补肝散含药血清对肝星状细胞的外周型苯二氮卓受体表达及凋亡的影响

目的:探讨补肝散含药血清对培养肝星状细胞(HSC)的外周型苯二氮卓受体(PBR)及凋亡的影响,并从PBR角度探讨其作用机制。方法:在不同浓度(5%、10%、20%)补肝散含药血清液的作用下,在PBR高表达期的不同时间,采用流式细胞仪测定细胞凋亡指数,同时采用放射免疫法检测PBR特异性配基[3H]PK11195结合量。结果:与不含药血清组相比较,补肝散各含药血清组细胞凋亡指数明显增加,而HSC与[3H]PK11195结合量明显减少(P0.05,P0.01)。结论:补肝散含药血清可以促进HSC凋亡,可能通过PBR途径发挥作用。     

感染血吸虫小鼠端脑外周型苯二氮卓受体表达的观察

目的探讨感染血吸虫小鼠不同时期端脑外周型苯二氮卓受体（PBR）的表达水平。方法应用实时监测荧光定量PCR技术，于感染8、12、20周时检测小鼠端脑PBR mRNA的表达水平。结果在8、12、20周各时期的感染组小鼠较同期正常组小鼠的端脑组织PBR表达量明显增加；感染组小鼠随着感染时间的延长，脑组织PBR mRNA的表达量逐渐增加，感染8、12、20周脑组织PBR mRNA的表达量差异有显著性（P〈0．01），而不同时期正常组脑组织PBR mRNA的表达差异无显著性。结论感染血吸虫小鼠在血吸虫肝纤维化过程中，端脑组织PBR表达水平显著增加。     

外周型苯二氮(艹卓)受体与中枢神经系统疾病

中枢神经系统内的外周型苯二氮（艹卓）受体（PBR）主要分布在小胶质细胞线粒体外膜,参与调控神经类固醇的合成以及神经元的凋亡过程。最近的研究表明,PBR在各种中枢神经系统疾病,如神经变性、肿瘤、炎症、脱髓鞘、脑缺血、脑创伤、癫癎和肝性脑病中表达明显上调。PBR已成为反映体内外神经病理学改变的一种敏感而特异的定量指标。深入研究PBR在中枢神经系统疾病中的作用机制,有可能为这些疾病的治疗找到一条新的途径。     

黄芪对感染血吸虫小鼠肝组织外周型苯二氮(艹卓)受体表达的影响

目的:探讨黄芪对感染血吸虫小鼠肝组织外周型苯二氮受体表达的影响。方法:采用黄芪注射液腹腔注射,在小鼠感染血吸虫满8周开始治疗,疗程12周,与生理盐水作对照。应用实时监测荧光定量PCR技术,于感染满8周、12周和20周时检测肝组织外周型苯二氮革受体mRNA的表达水平。结果:黄芪治疗组小鼠外周型苯二氮受体mRNA水平在感染12周和20周时均明显低于同期对照组,与正常组接近;黄芪治疗组治前、治中和治后外周型苯二氮受体mRNA水平比较差异无统计学意义,而对照组治疗前后差异显著。结论:黄芪可降低血吸虫病小鼠肝组织外周型苯二氮革受体mRNA表达水平,提示黄芪可能通过此机制阻止血吸虫病肝损伤的发展。     

黄芪对感染血吸虫小鼠肝组织外周型苯二氮革受体表达的影响

目的：探讨黄芪对感染血吸虫小鼠肝组织外周型苯二氮Zhuo受体表达的影响。方法：采用黄芪注射液腹腔注射，在小鼠感染血吸虫满8周开始治疗，疗程12周，与生理盐水作对照。应用实时监测荧光定量PCR技术。于感染满8周、12周和20周时检测肝组织外周型苯二氮革受体mRNA的表达水平。结果：黄芪治疗组小鼠外周型苯二氮Zhuo受体mRNA水平在感染12周和20周时均明显低于同期对照组，与正常组接近；黄芪治疗组治前、治中和治后外周型苯二氮Zhuo受体mRNA水平比较差异无统计学意义，而对照组治疗前后差异显著。结论：黄芪可降低血吸虫病小鼠肝组织外周型苯二氮Zhuo受体mRNA表达水平．提示黄芪可能通过此机制阻止血吸虫病肝损伤的发展。     

外周型苯二氮受体与中枢神经系统疾病

中枢神经系统内的外周型苯二氮受体(PBR)主要分布在小胶质细胞线粒体外膜,参与调控神经类固醇的合成以及神经元的凋亡过程。最近的研究表明,PBR在各种中枢神经系统疾病,如神经变性、肿瘤、炎症、脱髓鞘、脑缺血、脑创伤、癫癎和肝性脑病中表达明显上调。PBR已成为反映体内外神经病理学改变的一种敏感而特异的定量指标。深入研究PBR在中枢神经系统疾病中的作用机制,有可能为这些疾病的治疗找到一条新的途径。     

