藏药金腰草中黄酮诱导K562细胞凋亡及其分子机制研究

目的研究藏药金腰草中6，7，3’-三甲氧基-3，5，4’-三羟基黄酮对人红白血病细胞株K562的凋亡诱导效应及其可能的作用机制。方法采用四氮唑蓝（MTT）比色法、透射电镜、细胞周期分析法和DNA琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡；采用流式细胞术（FCM）测定细胞Bcl-2、Fas蛋白表达水平。结果6，7，3＇-三甲氧基．3，5，4’-三羟基黄酮可以抑制K562细胞增殖，并呈观典型的凋亡形态改变；细胞周期分析显示S期细胞数明显增多，出现S期阻滞；DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯状条带；6，7，3’-三甲氧基-3，5，4’-三羟基黄酮作用72h后，Bcl-2蛋白阳性表达率由36．10％下降到27．78％，Fas蛋白阳性表达率由11．33％上升到32．76％。结论6，7，3’-三甲氧基-3，5，4’-三羟基黄酮对K562细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用。其诱导凋亡可能与下调Bcl-2和E调Fas有关。     

白血病细胞bcl-2基因表达与药物敏感性的关系

目的:探讨白血病细胞bcl-2基因表达与药物敏感性的关系.方法:首先用Western印迹法检测HL60、U937细胞以及3例急性髓系白血病患者(AML)的骨髓单个核细胞的Bcl-2基因蛋白表达,继而用MTT法检测8种化疗药物对上述细胞的抑制率.结果:HL60细胞Bcl-2蛋白表达水平高于U937细胞,柔红霉素(DNR)对 HL60的抑制率低于U937细胞,AML原代白血病细胞Bcl-2蛋白的高表达伴随低药敏.结论:白血病细胞Bcl-2蛋白表达水平与其对化疗药物的敏感程度呈负相关性.     

二烯丙基三硫对人白血病HL-60细胞凋亡作用的实验研究

目的研究二烯丙基三硫对HL-60细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将浓度为30 mg/L的二烯丙基三硫与HL-60细胞体外共培养48小时后,采用Wright染色在光学显微镜下观察细胞形态学变化;以流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞凋亡率;应用免疫组化方法检测细胞内Bcl-2、survivin蛋白的表达。结果光镜下可见二烯丙基三硫作用后细胞形态出现凋亡的形态特征,空白对照和30 mg/L的二烯丙基三硫分别与HL-60细胞作用48小时,细胞的凋亡率分别为（12.42±0.76）%和（60.57±3.24）%（P〈0.05）,二烯丙基三硫组HL-60细胞的Bcl-2、survivin蛋白呈弱阳性或阴性表达,而对照组均阳性表达。结论二烯丙基三硫促进HL-60细胞的凋亡的机制,可能是通过抑制Bcl-2、survivin蛋白的表达。     

三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡作用机制研究进展

三氧化二砷治疗白血病和其他肿瘤的机制主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡。其诱导白血病细胞凋亡的途径主要有降解融合蛋白，线粒体途径，激活Caspase家族，抑制NF-κB、细胞增殖和端粒酶活性等。现就其诱导白血病细胞凋亡的作用机制作一综述。     

CIK细胞对 MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CYtokine-induced kill cells,CIK)对MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其作用机制.方法应用(TdT-mediated dUTP nick end labeling)TUNEL法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫细胞化学法测定Bcl-2、Bax的阳性表达率,深入研究CIK细胞对MGC-803胃癌细胞株凋亡相关基因蛋白表达的影响.结果TUNEL法检测对照组成不染或均匀淡蓝色,实验组凋亡细胞缩小,核或核周成深蓝色.CIK实验组5～14小时凋亡率上调,14～24小时凋亡率下降.CIK实验组凋亡率与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).免疫细胞化学结果表明:Bcl-2蛋白随作用时间延长表达均下降,Bax蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论CIK细胞对MGC-803胃癌细胞早期诱导凋亡,晚期诱导肿瘤细胞坏死.其作用机制之一可能是通过上调Bax,下调Bcl-2的蛋白表达实现的.     

三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡作用机制研究进展

三氧化二砷治疗白血病和其他肿瘤的机制主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡.其诱导白血病细胞凋亡的途径主要有降解融合蛋白,线粒体途径,激活Caspase家族,抑制NF-κB、细胞增殖和端粒酶活性等.现就其诱导白血病细胞凋亡的作用机制作一综述.     

