虎杖苷-桂皮醛对MSU诱导的THP-1细胞痛风性炎症模型的影响及机制

目的:探讨虎杖苷-桂皮醛对THP-1细胞痛风性炎症模型TLRs/My D88信号通路的影响。方法:以MSU刺激THP-1细胞,模拟体外痛风性炎症模型,各药物与细胞共孵育24 h后,ELISA法测定各组细胞上清液白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时荧光定量PCR法检测各组细胞TLR2、TLR4、My D88、NF-κB及TRIF mRNA表达;Western blotting法检测各组细胞TLR2、TLR4、My D88、TRIF蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组THP-1细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量及TLR2、TLR4、My D88、NF-κB、TRIF mRNA和TLR2、TLR4、My D88、TRIF蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01);与模型组比较,各给药组THP-1细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量及TLR2、TLR4、My D88、NF-κB、TRIF mRNA和TLR2、TLR4、My D88、TRIF蛋白表达均显著降低(P0.05或P0.01)。结论:虎杖苷-桂皮醛可能通过抑制TLRs/My D88通路发挥抗炎作用,从而抑制痛风性炎症。     

汉黄芩苷对糖尿病大鼠肾组织炎症因子表达及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨汉黄芩苷对糖尿病模型大鼠肾组织炎症因子表达及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法采用腹腔注射STZ(60 mg/kg)法复制糖尿病大鼠模型,分为模型组、汉黄芩苷高(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、低(10 mg/kg)剂量组及正常组,每组10只;灌胃给药,连续8周。检测各组大鼠体质量,肾脏指数,FBG、INS、UmAlb、Scr、BUN水平,肾组织病理形态,TNF-α、IL-1β、IL-18、TLR4、NF-κB p-p65及NF-κB p65等指标变化情况。结果与模型组比较,汉黄芩苷组大鼠体质量升高(P0.01),而肾脏指数及FBG、INS水平均降低(P0.01);大鼠UmAlb水平及血清Scr、BUN水平均降低(P0.01),且病理形态均有一定程度的改善,大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-18水平及肾组织TLR4、NF-κB p-p65蛋白表达均降低(P0.05,P0.01)。结论汉黄芩苷可以通过抑制炎症因子表达及调控TLR4/NF-κB信号通路的活化,发挥保护糖尿病模型大鼠肾组织损伤作用。     

小钻木脂素类化合物戈米辛R的体外抗炎机制研究

目的 通过脂多糖(LPS)诱导活化小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7建立炎症模型,探讨小钻木脂素类化合物戈米辛R对炎症细胞增殖及炎症因子分泌的影响,评价其抗炎活性及机制。方法 采用MTT比色法检测经LPS诱导的RAW264.7细胞存活率并计算半数抑制浓度(IC₅₀);采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子含量;利用RT-PCR法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IκB-α、NF-κB p65的mRNA表达量;Western blot法检测细胞IκB-α及NF-κB p65蛋白表达量。结果 与LPS模型组比较,戈米辛R可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖;降低细胞分泌TNF-α、IL-1β及IL-6的含量;升高LPS所致降低的IκB-α mRNA的表达量同时降低LPS引起升高的TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA表达量;升高IκB-α并降低NF-κB p65的蛋白表达量,显示出良好的剂量依赖性,具有统计学差异(P<0.05)。结论 戈米辛R可通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA和NF-κB p65蛋白的表达,增加IκB-α mRNA和IκB-α蛋白的表达,减少致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的释放,从而发挥显著抗炎活性。     

基于TLR3/TAK/NF-κB信号通路探究壮宣饮对H1N1流感病毒性肺炎大鼠肺损伤的保护作用

目的 探讨壮宣饮对H1N1流感病毒性肺炎大鼠肺损伤及TLR3/TAK1/NF-κB信号通路的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、奥司他韦组(13.5 mg/kg)和壮宣饮高、中、低剂量组(14.0、7.0、3.5 g/kg),每组12只。采用甲型流感病毒H1N1滴鼻法建立流感病毒性肺炎大鼠模型,造模24 h后灌胃给予相应剂量药物。给药5 d后观察大鼠一般状态变化,检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IFN-γ、IL-6水平,计算肺湿/干重比,HE染色观察大鼠肺组织病理学变化,RT-qPCR法检测肺组织H1N1病毒载量,Western blot法检测肺组织TLR3/TAK1/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠精神萎靡、毛色无光泽、呼吸加快、行动迟缓、体质量下降,肺湿/干重比值和BALF中TNF-α、IFN-γ、IL-6水平升高(P<0.01),肺组织病理学评分、H1N1病毒载量、TLR3、p-IκBα蛋白表达及p-TAK1/TAK1、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高(P<0.01),IκBα蛋白表达降低(P&l...     

苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导大鼠心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达的影响

目的观察苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导的大鼠原代心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其保护心肌细胞的分子机制。方法采用差速贴壁法和化学抑制法分离大鼠原代心肌细胞,分别设正常对照组、模型组、正常血清对照组、苓桂术甘汤含药血清(5%、10%、20%)组。通过脂多糖诱导复制心肌细胞损伤模型,检测含药血清预处理后心肌细胞NF-κBp65、IKK-β、IκB-α和p-IκBα蛋白表达,NF-κBp65核移位情况,TNF-α、IL-1β和IL-6的含量变化。结果与正常对照组比较,模型组和正常血清对照组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达增加(P0.01),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达降低(P0.01),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量升高(P0.01);与模型组比较,苓桂术甘汤5%、10%、20%浓度含药血清组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达降低(P0.05),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达增加(P0.05),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低(P0.05),且干预效应与苓桂术甘汤含药血清呈浓度依赖趋势。结论苓桂术甘汤可调节IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达,干预下游靶分子的转录调控,有效抑制细胞因子的过度激活。     

慢盆消炎方对慢性子宫内膜炎模型大鼠NF-κB、IκB-α及TNF-α、MCP-1表达的影响

目的:观察慢盆消炎方对慢性子宫内膜炎模型大鼠NF-κB、磷酸化IκB-α、TNF-α、MCP-1的表达及其TNF-α、MCP-1含量变化的影响。方法:采用混合菌株接种法制作慢性子宫内膜炎大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为:模型组、妇乐组、中药组(慢盆消炎方),另设同龄正常大鼠为正常组,连续灌胃给药3周。给药结束取各组大鼠子宫内膜组织进行病理形态学观察;Western blot分析NF-κB、磷酸化IκB-α蛋白在子宫内膜组织表达水平;RT-PCR法检测各组子宫内膜组TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达;ELISA法测定各组大鼠血清TNF-α、MCP-1含量。结果:1、与正常组相比,模型组子宫内膜组织NF-κB蛋白、磷酸化IκB-α蛋白、TNF-αmRNA、MCP-1 mRNA表达水平显著上调(P0.01或P0.05),血清中TNF-α、MCP-1含量亦明显上升(P0.01);病理学显示模型组子宫内膜呈炎症改变,各层组织均有大量的炎性细胞浸润,并且黏膜层有出血。2、与模型组相比,妇乐组子宫内膜组织NF-κB蛋白、磷酸化IκB-α蛋白、TNF-αmRNA、MCP-1 mRNA表达水平有所下降(P0.05),但下降程度不如中药组;病理学显示上皮细胞结构已有较明显的修复,排列较整齐,但子宫内膜仍可见少量淋巴细胞浸润,伴腺体轻度扩张。3、与模型组相比,中药组子宫内膜组织NF-κB蛋白、磷酸化IκB-α蛋白、TNF-αmRNA、MCP-1 mRNA表达水平均显著下调(P0.01),血清中TNF-α、MCP-1含量亦明显下降(P0.01);病理学显示中药组子宫内膜各层结构基本恢复正常,仅见极少量淋巴细胞浸润。结论:慢盆消炎方具有治疗子宫内膜炎的功效,其机制可能与抑制NF-κB、磷酸化IκB-α、TNF-α;MCP-1表达及降低TNF-α、MCP-1含量相关。     

