丝胶对2型糖尿病大鼠海马蛋白激酶B信号转导通路的作用

目的探讨丝胶(彩色蚕茧经浸泡、水煎、浓缩获得)对2型糖尿病大鼠海马蛋白激酶B(Akt)信号转导通路的作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为3组(n=12):正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组。小剂量链脲佐菌素(25mg/kg)连续腹腔注射(1次/d,3d)建立2型糖尿病大鼠模型。丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃[2.4g/(kg·d),35d]。TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,Western blotting法和RT-PCR法检测海马Akt信号转导通路相关因子Akt、核转录因子kappa B(NF-κB)和前凋亡因子Bad蛋白和mRNA的表达。结果与正常对照组比较,糖尿病模型大鼠海马CA1区神经元的凋亡指数明显升高(P0.01);海马Akt、NF-κB的表达明显降低,Bad的表达明显升高(P0.01)。与糖尿病模型组比较,丝胶治疗组大鼠海马CA1区神经元的凋亡指数明显降低(P0.05);海马Akt、NF-κB的表达明显升高,Bad的表达明显降低(P0.01,P0.05)。结论丝胶可通过调节糖尿病模型大鼠海马Akt信号通路的异常变化减少海马神经元凋亡,对糖尿病海马损伤具有一定的拮抗作用。     

血糖波动对糖尿病大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察糖尿病大鼠在血糖波动状态下海马神经元的病理形态学改变及BCL-2、BAX的异常表达,探讨血糖波动对糖尿病大鼠海马神经元的影响。方法　用链脲佐菌素(STZ) 诱导,间断短效胰岛素应用制备糖尿病血糖波动模型。12周后,用免疫组化法检测海马神经元凋亡蛋白BCL-2、BAX 的表达,分别在光镜、透射电镜下观察各组海马神经元病理形态学改变及超微结构的变化。结果DM组BCL-2的表达较N组显著下降,BAX显著升高(P<0.01),出现锥体细胞退变的典型病理改变。RDM组BCL-2的表达较DM组进一步下降,BAX进一步升高,差异有统计学意义 (P<0.05),病理改变较DM组进一步加重。结论　糖尿病大鼠血糖波动可明显加速海马CA1区神经元凋亡,BCL-2、BAX的异常表达可能是糖尿病大鼠海马神经元损伤机制之一。     

三七三醇皂苷对糖尿病大鼠学习记忆功能的改善作用

目的探讨三七三醇皂苷(panax notoginseng,PTS)对糖尿病大鼠学习记忆的改善作用及可能机制。方法链脲佐菌素诱导SD大鼠糖尿病模型,将大鼠分为对照组、糖尿病组及PTS组,3个月后水迷宫实验检测大鼠学习记忆,Nissl染色观察脑海马区神经元形态,TUNEL染色观察海马区神经元凋亡,免疫组化染色和Western blot检测凋亡相关基因Bax在海马区的表达情况。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠学习记忆能力减退,表现为逃避潜伏期长以及穿经水迷宫平台次数减少,而且脑海马区神经元形态不规则,排列紊乱,结构不清晰,凋亡神经元及Bax表达均明显增加。PTS组与对照组无明显差别。结论PTS改善糖尿病大鼠学习记忆能力可能与下调糖尿病脑海马区神经元Bax的表达,抑制神经元凋亡相关。     

侧脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马突触相关蛋白PSD-95和Shank 1表达的影响

目的 观察侧脑室注射链脲佐菌素对大鼠脑PSD-95和Shank1表达的影响.方法 将大鼠随机分为正常对照组和模型组,模型组大鼠双侧侧脑室注射链脲佐菌素3mg/kg,第3d重复此剂量;对照组以人工脑脊液代替链脲佐菌素.21d后,取大鼠海马,用免疫组织化学和Western blotting方法观察突触相关蛋白PSD-95和Shank1的表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠海马PSD-95和Shankl阳性细胞明显减少,PSD95和Shank1蛋白表达降低.结论 侧脑室注射链脲佐菌素使海马PSD-95和Shank1表达减少,干扰了神经元突触信号传导.     

