橼酸盐血浆中提取α_1—AT,并测定其抗蛋白酶活性,以抑制单位(NE)表示之。用     

胸腺素α_1单克隆抗体的产生与鉴定

通过骨髓瘤细胞系(P3—X63—Ag8.653)与一种BALB/c小鼠的脾细胞融合,已经产生一种对胸腺分泌的肽类激素-胸腺素α_1的单克隆抗体。这种小鼠是经过鼠IgG与胸腺素α_1复合物免疫过的,总免疫剂量为520μg,使用35％的聚乙二醇进行了成功的融合,产生了5株杂交瘤,这些杂交瘤可产生抗胸腺素α_1的单克隆抗血清。这些单克隆抗体有不同的种类和分型,可用酶联免疫吸附试验和特异的放射免疫分析法筛选。对含有Kappa或Lambda轻链和IgG-1、IgG2a及IgG2b重链的抗体进行了检测,进一步鉴定表明这些单克隆抗体既直接作用     

α_1抗胰蛋白酶

本文主要叙述α_1抗胰蛋白酶(α_1AT)的分子结构、α_1AT基因组成及其转录、转译、表达的作用。同时对α_1AT基因突变的不同类型所引起的各种α_1AT缺乏症以及α_1AT、中性白细胞弹性蛋白酶和肺气肿发生的关系作简要介绍。     

核心蛋白聚糖对TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞产生胶原的影响

目的:探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法:将体外培养的HK-2细胞分为:(1)阴性对照组;(2)10μg/LTGFβ1组;(3)TGFβ1(10μg/L) (10μg/L)核心蛋白聚糖组;(4)TGFβ1(10μg/L) (100μg/L)核心蛋白聚糖组。倒置显微镜下观察加入刺激因子48h后肾小管上皮细胞的细胞形态学改变;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察不同浓度的核心蛋白聚糖对HK-2细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达变化的影响。结果:加入刺激因子48h后,(1)组细胞形态与正常HK-2细胞形态基本一致,大部分仍为椭圆形;(2)组细胞形态发生明显的变化,大部分细胞由椭圆形拉长为长梭形;(3)和(4)组,梭形样细胞明显减少,尤其是(4)组梭形样细胞减少更为明显。(2)组HK-2细胞Ⅰ型胶原mRNA表达上升到(1)组的27.86倍,Ⅲ型胶原mRNA的表达上升到(1)组的21.83倍。(3)和(4)组与(2)组相比,Ⅰ型胶原mRNA的表达分别下降了36.39%、53.36%,Ⅲ型胶原mRNA的表达分别下降了26.35%、47.96%(P<0.05),但仍未下降到正常水平。结论:核心蛋白聚糖能抑制TGFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,可能是核心蛋白聚糖抑制肾间质纤维化的原因之一。     

己克隆的人类DNA序列

本文收集了至1983年6月为止的有关已隆的人类DNA序列研究的原始资料。它们是:肌动蛋白,白蛋白,淀粉样蛋白A,抗血友病因子Ⅸ,抗凝血酶Ⅲ,α1-抗胰蛋白酶,脱脂蛋自A-1,脱脂蛋白E,精氨酸代琥珀酸合成酶,降钙素,绒膜促性腺激素a,绒膜促性腺激素β,绒膜生长催乳激素,前胶原,前-α(Ⅰ)胶原,前-α_2(Ⅰ)胶原,α_2(Ⅰ)胶原,补体因子B,补体C3,补体C4D,C-oncAEV-rel.(ERBA),C-one AEV(ERBB), C-onc AMV-rel.(MYB),C-onc AMV-rel.(MYC),C-oncBa CV-rel,C-onc Ba EV-rel,C-onc Ba EV-rel.(POL,GAG),C-onc FOS-rel,C-onc FSV-rel.C-onc     

层粘连蛋白α2亚链在膜性肾病肾小球基膜的异常分布

目的观察Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(laminin)亚链在膜性肾病(membranous nephropathy,MN)肾小球基膜(glomerular basement membrane,GBM)中的异常分布。方法收集52例MN肾组织,按照Ehrenreich和Churg提出的基于电镜形态特征的分期方法进行分期,同时收集10例微小病变肾组织作为正常GBM的对照。采用间接免疫荧光法检测不同分期MN肾组织GBM正常存在的代表性α5(Ⅳ)链及lamininα5、β2链的分布形态,以及可能异常存在的laminin α2、β1链的表达。结果在微小病变肾组织中α5(Ⅳ)链、lamininα5和β2链均沿GBM呈连续线状阳性;laminin α2、β1链在GBM中无表达。在Ⅰ期MN肾组织中α5(Ⅳ)链、lamininα5和β2链均呈连续线状表达。Ⅱ期MN肾组织中α5(Ⅳ)链在连续线状表达基础上形成大量钉突;lamininα5、β2链表达不规则增多,节段在连续线状表达基础上形成钉突。在Ⅲ期MN肾组织中α5(Ⅳ)链表达不规则增多,节段双轨状表达;lamininα5、β2链表达不规则增多,节段双轨、链环状表达。laminin α2链在Ⅰ期MN肾组织GBM未见明显阳性表达;在Ⅱ期和Ⅲ期MN肾组织GBM呈颗粒状阳性。lamininβ1链在各期MN肾组织GBM均未见明显阳性表达。结论MN患者GBM增厚不仅源自GBM固有Ⅳ型胶原亚链和laminin同种型的表达增多,还有正常仅表达于肾小球系膜区的laminin α2链的参与。     

普伐他汀对人Ⅰ期胶原α1（Ⅰ）链启动子活性调控的研究

目的：研究普伐他汀对人Ⅰ期胶原α1（Ⅰ）链启动子活性的调控,从转录水平上了解普伐他汀对Ⅰ期胶原合成的影响。方法：大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代,传代培养,构建含人α1（Ⅰ）前原基因5'侧翼序列－2．5kb与报告基因氯霉素乙酰基转酶（CAT）的重组体phCOL2.5,用FuENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞,CAT－ELISA测定普伐他汀能明显抑制Ⅰ型胶原α1（Ⅰ）启动子和活性。结论：普伐他汀可以在转不水平上调节α1（Ⅰ）前胶原基因表达。     

运动神经-肌肉接点的突触前α-受体属于α_1-受体

Langer曾按α-受体的分布将突触后α-受体划分为。α_1-受体,将突触前α-受体划分为α_2-受体。根据α-受体与选择性激动剂和/或阻断剂的相互作用,已有大量证据表明,静脉平滑肌等效应器细胞上存在突触后α_2-受体。同样,亦有证据提示,突触前膜上的α-受体亦不仅限于α_2-受体。 最近,Snider等在大鼠膈神经-膈制备发现,去甲肾上腺素(NA,50μM)可使刺激膈神经引起的乙酰胆碱(Ach)释放增加183％;非选择性α-受体阻断剂酚妥拉明(10μM)和选择性α_1-受体阻断剂WB4101(10μM)予处理可完全阻断NA引起的Ach释放增加;