金荞麦对克雷伯杆菌肺炎大鼠肺组织损伤的保护作用及其机制

目的:研究金荞麦对克雷伯杆菌肺炎大鼠肺组织损伤的保护作用及其机制。方法:复制克雷伯杆菌肺炎大鼠模型。随机将雄性SD大鼠分成正常对照组、模型组、金荞麦(生药6、3、1.5 g/kg)组、左氧氟沙星(25 mg/kg)组。观察肺组织的病理改变,测大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、ICAM-1及INF-γ含量,采用免疫组化测肺组织中TNF-α、ICAM-1及NF-κB p65蛋白表达和原位杂交法测肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)mRNA表达。结果:模型组大鼠的肺脏组织损伤明显,血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、ICAM-1及INF-γ含量升高,模型组大鼠肺组织中TNF-α、ICAM-1、NF-κB p65的蛋白表达和MIP-2mRNA的表达均较对照组显著增强(P0.05或P0.01)。与模型组比较,金荞麦组和左氧氟沙星组大鼠肺组织损伤明显改善,血清中IL-6、IL-8、CAM-1及IFN-γ含量显著降低(P0.05或P0.01),肺组织中TNF-α、ICAM-1、NF-κB p65蛋白表达和MIP-2 mRNA的表达显著减弱(P0.05或P0.01)。结论:TNF-α、ICAM-1、NF-κB p65及MIP-2的表达上调参与了肺炎大鼠肺脏组织的损伤,金荞麦通过下调其表达来保护肺炎大鼠肺组织的损伤作用。     

4种归肺经中药对肺热证小鼠TLR2,NF-κB表达变化的研究

目的:研究麻黄、干姜、黄芩、桑白皮4味归肺经中药对肺热证小鼠肺组织TLR2,NF-κB p65表达的影响,探讨这4味中药干预肺热证的作用机制。方法:将100只健康KM种小鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄、干姜、黄芩、桑白皮组(20,10 g·kg^-1),鼻腔滴入肺炎链球菌菌液建立小鼠肺热证模型,分别给予不同中药治疗,应用免疫组化法检测肺组织TLR2,NF-κB p65蛋白含量,Real-time PCR法检测肺组织TLR2,NF-κB p65 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组TLR2,NF-κB p65蛋白含量升高（P<0.01）,mRNA表达上调（P<0.01或P<0.05）;与模型组比较,麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高剂量组TLR2蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高、低剂量组、桑白皮高、低剂量组NF-κB p65蛋白含量降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜高、低剂量组、黄芩高剂量组、桑白皮高剂量组TLR2 mRNA表达下调（P<0.01或P<0.05）。结论:麻黄、干姜、黄芩、桑白皮可能通过下调TLR2,NF-κB p65蛋白及mRNA表达,介导TLR2/NF-κB炎症信号通路,从而减轻小鼠肺热证肺组织损伤。     

蠲痹历节清方对痛风细胞模型中TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响

目的:研究蠲痹历节清方对痛风作用及对TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响。方法:实验分为两部分,①不添加TLR4受体抑制剂部分;②添加TLR4受体抑制剂部分。每部分利用单钠尿酸盐(MSU)结晶诱导巨噬细胞产生痛风模型,随机分正常对照组、模型组、蠲痹历节清方组,并分别干预。用Westen-blot法测定干预后巨噬细胞中髓样分化分子88(MyD88)、IκB激酶-β(IKK-β)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达,RT-PCR测定干预后各组巨噬细胞中Toll样受体4(TLR4)基因表达;免疫荧光法检测巨噬细胞核转录因子kappa B(NF-κB)核移位情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:不添加TLR4受体抑制剂部分:与正常对照组相比,模型组MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显升高;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高;IκB-α蛋白明显降低。与模型组比较,蠲痹历节清方组中MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显降低;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显降低;IκB-α蛋白含量明显升高。正常对照组血清组中NF-κB p65主要集中在细胞浆,细胞核中表达较少,模型组中NF-κB蛋白表达呈猩红色明显增强,主要集中在细胞核中,细胞浆中较少,表明NF-κB核移位明显;蠲痹历节清方组NF-κB主要在细胞浆中,细胞核中相对较少,未出现明显NF-κB核移位情况。同步使用通路阻断剂TAK-242(TLR4受体抑制剂)进行试验对照,上述通路及其上下游各分子(因子)水平均受到明显抑制。各组巨噬细胞NF-κB表达明显受到抑制。结论:蠲痹历节清方可改善痛风细胞模型炎症因子情况,抑制TLR4 mRNA及MyD88、IKK-β蛋白表达和上调IκB-α蛋白表达、抑制NF-κB活化作用,因此推测蠲痹历节清方治疗急性痛风性关节炎局部组织炎症的部分作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路表达有关,可能是以通路中MyD88依赖性信号转导经典途径。     