远志对糖尿病大鼠海马神经细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨远志对糖尿病(DM)大鼠海马神经细胞的影响.方法:大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、远志治疗组和远志预防组.除正常对照组外均建立链脲佐菌素致糖尿病模型.远志预防组大鼠在建模同时给予远志灌胃6周;此后给予远志治疗组大鼠远志灌胃6周.采用尼氏染色法观察大鼠海马CA1区神经细胞形态并计数神经细胞数量;采用免疫印迹检测大鼠海马组织Bcl-2和Bax的表达.结果:与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠海马CA1区神经细胞形态异常,数量减少,Bcl-2表达降低,Bax表达升高;与糖尿病模型组比较,远志治疗组与远志预防组大鼠海马CA1区生存神经细胞数量增多,Bcl-2表达升高,Bax表达降低.结论:远志可通过上调糖尿病大鼠海马Bcl-2的表达,并减少Bax的表达,抑制海马神经细胞凋亡,促进其存活,从而发挥对糖尿病大鼠海马损伤的预防保护作用.     

GAP-43在Ⅰ型糖尿病早期大鼠脑海马中的表达变化

目的:观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠早期海马生长相关蛋白(GAP-43)的变化,探讨GAP-43在糖尿病脑病发病中的重要作用。方法:本实验将SD雄性大鼠20只随机分为正常组及糖尿病组,用STZ复制糖尿病动物模型,饲养5d后测血糖,4周后进行灌注固定,应用免疫组织化学方法观察糖尿病组和正常组的大鼠海马CA1、CA2、CA3和CA4区GAP-43的表达情况。结果:糖尿病组大鼠的海马各区GAP-43的表达明显增高,尤以CA1和CA3区的表达增高最为明显,与正常组比较有显著性差异(P0.05)。结论:结果表明,在糖尿病早期海马内GAP-43已发生了变化,特别是与记忆有关的CA1和CA3区,提示GAP-43的改变可能与糖尿病脑病的发病密切相关。     

糖尿病大鼠自主神经节内细胞凋亡增加

近年来细胞凋亡与糖尿病及其并发症的关系倍受关注。本研究拟在体内条件下观察糖尿病大鼠自主神经节内细胞凋亡情况,同时应用神经生长因子(never growth factor,NGF)进行干预,观察其对细胞凋亡的影响。1材料与方法1·1药物及试剂:链脲佐菌素(S igm a公司)。神经生长因子(从雄性小鼠颌下腺提取纯化的NGF,纯度>95%)(南京军区军事医学研究所惠赠)。细胞凋亡检测试剂盒(BoehringerM annhe im公司)。1·2糖尿病动物模型制作:雄性SD大鼠,体重(180~230)g,按65 mg/kg剂量1次性腹腔注射链脲佐菌素,连续3 d尾静脉取血,血糖稳定且>16·7 mmol/L者…     

胰岛素对糖尿病大鼠海马一氧化氮合酶阳性神经元变化的影响

观察实验性糖尿病大鼠海马一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元变化及胰岛的治疗作用。给成年SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，每日给予长效胰岛素2－3U使血糖低于10mmol/L，于第3月及第6月末以NADPH－d组化法显示海马NOS阳性神经元。并做Morris水迷宫行为学测试。海马NOS阳性神经元密度变化如下：糖尿病组齿状回3月时显著减少（P＜0．01），6月时更明显（P＜0．01）；CA1区6月时显著降低（P＜0．01）；治疗组齿状回3月时恢复正常，而6月时低于正常（P＜0．01）但高于糖尿病组3月时（P＜0．05），CA1区3月，6月均恢复正常。行为学测试中各组大鼠逃避潜伏期变化与齿状回NOS阳性神经元密度变化一致。以上变化可能与糖尿病学习记忆功能损伤有关。胰岛素治疗可延缓其发生。     

