酶免疫法检测抗丙型肝炎病毒E2抗体

目的 试用一种更敏感，更特异酶免疫法检测的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗体。方法 将体外真核系统表达并纯化的ＨＣＶ Ｅ２糖蛋白作为包被抗原，用于２５７份丙型肝炎患者血清标本的抗Ｅ２抗本检测。结果 成功利用ＨＣＶ的Ｅ２糖蛋白建立酶免疫法检测抗Ｅ２抗体，在ＨＣＶ ＲＮＡ阳性标本中筛选探针抗Ｅ２抗体检出率为８２．４２％，高于抗ＨＣＶ抗体的检出率，两者比较差异有显著意义。     

间接EIA检测抗丙型肝炎病毒核心抗原IgM抗体

以基因重组的ＨＣＶ核心抗原包固相载体,建立了ＥＩＡ检测抗ＨＣＶｃＩｇＭ抗体的方法。为去除特异性抗ＨＣＶ ＩｇＧ及类风湿因子的干扰,用关抗人ＩｇＧ作血清标本稀释液,用抗入ＩｇＭ μ Ｆ（ａｂ‘）２片段制备酶结合物。该ＥＩＡ法对部分ＨＣＶ感染者的检测结果显示,在急性丙型肝炎中抗ＨＣＶｃ ＩｇＭ有较高的检出率,并与ＨＣＶ ＲＮＡ的检出率密切相关,揭示此 ＨＣＶ早期感染的血清学标志,与ＨＣＶ的复制有关。     

应用双抗原夹心法检测抗－HCV抗体

目的建立检测抗－ＨＣＶ抗体的双抗原夹心酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法。方法用基因工程手段，在大肠杆菌中表达ＨＣＶ抗原表位与大肠杆菌噬菌体ＭＳ２ＤＮＡ聚合酶（ＭＳ２－Ｐｏｌ）的融合蛋白，纯化后作为包被抗原，可溶性表达的ＨＣＶ抗原表位与霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）的融合蛋白经辣根过氧化物酶标记后作为酶结合物，建立双抗原夹心ＥＬＩＳＡ。结果ＭＳ２－Ｐｏｌ融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达并进行了纯化，所建立的双抗原夹心ＥＬＩＳＡ系统用于检测１４份ＨＣＶ阳性血清样品，抗－ＨＣＶ抗体检出率１００％；检测２１份ＨＣＶ阴性血清，没有假阳性结果。ＣＴＢ抗体不干扰反应。结论双抗原夹心法与采用二抗的ＥＬＩＳＡ系统具有相近的灵敏度和更好的特异性。可以避免由于二抗干扰带来的非特异性。     

丙型肝炎病毒不同区抗原酶免疫试剂研究

目的　探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 不同区抗原的反应性,为建立抗ＨＣＶ 酶免疫测定（ＥＩＡ） 确认试剂提供依据。方法　利用基因工程技术,重组所表达的ＨＣＶ 不同区抗原片段（ ＨＣＶＣ、ＮＳ３ 、ＮＳ４ 、ＮＳ５） ,建立了ＨＣＶ 单片段抗原ＥＩＡ 检测方法,检测了７４７ 份四川地区献血员血清。对其中３７３ 份血清,用２ 个厂生产的经批检合格的抗ＨＣＶＥＩＡ 试剂进行检测比较,对个别结果不符的样品进一步进行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 分析。结果　献血员中抗ＨＣＶＣ 等４ 种抗体阳性检出率分别为４ ．６８ ％ （３５／７４７） 、５ ．２ ％ （３９／７４７） 、１ ．１ ％ （８／７４７） 、１ ．２ ％ （９／７４７） ,２ 家试剂阳性检出率均为４ ％（１５／３７３） 。结论　ＨＣＶ 不同区抗原片段的抗体检出率差异较大,ＮＳ３ 检出率最高,其次为Ｃ 区、ＮＳ５ 、ＮＳ４ 。说明抗ＨＣＶＥＩＡ 检测试剂以ＨＣＶ ＮＳ３ 区和Ｃ 区为主要抗原片段。     