PTD4-GFP-Apoptin 融合蛋白对白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究 PTD4-GFP-Apoptin 融合蛋白对不同类型白血病细胞的增殖抑制及诱导凋亡效应。方法用基因工程技术构建含有 PTD4-GFP-Apoptin 目的基因的重组载体,表达 PTD4-GFP-Apoptin融合蛋白,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测其对白血病细胞增殖的影响,用流式细胞术（FCM）检测其对白血病细胞凋亡的影响。结果 PTD4-GFP-Apoptin 对不同类型的白血病细胞都有不同程度的增殖抑制效应,且抑制效应与作用的时间和浓度呈正相关;PTD4-GFP-Apoptin 对急性髓系白血病细胞株HL-60有诱导凋亡作用,其凋亡率与 PBS 对照组细胞相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PTD4能够携带大分子蛋白质穿过细胞膜,PTD4-GFP-Apoptin 在体外对多种白血病细胞有抑制增殖的作用;Apoptin 可诱导白血病细胞凋亡,而正常细胞不受影响,可能成为临床治疗白血病的新型药物。     

雄黄诱导白血病细胞凋亡的研究

目的探讨雄黄对白血病细胞凋亡及Bc l-2表达水平的影响。方法以阿霉素作用组为阳性对照组,通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定药物作用下细胞株的细胞活力(OD值),采用原位细胞凋亡检测法(TUNEL)观察凋亡细胞的形态学改变,用流式细胞仪法(FCM)测定药物作用下细胞株Bc l-2蛋白阳性表达率的变化。结果与ADR相比,雄黄作用组OD值和Bc l-2阳性表达率更低(P<0.05),凋亡率更高(P<0.05)。结论雄黄诱导白血病细胞凋亡的效果较好,且Bc l-2蛋白表达水平的变化能显著改变药物诱导细胞凋亡的能力。     

细胞凋亡与白血病化疗

随着药理学、药代动力学和化学合成工业的发展，化疗在癌症治疗中的作用日益明显。大量研究证明，在易感的癌细胞中，化疗药物主要通过诱导凋亡的细胞死亡而起作用。本文拟对白血病化疗的最新治疗手段及分子机制进行综述。     

Cytostatic Effects of Dolastatin 10 and Dolastatin 15 on Human Leukemia Cell Lines

We studied in vitro the cytostatic/cytotoxic effects of the peptides dolastatin 10 and dolastatin 15 on various human leukemia cell lines, peripheral blood mononuclear cells (PBMNC), and tonsillar mononuclear cells (tonsillar MNC). On leukemia cell lines both drugs proved to be highly potent cvtostatic agents; however, the cells were not killed even at concentrations of maximum growth-inhibition. Growth-suppression was not paralleled by induced differentiation as exposure to dolastatins did not significantly alter the immunophenotype, cytochemistry or morphology of HL-60 cells. Growth-inhibitory effects of dolastatins were reversed following the removal of the agents from the culture medium. The dolastatins inhibited proliferation of leukemia cell lines at lower concentrations than those which inhibited the growth of stimulated tonsillar MNC. The growth-inhibiting properties of the dolastatins regarding leukemia cell lines and their low toxicity towards normal MNC indicate that these agents might be promising new drugs for future experiments examining their effects on primary leukemic cells.     

Spicamycin and KRN5500 Induce Apoptosis in Myeloid and Lymphoid Cell Lines with Down-regulation of Bcl-2 Expression and Modulation of Promyelocytic Leukemia Protein

Spicamycin is a potent inducer of differentiation of human myeloid leukemia cells (HL-60) and murine myeloid leukemia cells (M1). One of the spicamycin derivatives, KRN5500, shows a broad spectrum of antitumor activity against human tumor xenografts in nude mice. In this study, we first investigated the differentiation efficacy of spicamycin and KRN5500 in HL-60 and acute promyelocytic leukemia cell line, NB4, and found that low concentrations of both compounds induced differentiation to a small extent in both cell lines, but markedly induced apoptosis in NB4 cells. Further investigation in a myeloid leukemia cell line, NKM-1, a lymphoma cell line, Daudi, and multiple myeloma cell line, NOP-1, showed that high concentrations of both compounds also induced apoptosis in these cells. The 50% inhibitory concentration (IC₅₀) determined by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay showed that myeloid cells were more sensitive to both compounds than lymphoid cells, and spicamycin was more potent than KRN5500. Western blot analysis of Bcl-2, Bcl-xL and Bax expression and immunofluorescence analysis of promyelocytic leukemia (PML) protein indicated that apoptosis induced by spicamycin and KRN5500 was associated with down-regulation of Bcl-2 expression and modulation of PML protein. Thus, spicamycin and KRN5500 may be useful for the treatment of myeloid and lymphoid neoplasms.     

