葫芦素B对压力负荷诱导的心肌纤维化的作用机制

目的探讨葫芦素B对压力负荷诱导的心肌纤维化的作用机制。方法选择C57小鼠60只,随机分为假手术组、葫芦素B组、结扎术组(主动脉结扎术)、联合组(葫芦素B+主动脉结扎术),每组15只。术后1周给予葫芦素B灌胃处理[0.2mg/(kg·2d),持续到术后4周],主动脉结扎术诱导心肌纤维化模型。用免疫组织化学方法检测心脏微血管密度;免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;运用免疫荧光染色和蛋白免疫印迹法检测CD31、CD34、α-SMA和波形蛋白表达和内皮间质转化程度。结果假手术组和葫芦素B组术后4周心脏微血管密度、α-SMA,波形蛋白、CD31、CD34表达无明显变化(P0.05)。与假手术组比较,结扎术组术后4周心脏微血管密度、CD31、CD34表达明显下调,α-SMA、波形蛋白表达明显增加(P0.05)。联合组术后4周心脏微血管密度、CD31、CD34表达明显高于结扎术组(4.31±1.06 vs 2.24±0.78,0.22±0.04 vs 0.05±0.02,0.12±0.02 vs0.04±0.01,P0.05),α-SMA、波形蛋白表达明显低于结扎术组(0.31±0.03 vs 0.98±0.04,0.05±0.02 vs 0.53±0.07,P0.05)。结论葫芦素B可以通过抑制内皮向间质转化改善压力负荷诱导的心肌纤维化。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管间质TGF-β1和α-SMA的影响

目的 研究血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂(AT1RA)--氯沙坦对链脲佐菌素(STZ)大鼠肾小管间质转化生长因子-β1(TGF-β1)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 用Wistar大鼠建立STZ诱导的糖尿病(DM)大鼠模型,设正常对照组(A),糖尿病组(B)和糖尿病+氯沙坦治疗组(C).用免疫组化方法检测肾小管间质TGF-β1和α-SMA蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β1mRNA.结果 TGF-β1和α-SMA在DM大鼠肾小管间质的表达较正常对照组显著升高(P＜0.05),C组与同期B组相比明显降低(P＜0.05).结论 氯沙坦能降低糖尿病大鼠肾小管间质TGF-β1和α-SMA的表达,缓解肾小管间质病理损害.     

肾小球疾病中肾小管间质纤维化的研究

目的 研究肾小球疾病中肾小管间质纤维化的发生机制。方法 通过对44例病因、病理类型和肾功能损伤程度不同的原发性和继发性肾小球疾病的临床和病理分析研究(包括硬化性肾小球肾炎15例、结节性硬化性糖尿病肾病10例，膜性肾病19例)肾小球、肾小管和肾间质的损伤，并进行TGFβ1、α-SMA、I、Ⅲ型胶原蛋白表达的回顾性分析，探讨它们与肾小管间质损伤之间的关系。结果 肾小球的损伤与肾小管间质纤维化密切相关;TGFβ1的表达位于损伤的肾小管上皮细胞，Ⅰ、Ⅲ型胶原和肌纤维母细胞(α—SMA阳性细胞)主要位于增生的肾间质，其中，Ⅰ、Ⅲ型胶原还见于部分肾小管上皮细胞。它们的表达均与肾小管间质损伤程度相关。肾小管TGFβ1的表达还与肾间质肌纤维母细胞及Ⅲ型胶原的表达相关。肾间质肌纤维母细胞的表达又与肾间质Ⅰ、Ⅲ型胶原表达相关。结论 损伤的肾小管是肾小管间质纤维化的中心环节。受缺血缺氧、尿蛋白和尿糖损伤的肾小管上皮细胞通过自分泌和旁分泌的途径，产生多种细胞因子(TGFβ1等)和表型转化(产生Ⅰ、Ⅲ型胶原等)，在人类肾小球疾病进行性发展至肾纤维化的过程中起重要作用。     