第三代酶免疫试验检测丙型肝炎病毒抗体的意义

本文应用Ａｂｂｏｔｔ公司第三代酶免疫试验（ＥＩＡ－３），与Ａｂｂｏｔｔ公司和国产第二代酶免疫试验（ＥＩＡ－２），对比检测了９６例肝炎病人和献血员标本的抗－ＨＣＶ，发现Ａｂｂｏｔｔ公司和国产ＥＩＡ－２的相对漏检率分别为１７．３％和２０．７％，而献血员中有漏检１０．８％。对部分漏检标本应用多聚酶链试验（ＰＣＲ）检测了ＨＣＶ－ＲＮＡ，发现与ＨＣＶ感染有关。这些是造成某些临床误诊及输血后肝炎的重要原因之一     

以抗原半乳糖苷酶融合蛋白为酶结合物检测丙型肝炎抗体

目的　为了降低检测丙型肝炎（ 丙肝） 病毒（ＨＣＶ） 抗体的假阳性,建立基于双抗原夹心法的酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ） 系统。方法　利用基因工程手段,在大肠杆菌中表达ＨＣＶ 嵌合抗原（ 含核心、Ｃ３３ｃ ,ＮＳ４ 及ＮＳ５ 抗原） 与大肠杆菌β半乳糖苷酶的融合蛋白,以该融合蛋白为酶结合物进行ＥＬＴＳＡ。结果　构建了重组质粒,并在大肠杆菌中表达了融合蛋白,融合蛋白具有ＨＣＶ 抗原的抗原性,并且保持了的酶活性。以重组融合蛋白为酶结合物,用于检测抗ＨＣＶ 抗体时,阳性检出率和阴性特异性均接近使用辣根过氧化物酶系统的水平。灵敏度接近以辣根过氧化物酶为标记酶的ＥＬＩＳＡ 系统。结论　重组ＨＣＶ 抗原β半乳糖苷酶融合蛋白可以用作酶结合物,应用于ＨＣＶ 感染的诊断。     

第三代重组免疫印迹试验（RIBA）检测HCV抗体的意义

第三代重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）检测ＨＣＶ抗体的意义上海市输血研究所输血传染病研究室（２０００５１）吴昌烈，冯恭文，周文伟，吴为民，郑岚，高跃明应用第三代免疫印迹试验（ＲＩＢＡ３．０）对６８例酶免疫试验（ＥＬＡ）抗ＨＣＶ抗体阳性、２例可疑和１４例阴...     

输血后丙型肝炎患者不同功能区抗体的研究

为了了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同功能区抗体的诊断价值，利用体外表达的ＨＣＶＣ、Ｅ１、Ｅ２／ＮＳ１、ＮＳ３、ＮＳ５蛋白作为重组抗原，按ＥＬＩＳＡ方法检测了已确诊为输血后丙型肝炎患者的血清１１２份。结果，检出率最高的是抗ＨＣＶ－Ｃ（８１．３％），最低的是抗ＨＣＶ－Ｅ１（１０．７％），输血后１个月内检出率最高的也是抗ＨＣＶ－Ｃ（８０％）。表明Ｃ蛋白是进行ＨＣＶ诊断的最重要抗原。另外，动态观察１０例输血     

输血后急性丙型肝炎患者抗-HCV和病毒血症观察

输血后急性丙型肝炎患者抗－ＨＣＶ和病毒血症观察４３００７１湖北医科大学附属第二医院左学兰骆名其许友芝第２代ＥＬＩＳＡ法（ＥＬＩＳＡⅡ）检测丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ，已常规应用于临床，为了估价这些血清学和分...     