萆薢总皂苷对尿酸钠诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高质量浓度组(1,3,10 mg·L~(-1))和秋水仙碱组(0.2 mg·L~(-1)),除正常组外,其余各组均用400 mg·L~(-1)MSU刺激6 h,诱导体外炎症反应。噻唑蓝(MTT)比色法检测TSD对细胞活力影响;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,髓样分化因子88(MyD88)及NF-κB蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4,NF-κB及IL-1β前体(Pro-IL-1β)mRNA表达水平;免疫荧光法检测NF-κB p65的核位移情况。结果:0～32 mg·L~(-1)TSD对细胞活力基本无影响;与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌水平显著升高(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达显著升高(P0.01);与模型组比较,1～30 mg·L~(-1)TSD可显著下调炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达明显降低(P0.05,P0.01),细胞核内NF-κB p65叠加减少,部分转位至胞浆,抑制NF-κB p65核转位。结论:TSD可能通过下调TLR4,NF-κB及Pro-IL-1βmRNA的表达,减少炎性因子TNF-α及IL-1β分泌而发挥抗炎作用。     

黄芩苷抑制THP-1细胞NF-κB-HIF-1信号轴缓解痛风炎症的机制研究

目的 观察黄芩苷对单钠尿酸盐（MSU）诱导THP-1巨噬细胞核转录因子-κB(NF-κB)-缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号轴激活的调节作用，探讨其缓解痛风炎症的作用机制。方法 使用佛波酯（PMA）诱导THP-1单核细胞分化为M0巨噬细胞，以MSU刺激诱导体外炎症模型，再分别予黄芩苷、HIF-1α特异性siRNA进行干预。噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芩苷对细胞活力的影响；RT-PCR检测各组HIF-1α、RELA/NF-κB p65及白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA的表达水平；Western blotting及细胞免疫荧光法检测HIF-1α、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白含量及表达定位。结果 0～10μmol/L黄芩苷对细胞活力基本无影响；与对照组比较，MSU组HIF-1α、RELA及IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平上调（P <0.05），信号轴关键蛋白HIF-1α、p65、p-p65表达水平显著升高（P <0.05）,HIF-1α、p-p65在细胞核中荧光强度明显增强；...     

化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察化纤煎冻干粉溶液对人胚肺成纤维细胞增殖、活化、分泌细胞外基质的影响,并观察其对TNF-α细胞因子和NF-κB信号通路的调控,探讨化纤煎治疗特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:采用TGF-β_1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、活化,化纤煎冻干粉溶液进行干预,CCK8法检测化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响。qRT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,观察成纤维细胞向肌成纤维细胞转化、分泌细胞外基质情况。qRT-PCR法检测TNF-αmRNA、NF-κB p65 mRNA、IκBαmRNA、IKKβmRNA,Western Blot检测NF-κB p65蛋白,观察化纤煎对炎症反应因子TNF-α与炎症信号通路NF-κB的作用。结果:与空白对照组比较,模型对照组的细胞增殖水平显著增加(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎中、高剂量组MRC-5细胞增殖水平均明显下降(P0.01)。模型对照组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达水平显著高于空白对照组(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平显著低于空白对照组(P0.01)。与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平均上升(P0.05或P0.01)。模型对照组NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:化纤煎冻干粉溶液可能通过抑制炎症因子TNF-α分泌和NF-κB炎症信号通路活化,从而发挥抗纤维化作用。     

养阴清热化瘀方对急性放射性肺炎大鼠TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨养阴清热化瘀方对大鼠急性放射性肺炎的防护作用及可能机制。方法:采用随机数字表法将48只雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(NC)、模型组(MD)、养阴清热化瘀方提前干预组(YHF-EI)及养阴清热化瘀方组(YHF-ST),分别于照射后4周时采集血清及取出右肺。观察大鼠的一般情况,应用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测血清中含量, RT-PCR和Western-blotting法分别检测肺组织内TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白的水平。结果:养阴清热化瘀方能显著减轻大鼠放射性肺炎的炎症表现; 与空白对照组比较,血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量升高,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性增强,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平升高; 与模型组比较,两组养阴清热化瘀方组血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量降低,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性下降,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平降低。结论:养阴清热化瘀方可能通过抑制“TLR4/NF-κB”信号通路,从而抑制TNF-α、IL-6、TGF-β的产生,起到抵抗放射性肺炎的发生,从而发挥放射防护作用。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-κB p65，IκBα，IκKβ蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白激酶(IκK)/NF-κB抑制蛋白(IκB)/NF-κB信号通路的影响,探讨参苓白术散改善UC的作用机制。方法:将48只Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、参苓白术散(15.6 g·kg-1)组、奥沙拉嗪钠(0.68 g·kg-1)组,每组12只,脾虚湿困型UC大鼠模型采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠结合环境与饮食干预法复制,给药组连续灌胃14 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量,免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠结肠组织中NF-κB p65,IκBα,IκKβ蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠结肠组织NF-κB p65,IκBα,IκKβmRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α,IL-6及IL-1β含量均显著升高(P0.01),结肠组织NF-κB p65,IκKβ蛋白和mRNA表达显著升高(P0.01),IκBα蛋白和mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,参苓白术散组和奥沙拉嗪钠组大鼠血清TNF-α,IL-6及IL-1β水平均显著下降(P0.01),结肠组织NF-κB p65,IκKβ蛋白和mRNA均显著下降(P0.01),IκBα蛋白和mRNA表达显著升高(P0.01)。结论:参苓白术散能明显下调脾虚湿困型UC大鼠结肠组织NF-κB p65,IκKβ,蛋白和mRNA表达,上调IκBα蛋白和mRNA表达;参苓白术散抑制UC大鼠IκK/IκB/NF-κB信号通路活化是其发挥肠黏膜保护作用的重要机制。     

氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织细胞因子的影响

目的 探讨氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织核因子-κB (NF-κB)等细胞因子的影响.方法 采用大鼠盲肠结扎穿孔法制备大鼠感染性休克模型.造模后56只SD大鼠随机分为假手术组,氧化苦参碱对照组,模型组,氧化苦参碱高、中、低剂量(52、26、13 mg/kg)组、地塞米松阳性对照(10 mg/kg)组,各组给药1次.采用RT-PCR法测定心肌组织NF-κB (p65) mRNA的表达;Western blotting法测定心肌组织NF-κB (p65)及IκB-α的表达;放射免疫分析法测定心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)量的改变.结果 氧化苦参碱能显著抑制大鼠心肌组织NF-κB(p65) mRNA的表达及NF-κB (p65)和IκB-α的活性(P＜0.05),降低心肌组织匀浆中TNF-α及IL-1β的量(P＜0.05).结论 氧化苦参碱能通过抑制NF-κB (p65) mRNA的表达及诱导NF-κB激酶(NF-κB-inducing kinase,NIK)的活化,抑制细菌、病毒等对NF-κB的激活作用,减少TNF-α、IL-1β等促炎因子的表达,进而对感染性休克大鼠心肌损伤性病变发挥治疗作用.     

黄芩苷通过IκBα/NF-κB通路调节Aβ_(25-35)诱导的HT22细胞凋亡

目的探讨黄芩苷通过IκBα/NF-κB通路调节Aβ25-35诱导的HT22细胞凋亡。方法将HT22细胞分为空白组、模型组(40μmol/L Aβ_(25-35))、黄芩苷组(50μmol/L),多奈哌齐组(20μmol/L),给药组预处理1 h后加入Aβ_(25-35)。24 h后,MTT检测细胞存活率并观察细胞形态,Annexin V-FITF/PI检测细胞凋亡,Western blot法检测p-IκBα、p-NF-κB、TNF-α, IL-1β蛋白表达。结果与模型组比较,黄芩苷组与多奈哌齐组的细胞形态较完整、细胞密度较高、细胞间隙较小,细胞存活率升高(P0.01),细胞凋亡率降低(P0.01);p-IκBα,p-NF-κB, TNF-α, IL-1β蛋白表达较低(P0.05,P0.01)。结论黄芩苷可能通过抑制由Aβ_(25-35)激活的IκBα/NF-κB通路,减少TNF-α, IL-1β分泌,从而以减少神经元的凋亡,提高细胞的存活率。     

基于“脾为之卫”探讨历节胶囊对CIA小鼠炎症信号通路的影响

目的 观察历节胶囊对CIA小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响，探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法 将60只DBA/1小鼠随机分成3组：正常组，模型组，历节胶囊组，每组各20只。每组给药连灌21天后处死。Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达量；PCR检测TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA表达水平；ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 与正常组比较，模型组MyD88、NF-κB p65及TLR4的mRNA及蛋白表达量均上升，模型组的血清TNF-α水平升高，差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较，历节胶囊组MyD88、NF-κB p65及TLR4 mRNA及蛋白表达量均下降，血清TNF-α水平下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 历节胶囊可以通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65炎症信号通路以取得疗效。     