α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子-β1在高尿酸血症大鼠肾小管间质纤维化中的表达

目的观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子-β1(TGF-β1)在高尿酸血症(HUA)大鼠肾小管间质纤维化(RIF)过程中的表达及意义。方法 SD大鼠36只,随机分为对照组(Con)、模型组及非布司他组,每组12只。氧嗪酸钾(OP)溶于0.5%的羧甲基纤维素钠(CMC)溶液,模型组和非布司他组用OP灌胃,1次/d,制备HUA模型,非布司他组另予非布司他灌胃,Con组仅予等量0.5%(CMC灌胃。于0、4、8周后检测血尿酸(SUA)、血肌酐(Scr)及BUN,收集24 h尿量,检测24 h尿蛋白定量。第0、4、8周末每组随机处死4只大鼠,HE染色及Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组织化学法检测α-SMA、TGF-β1的表达。结果实验4周后,与Con组比较,模型组SUA、Scr、BUN升高(P0.05或P0.01),TGF-β1、α-SMA表达量增多(P0.01),肾小管间质发生纤维化。实验8周后,RIF加重;非布司他组RIF较模型组减轻(P0.01)。结论 HUA诱导肾组织TGF-β1、α-SMA表达量增加;α-SMA及TGF-β1表达增多促进RIF发生。     

胰岛素治疗对糖尿病大鼠肾脏自噬水平及纤维化影响的观察

目的观察胰岛素治疗对糖尿病大鼠肾脏纤维化的影响。方法将24只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC,n=8)、糖尿病模型组(DM,n=8)和胰岛素治疗组(DMA,n=8)。HE、Masson染色,qRT-PCR和Western blot分别检测肾组织中自噬及纤维化相关指标的变化。结果HE、Masson染色结果显示,DM组肾小管上皮细胞空泡变形甚至萎缩脱落,肾小管基底膜增厚,炎症细胞浸润;肾小管及肾间质大量蓝色胶原纤维沉积。qRT-PCR结果显示,与DM组比较,DMA组肾组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)[(1.06±0.42)vs(0.22±0.02)]和胶原I(Col I)mRNA[(18.03±8.42)vs(6.36±1.89)]表达下降(P0.05),自噬相关蛋白Beclin1mRNA[(0.74±0.26)vs(1.35±0.61)]表达上调(P0.05)。Western blot结果显示,与DM组比较,DMA组肾组织中α-SMA[(0.06±0.02)vs(0.02±0.01)],Col I[(0.74±0.18)vs(0.22±0.12)]以及泛素结合蛋白(p62)[(0.7±0.1)vs(0.3±0.11)]表达减少(P0.05),Beclin1[(0.02±0.01)vs(0.05±0.01)]和自噬标记蛋白(LC3)[(0.02±0.01)vs(0.06±0.04)]表达增加(P0.05)。结论自噬相关蛋白可能有参与胰岛素对糖尿病肾脏疾病治疗的作用机制。     

miR-200c改善转化生长因子－β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化的机制

目的探讨miR-200c是否通过调节自噬缓解转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞纤维化。方法不同浓度(0、5、10、15、20、30 ng/ml)TGF-β1刺激HK2细胞48 h后倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8检测细胞增殖情况。选择致HK2细胞增殖最快的TGF-β1浓度(c)进行转染实验:细胞转染40 nmol/L无意义序列RNA(NC组);细胞转染40 nmol/L无意义序列RNA后c浓度TGF-β1处理细胞48 h(NC+T组);细胞转染40 nmol/L miR-200c mimics(M组);细胞转染40 nmol/L miR-200c mimics后c浓度TGF-β1处理细胞48 h(M+T组)。qRT-PCR检测miR-200c转染效率。Western blotting检测4组细胞Smad通路蛋白Smad2和Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cad)表达量,以及自噬相关蛋白LC3(包括LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值)和P62。结果 10 ng/ml的TGF-β1刺激HK2细胞48 h后增殖最快,镜下细胞形态由正常的卵圆形铺路石状变为长梭形,纤维化形态最明显。qRT-PCR显示M组miR-200c表达量是NC组(212.42±12.25)倍(t=24.41,P=0.000),说明转染有效。Western blotting结果显示,与NC组比较,NC+T组加入10 ng/ml TGF-β1的HK2细胞Smad2、Smad3和α-SMA表达量增加,E-cad蛋白表达量降低(P0.05)。与NC+T组比较,M+T组Smad2、Smad3和α-SMA表达量减少,E-cad表达量增加(P0.05),提示miR-200c表达增加抑制了纤维化。进一步发现,M组较NC组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平增加,P62表达水平降低,提示自噬活性增加;M+T组较NC+T组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平增加,P62表达水平降低,提示miR-200c表达升高缓解了纤维化程度。结论 miR-200c可能通过激活细胞自噬缓解TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化。     