自身免疫病患者可抽提核抗体谱与体液免疫的关系

目的　探讨可抽提核抗原（ Ｅ Ｎ Ａ） 抗体谱的临床意义及与其他免疫指标的关系。方法　对１５６ 份自身免疫病患者血清样本,采用免疫印迹法检测抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体,经免疫浊度法检测 Ｉｇ 和补体。结果　（１） 抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体在自身免疫病有较高的检出率,其中抗平滑肌（ Ｓｍ） 抗体、抗 Ｕ１ 核糖核蛋白抗体的阳性率在系统性红斑狼疮（ Ｓ Ｌ Ｅ） 中分别为３６ ．３ ％ 、２８ ．８ ％ ; 抗 Ｓ Ｓ Ａ 和抗 Ｓ Ｓ Ｂ 抗体的出现在干燥综合征（ Ｓ Ｓ） 患者中分别为５／１６ 和３／１６ 。（２） 与正常对照和抗体阴性组比较,抗 Ｅ Ｎ Ａ 阳性血清中 Ｉｇ Ｇ、 Ｉｇ Ｍ、 Ｉｇ Ａ 增高,分别为（２１ ．６ ±１５ ．０） 、（１ ．７ ±０ ．８） 、（２ ．２ ±１ ．２）ｇ／ Ｌ, 而 Ｃ３ 、 Ｃ４ 和总补体溶血活性（ Ｃ Ｈ５０）水平下降分别为（１ ．０８ ±０ ．３７） 、（０ ．２１ ±０ ．１２） 、（９８ ．±２９） ｇ／ Ｌ;（３） 随着抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体免疫印迹条带数的增多, Ｉｇ Ｇ 增高,而 Ｉｇ Ｍ、 Ｃ３ 、 Ｃ４ 及 Ｃ Ｈ５０ 与之相反,下降很明显;（４） Ｃ３ 、 Ｃ４ 、 Ｃ Ｈ５０ 与疾病活动性有相关关系。结论　抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体阳性者存在体液免疫应答增加,且与抗     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的临床评价

[目的]对研制的丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—cAg）ELISA检测试剂进行临床特异性及敏感性评价。[方法]制备抗HCV-核心区（Core）抗原四株单克隆抗体，研制出双抗体夹心检测HCV～core抗原酶联免疫检测（ELISA）试剂。三家临床单位收集抗HCV阴性样品3040份，HBsAg阳性100份，抗HIV阳性40份，从10万份抗-HCV筛查出临界样品28人份。[结果]3040份阴性样品检测有3份HCV—cAg阳性，3份经HCVPCR检测有1份阳性，100份HBsAg阳性，40份抗HIV阳性样本检测均为阴性，在10万份抗HCV抗体筛查样品中，选择28份抗-HCV检测临界样品进行HCV—cAg检测，有4份阳性，4份HCV—cAg阳性样品中有3份HCV—RNA检测阳性。[结论]研制的双抗体夹心HCV-核心抗原ELISA试剂具有很好的特异性和灵敏度。     

HCV包膜蛋白E2的B细胞抗原模拟表位的筛选、重组表达与抗原性鉴定

目的　采用蛋白质 /多肽递呈技术对HCV包膜蛋白E2进行模拟表位研究。方法　通过使用E2蛋白结合血清中的抗 E2 ,筛选M1 3噬菌体构建的随机肽库 ,寻找E2区蛋白的模拟表位 ;用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式重组表达该模拟表位 ,用HCV感染者血清验证重组蛋白的抗原性。结果　寻找到一个E2区蛋白的模拟表位 ,可能为E2蛋白的构象性表位。结论　本实验为研究HCV外膜蛋白E2抗原表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据     

双抗原夹心与间接ELISA法检测抗HCV对比研究

[目的]用研制的双抗原夹心ELISA法试剂与间接ELISA法试剂对比检测抗HCV。[方法]利用基因重组技术表达的HCV多表位抗原分别包被和标记，收集献血员样本，二种国产（试剂A，B）及雅培间接抗HCV试剂同时检测，对一种试剂单独阳性和3种试剂检测均为阳性的样本，再用研制的双抗原夹心法进行检测。[结果]试剂A检测单独阳性的样本12份，试剂B单独检测阳性20份样本中，双抗原夹心检测为阴性 ；而三家试剂检测均为阳性9份样本，双抗原夹心检测均为阳性。[结论]双抗原夹心检测抗HCV特异性较间接法好，灵敏度二者相当。     