六种小鼠肿瘤及白血病细胞株的细胞动力学研究

本文对L7811-85,L7212-85,L1210-86,P388-86 4个淋巴细胞白血病及S180-86和肝Ca-86肿瘤细胞株分别测定了细胞生长曲线、克隆形成效率和细胞DNA含量分布等参数。对其中L7811-85细胞株进行了较系统的细胞动力学研究,并应用~3H-TdR自杀试验微培养测定其克隆形成细胞的增殖时和合成时。结果表明:这6种细胞株均可在体外无刺激因子作用下良好生长。并可见随细胞传代数增加,细胞增殖加速,克隆形成率提高。用~3H-TdR自杀试验测出的克隆形成细胞增殖时与群体细胞倍增时相比,可反映其潜在倍增时。     

HA14-1 联合环磷酰胺调控肺癌小鼠Bcl-2、Bax蛋白的表达*

目的：探讨HA14-1 联合环磷酰胺对肺癌小鼠Bcl- 2、Bax 蛋白的表达。方法：建立小鼠肿瘤模型,分为生理盐水组、HA14-1 组、环磷酰胺组和HA14-1 + 环磷酰胺组,应用Western blot和免疫组化方法检测Bcl- 2、Bax 的蛋白表达。结果：HA14-1组、环磷酰胺组、HA14-1 + 环磷酰胺组较生理盐水组Bcl- 2 表达减少、Bax 表达增加（P<0.05）,HA14-1 + 环磷酰胺组较单一的HA14-1 组或环磷酰胺组Bcl- 2 表达明显减少、Bax 表达明显增加（P<0.05）。 结论：HA14-1 可以通过抑制Bcl- 2 的表达,增加Bax的表达,从而促进肿瘤细胞的凋亡,同时增强环磷酰胺的抗肿瘤特性。     

低频超声对阿霉素杀伤人白血病多药耐药细胞K562/A02作用的影响

背景与目的:有研究表明,超声可增加化疗药物对肿瘤细胞的敏感性.从而抑制细胞增殖.本研究中我们观测不同剂量的低频超声波联合阿霉素(adriamycin,A02)对人白血病耐药细胞株K562/A02的生物学影响,并探讨可能的机制.方法:将对数生长期的K562/A02细胞分为空白对照组、单纯阿霉素组、单纯超声组、阿霉素加超声组.24孔培养板上进行超声照射,台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞活性,应用瑞姬氏染色法和流式细胞仪榆测细胞凋亡和药物浓度,免疫细胞化学检测细胞膜P-糖蛋白的表达变化.结果:频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、辐射时间60 s的超声辐射联合7.5 ug/mL阿霉素可诱导细胞凋亡,当超声频率20 kHz,声强0.5 W/cm2时,对细胞有急性杀伤作用.与单纯阿霉素组相比较.超声辐射增加了细胞内阿霉素的药物浓度,促进细胞凋亡的发生;但超声辐射没有影响细胞膜P-糖蛋白变化.结论:频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、辐射时间60 s的超声可以增强阿霉素对耐约细胞K562/A02的杀伤作用.     