转换生长因子-β_1对肺成纤维细胞窖蛋白-1与细胞外基质表达的影响

目的 研究转换生长因子-β_1(TGF-β_1)对人胚肺成纤维细胞(HFLF)的窖蛋白-1、Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养HFLF,以未加TGF-β_1的HFLF为对照组.分别以不同终浓度(2、5和10 μg/L)TGF-β_1处理的HFLF为实验组,每组5×10~8细胞,实验重复3次,逆转录-PCR和Western blot法分别检测TGF-β_1刺激3、6、12和24 h后各组窖蛋白-1及其mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达.组间均值比较采用单因素方差分析,采用直线回归模型进行相关性分析.结果 TGF-β_1作用后,HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达逐渐减少,呈时间-浓度依赖关系;TGF-β_1作用12 h,中剂量组(5 μg/L)窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达的积分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明显低于对照组(1.22±0.12和1.45±0.06),差异均有统计学意义(F值分别为29.279和95.786,均P＜0.01);TGF-β_1作用24 h,中剂量组(5 μg//L)Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达的积分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明显高于对照组(0.28±0.04和0.18±0.04),差异均有统计学意义(F值分别为81.221和65.477,均P＜0.01);相关分析结果显示,HFLF窖蛋白-1的蛋白表达下调与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调旱显著负相关(r值分别为-0.923和-0.793,均P＜0.05).结论 TGF-β_1可下调HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋门表达,并与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调呈负相关,提示HFLF窖蛋白-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关.     

辣椒素通过抑制肾小管间质纤维化改善高盐诱导肾脏损害的作用

目的探讨辣椒素对高盐诱导肾小管间质纤维化(RIF)的作用和机制。方法雄性Wistar大鼠36只,随机分为普食组(n=12,0.5%正常盐饲料)、高盐组(n=12,4%高盐饲料)、辣椒素组(n=12,4%高盐+0.02%辣椒素饲料)。每4周用智能无创鼠尾动脉血压仪测大鼠尾动脉收缩压;24周测定血肌酐、24h尿蛋白、尿视黄醇结合蛋白和尿TH-糖蛋白;HE、Masson染色观察肾髓质形态及纤维化;免疫组化法及Western-blot法检测肾髓质区瞬时受体电位通道香草醛亚型1(TRPV1)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)、p-Smad2/3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达。结果与普食组相比,高盐组大鼠血压升高[(138.9±6.8)比(107.8±7.6)mm Hg,P0.05],RIF指数明显增高(23.55±2.23比11.30±1.26,P0.05),24h尿蛋白、视黄醇结合蛋白明显增高,TH-糖蛋白降低;肾脏髓质区TRPV1表达降低,TGF-β_1、α-SMA、p-Smad2/3、波形蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达增高。辣椒素干预后,大鼠尾动脉收缩压较高盐组明显降低[(119.5±8.3)比(138.9±6.8)mm Hg,P0.05],RIF指数明显降低(15.65±1.72比23.55±2.23,P0.05),24h尿蛋白、视黄醇结合蛋白降低,TH-糖蛋白排泄增高,肾髓质TRPV1表达明显增加,TGF-β_1、α-SMA、p-Smad2/3、波形蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达显著降低(均P0.05)。结论长期高盐摄入可诱导Wistar大鼠RIF,辣椒素可能通过激活TRPV1,抑制RIF,改善高盐诱导的高血压肾脏损伤。     