外周型苯二氮革受体与衰老

外周型苯二氮zhuo受体是由169个氨基酸组成的跨越线粒体膜的蛋白质，其广泛分布于人体各部位，对细胞生长、细胞凋亡和类固醇合成具有调节作用，在人类免疫、衰老和神经系统变性疾病中起着重要的作用。     

大鼠脑线粒体和突触体外周型苯二氮(艹卓)受体的增龄变化

目的探讨衰老过程大鼠脑组织线粒体和突触体外周型苯二氮[艹卓]受体（PBRs）的动态变化。方法雌性SD大鼠分为乳鼠组、3、12、15、18、24和30月龄组。动物断头后迅速取脑，采用梯度离心法提取大脑皮质线粒体和海马突触体，应用放射配基结合实验测定PBRs结合活力。结果7组比较，皮质线粒体和海马突触体PBRs结合活性差异显著（均P〈0．05～0．001）。15月龄以前皮质线粒体和海马突触体PBRs结合活性逐渐下降（P〈0．01），15～24月龄PBRs结合活性有下降趋势，但变化不显著（P〉0．05）。30月龄组皮质线粒体和海马突触体PBRs结合活性显著高于3月龄组（P〈0．01），低于乳鼠组（P〈0．05）。结论大脑皮质线粒体、海马突触体PBRs结合活性呈明显增龄性改变，PBRs参与了脑老化过程。     

大鼠肝星状细胞中生长抑素受体表达的研究

应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测肝星状细胞（HSC）中5个生长抑素受体（SSTR）亚型的表达情况，从侧面探索生长抑素影响肝纤维化的作用机制。针对试验结果中SSTR的表达情况，采用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的奥曲肽（OCT）作用于体外培训的HSC，然后在共聚焦显微镜下观察活细胞中奥曲肽的分布情况，从形态学上证实SSTR的存在。     

生长抑素受体与肝星状细胞活化的相关性研究

目的 探讨生长抑素受体(somatostatin receptor，ssTR)表达与肝星状细胞(hepatic stenate cell，HSC)活化的相关性。方法 分离、培养大鼠HSC，以RT-PCR法检测原代HSC活化前后SSTR1-5mRNA的表达状况，并以免疫组化染色检测正常及纤维化肝组织中SSTR1-5的表达与定位。结果 静止HSC及正常肝组织中未发现SSTRmRNA及SSTR，HSC活化后则表达SSTR1-3mRNA，纤维化肝组织中亦可见SSTR1-3染色阳性的HSC，且主要分布于窦周间隙、纤维间隔等部位。讨论 SSTR表达与HSC活化存在密切联系，表达SSTR可能是HSC活化过程中主要的负调节机制之一。     

内毒素受体在肝星状细胞的表达及其作用

目的了解内毒素受体在肝星状细胞活化中的变化和作用。方法分离正常大鼠的肝星状细胞，以逆转录聚合酶链反应法检测其在体外培养过程中内毒素受体（CD14和TLR4）mRNA的表达变化。以细胞免疫染色法检测肝星状细胞内毒素受体CD14的表达。制作肝纤维化和肝硬化的大鼠模型，免疫组织化学法动态检测肝组织内CD14和α平滑肌肌动蛋白的表达变化和定位。结果初分离的肝星状细胞表达低水平的CD14 mRNA，不表达TLR4 mRNA，培养活化的肝星状细胞内毒素受体的表达增强，内毒素可上调这种表达。体外培养10d的肝星状细胞表达CD14蛋白，内毒素作用后CD14表达更明显。在肝纤维化的发展过程中，肝组织内CD14阳性细胞增多，阳性细胞多分布于肝窦周围，晚期CD14阳性细胞聚集在纤维隔内，与α平滑肌肌动蛋白阳性细胞的分布一致。结论肝星状细胞在体内外的活化过程中内毒素受体的表达增强，因此，内毒素受体可能参与肝星状细胞在肝脏炎症和纤维化中的作用。     

抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响。方法:传代培养的HSC-T6(肝星状细胞系)与KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其药物血清(5%、10%、20%)共同培养72小时后,应用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪测定HSC细胞周期各时相的DNA含量。结果:KXRG及药物血清均能显著抑制HSC的增殖,使细胞周期阻滞于S期,且2.5mg/ml药物和10%药物血清作用最强(P0.01)。结论:KXRG通过抑制HSC的活化,阻滞其细胞周期的正常进行,进而抑制HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用。     

胆红素对肝星状细胞-T6增殖及细胞周期的影响

[目的]观察胆红素对肝星状细胞(HSC)-T6增殖及细胞周期影响.[方法]将培养细胞分成正常组和胆红素不同浓度(10 μmol/L、30 umol/L、50 /μmol/L、70 μmol/L、100 μmol/L)干预组,采用MTT法观察胆红素对HSC-T6增殖的影响,流式细胞仪观察各组细胞周期的变化.[结果]①不同浓度胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用,且呈一定的量效关系,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05);②10 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L浓度胆红素作用HSC-T6后,G0/G1期减少,S期增加,G2/M期增加,与正常组比较均P＜0.05.[结论]胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用.     