用酶联免疫夹心法测定肝炎患者血清丙型肝炎抗原

目的建立血清中丙肝病毒NS3抗原（HCAg-NS3）的酶免检测方法。方法以特异性强、敏感度高、识别不同HCAg-NS3抗原表位的HCAg-NS3单克隆抗体和高效价的纯化抗-HCV分别作为包被抗体和酶标记抗体，采用夹心ELISA法测定血清中HCAg-NS3抗原。结果优化了酶免疫反应条件；该方法对HCAg-NS3的最低检测限为1—2ng／ml；批内（n=13）及批间（n=3）变异系数（CV）分别为4．51％和5．64％；对52例抗-HCV阳性血清测定HCAg-NS3抗原的检出率为21．2％，对15例HCAg-NS3阳性标本测定HCV RNA的检出率为60％，1350例抗-HCV阴性的其他类型肝炎患者血清标本中，HCAg-NS3检出率为1．7％，50例正常人血清标本的HCAg-NS3抗原测定结果均为阴性。结论该方法敏感性较高，特异性、重复性和稳定性均良好，可以作为早期诊断HCV感染的有效方法。     

丙型肝炎病毒总抗原检测用于病程监测的研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)总抗原检测方法在丙肝病程监测方面的临床意义。方法对来本院就诊的40位丙肝患者于治疗前、治疗1个月时、治疗3个月时、治疗6个月(停药)时,停药6个月后等不同时期进行采血,收集血清或血浆标本,用抗-HCV检测试剂盒(酶联免疫法)、HCV核酸(RNA)扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒、HCV总抗原检测试剂盒(酶联免疫法)进行检测。结果从患者确认感染丙肝到治疗结束抗-HCV检测均呈阳性,而HCV-RNA检测和HCV总抗原检测会随着病程的变化而变化。本次共检测了189例标本(40位患者不同时期标本总例数),其中HCV-RNA阳性51例,该51例阳性标本中,HCV总抗原检测阳性44例,阳性检出率为86.27%;138例HCV-RNA阴性标本,有3例HCV总抗原检测为阳性(2.2%)。2种方法比较,差异无统计学意义(χ2=1.6,P>0.05)。HCV总抗原检测其OD值会随着病程的变化而相应改变,可以较好地反应丙肝患者的病程状况。结论 HCV总抗原检测方法在丙肝病程监测方面具有很好的临床意义,适合在缺少荧光定量PCR检测能力的中小医院使用,可在一定程度上替代HCV-RNA检测,对抗-HCV阳性患者作进一步的验证检测或补充,更好地应用于丙肝患者的病程监测。     

Immunologic events during the incubation period of hepatitis C virus infection: the role of antibodies to E2 glycoprotein. Multicentre Hemodialysis Cohort Study on Viral Hepatitis

BACKGROUND: The study of the sensitivity of screening assays is greatly facilitated by testing the sequential changes in seroconverting individuals. The aim of this study was to investigate the early immunologic response after hepatitis C virus (HCV) infection and to evaluate whether HCV envelope (E2) recombinant antigen would provide a significant increase in sensitivity for detection of anti-HCV. STUDY DESIGN AND METHODS: Twenty hemodialysis patients who were seroconverting to anti-HCV were included in this study. They were followed up for a mean period (+/− SD) of 10.5 +/− 3.3 months, in which 13 to 46 serum samples per case were collected. Each sample was tested for anti-HCV by second- and third-generation enzyme immunoassay (EIA-2 and EIA-3) and recombinant immunoblot assay (RIBA-3). E2 antibodies were tested by a prototype EIA in which E2 was expressed as a recombinant antigen in Chinese hamster ovary cells. RESULTS: Alanine aminotransferase elevation was observed in 18 of 20 cases. Reactivity against c100, c33c, c22, NS5, and E2 was detected in 15 (75%), 19 (95%), 15 (75%), 2 (10%), and 17 (85%) patients, respectively; c33c was the most immunogenic antigen, followed in descending order by E2, c22, c100, and NS5. E2 antibody reactivity resolved the two RIBA-3- indeterminate cases. However, there was no case in which E2 reactivity preceded all other HCV antigens. Anti-E2 was found to react in all patients of genotypes 1a, 1b, and 3a but in only 2 of 4 patients of genotype 4a. CONCLUSION: In this group of seroconverting individuals, E2 antigen was shown to be highly immunoreactive and did resolve some RIBA-3-indeterminate samples as being positive, on the basis of reactivity to multiple antigens, but it did not improve early detection of seroconversion.     