五灵胶囊调节TGF-β/Smad信号通路蛋白对胶原Ⅰ、Ⅲ型表达的影响

目的探讨五灵胶囊(WL)调节肝纤维化大鼠肝组织及星状细胞(HSC)TGF-β/Smads信号转导蛋白对胶原Ⅰ和Ⅲ型(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)表达的影响.方法SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10%乙醇,皮下注射40%CCl4,隔4天注射1次,连续6周制备肝纤维化模型,灌胃给予WL 3.86 g/kg和秋水仙碱0.1 mg/kg治疗1月;另体外分离HSC,以不同剂量的WL与HSC培养24 h, 最后3 h加入TGF-β1 10 ng/ml.实验结束后镜检肝细胞变性和肝组织纤维化程度,同时ELISA法测定血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和培养液COL-Ⅰ含量,RT-PCR检测肝组织COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1 mRNA的表达. Western blot检测肝组织及HSC内COL-Ⅰ、ProCOL-Ⅰ、LN、α-SMA、ERK、p-ERK、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad7蛋白表达.结果WL组大鼠肝细胞变性和肝纤维化程度明显减轻,血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ含量增加, COL-Ⅰ、COL-Ⅲ mRNA表达降低.Western blot结果显示,WL能明显下调肝组织α-SMA、LN、p-ERK、TβRⅠ、COL-Ⅰ、ProCOL-Ⅰ蛋白表达,对ERK、TβRⅡ、Smad2/3、Smad7蛋白表达无影响;显著下调HSC α-SMA 、TβRⅡ、p-ERK、Smad7表达,呈浓度依赖性抑制HSC分泌COL-Ⅰ.结论WL抑制肝纤维化大鼠肝组织COL-Ⅰ、COL-Ⅲ合成并增加COL-Ⅰ降解,其作用位点是下调肝组织和HSC TGF-β/Smad、Ras/ERK信号通路蛋白p-ERK、TβRⅡ表达.     

大黄酸对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的:探讨大黄酸防治糖尿病肾病的机制.方法:60只雄性Wistar大鼠随机分为时照组(n=20只)和糖尿病模型组(n=40只),模型组大鼠给予腹腔内一次注射STZ 60 mg/kg诱导糖尿病模型,再随机分为糖尿病组和大黄酸组.大黄酸组给予大黄酸150 mg/(kg·d)灌胃.16周后测定大鼠24 h尿蛋白,光镜观察肾小管间质损害及纤维化,免疫组织化学法检测肾小管上皮细胞内肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA和间质细胞标志蛋白Vimentin的表达,并对结果进行半定量分析.结果:糖尿病组大鼠24 h尿蛋白排泄增加(P＜0.01),肾小管上皮细胞α-SMA和Vimentin阳性表达面积分别为(0.2763±0.0529)和(0.1388±0.0336);大黄酸组大鼠24 h尿蛋白排泄较糖尿病组减少,肾小管间质损伤和间质纤维化程度减轻,其肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin阳性表达面积分别为(0.1449±0.0447)和(0.822±0.0176),表达较糖尿病组显著下调(P＜0.01).结论:大黄酸能显著下调糖尿病大鼠肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin表达,阻抑肾小管上皮细胞的表型转化.     

中药肝炎平对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响

目的:研究中药肝炎平对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ水平和 Smad3,Smad7及前胶原α2(Ⅰ)(Colla2)mRNA 表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制．方法:健康Wistar大鼠38R随机分为正常对照组(N组)、模型对照组(A组)以及肝炎平治疗组(B组)．N组每日以生理盐水10μL/g灌胃,A 组及B组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型,B组 4wk后开始以肝炎平10μL/g灌胃给药,A组同时以生理盐水10μL／g灌胃,每日1次．9 wk 后处死大鼠,取肝组织作病理学检查,免疫组化检测TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ的表达, RT-PCR检测胞内信号蛋白Smad3,Smad7以及 Coila2 mRNA的表达．结果:与正常对照组相比,模型组TGFβ1、 TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad3、Colla2表达明显增强,Smad7表达明显下降．经肝炎平治疗后大鼠肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ表达均比模型组减弱(TGFβ1:4．30±0．16 vs 4．18 ±0．17．P<0．05;TβR Ⅰ:4．35±0．14 vs 4．24± 0．10．P<0．05;TβRⅡ:4.37±0．11 vs 4．27±0．08． P<0．05)．肝炎平同时下调Smad3和Colla2 mRNA的表达(Smad3:0．93±0．05 vs 0．90± 0．41．P<0．05;Colla2:0．95±0．03 vs 0．92±0．03． P<0．05),上调Smad7 mRNA的表达(0．84±0．05 vs 0．87±0．03,P<0．05)．另外,肝炎平组大鼠肝脏病理变化显著改善．结论:肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1/ Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制 TGFβ1．及其受体TβR Ⅰ,TβRⅡ蛋白表达,下调Smad3 mRNA,上调Smad7 mRNA的表达, 并最终下调了作为主要细胞外基质的Colla2 mRNA的表达．     