雷帕霉素诱导大鼠肝星状细胞凋亡的研究

目的观察雷帕霉素(RAPA)对大鼠肝星状细胞系rHSCs-99增殖、凋亡的影响。方法将rHSCs-99分成4组:对照组(A组),RAPA 50 nmol/L组(B组),RAPA 100 nmol/L组(C组),RAPA 150 nmol/L组(D组)。RAPA作用72 h后,分别用MTT法检测rHSCs-99增殖,ELISA法检测I型胶原表达,流式细胞仪Annexin-V FICT/PI法检测细胞凋亡情况,Wright-Giemsa染色法观察细胞形态学改变,细胞免疫组化法检测Fas、P53与Bcl-2的表达变化。结果 RAPA作用后,rHSCs-99增殖受到抑制,I型胶原含量降低,凋亡率增高,Fas、P53表达增多,Bcl-2表达减少。结论 RAPA能抑制rHSCs-99的增殖及I型胶原合成。促进rHSCs-99凋亡,其机制可能是通过开启Fas/FasL凋亡途径及上调凋亡相关基因P53、下调Bcl-2的表达来实现。     

蛋白酶活化受体1诱导大鼠肝星状细胞分泌MCP-1

目的 探讨蛋白酶活化受体1（proteinase—activated receptors 1，PAR1）激动剂和活性肽对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）分泌单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein 1，MCP—1）的调控作用。方法 应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离SD大鼠HSC，选用生长7天的HSC，接种于12孔培养板各孔内，分别用不同浓度的PAR1激动剂-凝血酶、凝血酶抑制剂水蛭素、PAR1活性肽SFLLR和反活性肽RLLFS进行刺激，刺激时间为2、8、16h，用ELISA方法检测培养细胞上清液中的MCP—1水平。结果 经过16h的培养，PAR1激动剂-凝血酶和活性肽SFLLR可引起HSC MCP-1的释放增加，凝血酶抑制剂水蛭素及PAR1反活性肽RLLFS不能引起MCP—1的释放增加。结论 PAR1活性肽和凝血酶可促进SD大鼠HSC分泌MCP—1及肝纤维化大鼠肝脏炎症反应，PAR1反活性肽和凝血酶抑制剂在肝纤维化炎症反应中可能具有抗炎作用。     

Induction of hepatic stellate cell proliferation by LPS-stimulated peripheral blood mononuclear cells from patients with liver cirrhosis

We studied hepatic stellate cell proliferation in vitro. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from patients with chronic active hepatitis C (CAH) and liver cirrhosis (LC) were cultured for 24 h in the presence or absence of Escherichia coli lipopolysaccharides (LPS). Hepatic stellate cell proliferation induced by the culture supernatants was measured, and interleukin-1 (IL-1) and IL-6 levels in the culture supernatants were quantified. Culture supernatants of LPS-stimulated PBMC from LC patients induced rat hepatic stellate cell proliferation by almost 2.8-fold (stimulation index, 2.83 ± 1.41) compared with when the cells were cultured without addition of PBMC culture supernatants. Production of IL-1β was significantly higher in the culture supernatants of both CAH and LC patients than in those of ten healthy controls (P < 0.01 and P < 0.05, respectively). But there was no significant correlation between IL-1 production and the induction of hepatic stellate cell proliferation by the culture supernatants. Although there were no significant differences in IL-6 production by LPS-stimulated PBMC among healthy controls and CAH and LC patients, we observed a significant correlation between IL-6 production and the induction of hepatic stellate cell proliferation in the culture supernatants of LC patients. Rat hepatic stellate cells themselves produced IL-6, and treatment with IL-6 antisense oligodeoxynucleotides suppressed the cell proliferation, suggesting that IL-6 is an autocrine growth factor for hepatic stellate cells. The addition of human recombinant IL-6 (hrIL-6) augmented rat hepatic stellate cell proliferation, indicating that excessive IL-6 may further facilitate cell proliferation. These findings suggest that a cytokine cascade including IL-6 may participate in hepatic stellate cell proliferation in LC patients when they are exposed to endotoxin. Received: December 24, 1998 / Accepted: September 24, 1999