脑室注射链脲佐菌素对大鼠空间学习记忆能力及海马CA1区神经元数量和海马突触素表达的影响

为了观察脑室内注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对大鼠空间学习记忆能力的影响,分析其可能的内在机制,本实验选用40只SD大鼠随机分成对照组和模型组,模型组于第1 d和第3 d脑室注射STZ(总量3 mg/kg)建立Alzheimer病(AD)模型,15 d后进行Morris水迷宫试验,利用RT-PCR方法检测突触素(synaptophysin,SYP)mRNA的表达变化;Nissl染色观察海马结构的改变。结果显示:与对照组相比,脑室注射STZ后大鼠平均上台潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少,靶象限游泳时间的百分比降低,SYP mRNA的表达明显减少,Nissl染色见海马CA1区神经元减少。以上结果提示脑室注射STZ可损伤大鼠的空间学习记忆能力,这可能与海马CA1区神经元和突触结构的损伤有关。     

DHA对糖尿病认知障碍大鼠海马神经元SDF-1/CXCR4通路的影响

目的:研究DHA对糖尿病认知障碍大鼠空间学习记忆的作用,探讨DHA对糖尿病大鼠海马神经元SDF-1/CXCR4表达的影响。方法:采用SD大鼠,随机分为对照组、对照+DHA组、糖尿病组和糖尿病+DHA组,以高脂膳食加小剂量链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,ELISA法、PCR法检测海马神经元SDF-1、TNF-α含量,免疫组化法检测CXCR4受体表达情况,Western Blot法检测海马神经元JNK磷酸化水平。结果:DHA可在一定程度上改善糖尿病大鼠学习记忆能力。糖尿病大鼠海马神经元TNF-α和p-JNK水平升高,SDF-1水平明显降低,CXCR4受体阳性神经元数量明显减少。DHA抑制TNF-α和JNK磷酸化,增加CXCR4的表达,升高SDF-1的含量。结论:DHA可减轻糖尿病大鼠的认知损伤,其机制可能与提高SDF-1水平,抑制海马神经元JNK磷酸化,降低炎性因子水平有关。     

辛伐他汀对糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的影响及其机制研究

目的 探讨辛伐他汀糖尿病脑病大鼠认知功能的改善作用及可能机制。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病脑病大鼠模型，选取模型制备成功的大鼠随机分为模型组与辛伐他汀组(20 mg/kg),每组8只，另取同龄8只SD大鼠作为对照组，连续灌胃5周。测定大鼠空腹血糖水平；Morris水迷宫测定大鼠认知功能；HE染色观察大鼠脑组织海马病理损伤；Nissl染色观察大鼠海马神经元；ELISA检测大鼠脑组织白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平；Western blot检测大鼠脑组织中SIRT1、NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-18蛋白表达。结果 与模型组相比，辛伐他汀组大鼠空腹血糖水平显著降低，认知功能显著改善，海马区病理性损伤减轻，海马尼氏体数量增加，IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低，SIRT1蛋白表达水平升高，而NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-18蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 辛伐他汀可通过调控SIRT1/NLRP3通路改善糖尿病脑病大鼠认知功能。     

糖尿病大鼠海马生长相关蛋白GAP-43表达的研究

目的:确定链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠早期海马区生长相关蛋白(GAP-43)的表达,研究GAP-43在糖尿病时海马组织中的变化并讨论其意义。方法:SD雄性大鼠16只分为对照组和糖尿病组。用STZ制作糖尿病大鼠模型,饲养5 d,然后测血糖以确定模型大鼠成功。4周后进行灌注固定,按要求进行组织学病理检查和免疫组织化学方法观察糖尿病组和对照组的大鼠海马CA1、CA2、CA3和CA4区GAP-43的表达情况。结果:与对照组大鼠比较,糖尿病大鼠血糖明显升高(P0.05),部分锥体细胞的胞体明显增大,核显著着色;海马各区GAP-43的表达显著,特别是CA1和CA3区的表达增高更为显著(P0.05),同时海马各区GAP-43阳性颗粒平均灰度值明显降低(P0.05)。结论:结果表明,在糖尿病大鼠早期海马中GAP-43的表达发生了改变,提示大脑出现了实质性损伤并伴有再生,而这些改变主要发生在记忆相关的CA1和CA3区,这对研究糖尿病性神经病变具有重要意义。     

脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用.方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型.3周后,皮下注射App17肽.4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析.结果 模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01).Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P＜0.01).结论 脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低.App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常.胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用.     