TGF-β1/p38MAPK通路在介导单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的 探讨TGF-β1/p38MAPK信号传导通路在老年单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化过程中的作用.方法 将老年SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、SB203580治疗组.分别至UUO术后第3、7、14天处死,取梗阻侧肾脏,观察病理改变;采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肾小管上皮细胞中转化生长因子(TGF)-β1、p-p38、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达情况.结果 与假手术组比较,模型组及治疗组TGF-β1、p-p38MAPK 、α-SMA的表达显著升高(P＜0.05);而与模型组相比较,治疗组TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达显著降低(P＜0 05).TGF-β1、p-p38MAPK和α-SMA三者的表达呈正相关(TGF-β1与p38MAPK之间r1=0.745,P＜0.05;p-p38MAPK与α-SMA之间r2=0.659,P＜0.05;TGF-β1与α-SMA之间r3=0.770,P＜0.05).结论 TGF-β1/ p38MAPK通路的激活可上调肾小管上皮细胞α-SMA的表达,促进上皮细胞转分化,并可能是调控UUO大鼠肾间质纤维化主要信号通路之一.     

MCP-1在小型猪慢性阻塞性胰腺炎组织中的表达及其意义

目的 检测慢性阻塞性胰腺炎小型猪血单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量及胰腺组织MCP-1蛋白表达,探讨其在胰腺纤维化中的作用.方法 采用不全结扎主胰管方法建立小型猪慢性阻塞性胰腺炎模型,术后4、6、8 周分批处死动物.观察胰腺病理变化;胶原(VG)染色评估胰腺纤维化程度;ELISA法检测血MCP-1浓度;免疫组化法检测胰腺组织MCP-1、α-SMA、PDGF、TGF-β1和NF-κB表达.结果 造模成功14头(58.3%).术后4周起胰腺体尾部呈萎缩性改变,间质纤维组织增生,炎细胞浸润,第8周改变最明显.胰腺纤维化Ⅰ期5头(35.7%),Ⅱ期4头(28.6%),Ⅲ期5头(35.7%).术后4、6、8周造模成功组血MCP-1含量分别为(102.44±36.25)pg/m1、(97.84±28.67)pg/ml、(94.32±28.42)pg/ml,显著高于对照组的(10.42±5.86)pg/ml、(8.58±4.86)pg/ml、(8.22±4.58)pg/ml(P值均＜0.01).对照组胰腺无MCP-1蛋白表达,造模成功组胰腺组织内见MCP-1蛋白表达,且MCP-1表达与α-SMA、PDGF、TGF-β1和NF-κB表达呈正相关.结论 MCP-1在慢性阻塞性胰腺炎胰腺纤维化过程中起重要作用.     

β-榄香烯对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ表达的影响

目的观察β-榄香烯对四氯化碳肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ表达的影响.方法采用CCl4皮下注射诱导Wistar ♂大鼠肝纤维化模型,用β-榄香烯0.1 mL/100 g剂量每天腹腔注射8 wk后,用苏木精-伊红染色(HE)和胶原纤维(Masson)染色观察大鼠肝脏病理变化,酶动力法检测肝功能,SP免疫组化法检测肝组织中α-肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)表达的变化,样本碱水解法检测肝组织中羟脯氨酸(HYP)的含量.结果8 wk后,正常组、模型组、对照组及治疗组肝组织胶原纤维面积百分比分别为1.22%±0.24%,7.47%±0.81%,5.57%±0.78%,4.33%±0.48%,治疗组与模型组、对照组相比均有显著差异(P＜0.01),并且治疗组肝组织纤维化程度分级较模型组逐渐好转,胶原纤维所占面积显著缩小;在肝组织中测得的Col-Ⅰ阳性面积比分别为3.022%±0.553%,9.998%±1.431%,7.554%±0.914%,4.587%±1.008%,治疗组与模型组、对照组相比均有显著差异(P＜0.01).α-SMA和TGF-β1在治疗组和模型组肝组织中的表达也有显著差异(3.172%±0.542% vs 5.605%±1.315%,P＜0.01;2.868%±0.554% vs 5.653%±0.9%,P＜0.01).结论β-榄香烯对四氯化碳肝纤维化大鼠具有拮抗作用,主要是通过抑制肝星状细胞激活,降低TGF-β1,α-SMA在肝组织中的表达,减少细胞外基质在肝脏中的沉积,从而延缓肝纤维化的进程.     

辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织纤维化的影响及分子机制

目的 探讨辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝组织纤维化模型及肝星状细胞的作用及其分子机制.方法 ①体内实验应用高脂饮食建立NAFLD肝组织纤维化大鼠模型,并用辛伐他汀干预,RT-PCR法和Western印迹检测大鼠肝组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型NOS(iNOS)和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达.②体外实验采用促进脂肪细胞分化的培养基诱导人肝星状细胞株LX-2细胞获得静止表型,分别用转化生长因子β1( TGF-β1)、NOS抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、辛伐他汀、TGF-β1+辛伐他汀、L-NAME+辛伐他汀处理静止型LX-2细胞,RT-PCR法和Western印迹检测各组LX-2细胞中eNOS、iNOS、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的变化.结果 ①随造模时间延长,模型组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白表达逐渐减少,iNOS和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达逐渐增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P分别＜0.05和0.01).与24周末模型组相比,辛伐他汀干预组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白的表达分别增加(0.30±0.02比0.24±0.01和0.45±0.04比0.22±0.02,P值均＜0.05),iNOS mRNA和蛋白的表达分别减少,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达分别减少(P值均＜0.05).模型组大鼠肝组织中eNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈负相关(P值均＜0.01);iNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈正相关(P值均＜0.01).②体外培养LX-2细胞中,L-NAME能抑制LX-2细胞活化,减少eNOS和iNOS的表达,增加α-SMA和Ⅰ型胶原表达,与TGF-β1作用一致;辛伐他汀能直接增加静止型及活化型LX-2细胞中eNOS的表达,减少iNOS的表达,维持其静止表型,抑制其活化.结论 辛伐他汀通过增加LX-2细胞中eNOS表达,减少iNOS表达,减少α-SMA和Ⅰ型胶原生成,抑制或逆转肝纤维化发生和发展.     

干扰素α干预对大鼠胰腺纤维化的影响

目的 观察干扰素α(INF-α)对DDC诱导的胰腺纤维化大鼠模型纤维增生程度、胰腺星状细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞外基质成分Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法 Wistar大鼠40只随机数字法分成对照组、纤维化组和干扰素组.纤维化组和干扰素组每周2次腹腔内注射DDC,干扰素组在造模同时每天皮下注射INF-α10万U.6周末取材,光镜下观察胰腺病理学变化.免疫组化法测定胰腺组织中α-SMA、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 第4周起纤维化组大鼠体重增长缓慢甚至下降,干扰素组体重仍缓慢增长,5周后两组差异显著[(309.8±19.7)g与(277.3±19.9)g,P＜0.05].纤维化组胰腺组织纤维化表现明显,纤维化分值、Masson染色值、α-SMA和Ⅲ型胶原蛋白相对表达量分别为2.679±0.899、218.713±36.102、148.971±30.686和88.142±42.581;干扰素组纤维化减轻,上述指标分别为1.952±0.219、114.732±24.912、77.237±9.275和59.952±25.498,均较纤维化组显著降低(P＜0.05).结论 给予INF-α能显著减轻纤维化程度和α-SMA、Ⅲ型胶原表达,对DDC诱导的大鼠胰腺纤维化有一定的预防作用.     

双氢青蒿素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞及NLRP3炎性小体活性的影响

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖、转分化及激活NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体的作用,分析DHA拮抗心肌纤维化的分子机制。方法:采用胰酶消化新生大鼠的心肌组织,分离出成纤维细胞并进行免疫鉴定。实验分为正常组、DHA对照组、AngⅡ组、DHA处理组。比较各组细胞的数量变化;采用酶联免疫吸附试验检测各组细胞孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞表型分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,细胞内NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。结果:与正常组比较,DHA对照组吸光度值、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达、细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达水平,差异均无统计学意义(P>0.05),AngⅡ组吸光度值增加,孵育液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量、细胞表型分子α-SMA表达升高,细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0...     

