柚皮苷协同骨形态发生蛋白-2促进小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化的研究

目的 研究柚皮苷（NAR）联合骨形态发生蛋白（BMP）-2对体外培养的成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨相关基因ALP、骨钙素（OCN）、成骨特异性转录因子（Runx2）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）表达的影响。方法 以成骨细胞株MC3T3-E1为体外药效的试验模型,通过Alamar blue法检测第1、4和7天3种不同浓度NAR（10、100和1 000 μmol·L^-1）单独作用以及分别与50 ng·mL^-1 BMP-2联合诱导对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响。同时在第4天和7天测定成骨细胞内ALP活性,采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、ColⅠ的表达。结果 单纯NAR刺激及联合BMP-2刺激能够促进细胞增殖,在NAR浓度为100 μmol·L^-1时达到高峰（P<0.05）,且该浓度NAR与BMP-2联合作用时增殖效果大于两者单独作用（P<0.05）。单纯NAR刺激及联合BMP-2刺激4 d和7 d时均能促进细胞ALP活性,100 μmol·L^-1 NAR与BMP-2联合作用时ALP活性最强（P<0.05）。100~1 000 μmol·L^-1的NAR单独及联合作用在不同程度上能促进ALP、OCN、Runx2、ColⅠ成骨相关基因表达。结论 NAR能有效促进成骨细胞株MC3T3-E1增殖、分化,且适宜浓度的NAR和BMP-2有协同和促进作用。     

敲低F-ATPase促进变形链球菌感染人牙髓成纤维细胞成骨/成牙本质分化的研究

目的:研究敲低耐酸因子F-ATPase促进变形链球菌感染人牙髓成纤维细胞(human dental pulp fibro-blasts,HDPFs)成骨/成牙本质分化的作用.方法:培养HDPFs并采用免疫荧光染色、流式细胞术进行鉴定,而后分为对照组、感染组、感染+si-NC组、感染+si-F-ATPase组、感染+si...     

种植体周围炎对颌骨成骨细胞生物学功能的影响

目的 研究种植体周围炎条件下炎性微环境对颌骨成骨细胞生物学功能的影响。方法原代分离培养和纯化种植体周围炎来源和正常组织来源的人颌骨成骨细胞,取第3代细胞进行鉴定和检测,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,实时定量聚合酶链反应法检测成骨细胞相关基因骨钙素（OCN）、Runx2、Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）的表达,Western blot法检测成骨细胞相关蛋白OCN的表达。结果从培养第4天起,种植体周围炎来源的成骨细胞的增殖活力明显低于正常组织来源的成骨细胞（P<0.05）。培养7 d时,与正常组织来源的成骨细胞相比,种植体周围炎来源的成骨细胞相关基因OCN、Runx2、Col Ⅰ的表达均显著降低（P<0.05）,相关蛋白OCN的表达也显著降低（P<0.05）。结论 种植体周围炎的炎性微环境降低了颌骨成骨细胞的增殖及分化能力。     

二氧化钛纳米管对兔胫骨内种植体旋转扭力的影响

目的　通过兔子动物模型评估种植体表面不同管径的TIO2纳米管对成骨细胞黏附、种植体扭力和成骨基因表达的影响。方法　将24个订做的螺旋状的长为6 mm,外径为2.5 mm的纯钛种植体分为3组。A组：对照组平滑面种植体;B组：表面为30 nm管径TiO2纳米管的种植体;C组：表面为70 nm管径TiO2纳米管的种植体。分别将种植体植入兔子胫骨,手术后四周,处死兔子,采用数字扭力仪通过反向旋转取下腿部种植体,测量种植体扭力,通过扫描电子显微镜分析种植体表面成骨细胞的粘附,通过实时PCR检测核心结合因子（Runx2）、胰岛素样生长因子（IGF）、I型胶原（col 1）和骨钙素（OCN）的基因表达水平。结果　表面为70 nm管径TiO2纳米管的种植体可以增强兔胫骨内种植体的扭力（P＜0.05）,并显著性的提高Runx2、IGF、col 1和 OCN等成骨基因的表达水平（P＜0.05）。结论　相对于30 nm管径纳米管,表面为70 nm管径纳米管的种植体可以获得良好的成骨反应,并且在早期植入期具有较高的界面强度。     

格列美脲对大鼠下颌骨成骨细胞增殖分化及矿化的影响

目的:研究格列美脲对大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化的影响.方法:原代培养分离下颌骨成骨细胞,将细胞接种于96孔板中,分两组:5.5mM葡萄糖(5.5mMG)(生理浓度葡萄糖)组,5.5mMG +10μmol/L格列美脲组,继续培养7d,1)MTT法检测大鼠下颌骨成骨细胞的增殖;2)生化法测定7d碱性磷酸酶(ALP)活性;3)Western blots检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达;4)RT-PCR检测骨钙素(OCN)的表达.结果:格列美脲能显著促进成骨细胞的增殖,ALP活性,ColⅠ的蛋白和OCN的mRNA的表达.结论:格列美脲能促进大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化.     