实验性糖尿病大鼠海马星形胶质细胞形态和凋亡的研究

目的:研究糖尿病高血糖大鼠海马星形胶质细胞形态和凋亡改变。方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱导Ⅰ型糖尿病SD大鼠模型,并以正常SD大鼠作对照。分别于1、2、4周和8周用组织学、免疫组织化学、免疫荧光和Western Blot等方法对比研究糖尿病高血糖对大鼠海马区星形胶质细胞形态和凋亡的作用。结果:与正常对照比较,大鼠糖尿病高血糖1~2周,脑组织结构基本正常,海马区固缩神经元偶见,4~8周固缩神经元数明显(P0.05),出现轻微脑水肿,星形胶质细胞胞体轻度肿胀;免疫荧光和免疫组织化学检测显示,糖尿病高血糖1~2周,星形胶质细胞胞体增大和突起增粗,4~8周时突起增粗变长,星形胶质细胞数量减少(P0.05);Western Blot结果表明,大鼠糖尿病高血糖4~8周时,脑组织胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)含量明显升高(P0.05);免疫组化双标显示,糖尿病高血糖大鼠1~2周偶见cleavedcaspase-3阳性标记的星形胶质细胞(P0.05),4~8周海马区双标阳性细胞数明显增多(P0.01)。结论:大鼠糖尿病高血糖早期对星形胶质细胞可能有激活作用,而持续的糖尿病高血糖则可抑制海马区星形胶质细胞,并可能导致星形胶质细胞凋亡。     

侧脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元突触的影响

为观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)双侧侧脑室注射对大鼠海马神经元突触的影响,本研究将Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,模型组大鼠分别于第1、3d双侧侧脑室重复注射STZ3mg/kg,对照组以人工脑脊液代替STZ。21d后,取大鼠海马,免疫组织化学染色及Western blotting方法观察突触素、活性调节细胞骨架相关蛋白(activity-regulated cytoskeletal-associatedprotein,Arc)的表达;电镜观察海马CA1区神经元突触超微结构的改变。结果显示:与对照组相比,模型组大鼠海马内突触素蛋白表达显著减少,而Arc蛋白表达显著增多;模型组海马CA1区神经毡内突触结构异常,突触小泡聚集增多。以上结果提示:脑室注射STZ可影响大鼠海马突触相关蛋白的表达,引起突触超微结构异常,干扰了神经元突触信号的传导。     

二甲双胍抑制p38MAPK/ATF2信号通路改善糖尿病大鼠认知功能障碍

目的 探索二甲双胍对糖尿病大鼠认知功能障碍的保护作用，探讨p38 MAPK/ATF2信号通路的作用。方法 30只SD大鼠随机分成空白组、模型组及二甲双胍组，每组10只。除空白组外均给予高糖高脂饲料，50 d后腹腔注射链脲佐菌素（STZ, 30 mg/kg）建立2型糖尿病脑病模型。模型制备成功后，二甲双胍组大鼠腹腔注射100 mg/kg二甲双胍，连续给药6周，空白组和模型组给予等体积蒸馏水。Morris水迷宫检测各组大鼠认知能力；HE染色观察海马区形态学变化；TUNEL染色检测神经元凋亡；Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3以及p38 MAPK、p-p38 MAPK、ATF2蛋白的表达情况。结果 二甲双胍组大鼠逃避潜伏期明显缩短，目标象限停留时间延长，穿越平台次数相应增加，海马区神经细胞结构改善、神经元凋亡数量显著降低，Bax/Bcl-2比值和Cleaved-caspase3蛋白表达水平显著降低，二甲双胍还能够抑制p-p38 MAPK、ATF2蛋白的表达。结论 二甲双胍改善糖尿病大鼠认知功能，与抑制p38 MAPK/ATF2信号通路有关。     