雷帕霉素抑制肝纤维化病理进程的疗效及其机制

目的研究雷帕霉素抑制肝纤维化病理进程的疗效及其机制。方法选取健康雄性清洁级SD大鼠80只,随机分为正常组(16只)、模型对照组(32只,制备四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型)、雷帕霉素干预组(32只,于四氯化碳诱导后第6周按2 mg/kg体质量行雷帕霉素灌胃处理,持续2周,于第8周与模型对照组大鼠一起处死)。分析三组肝脏组织α-SMA染色、HE染色结果,对比三组上皮标志物E-cadeherin、connexin43表达及间质细胞标志物Vimentin、α-SMA表达,并分析三组上皮间质转化通路重要蛋白p-smad2、p-smad3、smad2/3、smad4表达,探讨雷帕霉素抑制肝纤维化进程中肝细胞上皮间质转化机制。结果经HE染色发现雷帕霉素干预组肝纤维化显著减轻,经免疫组化α-SMA验证。模型对照组肝脏中肝细胞内Ⅰ型胶原表达较正常组明显增高(P0.05),上皮标志物E-cadeherin、connexin43表达较正常组明显减少(P0.05),间质细胞标志物Vimentin、α-SMA表达较正常组明显增高(P0.05),上皮间质转化通路重要蛋白p-smad2、p-smad3、smad2/3、smad4较正常组明显增高(P0.05)。雷帕霉素干预组肝脏内肝细胞Ⅰ型胶原表达及Vimentin、α-SMA表达较模型对照组显著下降(P0.05),肝细胞E-cadeherin、connexin43表达较模型对照组明显增高(P0.05),p-smad2、p-smad3、smad2/3、smad4表达较模型对照组显著下降(P0.05)。结论雷帕霉素可抑制四氯化碳所致大鼠肝纤维化,可能与下调上皮间质转化通路重要蛋白p-smad2、p-smad3、smad2/3、smad4表达,抑制纤维化过程中肝细胞上皮间质转化有关。     

系统性红斑狼疮相关血栓性微血管病血管内皮-间充质细胞转分化的研究

目的:探讨系统性红斑狼疮相关血栓性微血管病(SLE-TMA)肾间质血管内皮细胞表型变化及其与血管病变和间质纤维化之间的关系。方法:30例经肾活检明确诊断的SLE-TMA患者,根据血管组织学改变分为急性TMA和慢性TMA,以正常肾组织血管为对照。内皮细胞CD31、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β(TGF-β)采用间接免疫荧光双重染色定位,免疫组织化学染色和Image-ProPlus 6.0测量上述分子的表达量,以平均光密度表示其表达强度。Aperio图像分析系统测量肾间质纤维化面积。结果:间接免疫荧光双重染色显示正常血管内膜无α-SMA表达,SLE-TMA血管内皮细胞表达α-SMA。与正常对照组相比,急性TMA组血管内皮CD31和VE-cadherin表达降低(P0.05),α-SMA表达则显著增高(P0.01);慢性TMA组内皮细胞CD31、VE-cadherin和TGF-β表达强度均显著低于急性TMA组和正常血管组(P0.01),α-SMA表达更高(P0.01)。肾间质血管α-SMA平均光密度与肾间质纤维化面积呈显著正相关(r=0.439,P=0.015),而CD31平均光密度与肾间质纤维化呈显著负相关(r=-0.458,P=0.011)。结论:SLE-TMA血管内皮细胞正常标记物表达减少而α-SMA表达增加,表明内皮细胞向成纤维细胞表型转变,且表达量的变化与血管病变进展相关;肾血管内皮细胞CD31表达减少和α-SMA增加与肾间质纤维化相关。     

丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的：探讨丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法：30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丹参酮ⅡA组。结扎大鼠单侧输尿管建立肾间质纤维化动物模型。丹参酮ⅡA经腹腔注射，剂量为1．5mg／（kg·d）。术后第10天取梗阻侧肾组织作HE、Masson染色，观察肾间质病理改变。免疫组化法检测肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原的蛋白表达与定位。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测三者的mRNA水平。结果：模型组术后第10天梗阻侧出现明显的肾间质纤维化，肾组织TGF-β1、α—SMA和Ⅰ型胶原的蛋白及mRNA表达显著增加（P〈0．01）。丹参酮ⅡA组肾间质纤维化程度减轻，肾组织TGF-β1、α—sMA及Ⅰ型胶原表达下调（P〈0．05）。结论：丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化有明显的抑制作用，其机制可能与下调TGF-β1表达，抑制成纤维细胞增殖和表型转化，减少胶原沉积有关。