miR-199a调控IGF1表达对机械刺激下成骨细胞分化的影响

目的： 探讨微小RNA（miR）-199a在机械牵张力刺激下MC3T3-E1细胞中的表达变化及其对牵张力刺激MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。方法： 对体外培养的MC3T3-E1细胞加载12%牵张力0、3、6、12和24 h后,利用碱性磷酸酶（ALP）活性检测试剂盒检测ALP活性,实时荧光定量PCR检测骨钙素（OCN）、成骨细胞特异性转录因子Osterix（OSX）、Runt相关转录因子2（Runx2） mRNA和miR-199a的表达。将MC3T3-E1细胞分为对照组、牵张力组、牵张力+miR-NC组和牵张力+miR-199a组,加载12%牵张力和转染miR-199a模拟物后,观察miR-199a和OCN、OSX、Runx2 mRNA及蛋白表达以及ALP活性。茜素红S（ARS）染色观察钙结节形成能力。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a与胰岛素样生长因子1（IGF1）的靶向关系,实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测miR-199a模拟物对IGF1 mRNA和蛋白表达的影响。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果： 与0 h时间点相比,以机械牵张力刺激3、6、12和24 h后,MC3T3-E1细胞ALP活性和OCN、OSX、Runx2 mRNA表达水平均显著升高,而miR-199a表达水平显著降低（P<0.05）,12 h时变化最为显著。与对照组相比,牵张力组细胞中miR-199a表达水平显著降低,而细胞ALP活性、OCN、OSX、Runx2 mRNA及蛋白表达水平、钙结节形成水平均显著升高（P<0.05）;与牵张力组相比,牵张力+miR-NC组细胞中上述各指标差异均无统计学意义（P>0.05）;与牵张力+miR-NC组相比,牵张力+miR-199a组细胞中miR-199a表达水平显著升高,而细胞ALP活性、OCN、OSX、Runx2 mRNA及蛋白表达水平、钙结节形成水平均显著降低（P<0.05）。miR-199a可与IGF1靶向结合,miR-199a模拟物可使MC3T3-E1细胞中IGF1 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论： miR-199a可抑制机械牵张力刺激诱导的MC3T3-E1细胞成骨分化,其作用机制可能与靶向调控IGF1表达有关。     

流体剪切力对人脂肪基质细胞成骨相关基因表达影响的研究

目的 探讨流体剪切力(FSS)对人脂肪基质细胞(ADSC)成骨相关基因骨钙素(OCN)、转录因子Osterix(Osx)及核心结合因子(Cbf) al/Runt相关转录因子(Runx)2表达的影响.方法 将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行常规培养(A1、A2组)和诱导培养(A3、A4组),然后分别对其加载强度为0.3 Pa的FSS(A1、A3组),未加FSS的为对照组(A2、A4组),通过逆转录-聚合酶链反应检测骨钙素、转录因子Osx及Cbfal/Runx2基因表达的情况.结果 A3、A4组在FSS加载后,其成骨相关基因的表达增强;而A1、A2组未见成骨特异性基因条带.这表明在常规培养条件下,无论是否有FSS的刺激,均无成骨特异性基因表达.结论 脂肪基质细胞在诱导培养条件下,FSS可促使其向成骨细胞分化,可作为骨组织工程的种子细胞.     

多孔纯钛孔隙率及孔隙尺寸对蛋白吸附及成骨细胞分化的影响

目的从分子生物学角度研究筛选利于蛋白质吸附、成骨细胞分化的合适孔隙结构,为多孔钛材料作为牙种植体提供研究基础及制备参数。 方法筛选不同粒径（Ⅰ组：0~200 μm、Ⅱ组：200~400 μm、Ⅲ组：400~600 μm）的NH₄HCO₃造孔剂颗粒,按照不同的质量分数（A组：20%、B组：30%）与钛粉均匀混合,粉末冶金法制备6组多孔纯钛试件,不添加造孔剂制备致密纯钛试件作为对照组;每组10个试件。蛋白定量试剂盒测定蛋白质吸附量以评价多孔纯钛试件的蛋白吸附能力,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测Runt相关转录因子2（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）及骨钙素（OCN）基因表达量以评价成骨细胞分化水平。 结果多孔纯钛的蛋白质吸附量高于致密纯钛（P < 0.05）,其中小平均孔隙尺寸及高平均孔隙率组较其余多孔纯钛组吸附更多蛋白质（P < 0.05）。多孔纯钛的孔隙率和孔隙尺寸对成骨细胞分化的影响具有交互效应。成骨细胞培养第7天,仅AI组Runx2基因表达量高于对照组（P < 0.05）;培养第14天,多孔纯钛各组Runx2基因的表达量均低于对照组（P < 0.05）。成骨细胞培养7、14 d后,多孔纯钛各组ALP基因的表达量高于对照组（培养第7天,BⅢ组除外;培养第14天,AⅠ、AⅢ组除外）（P < 0.05）。成骨细胞培养第7天,AⅠ、BⅠ组OCN基因的表达量较对照组及其他平均孔隙尺寸组高（P < 0.05）;成骨培养第14天,仅BⅠ组OCN基因的表达量高于对照组（P < 0.05）。 结论本实验条件下,孔隙结构提高了纯钛试件的蛋白质吸附量,且平均孔隙率为53.3%、平均孔径为191.6 μm的多孔钛试件利于小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的成骨向分化。     