黄芩苷对ESBLs大肠埃希菌感染RAW264.7 细胞TLR4表达的影响

目的:体外研究黄芩苷经由TLR4信号转导途径抗ESBLs大肠埃希菌感染的作用及其机制.方法:用临床分离ESBLs大肠埃希菌接种于单层生长的RAW264.7细胞培养板中以及用黄芩苷(25,50 mg·L-1)预处理的单层生长的RAW264.7细胞培养板中,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测培养细胞TLR4 mRNA表达的变化,免疫荧光检测TLR4蛋白表达的变化,Western blot检测NF-κB表达的变化和酶联免疫吸附(ELISA)检测培养上清中TNF-α含量的变化.结果:ESBLs大肠埃希菌上调RAW264.7细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达,NF-κB表达量增加,培养上清中TNF-α含量升高.黄芩苷能抑制大肠埃希菌对RAW264.7细胞TLR4 mRNA和蛋白的上调作用,降低NF-κB的活化,减少TNF-α的分泌,抑制作用呈现黄芩苷剂量依赖性.结论:黄芩苷对ESBLs大肠埃希菌体外直接抑菌作用虽然较弱,但可通过抑制TLR4及其介导的信号转导途径减少炎性因子的生成,从而发挥抗炎作用.     

苓桂术甘汤调节心室重构模型大鼠心肌组织NF-κB信号通路的分子机制研究

目的:观察苓桂术甘汤对心室重构大鼠心肌组织NF-κB信号通路相关分子表达的影响,探讨其抑制心室重构的分子机制。方法:采用冠脉结扎复制心梗后心室重构大鼠模型,造模2 w后,药物连续干预4 w,采用Western blot法检测模型大鼠心肌组织NF-κBp65、IKK-β、IκB-α及p-IκBα的蛋白表达,采用ELISA法检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β及IL-6的含量,采用HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化。结果:心室重构模型大鼠出现明显的心肌细胞损伤及间质纤维化等病理变化,与假手术组比较,心肌组织NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达显著升高,IKK-β、IκB-α蛋白表达显著降低,血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤各剂量干预4 w后,可显著改善模型大鼠心肌组织损伤,抑制NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达、上调IKK-β、IκB-α蛋白表达,降低血清TNF-α、IL-1β及IL-6含量(P0.05或P0.01)。结论:苓桂术甘汤改善心肌组织损伤、抵制心室重构的作用机制与抑制心肌组织NF-κB信号通路过度激活有关。     

狼疮定对系统性红斑狼疮活动期肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞中pDC含量及TLR7/TLR9/MyD88通路的影响

目的探讨狼疮定治疗系统性红斑狼疮(SLE)活动期肝肾阴虚证的可能作用机制。方法收取SLE活动期肝肾阴虚证患者及正常人全血分离外周血单个核细胞(PBMC),并将SLE活动期肝肾阴虚证患者PBMC分为模型组、狼疮定组(狼疮定冻干粉2μg/μl)、狼疮定+地塞米松组(狼疮定冻干粉2μg/μl+地塞米松注射液10μg/ml)、地塞米松组(地塞米松注射液10μg/ml)。用药24h后收集细胞,采用流式细胞术检测正常人与活动期SLE患者及各组PBMC中浆细胞样树突状细胞(pDC)含量。采用Realtime-PCR法检测各组PBMC细胞Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(MyD88) mRNA表达水平,Western blotting检测TLR7、TLR9、MyD88、核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达,ELISA法检测其上清中干扰素α(IFN-α)含量。结果与正常人比较,SLE活动期患者外周血PBMC中pDC含量减少(P0.01)。与模型组比较,狼疮定组pDC含量、NF-κB p65蛋白表达增多,MyD88 mRNA及TLR7、TLR9蛋白表达、培养上清中IFN-α含量减少(P0.05或P0.01);狼疮定+地塞米松组TLR9、MyD88 mRNA及TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白表达,培养上清中IFN-α含量减少(P0.05或P0.01)。与地塞米松组比较,狼疮定组pDC含量增多,TLR7、MyD88 mRNA表达降低,培养上清中IFN-α含量降低;狼疮定+地塞米松组TLR7、TLR9、MyD88 mRNA表达及MyD88、NF-κB p65蛋白表达,培养上清中IFN-α含量均降低(P0.01)。与狼疮定组比较,狼疮定+地塞米松组NF-κB p65蛋白表达减少(P0.01)。结论狼疮定及狼疮定联合地塞米松可能通过增多活动期SLE患者PBMC中pDC含量,抑制其PBMC的TLR7/TLR9/MyD88信号通路,进而抑制SLE病情进展,且狼疮定联合地塞米松效果更好。