丙型肝炎病毒包膜区E2基因的克隆、表达及其感染者中E2抗体检测的意义

目的　对丙型肝炎病毒 (HCV)包膜区E2基因进行克隆与表达 ,并将纯化的E2蛋白用于对HCV感染者血清中E2抗体的检测。方法　首先从HCV感染者血清中经随机引物反转录和聚合酶链反应 (PCR)获得E2区基因片段 ,然后克隆入原核表达系统pQE 30中进行蛋白表达、纯化 ,并检测表达蛋白的抗原性。结果　获得一段具有正确读码框架的E2区基因 ,全长 984bp ,表达蛋白分子量为 38kD。经与HCV感染者血清进行ELISA检测 ,证明其具有一定的抗原性。结论　本实验为研究HCV外膜蛋白的基本特点、血清学诊断意义和HCV疫苗设计提供了基础资料     

绵阳市丙型肝炎感染调查报告

目的了解绵阳市丙型肝炎病毒（HCV）感染情况,为丙型肝炎的防治提供科学依据。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）对前来绵阳市人民医院就诊的32812例住院、门诊病人进行抗一HCV检测,并对其感染状况进行分析。结果检测32812例人群中,抗-HCV阳性630例,总感染率为1．89％,其中男性检测者17341例,抗-HCV阳性336例,感染率为1．94％,女性检测者15471例,抗-HcV阳性294例,感染率为1．90％;其中20岁以下检测3127例,抗一HCV阳性26例,感染率为0．83％,20～40岁检测15206例,抗-HCV阳性227例,感染率为1．49％,40岁以上检测14479例,抗-HCV阳性377例,感染率为2．60％。结论调查结果显示绵阳市HCV的感染率为1．89％,低于全国HCV感染率;在已感染人群中,男、女性患者所占比率无显著差异。人类感染HCV后导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,可发展为肝硬化甚至肝细胞癌,对患者的健康和生命危害极大,故对HCV进行实验室早检测早治疗非常重要。     

Accuracy of hepatitis C virus core antigen testing in pools among seroconverters

BACKGROUND: Screening blood units for hepatitis C virus (HCV) with nucleic acid testing (NAT) reduces the risk associated with the long "window period" (8-9 weeks) after HCV infection. The feasibility of adding the HCV core antigen assay in pools to the existing anti-HCV individual screening was examined as an alternative of NAT, for early detection of HCV. STUDY DESIGN AND METHODS: Eighteen HCV seroconversion panels were tested for HCV antibodies, HCV antigen, and HCV RNA. Each sample was tested for HCV antigen individually and in pools of 3, 6, and 12. Statistical analyses included estimation of time until detection of the first positive HCV antigen bleed in each pool size, with a locally weighted regression (LOWESS) model. Sensitivity was calculated compared to NAT. RESULTS: Detection of HCV antigen in individual samples and in pools of 3 and 6 significantly preceded the detection of antibodies by 63, 53, and 46 days, respectively. Although the sensitivity of the HCV antigen test decreased with the increase in pool size, the estimated overall sensitivity of the "two-stage" antigen and antibody screening (where NAT of individual samples was the gold standard) was not significantly different between individual and the different pool sizes. CONCLUSION: Screening for HCV antigen in pools of 6 can be considered an efficient and easier-to-implement alternative to the costly NAT for identifying blood donors in the seroconversion period. It may offer a cost-effective approach in resource utilization in poor countries, that, after the implementation of HCV antibody testing, want to further improve blood safety.