大鼠创伤性脑损伤后细胞凋亡及NOS阳性细胞的变化

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时相皮质、海马、隔区细胞凋亡及NOS、ChAT阳性细胞的变化。方法：采用大鼠自由落体脑损伤模型，伤后1、2、3、4、5、7、10d取脑切片，经Nissl染色，用TUNEL法检测细胞凋亡，NADPH—d组化染色观察NOS阳性细胞，ChAT免疫组化染色观察隔区ChAT阳性细胞。结果：Nissl染色可见损伤侧海马CA2、CA3区锥体细胞层细胞消失或紊乱。损伤区周围皮质凋亡细胞伤后3d达到高峰；损伤侧海马凋亡细胞伤后5d达到高峰；损伤侧隔区凋亡细胞7d达到高峰。正常侧上述脑区各时相点均未见到凋亡细胞。损伤区周围皮质、损伤侧海马和隔区iNOS阳性细胞数量明显增加。损伤侧隔区ChAT阳性神经元也明显减少。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马、隔区细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞iNOS表达增加是导致细胞凋亡的因素。     

糖皮质激素对糖尿病大鼠学习记忆及Bax表达的影响

目的探讨糖皮质激素对糖尿病大鼠学习记忆及Bax表达的影响。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,将实验分为3组:正常对照组,糖尿病组,RU486组(糖皮质激素受体阻断剂)即给予RU486的糖尿病大鼠。3个月后水迷宫检测大鼠学习记忆能力,TUNEL染色检测脑海马区神经元凋亡,免疫组化及Western检测脑海马区Bax蛋白表达。结果水迷宫检测显示,与对照组相比糖尿病大鼠逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少(均<0.01),出现了学习记忆能力减退的表现,RU486组较对照组无明显变化(>0.05)。与对照组相比,糖尿病组脑海马区凋亡神经元数目增多,Bax表达增加(<0.01),RU486组较对照组无明显变化(>0.05)。结论糖皮质激素能促进糖尿病大鼠脑海马区凋亡相关基因Bax表达,诱导神经元凋亡,损害学习记忆能力。     

糖尿病大鼠海马毛细血管超微结构观察

目的:观察实验性糖尿病大鼠海马毛细血管超微结构改变。方法:将成年SD大鼠随机分为正常对照组（5只）、糖尿病组（12只,经腹腔注射链脲佐菌素制备实验性糖尿病大鼠模型）、糖尿病治疗组（12只,给予部分成模大鼠长效胰岛素2-3U/日治疗,使血糖低于10mmol/L）,于成模第3月末及第6月末灌注固定取脑,透射电镜下观察海马CA1区毛细血管。结果:糖尿病大鼠海马毛细血管基底膜增厚、内皮细胞与周细胞退变。6月组病变较3月组更显著,各治疗组改变较轻微。结论:糖尿病可导致大鼠海马毛细血管基底膜增厚,早期应用胰岛素治疗可延缓其发生。     

Genistein后处理介导eNOS激活及其对缺血后神经元的保护作用

 目的 研究Genistein后处理 (Genistein Postconditioning, GPC) 对脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用,及其对eNOS磷酸化水平的影响,从而揭示GPC神经保护作用可能的分子机制。方法 建立大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,采用Western Blot技术检测大鼠海马CA1区eNOS、p-eNOS的表达;NeuN染色和TUNEL技术分别观察海马CA1区神经元的存活和凋亡样损伤。结果 1. Western Blot结果显示,与I/R组相比GPC后再灌注30min和3d p-eNOS水平显著升高,而eNOS蛋白表达在各个时间点没有明显变化。2. 激光扫描共聚焦显微镜技术结果显示,GPC组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加,而凋亡样损伤的神经元显著减少;3. NOS抑制剂L-NAME不但有效降低p-eNOS水平,而且可显著减弱GPC诱导的神经保护作用。结论 Genistein后处理可抑制大鼠海马CA1区神经元凋亡,其机制可能与p-eNOS表达上调有关。