白血病患者骨髓血管新生与Bcl-2蛋白关系的研究

目的研究白血病患者骨髓血管新生与Bcl-2蛋白关系。方法采用免疫组织化学法(EnVison)检测了33例白血病患者骨髓活检组织中Bcl-2蛋白的表达,用第Ⅷ因子抗体标记内皮细胞,计算微血管密度(microvesseldensity,MVD),同时采用ELISA法检测白血病患者外周血的VEGF含量。结果Bcl-2蛋白阳性表达、MVD、VEGF含量均明显高于对照组(P<0.05)。通过对这三者进行两两相关性分析,结果MVD与VEGF存在相关性(P<0.01),Bcl-2蛋白阳性率与VEGF存在相关性(P<0.05),但Bcl-2蛋白阳性率与MVD不存在明显相关性(P>0.05)。结论白血病患者骨髓Bcl-2蛋白阳性和血管新生的增加,可能在白血病的发展、治疗中有重要作用,相互促进白血病的进程。     

蝎毒多肽提取物对白血病小鼠Bcl-2 SDF-1α与TGF-β1 表达的影响*

目的:探讨蝎毒多肽提取物（PESV）对白血病小鼠Bcl- 2、SDF-1 α 与TGF-β 1 表达的影响,探究PESV对白血病细胞增殖和浸润的影响与机制。方法:NOD-SCID 小鼠60只,按本课题前期研究方法,建立人白血病NOD-SCID 小鼠髓外浸润模型。选取造模成功的小鼠40只,随机分为4 组,每组10只,分别为高、中、低剂量组和模型组,另设同周龄正常NOD-SCID 小鼠10只为空白对照组。高、中、低剂量组每只分别尾静脉注射PESV 1.2mg/（kg ·d）、0.6mg/（kg ·d）、0.3mg/（kg ·d）,模型组和空白组每只均尾静脉注射0.9% 的生理盐水0.3mL/d,35d 后全部处死,取血清和骨髓细胞培养液上清,用ELISA 法进行Bcl- 2、SDF-1 α 与TGF-β 1 的检测。结果:高、中、低剂量组存活率均高于模型组,高、中、低剂量组小鼠血清以及骨髓的Bcl- 2、SDF-1 α 均明显低于模型组（P<0.05）,而TGF-β 1 均高于模型组,均以高剂量组效果最为明显（P<0.05）。 结论:蝎毒多肽提取物可以有效的降低白血病小鼠血清及骨髓中Bcl- 2、SDF-1α的表达,提高TGF-β1 的表达,具有较好的阻抑白血病细胞增殖和浸润的作用。      

Frameshift Mutations of the hMSH6 Gene in Human Leukemia Cell Lines

Defects in DNA mismatch repair mechanisms, including frameshift mutations of the hMSH6 and hMSH3 genes at their (C)₈ and (A)₈ tracks, respectively, have been shown to be associated with human malignancies. To clarify the possible involvement of these mutations in hematopoietic malignancies, we screened a total of forty-four human leukemia and lymphoma cell lines for mutations in the hMSH6 and hMSH3 genes, as well as in other genes required for DNA replication or repair, by polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphism analysis and sequencing analysis. Frameshift mutations at the (C)₈ track of the hMSH6 gene were detected in two cell lines established from lymphoid leukemias. These two cell lines had no wild-type alleles, and both of them showed microsatellite instability. This is the first report that describes mutations and inactivation of the hMSH6 gene in hematological malignancies, suggesting that defects of the hMSH6 gene may be associated with development of hematological malignancies.     

Ginsenoside Rg1 Induces Apoptosis through Inhibition of the EpoR-Mediated JAK2/STAT5 Signalling Pathway in the TF-1/Epo Human Leukemia Cell Line

Ginsenoside Rg1 is one effective anticancer and antioxidant constituent of total saponins of Panax ginseng(TSPG), which has been shown to have various pharmacological effects. Our previous study demonstrated thatRg1 had anti-tumor activity in K562 leukemia cells. The aim of this study was designed to investigate whetherRg1 could induce apoptosis in TF-1/Epo cells and further to explore the underlying molecular mechanisms. Herewe found that Rg1 could inhibit TF-1/Epo cell proliferation and induce cell apoptosis in vitro in a concentrationand time dependent manner. It also suppressed the expression of EpoR on the surface membrane and inhibitedJAK2/STAT5 pathway activity. Rg1 induced up-regulation of Bax, cleaved caspase-3 and C-PAPR protein anddown-regulation of Bcl-2 and AG490, a JAK2 specific inhibitor, could enhance the effects of Rg1. Our studiesshowed that EpoR-mediated JAK2/STAT5 signaling played a key role in Rg1-induced apoptosis in TF-1/Epocells. These results may provide new insights of Rg1 protective roles in the prevention a nd treatment of leukemia.