The effect of extracellular calcium ion on gene expression of bone-related proteins in human pulp cells

Calcium hydroxide is often used for induction of reparative dentin formation in endodontic treatment. However, little is known about the mechanism by which calcium hydroxide works. The calcium ion (Ca2+) is an important regulator of cell functions. In this study, we examined the effect of extracellular Ca2+ on gene expression of bone-related proteins in human cultured pulp cells in serum-free conditions. A Ca2+ level elevated by 0.7 mM induced an increase in mRNA expression of osteopontin and bone morphogenetic protein (BMP)-2. However, mRNA levels of BMP-4 and alkaline phosphatase decreased under the elevated Ca2+ culture condition. The same concentration of additional magnesium ions had little effect on expressions of the examined bone-related protein mRNAs. These findings suggest that Ca2+ in Ca(OH)2 specifically modulates osteopontin and BMP-2 levels during calcification in pulp.     

山羊骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导后成骨分化相关基因表达的变化

目的:研究山羊骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导后成骨分化相关基因ALP、OCN、COL I mRNA表达水平的变化.方法:采用全骨髓培养法培养骨髓基质干细胞,使用成骨条件培养液体外诱导成骨细胞,通过细胞形态学观察、免疫组化染色、钙结节等检测手段进行成骨细胞鉴定,采用RT-PCR和实时定量PCR检测诱导2周后骨髓基质干细胞ALP、OCN、COL Ⅰ的表达水平,未诱导的骨髓基质干细胞作为对照组.结果:通过成骨细胞鉴定,骨髓基质干细胞成功诱导分化为成骨细胞:OCN和COL Ⅰ基因存细胞诱导组表达上调,ALP基因表达在诱导组和未诱导组间无显著差异.结论:成功诱导山羊BMSCs向成骨细胞分化,成骨分化相关基因在诱导后为适应成骨细胞的功能发生变化.     

Effects of ultrasound on the proliferation and differentiation of cementoblast lineage cells

BACKGROUND: The purpose of this study was to investigate the effects of low-intensity pulsed ultrasound (LIPUS) stimulation on the proliferation and differentiation of cementoblast lineage cells. METHODS: An immortalized human periodontal ligament cell line (HPL) showing immature cementoblastic differentiation was used. Cultured HPL cells were subjected to LIPUS exposure (frequency = 1 MHz; pulsed 1:4; intensity = 30 mW/cm(2)) or sham exposure for 15 minutes per day. Expression levels of alkaline phosphatase (ALP), type I collagen (Col-I), runt-related gene 2 (Runx2), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OCN), and osteopontin (OPN) mRNA were analyzed with real-time polymerase chain reaction analysis. Furthermore, ALP activity, collagen synthesis, and protein level of Runx2 were examined after 6 days of LIPUS exposure. RESULTS: mRNA and protein levels of ALP, Col-I, and Runx2 were significantly increased by LIPUS exposure compared to controls, whereas BSP, OCN, and OPN mRNA expression could not be detected in HPL cells, irrespective of LIPUS exposure. CONCLUSION: LIPUS enhanced ALP activity, collagen synthesis, and Runx2 expression of HPL cells, which provides important insight into the promotion of early cementoblastic differentiation of immature cementoblasts.     

Runx2、Osterix转录因子过表达驱动内皮细胞成骨分化的机制探讨

目的:探讨Runx2和Osterix (OSX)过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成骨分化的调控作用.方法:通过慢病毒载体,将Runx2和Osterix基因分别转染入HUVECs.通过碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量活性检测,探讨过表达Runx2和Osterix对HUVECs成骨分化的影响.通过RT-PCR、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色检测成骨相关标志物Runx2、OSX、ALP、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)在HUVECs中的表达.采用GraphPad Prism 6.01软件包对数据进行统计学分析.结果:Runx2过表达有利于HUVECs的成骨分化,而Osterix过表达则无此作用.HUVECs转染Runx2过表达慢病毒后,成骨相关基因Runx2、OSX、ALP、BSP、OPN及OCN的转录水平上调,同时Runx2、OSX、OPN及OCN的蛋白表达水平亦有所上调.结论:Runx2过表达可促进HUVECs的成骨分化.     

外源性bFGF对2型糖尿病大鼠钛种植体骨结合的影响及机制探讨

目的:探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对2型糖尿病(T2DM)大鼠钛种植体骨结合的影响及机制.方法:取SPF级雄性SD大鼠40只,随机分为对照组、T2DM组、bFGF-T2DM组、氯化锂(LiCl)-T2DM组.对照组正常饲料喂养,其余大鼠以高脂高糖喂养+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg建立T2...